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“Patrimonio de la Comunidad”
MATERIA
Bioanálisis y tecnología
Actividad 2.1
Conceptos de Microscopia
MAESTRA
SUSTENTANTES
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INTRODUCCION
A medida que continúan las investigaciones para un diagnóstico más y un perfilamiento más
precoz de los resultados, de están perfeccionado más instrumentos, y la automatización de
una u otras manera, Adelanta a pasos agigantados. Sin embargo, estos no pueden introducirse
inmediatamente en el laboratorio sin que el usuario tenga un entendimientos básicos y
rutinarios de ellos.
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María Rebeca Mejía Cepeda…….2003-075
Antes de la invención del microscopio ya estaba ampliamente extendido el uso de lentes que
permitían observar una imagen de forma aumentada y que hoy en día se conocen como lupas.
Las propiedades de este tipo de lentes fueron detalladamente estudiadas por Roger Bacon en el
siglo XIII.
No fue hasta finales del siglo XVI cuando Zacharias Janssen, un fabricante de anteojos
holandés, fabricó el primer microscopio compuesto. Este primer microscopio consistía en dos
lentes montadas en un tubo (de aquí el nombre de microscopio compuesto) y permitía
amplificar una imagen hasta 9 veces. Esto representó una mejora significativa respecto a los
aumentos obtenidos mediante lupas, también conocidas como microscopios simples.
Aproximadamente durante estas mismas fechas Galileo Galilei también fabricó un microscopio
combinando una lente convexa y una cóncava. Es por eso que todavía hoy se debate entre los
historiadores quién fue el verdadero inventor del microscopio.
Sí está claro, sin embargo, que Giovanni Faber fue quien en 1625 utilizó por primera vez el
término microscopio para referirse a este nuevo invento.
Durante la segunda mitad del siglo XVII empiezan a aparecer las primeras obras científicas
documentando observaciones llevadas a cabo con el microscopio. La primera de estas obras se
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tituló Micrographia, fue escrita por Robert Hooke y publicada en 1665. En ella se pueden
encontrar ilustraciones de plantas e insectos observados a través del microscopio.
Otro gran personaje de este período es Antonie van Leeuwenhoek, considerado el padre de la
microbiología. Este comerciante y científico holandés mejoró la calidad de los microscopios
existentes hasta el momento mediante la fabricación de mejores lentes. Esto le permitió
descubrir las bacterias y los glóbulos rojos en la sangre.
La tecnología del microscopio fue evolucionando y perfeccionándose durante los siglos XVIII
y XIX hasta resultar en el tipo de microscopio que utilizamos hoy en día. Uno de los fabricantes
de microscopios más importantes del siglo XIX fue Carl Zeiss. Las innovaciones de su empresa
modernizaron el microscopio incorporando las teorías de óptica desarrolladas por el físico
Ernst Abbe.
1. Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Capta y amplía la imagen formada
en los objetivos.
2. Objetivo: lente situada en el revólver. Amplía la imagen, es un elemento vital que
permite ver a través de los oculares.
3. Cabezal: es la cabeza del microscopio que te permite obtener mejores tomas del
objetivo.
4. Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
5. Diafragma: regula la cantidad de luz que llega al condensador.
6. Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
7. Tubo: es la cámara oscura que porta el ocular y los objetivos. Puede estar unida al brazo
mediante una cremallera para permitir el enfoque.
8. Revólver: Es el sistema que porta los objetivos de diferentes aumentos, y que rota para
poder utilizar uno u otro, alineándolos con el ocular.
9. Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina o el tubo
hacia arriba y hacia abajo. El macrométrico, permite desplazamientos amplios para un
enfoque inicial y el micrométrico, desplazamientos muy cortos, para el enfoque más
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preciso. Pueden llevar incorporado un mando de bloqueo que fija la platina o el tubo a
una determinada altura.
10. Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la
preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación
situada por debajo.
11. Pinzas sujetadoras: Dos pinzas, sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un
sistema de cremallera que permite mover la preparación. Puede estar fija o unida al
brazo por una cremallera para permitir el enfoque.
