Berg • Tymoczko • Stryer

Biochemistry
Sixth Edition

Chapter 20:
The Calvin Cycle and the Pentose
Phosphate Pathway

Copyright © 2007 by W. H. Freeman and Company

Mediciones
atmosféricas del
dióxido de carbono en
Mauna Loa, Hawaii.
Estas mediciones
muestran ciclos anuales
resultantes de la
variación estacional en
la fijación de dióxido de
carbono por el ciclo de
Calvin en plantas
terrestres. Gran parte de
esta fijación tiene lugar
en las selvas tropicales,
que representan
aproximadamente el
50% de la fijación
terrestre
Ciclo de Calvin
sintetiza hexosas de
CO2 y H2O.

El ciclo de Calvin
consta de tres
etapas. La etapa 1
es la fijación de
carbono por la
carboxilación de
1,5-bisfosfato de
ribulosa. La etapa
2 es la reducción
del carbono fijo
para comenzar la
síntesis de hexosa.
La etapa 3 es la
regeneración del
compuesto de
partida, ribulosa-
1,5-bisfosfato
El dióxido de carbono reacciona con la ribulosa 1,5-bisfosfato para
formar dos moléculas de 3-fosfoglicerato.
Esta reacción altamente exergónica es catalizada por la ribulosa 1,5-
bisfosfato carboxilasa / oxigenasa (usualmente llamada rubisco), una
enzima localizada en la superficie estromal de las membranas
tilacoides de los cloroplastos.
Seguimiento del destino de CO2 . En cultivos iluminados de algas, a
los 5 segundos , la radiactividad del 14CO2 se incorpora al 3-
fosfoglicerato. Después de 60 segundos, la radiactividad esta presente
en muchos compuestos intermediarios del ciclo de Calvin.
Estructura del rubisco.
La enzima ribulosa
1,5-bisfosfato
carboxilasa /
oxigenasa (rubisco)
comprende ocho
subunidades grandes
(una mostrada en rojo
y las otras en
amarillo) y ocho
subunidades pequeñas
(una mostrada en azul
y las otras en blanco).
Los sitios activos se
encuentran en las
grandes subunidades
La actividad de la Rubisco depende del
Mg y el carbamato.

Papel del ion magnesio H + en el

mecanismo de rubisco. La ribulosa
1,5-bisfosfato se une a un ion
magnesio que está unido a rubisco a
través de un residuo de glutamato,
un residuo de aspartato y el
carbamato de lisina. La ribulosa 1,5-
bisfosfato coordinada abandona un
protón para formar una especie
reactiva de enodiol que reacciona
con CO2 para formar un nuevo
enlace carbono-carbono
La formación del
carbamato es
facilitada por la
enzima rubisco
activasa, aunque
también se formará
espontáneamente a
una velocidad
menor. El centro
metálico juega un
papel clave en la
unión del 1,5-
bisfosfato de
ribulosa y
activándolo para
que reaccione con
CO2
Formación de 3-fosfoglicerato. El camino
general para la conversión de la ribulosa 1,5
bisfosfato y CO2 en dos moléculas de 3-
fosfoglicerato. Aunque las especies libres se
muestran, estos pasos tienen lugar sobre el
ion de magnesio.
Rubisco también cataliza una reacción inútil de oxigenasa:
imperfección catalítica. El reactivo intermediario de enodiol en la
rubisco reacciona con el oxígeno molecular para formar un intermedio
de hidroperóxido, que luego procede a formar una molécula de 3-
fosfoglicerato y una molécula de fosfoglicolato.
Reacciones fotorespiratorias. El
fosfoglicolato se forma como un
producto de la reacción de la
oxigenasa en los cloroplastos.
Después de la desfosforilación,
el glicolato se transporta a
peroxisomas donde se convierte
en glioxilato y luego en glicina.
En las mitocondrias, dos glicinas
se convierten en serina, después
de perder un carbono como CO2
y ión amonio. El ion amonio se
recupera en los cloroplastos.
Micrografía electrónica de un
peroxisoma anidado entre
dos cloroplastos.
Las hexosa fosfatos se fabrican a partir de
fosfoglicerato y se regenera la ribulosa 1,5-
bisfosfato.

