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Periodoncia 2000, vol. 43, 2007, 160–232 Impreso en
Singapur. Reservados todos los derechos
El papel del oxígeno reactivo y las
especies antioxidantes en
destrucción del tejido periodontal
IAINLC CFELIZy jOHNBMATENAS
Contexto de la revisión
Periodontitis es un término utilizado para describir un
proceso inflamatorio, iniciado por la biopelícula de la placa,
que conduce a la pérdida de la unión periodontal a la
superficie de la raíz y al hueso alveolar adyacente y que, en
última instancia, provoca la pérdida de dientes. Las
respuestas inflamatorias e inmunitarias a las bacterias y
también a los virus (387) que colonizan los tejidos
periodontales y asociados involucran la circulación sistémica
y, en última instancia, los sistemas periféricos del cuerpo.
Esto crea una serie bidireccional compleja de interacciones
huéspedmicrobianas que involucran factores celulares y
humorales y redes de citocinas, quimiocinas y factores de
crecimiento. Se cree que si bien el agente etiológico primario
es específico, predominantemente bacterias anaerobias o
facultativas gramnegativas dentro de la biopelícula
subgingival (1, 172), la mayor parte de la destrucción del
tejido periodontal es causada por una respuesta inapropiada
del huésped a esos microorganismos y sus productos (239).
Más específicamente, una pérdida del equilibrio
homeostático entre las enzimas proteolíticas (p. ej., elastasa
de neutrófilos) y sus inhibidores (p. ej.,a1-antitripsina) y
especies reactivas de oxígeno (ROS) y los sistemas de defensa
antioxidantes que protegen y reparan tejidos vitales, células
y componentes moleculares se cree que son los
responsables. La base de dicha desregulación es en parte
genética (38–82 %) (270) y en parte el resultado de factores
ambientales (p. ej., fumar) (311).
Esta revisión se centra predominantemente en el papel de las
ERO y los sistemas de defensa antioxidantes en la patobiología
de la periodontitis, con miras a identificar dianas terapéuticas
específicas para futuras terapias moduladoras del huésped. Se
realizaron búsquedas en las bases de datos de Medline y PubMed
desde 1966 hasta julio de 2005 con los siguientes términos clave:
-especies reactivas de oxígeno-, -radicales de oxígeno-,
- radicales libres-, -antioxidantes-, incluidos los términos para
160
- 2007 Los Autores.
Recopilación de diarios - 2007 Blackwell Munksgaard
PERIODONTOLOGIA 2000
antioxidantes individuales (por ejemplo, ácido ascórbico,
ascorbato, vitamina C, urato, ácido úrico, etc.) y -periodonto*- o
- periodontitis- o -enfermedad periodontal-. Se
identificaron un total de 503 artículos de los cuales 388
estaban escritos en inglés. Reconocemos algunas
investigaciones originales excelentes publicadas en otros
idiomas, pero hemos limitado en gran medida nuestra
revisión a los artículos publicados en inglés y manuscritos
adicionales apropiados de la literatura biomédica para
respaldar esta revisión. Éramos conscientes de que
nuestros criterios de búsqueda no identificaban todos los
artículos en este campo (p. ej., 7) y, por lo tanto,
complementamos la búsqueda con una búsqueda
manual. Si se han pasado por alto manuscritos aislados,
nos disculpamos con esos autores y agradeceríamos
enormemente una reimpresión de su trabajo publicado.
No pretendemos volver sobre un tema antiguo, que ha
sido ampliamente cubierto en revisiones anteriores por
nuestro grupo (79, 80) y por nuestros colegas (39, 64,
434); sin embargo,
Un cambio de paradigma en nuestra comprensión de la
importancia del oxígeno reactivo y las especies antioxidantes
para la biología humana durante la última década provino de
la comprensión de que los factores de transcripción vitales y
ubicuos, como el factor nuclear-jB y la proteína activadora-1
eran sensibles a redox. Esto se refleja en esta revisión y la
atención del lector se dirige específicamente a un principio
subyacente: los cambios más pequeños y sutiles en el estado
redox intracelular desencadenan eventos de transcripción de
genes, que pueden provocar daño tisular secundario a la
inducción de un proceso proinflamatorio. Expresar. Los
cambios hacia arriba más grandes en la relación
prooxidante/antioxidante causan intracelularmente daño
directo a biomoléculas y estructuras vitales, daño y
disfunción de la membrana celular y muerte celular (por
necrosis o apoptosis acelerada), y extracelularmente causan
daño directo al tejido conjuntivo (ambos).

