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Práctica “tinción GRAM”

Antecedentes:
 Las bacterias GRAM+ y GRAM-, la conformación química de las paredes celulares de cada una de ellas
La tinción de Gram es una técnica que permite identificar distintos tipos de bacterias según se coloree su
superficie. La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra que contenga bacterias no
identificadas. Las GRAM positivas tienen una envoltura de peptidoglicano muy gruesa, Otro compuesto de sus
paredes celulares son los ácidos teicoicos, polímeros de glicerol unidos por enlace fosfodiéster
Las GRAM negativas presentan una pared más delgada, con menos peptidoglucano. Además cuentan con
una segunda membrana de fosfolípidos. Esta segunda membrana es muy impermeable debido a su carga
fuertemente negativa, también puede incluir una capa externa de glicoproteínas, llamada capa S o superficial,
esta capa formada por proteínas y puede ser hasta el 15% del contenido proteico de la bacteria.

 Enfermedades causadas por cada tipo de bacteria, por un lado, y, por el otro, beneficios que aportan

Enfermedad Bacteria Beneficios

Botulismo Clostridium botulinum. los lactobacilos y las bifidobacterias, ejercen un
Cólera Vibrio cholerae. positivo efecto en el funcionamiento del
sistema digestivo. Capaces de sintetizar las
Impétigo Estreptococo. vitaminas, mejorar la absorción de los
Lepra Mycobacterium leprae. nutrientes, neutralizar sustancias tóxicas
Meningitis dañinas, reducir los síntomas del intestino
Neisseria meningitidis.
bacteriana irritable, favorecer la digestión de la lactosa y
Neumonía una flora intestinal sana. Los prebióticos,
Streptococcus pneumoniae
bacteriana sustancias que estimulan el crecimiento y la
Tétanos Clostridium tetani. actividad de las bacterias que enriquecen la
Tos ferina Bordetella pertussis. flora intestinal. Es importante ingerir alimentos
Tuberculosis Mycobacterium tuberculosis. con microorganismos vivos, bacterias
probióticas que se encargan de restablecer
Leptospirosis Leptospira interrogans. el equilibrio de la flora intestinal

 Alimentación y nutrición en procariotas

La nutrición puede ser autótrofa (quimiosíntesis o fotosíntesis)
o heterótrofa (saprófita, parásita o simbiótica). En cuanto al metabolismo los organismos pueden
ser: anaerobios estrictos o facultativos, o aerobio.
La quimiosíntesis es la conversión biológica de moléculas de un carbono y nutrientes en materia
orgánica usando la oxidación de moléculas inorgánicas como fuente de energía, sin la luz solar, a
diferencia de la fotosíntesis.
La fotosíntesis es una serie de procesos mediante los cuales las plantas, algas y
algunas bacterias captan y utilizan la energía de la luz para transformar la materia inorgánica de su
medio externo en materia orgánica que utilizan para su crecimiento y desarrollo.
Los organismos capaces de llevar a cabo este proceso se denominan fotótrofos y si además son
capaces de fijar el CO2 atmosférico se llaman autótrofos.
La fotosíntesis anoxigénica, en la cual no se libera oxígeno, es llevada a cabo por un número reducido
de bacterias, como las bacterias púrpuras del azufre y las bacterias verdes del azufre; estas bacterias
usan como donador de hidrógenos el H2S, con lo que liberan azufre.
Nutrición saprofita: es a base de restos de animales o vegetales en descomposición.
Nutrición parásita: obtienen el alimento de un hospedador al que perjudican, pero no llegan a matar.
Nutrición simbiótica: los seres que realizan la simbiosis obtienen la materia orgánica de otro ser vivo,
el cual también sale beneficiado.   

Objetivo:
 Seguir la metodología para distinguir entre las bacterias GRAM+ y GRAM-, así como las características de
cada una
 Relacionar lo anterior con enfermedades y beneficios aportados por estas bacterias
 Concluir las diferencias y similitudes entre alimentación y nutrición de procariotas y eucariotas

Material:
 Microscopio óptico, porta y cubreobjetos,  Aceite de inmersión, papel seda
 Cajas de Petri  Mecheros de alcohol
 Piseta  Goteros o pipetas berales
 Solución de violeta de genciana  Solución de lugol
 Solución rojo de safranina  Alcohol del 96%

Método
1. Dejar reposando (SEPARADOS) en algún lugar de su casa (de preferencia cerca o en la cocina) trozos de
distintos quesos y mantenerlos húmedos
2. Requerimos que se “echen a perder” y les salgan hongos y bacterias. Avisen para que no los vayan a tirar.
3. Llevar esos materiales al laboratorio y elaborar preparaciones fijas de cada uno
4. Fijar a la flama las preparaciones
5. Ladear el portaobjetos y añadir 2 gotas de cristal violeta a la preparación, hasta que se cubra por completo.
Dejar reposar durante 1 minuto.
6. Lavar la preparación con la pízeta sobre la caja de petri
7. Añadir 2 gotas de lugol hasta cubrir por completo. Dejar reposar durante 1 minuto.
8. Lavar la preparación con la pízeta sobre la caja de petri
9. Decolorar con alcohol, evitando salga todo el colorante
10. Cubrir con la safranina y esperar 30 segundos; dejar secar la preparación
11. Observar al microscopio con 100X (recuerden colocar aceite de inmersión y después limpiar los objetivos
con el papel seda)
12. Elaborar un cuadro donde coloquen los alimentos y el tipo de bacteria GRAM + ó -

Resultados:

Análisis

Conclusiones:
Bibliografía consultada:
Gaviño, G., J. C. Juárez y H. H. Figueroa. 1982. Técnicas biológicas selectas de laboratorio y de campo. Editorial
LIMUSA México. Pp 89-95
http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClaseProcariontes/Alejandra/Pr
%C3%A1ctica%203%20Tinci%C3%B3n%20de%20Gram.pdf

CUESTIONARIO:
1. Describan la composición de las paredes bacterianas GRAM+ y GRAM- enfatizando sus diferencias. Elaborar
un esquema

Gram Positivo

 La red de mureína está muy desarrollada y llega a tener

hasta 40 capas.
 No tiene espacio periplasmatico
 El contenido proteico es bajo.
 No contiene LPS lipopolisacaridos
 Bajo contenido de aminoazucares.