12. Brazo: Es la estructura que sujeta el tubo, la platina y los tornillos de enfoque asociados
al tubo o a la platina. La unión con la base puede ser articulada o fija.
13. Base o pie: Es la parte inferior del microscopio que permite que este se mantenga de
pie.
APORTE.
Hemos aprendido que mediante la combinación de estas lentes se puede generar una imagen
aumentada de cualquier objeto. El ejemplo más sencillo sería utilizar una sola lente, como en
el caso de una lupa, para producir una imagen aumentada de una muestra.
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Elizabeth Ortiz Santos………….2019-1260
Parte mecánica del microscopio comprende el pie o base, el tubo, el revólver, el asa o brazo,
la platina y los tornillos: macro métrico y micrométrico. Estos elementos sostienen la parte
óptica y de iluminación; además, permiten los desplazamientos necesarios para el enfoque del
objeto.
La mayoría de los microscopios modernos tienen varios objetivos, que pueden usarse
alternativamente, montados con rosca en una pieza giratoria, denominada revolver porta-
objetivos. El número de objetivos varía con el tipo de microscopio y su uso. Los aumentos de
los objetivos secos más frecuentemente utilizados son: 4X, 10X, 20X, 40X y 60X. Los
objetivos de 100 aumentos (100X) suelen ser objetivos de inmersión, es decir, para ello se
pone sobre la muestra una gota de aceite y se acerca el objetivo a la muestra hasta que su
lente frontal queda sumergida en la gota.
Cada sistema objetivo o simplemente objetivo es un objeto cilíndrico que contiene una serie
de lentes alineados. Los objetivos se distinguen principalmente por la ampliación que realizan
y por su poder de separación, es decir, su resolución. Cuanto mayor es la ampliación de un
objetivo más debe acercarse a la muestra. Cada objetivo lleva grabado su poder de
ampliación (aumento). La lente frontal del objetivo es siempre muy pequeña y su cuidado es
una parte crítica del mantenimiento de los microscopios, evitando mancharla y limpiándola
con medios adecuados.
El ocular se ubica en el extremo superior del tubo óptico, el de observación, es decir, donde
se aproxima el ojo o ubica una cámara. Un ocular tiene también forma cilíndrica y contiene
varias lentes. Cada ocular lleva grabado su poder de ampliación. Los oculares más usados son
los de 10X, pero también son usuales los 5X y los 15X.
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1. Foco o fuente: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
2. Tubo: cámara oscura en cuyo interior se encuentran el ocular y los objetivos.
3. Revólver: parte que lleva los objetivos de diferentes aumentos y gira para poder utilizar uno u
otro, alineándolos con el ocular.
4. Tornillos macrométrico y micrométrico: tornillos de enfoque, mueven la platina o el tubo
hacia arriba y hacia abajo. El macrométrico permite desplazamientos amplios para un enfoque
inicial y el micrométrico desplazamiento muy corto, para el enfoque más preciso.
5. Platina: bandeja o plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la
muestra y permite el paso de los rayos luminosos de la fuente de iluminación situada por
debajo. Dos pinzas, generalmente, sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un
sistema de cremallera que permite mover la preparación.
6. Brazo: estructura que sujeta el tubo, la platina y los tornillos de enfoque asociados al tubo o a
la platina.
7. Base o pie: parte inferior del microscopio que permite se mantenga de pie.
Los microscopios ópticos tienen un límite máximo de resolución de 0,2 µm. El poder de
resolución es la distancia mínima a la que se pueden discriminar dos puntos. Este límite viene
determinado por la longitud de onda de la fuente de iluminación, en este caso la luz visible.
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En un objetivo de microscopio, la apertura numérica se define como la medida de su capacidad para
colectar la luz y poder examinar los detalles del espécimen.
Los rayos de luz pasan a través de la muestra para formar la imagen, y entran en el objetivo en un
cono invertido como se ilustra en la figura A. La luz blanca se compone de un amplio espectro de
ondas electromagnéticas, en donde las longitudes oscilan entre 400 y 700 nanómetros.