El 3-fosfoglicerato se convierte en
fructosa-6-fosfato en una vía paralela a
la de la gluconeogénesis.
La transcetolasa, que volveremos a ver en la vía de la pentosa fosfato,
requiere que la coenzima tiamina pirofosfato (TPP) transfiera una
unidad de dos carbonos (COOCH2OH) de una cetosa a una aldosa.
La aldolasa, que ya hemos encontrado en la glicólisis, cataliza una
condensación aldólica entre fosfato de dihidroxiacetona (DHAP) y
un aldehído. Esta enzima es muy específica para el fosfato de
dihidroxiacetona, pero acepta una amplia variedad de aldehídos.
Formación de azúcares de 5 carbonos. La transcetolasa convierte un
azúcar de 6 carbonos y un azúcar de 3 C en un azúcar de 4 carbonos
y un azúcar de 5 carbonos.
Luego, la aldolasa combina el producto de cuatro carbonos y un
azúcar de tres carbonos para formar un azúcar de siete carbonos
Finalmente, este azúcar de 7 carbonos reacciona con otro azúcar de 3
carbonos para formar 2 azúcares adicionales de 5 carbonos
 Regeneración de la ribulosa 1,5-bisfosfato

Tanto el 5-fosfato de ribosa como el 5-fosfato de xilulosa se

convierten en 5-fosfato de ribulosa, que luego se fosforila para
completar la regeneración del 1,5-bisfosfato de ribulosa.
 Ciclo de Calvin.
El diagrama
muestra las
reacciones
necesarias con
la
estequiometría
correcta para
convertir 3
moléculas de
CO2 en una
molécula de
fosfato de
dihidroxiacetona
(DHAP).

El ciclo conlleva muchas reacciones que conducen a la síntesis de

glucosa y la regeneración de ribulosa 1,5-bisfosfato.
 La actividad
del ciclo de
Calvin
depende de las
condiciones
ambientales.

Síntesis de sacarosa. La sacarosa 6-fosfato se forma por la

reacción entre la fructosa-6-fosfato y el intermedisrio
activado uridina-difosfato-glucosa (UDP-glucosa).
Rubisco es activado por los
cambios impulsados por la
luz en las concentraciones de
iones de protones y
magnesio.
Regulación de la luz del ciclo de
Calvino. Las reacciones de luz de la
fotosíntesis transfieren los electrones
del lumen del tilacoide hacia el
estroma y transfieren los protones del
estroma al lumen del tilacoide. Como
consecuencia de estos procesos, las
concentraciones de NADPH,
ferredoxina reducida (Fd) y Mg2+ en
el estroma son más altas en la luz que
en la oscuridad, mientras que la
concentración de H+ es más baja en la
oscuridad. Cada uno de estos cambios
de concentración ayuda a acoplar las
reacciones del ciclo de Calvin a las
reacciones de luz.
La Tioredoxina juega un papel
clave en la regulación del ciclo de
Calvin
Tiorredoxina. La forma oxidada
de la tiorredoxina contiene un
enlace disulfuro. Cuando la
tiorredoxina se reduce mediante
ferredoxina reducida, el enlace
disulfuro se convierte en dos
grupos sulfhidrilo libres.
La tiorredoxina reducida puede
romper enlaces disulfuro en
enzimas, activar ciertas enzimas
del ciclo de Calvin e inactivar
algunas enzimas degradativas.
La forma reducida de tiorredoxina activa muchas enzimas
biosintéticas reduciendo puentes disulfuro que controlan su actividad
e inhiben varias enzimas degradativas por los mismos medios
Las actividades de las reacciones de luz y
oscuridad de la fotosíntesis se coordinan
a través de la transferencia de electrones
de la ferredoxina reducida a la
tiorredoxina y luego a las enzimas
componentes que contienen enlaces
disulfuro reguladores.
Activación enzimática por tiorredoxina.
La tiorredoxina reducida activa ciertas
enzimas del ciclo de Calvin cortando los
enlaces disulfuro reguladores.
Via C4. El CO2 es concentrado en las células de la vaina del haz
mediante gasto de ATP en las células del mesófilo.
La reacción neta de la via C4 es:
CO2 (células del mesófilo) + ATP + H2O  CO2 (células de la
vaina del haz) + AMP + 3P i+ 2H+
El metabolismo acido de las crasuláceas les permite crecer en
ecosistemas áridos. Micrografia electrónica de un estoma abierto y
otro cerrado.
La via de las pentosa fosfato genera NADPH
y sintetiza azucares de 5 C.
Vias que precisan NADPH:
SINTESIS
Biosintesis de acidos grasos
B de colesterol
B de neurotransmisores
B de nucleótidos
DETOXIFICACION
Reduccion del glutatión oxidado
Citocromo P450 monooxigenasa