Gram Negativo

 La red de mureína presenta una sola capa.

 La constitución de mureína es igual en todas las bacterias
Gram negativas.
 Nunca contiene lisina.
 No hay puentes interpeptídicos.
 Hay gran cantidad de lipoproteínas y lipopolisacáridos que representan hasta el 80% del peso seco de la
pared celular.
 Necesitan calcio para mantener la estabilidad de las capas de lipopolisacáridos, lo que las hace vulnerables
a la lisozima.
 No se han podido demostrar ácidos teicoicos.

2. Indica las estructuras más importantes y su función

 Lipopolisacáridos  Ácido teicoico

(LPS) o endotoxina es el mayor componente de la
membrana externa de las bacterias Gram negativas.
Una función importante en la activación del sistema
inmune al constituir el antígeno superficial más
importante de este tipo de bacterias. El LPS está
compuesto por una región lípidica y una glicosídica
con funciones separadas y/o sinérgicas lo que hace de
esta molécula uno de los factores de virulencia más
complejos de comprender,
 Peptidoglucano
El peptidoglicano o mureína es el componente
principal de la pared bacteriana. Es muy resistente
son polímeros de ribosa o glicerol modificados
químicamente y unidos por grupos fosfato.
sirven para proporcionar rigidez a la pared celular
mediante la atracción de cationes tales como
magnesio y sodio, constituye del 20-40% del peso
seco de la pared celular. determinan la forma celular,
la regulación de la división celular ayudan en la
patogénesis y en la resistencia a los antibióticos. No
suelen hallarse en las bacterias gram negativas.
 Espacio periplásmico
La función principal del periplasma es la de osmo
regulación. es una solución densa, con un alto
y protege a las bacterias de una ruptura osmótica contenido de macromoléculas concisas, las cuales
en ambientes acuáticos y da a los tipos diferentes intervienen en la regulación de la osmolaridad, es
de bacterias sus formas decir, el nivel de concentración de las partículas. Si se
está en medio de una alta osmoralidad en fluidos
corporales, el periplasma baja la concentración de
oligosacáridos y viceversa Es clave en el transporte y
procesamiento de moléculas que entran y salen
 Membrana plasmática
Define la extensión celular.
Separa el medio interno del externo.
Transporte molecular: controla la entrada y salida de
moléculas e iones y transporta moléculas del interior
al exterior de la célula.
Participa en la transmisión del impulso nervioso,
recepción de estímulos.
Establece uniones con otras células

3. Describan el color obtenido de cada una de las tinciones; al menos tres enfermedades causadas por cada
una así como tres beneficios

4. Describa tres similitudes y tres diferencias en la alimentación de procariotas y eucariotas

procariotas similitudes eucariotas

Generan su propio alimento Obtienen por su cuenta el
alimento

5. Describa tres similitudes y tres diferencias en la nutrición de procariotas y eucariotas

procariota Similitudes eucariota

no hay fagocitosis Rutas metabólicas compartidas si hay fagocitosis
Ejem. Glucolisis, ciclo de Krebs
quimio síntesis Sin quimio síntesis
fotosintéticos Solo las células vegetales son
fotosintéticas

Antecedentes bibliografía. Me falta hacerlas en formato APA

http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399 Actualizado: 30 de Mayo de 2017
https://biologia.laguia2000.com/microbiologia/pared-celular-bacteriana 30 de Abril de 2015
http://josantonius.blogspot.mx/2011/01/enfermedades-causadas-por-bacterias.html 2011
http://muyenforma.com/beneficios-de-las-bacterias.html 2011-2013 

http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0122-93542010000100004 Rev. Med.

Vet.  no.19 Bogotá Jan./June 2010
http://medicina.pcweb.info/2017/07/acidos-teicoicos-bacterias-composicion-funcion-definicion-que-son-
sirven-lipoteicoicos.html

https://www.animales.website/periplasma/

http://cualesel.net/la-funcion-la-membrana-celular-plasmatica/

 la función principal es la de absorber los nutrientes del quimo, o los

alimentos digeridos.
  absorber la vitamina B12. Las proteínas y los péptidos se
descomponen en los aminoácidos en el íleon.
 El desglose de los hidratos de carbono en los azúcares simples y los
lípidos en el glicerol y los ácidos grasos para ser fácilmente absorbidas
por el cuerpo es también una de las funciones.
 Esta parte del intestino delgado absorbe las sales biliares que son
producidas por el hígado.
 }https://lasaludi.info/funcion-ileon.html

Recto

 funcionar como lugar temporal de almacenamiento para la materia fecal antes de que sea
eliminada a través del ano.
  el recto absorbe agua de los residuos, que al pasar por este último segmento del intestino
grueso las paredes se distienden produciendo el reflejo de defecar.