Debemos saber, que 1 milímetro equivale a 1000 micrómetros y 1 micrómetro (µm) equivale a 1000
nanómetros. La luz del color verde tiene un rango de longitud de onda centrada a 550 nm
(nanómetro), que corresponde a 0,55 µm.
Cuanto más pequeño sea el objeto, más pronunciada será la difracción de los rayos de luz incidente.
En los valores más altos, los rayos oblicuos cada vez que entran en la lente frontal del objetivo,
produce una imagen altamente resuelta y permite que los objetos más pequeños sean visualizados con
mayor claridad.
APORTES
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Magdelyn Ortega Hernández….2020-0035
MANTENIMIENTO GENERAL
DEL MICROSCOPIO
Ante todo es necesario enfatizar que el microscopio es un equipo de alta precisión. La integridad de
sus componentes ópticos, mecánicos y eléctricos debe ser observada, a fin de conservarlo en las
mejores condiciones. Cada elemento del microscopio ha sido desarrollado utilizando las más
avanzadas técnicas de fabricación. El ensamble de sus componentes y su ajuste se realiza en fábrica,
utilizando equipos especializados que, mediante técnicas de medición avanzadas, controlan las
tolerancias requeridas entre los diversos componentes del equipo. La limpieza del ambiente en el que
se utiliza, su instalación y uso cuidadoso resultan fundamentales para lograr una larga vida útil.
La humedad, el polvo y las malas condiciones de alimentación eléctrica, el mal uso o instalación
inadecuada resultan contraproducentes para su correcta conservación. El mantenimiento del
microscopio implica mucho cuidado, paciencia y dedicación. Se presentan a continuación las
recomendaciones generales para la instalación y el mantenimiento necesarios para mantener un
microscopio en buen estado de funcionamiento y que están al alcance del microscopista.
Instalación y almacenamiento.
1. Asegurarse que el ambiente o área en que se instale el microscopio esté protegido o protegida del
polvo y la humedad. El ambiente ideal debe disponer de un sistema de aire acondicionado que
garantice aire libre de polvo o partículas, control de humedad y control de temperatura de manera
permanente.
2. Verificar que el ambiente o área en que se instale el microscopio disponga de seguridad: puerta con
cerradura para evitar su sustracción no autorizada.
3. Confirmar que el lugar seleccionado para ubicar el microscopio esté alejado de lugares como
pocetas de agua o donde se trabajen sustancias químicas, para evitar que el equipo resulte afectado por
un derrame o salpicadura. También deben evitarse sitios que tengan luz solar directa.
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4. Verificar que el lugar seleccionado cuente con una toma eléctrica en buen estado, cuyo voltaje esté
ajustado en magnitud y frecuencia con los códigos y normas eléctricas, y que resulte compatible con
el del sistema de iluminación del microscopio.
5. Instalar el microscopio sobre una superficie nivelada de estructura rígida, bajo la cual exista espacio
suficiente para que el usuario –microscopista– coloque sus piernas y como consecuencia pueda
acercar el cuerpo hacia el microscopio y la cabeza hacia los oculares, sin forzar la columna vertebral:
cuello y espalda.
6. Para facilitar la colocación del microscopista, proporcionar una silla de altura variable, que le
brinde un buen soporte lumbar; si es del caso, también proveer un apoyo para los pies, situado al
frente del sitio de trabajo, no en la silla. El propósito es lograr que la columna vertebral esté lo más
recta posible y se reduzca la flexión de los hombros y el cuello.
7. Evitar que en sitios cercanos al lugar de instalación del microcopio haya equipos que produzcan
vibraciones como centrífugas o refrigeradores.
9. Cubrir el microscopio con un protector de polvo si no se usa por períodos de tiempo largos; tomar
precauciones para que no lo afecten excesos de humedad.
10. En zonas de humedad alta, guardar el microscopio durante la noche, en una cabina provista de un
bombillo de máximo 40 W.