En la fase oxidativa
G6P + 2NADP+ + H2O  R5P + 2NADPH
+ 2H+ + CO2
Via de las Pentosa
fosfato.
Fase Oxidativa.
Genera NADPH
En la fase no oxidativa, la via
cataliza la interconversion de
azucares de 3, 4, 5. 6 y 7 C en
una serie de reacciones no
oxidativas.
Fase oxidativa de la via de las pentosa fosfato.
La G6P se oxida a 6-fosfoglucono-δ-lactona generando una
molécula de NADPH. La lactona producto se hidroliza a 6-
fosfogluconato, el cual se descarboxila para dar ribulosa 5-fosfato
con la generación de una segunda molécula de NADPH
La ribosa 5-fosfato es convertida en Gliceraldehido 3-fosfato y
fructosa 6-fosfato por las transcetolasas y la transaldolasa
La suma global de las 3 reacciones da:
X5P + R5P = G3P + S7P
G3P + S7P = F6P + E4P
E4P + X5P = F6P + G3P
------------------------------
2 X5P + R5P = 2 F6P + G3P
Los esqueletos carbonados de los azucares pueden reorganizarse
en profundidad para atender las necesidades fisiológicas.
Mecanismo de la transcetolasa.
La TPP se ioniza para formar un carbanión.
El carbanión de la TPP ataca a la cetosa sustrato.
La ruptura del enlace C-C
libera una aldosa producto
y deja un fragmento de 2 C
unido al TPP
Este intermediario glicoaldehido activado ataca a la aldosa
sustrato formando un nuevo enlace C-C
Se libera la cetosa producto y el TPP queda disponible para un
nuevo ciclo de reacción.
Mecanismo de la transaldolasa.
La reacción comienza con la formación de una base de Schiff
entre un residuo de Lys y la cetosa sustrato.
La protonación de la base de Schiff conduce a la liberación de la
aldosa producto.
Dejando un fragmento
de 3 C unido al
residuo de Lys
Este intermediario se añade a la aldosa S para formar un nuevo
enlace C-C
La subsiguiente desprotonacion
E hidrolisis de la base de Schiff libera la cetosa producto de la
cadena lateral de Lys, completando el ciclo de reaccion
Intermediarios carbanionicos. En la transcetolasa y transaldolasa, el
intermediario carbanionico se estabiliza por resonancia.

En la
transcetolasa,
el TPP
estabiliza al
intermediario

En la
transaldolasa
se estabiliza
mediante una
base de Schiff
protonada
El metabolismo de la G6P a través de la via de las pentosas fosfato
esta coordinado con la glicolisis
El flujo de G6P depende de las necesidades de NADPH, ribosa 5-
fosfato y ATP. Modalidad 1. Se requiere mas R5P que NADPH.
Modalidad 2. Las necesidades de NADPH y R5P están
equilibradas.
Modalidad 3. Se requiere mas NADPH que R5P
Modalidad 4. Se requiere NADPH y ATP
Micrografia electrónica de un cloroplasto.

Las
membranas
tilacoidales
se apilan en
el estroma
del
cloroplasto
de una
celula de la
hierba
Phleum
pratense.
Las áreas
oscuras son
la grana.
La G6P DHasa desempeña un
papel clave en la protección
frente a las especies reactivas de
oxigeno (ROS).
Vicia faba. La planta
mediterránea Vicia faba
produce habas, que
contienen un glicósido de
purina, la vicina.
La deficiencia de G6P
DHasa origina un tipo de
anemia hemolítica
inducida por fármacos.
Eritrocitos con
corpúsculos de
Heinz.
Micrografia
óptica de
eritrocitos
procedentes de
una persona
deficiente en
G6P Dhasa.
Las particulas
oscuras,
corpúsculos de
Heinz, son
grumos de
proteínas
desnaturalizadas