Esto ayuda a mantener seco el entorno y reduce la probabilidad de que se presente formación de
hongos.
Este instrumento de última generación tiene la ventaja de ser más compacto y de menor costo de
mantenimiento e instalación que los equipos convencionales, con interfaz de usuario mucho más
intuitiva y simple. Es un sistema del tipo “todo-en-uno” que permite realizar tomas de imágenes
micro- y nanoscópicas como análisis elemental por emisión de rayos X, lo que permite examinar
físicamente la topología y arquitectura de la muestra, como determinar su composición elemental en
forma rápida y directa.
El equipamiento fue adquirido a través de un subsidio del Fondo Argentino Sectorial (FONARSEC)
de la convocatoria de Fondo de Innovación Tecnológica Regional (FITR) 2013 en el área Industria en
el marco de un convenio público-privado entre INBIONATEC y la empresa tecnológica
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TELEMATICA SRL de San Miguel de Tucumán, con la finalidad de implementar una plataforma
bionanotecnológica para el desarrollo de instrumental de monitoreo selectivo de diferentes moléculas
para el seguimiento de procesos industriales y/o control de calidad de materias primas o productos.
Aportes
Al concluir este tema pude entender que el Microscopio es: un instrumento que se utilizan para
obtener una imagen aumentada de objetos minúsculos o detalles muy pequeños de los mismos. El
microscopio simple o lente de aumento es el más sencillo de todos y consiste en realidad en una lupa
que agranda la imagen del objeto observado.
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Angelica Alt. Holguín Guzmán….2013-0930
Para transportar el microscopio deben utilizarse siempre las dos manos, sujetándolo
por el brazo con una mano y por el pie con la palma de la otra.
Una vez colocado el microscopio en su sitio, no debe moverse hasta que finalice la
práctica. Cuando se vaya a cambiar de observador se debe mover él y no el
microscopio.
Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del microscopio.
Nunca poner los dedos en las lentes del ocular ni del objetivo. Si se ensucian dichas
lentes se limpiarán con un paño suave de algodón, sin utilizar ningún disolvente.
No sacar de su sitio el ocular ni los objetivos, a no ser que vayan a ser sustituidos, en
cuyo caso la operación debe realizarse lo más rápidamente posible, para evitar la
entrada de polvo.
Asegurarse de que el portaobjetos está bien seco cuando va a ser colocado sobre la
platina.
Al enfocar, sobre todo con los objetivos de mayor aumento, hay que evitar que el
extremo del objetivo choque con la preparación. Para ello acercaremos el objetivo a la
preparación mirando lateralmente y luego, mirando ya a través del ocular, enfocamos
alejando el objetivo.
La limpieza de un microscopio es una de los aspectos clave para maximizar la vida útil de
este instrumento.
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Un buen mantenimiento ayuda a reducir la frecuencia de su limpieza. Por esto es
recomendable cubrir siempre el microscopio con una funda después de su uso. Esto evita la
acumulación de polvo y suciedad en sus superficies.
La limpieza del sistema óptico debe realizarse si detectamos partículas de suciedad o polvo
en el campo de visión del microscopio.
El primer paso antes de realizar la limpieza del sistema óptico es identificar la superficie que
tiene partículas de suciedad incrustadas. Estas pueden estar en la muestra, en el objetivo, en el
ocular o en algún punto interno del microscopio.
14. El primer intento debe ser siempre utilizar un simple soplador de aire como una pera.
Evita soplar con la boca ya que puedes depositar partículas de saliva que empeoren la
situación. Si esto es suficiente para eliminar la suciedad no es necesario realizar los
siguientes pasos.
15. Si la suciedad persiste pueden utilizarse toallitas húmedas o utilizar papel sin
filamentos junto con unas gotas de agua destilada. Evita utilizar toallitas o papel que
pueda dejar impurezas sobre la superficie de la lente. En este caso existen toallitas
profesionales para equipos de laboratorio.
16. Si el agua destilada no es suficiente para eliminar la suciedad puedes probar con
algunas gotas de alcohol aplicadas sobre el papel que utilices. También existen
soluciones de limpieza adecuadas para equipos ópticos. Tanto si utilizas agua
17. destilada como alcohol, evita aplicar una presión excesiva sobre las lentes ya que
podrías dañarlas.
Si no dispones de toallitas húmedas puedes utilizar palitos de algodón con algunas gotas de
agua destilada o alcohol, según el caso.
Limpia las lentes siguiendo un patrón espiral desde el centro y no siguiendo un camino en
zigzag.
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Limpieza del sistema mecánico
El sistema mecánico del microscopio requiere una limpieza mucho más frecuente ya que es
donde se acumula parte de la suciedad ambiental y debida al contacto con el usuario.
Todos los puntos que el usuario toca durante la operación del microscopio son susceptibles a
acumular suciedad debido a la grasa y humedad de las manos. Este es particularmente el caso
de los tornillos y el ocular.
También es importante limpiar bien la platina ya que es posible que se ensucie debido a
residuos de las muestras observadas.
Para evitar la acumulación de polvo es recomendable cubrir el microscopio con una funda
cuando no se está utilizando.
01. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la
misma y dejarlo cubierto con su funda.
02. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda
para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se
debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
03. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente
con un papel de filtro o mejor, con un papel de óptica.
05. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable).
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07. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico,
platina, revólver y condensador).
Como el control de Calidad son mecanismos para detectar y corregir deficiencias antes de
emitir un resultado, al aplicar el control de calidad al microscopio debemos verificar que este
se encuentre en perfecto estado y limpio, que los porta objetos y cubre objetos estén limpios y
secos antes de ser utilizados.
APORTE
La limpieza del microscopio es esencial para mantenerlo en buen estado y alargar su vida
útil.
La limpieza del sistema óptico debe realizarse con sumo cuidado debido a la fragilidad de los
elementos ópticos.
La limpieza del sistema mecánico debe realizarse con mayor frecuencia ya que es allí donde
se acumula gran parte de la suciedad debido al contacto con el usuario.
Que debemos tener un buen control de calidad con el microscopio antes de ser utilizado, ya
que de ello depende un buen resultado.
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Jennifer Ortega Suarez…………2020-0020
Tipos de microscopio
Microscopio óptico
En el microscopio óptico la muestra es iluminada mediante luz visible. Esto significa que
existe un foco de luz apuntando hacia la muestra. Esa misma luz es conducida a través del
objetivo y del ocular hasta llegar a formar la imagen en el ojo del observador.
Microscopio electrónico
Los microscopios de luz ultravioleta iluminan la muestra, como el nombre indica, con luz
ultravioleta. Este tipo de luz tiene una longitud de onda más corta que la luz visible utilizada
en los microscopios ópticos.
Microscopio de fluorescencia
Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan las propiedades de fluorescencia
para generar una imagen de la muestra.
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Microscopio simple
Este tipo de microscopio dispone de una única lente y es más habitualmente conocido como lupa.
Microscopio compuesto
Este tipo de microscopio es aquél que dispone de por lo menos dos lentes. Este es el caso más habitual
en todos los microscopios modernos.
Microscopio monocular
Este tipo de microscopio dispone de un solo ocular a través del cual se puede observar la muestra.
Microscopio binocular
Los microscopios binoculares disponen, como indica su nombre, de dos oculares. Esto permite
observar la muestra simultáneamente con los dos ojos resultando en una mayor comodidad para el
usuario.
APORTE
Las limitaciones para el estudio de las células y tejidos han sido superadas a lo largo del tiempo
gracias al desarrollo tecnológico que ha permitido la construcción de instrumentos de laboratorio,
tales como el microscopio, el cual permite la observación y obtención de imágenes aumentadas de
esos especímenes diminutos, que a simple vista resultan invisibles.
El microscopio ha sido y será el instrumento de mayor utilidad en el estudio de las células y tejidos.
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bibliografia
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