Figura 1.Los efectos biológicos de pequeños y grandes cambios en el equilibrio de actividad entre las especies reactivas de oxígeno (ROS) y las
especies antioxidantes (AO).
mineralizados y no mineralizados) y daño a las
matrices extracelulares y sus componentes (Fig. 1).
Por lo tanto, los sistemas de defensa antioxidantes también se
analizan con respecto a la restauración del equilibrio redox
intracelular y sus efectos sobre la transcripción génica y la
señalización celular. También se analiza la capacidad de los
antioxidantes para prevenir la formación de especies reactivas y
efectuar su eliminación y reparar el daño tisular biológico
resultante. Al final de esta revisión, aludiremos brevemente a
posibles estrategias terapéuticas que vale la pena explorar en el
futuro, para modular la respuesta inapropiada del huésped que
actualmente se considera responsable de la mayoría del daño del
tejido periodontal que se manifiesta como -periodontitis-.
Antecedentes y terminología
Los radicales libres se han definido como -cualquier especie
capaz de existir de forma independiente que contiene uno o
más electrones desapareados- (175). Son, por naturaleza,
especies altamente reactivas y diversas, capaces de extraer
electrones y, por lo tanto, oxidar una variedad de
biomoléculas vitales para la función celular y tisular, que no
solo incluyen radicales libres de oxígeno, sino también
especies de nitrógeno y cloro. Esta revisión se centrará
predominantemente en los radicales de oxígeno. Sin
embargo, no es posible revisar las actividades de ROS sin
discutir brevemente las especies colaboradoras de otras
clases. En particular peroxinitrito (ONOO)) formación,
derivada de la reacción de óxido nítrico (NO•) y superox-
ide (O--2) se discutirá brevemente, dados los nuevos datos
lo que indica su importancia hasta ahora subestimada en
la patogenia de las enfermedades inflamatorias (96).
ROS y antioxidantes en la periodontitis
ROS es un término que se ha vuelto más popular
porque abarca otras especies reactivas que no son
verdaderos radicales pero que, sin embargo, son
capaces de formar radicales en los entornos intra y
extracelular. La Tabla 1 se modifica ligeramente de la
revisión exhaustiva de Battino et al. (39) y resume los
principales radicales de oxígeno verdadero y ROS.
Los antioxidantes se definen como -aquellas sustancias
que cuando están presentes en bajas concentraciones, en
comparación con las de un sustrato oxidable, retrasan o
inhiben significativamente la oxidación de ese sustrato- (181).
En la fisiología normal existe un equilibrio dinámico entre la
actividad de ROS y la capacidad de defensa antioxidante y
cuando ese equilibrio cambia a favor de ROS, ya sea por una
reducción en las defensas antioxidantes o por un aumento
en la producción o actividad de ROS, se produce estrés
oxidativo. El estrés oxidativo fue definido por Sies (381) como
-una alteración del equilibrio prooxidante-antioxidante a
favor del primero, que conduce a un daño potencial-. Dado
que se estima que se generan entre 1.000 y 3.000 millones de
especies reactivas por célula al día, queda clara la
importancia de los sistemas de defensa antioxidantes para el
mantenimiento de la salud (19).
El potencial redox es una medida (en voltios) de la afinidad
de una sustancia por los electrones, en relación con el
hidrógeno. Las sustancias más fuertemente electronegativas
que el hidrógeno (es decir, capaces de oxidar el hidrógeno)
tienen potenciales redox positivos y son oxidantes. Las
sustancias menos electronegativas que (es decir, capaces de
reducir) el hidrógeno tienen potenciales redox negativos y
son agentes reductores. Las reacciones de oxidación y
reducción siempre van juntas y se denominan reacciones
redox. Dentro del surco/bolsa gingival, un potencial redox
bajo se considera esencial para el crecimiento.
161
chapple y matthews

Tabla 1.Verdaderas especies radicales y reactivas de oxígeno (ROS) y sus símbolos

verdaderos radicales símbolo radical ROS símbolos ROS

superóxido O-- Peróxido de hidrógeno H2O2

2
•
hidroxilo OH Ácido hipocloroso HOCl
perhidroxilo HO--2
hidroperoxilo HOO• Oxígeno singlete 1O2

alcoxilo RO• Ozono O3

ariloxilo ARO•
arilperoxilo ArOO•

peroxilo ROO•)

aciloxilo RCOO•

acilperoxilo RCOOO•

La convención es usar•para indicar un electrón desapareado y ) o + para indicar la carga molecular, que puede ser +ve o )ve o incluso neutral (p. ej.•OH).

y la supervivencia de los anaerobios subgingivales (308), mientras
que dentro de las células y los tejidos un entorno reductor (bajo
potencial redox) protege contra el estrés oxidativo. Por lo tanto,
existe un conflicto aparente en el desarrollo de estrategias
terapéuticas futuras para la periodontitis que se basen en la
biología redox, porque mantener un estado redox bajo para
proteger las células y los tejidos del huésped del estrés oxidativo
favorece el crecimiento y la supervivencia de los anaerobios. Sin
embargo, es vital para la comprensión de esta revisión y las
complejidades de la biología redox recordar que el cuerpo está
compartimentado. Las bacterias no son patógenos intracelulares
(a diferencia de los virus) y, por lo tanto, mantener un estado
redox bajo dentro de una célula puede no tener relevancia para
un estado redox alto dentro de la bolsa periodontal/fisura
gingival. Un ejemplo clave de diferencias compartimentadas en la
composición de antioxidantes fue destacado por Brock et al. (58),
quienes demostraron que la composición antioxidante del líquido
crevicular gingival difiere sustancialmente de los compartimentos
del plasma y la saliva, siendo el glutatión reducido (GSH) un
antioxidante importante dentro del líquido crevicular gingival,
mientras que el ácido úrico predomina en la saliva y el plasma,
que también poseen niveles más altos de proteínas y
antioxidantes.
Oxígeno reactivo y especies
antioxidantes en biología y medicina.
Oxígeno atómico y molecular: principios
básicos
Los átomos tienen capas que contienen electrones (e)) que
tienen energía para evitar que sean absorbidos por el
núcleo cargado positivamente. Cada capa (numerada 1, 2,
3, 4, etc.) puede tener hasta cuatro patrones orbitales
(indicados por s, p, d, f) girando en cualquier dirección.
Cada orbital solo tiene dos electrones que giran en
direcciones opuestas (el principio de exclusión de Pauli)
como un par. La figura 2 muestra que el oxígeno atómico
(O) tiene concha-1con un orbital s (2e)) yconcha-2con un
orbital s (2e)) y tres orbitales p (4e)). Uno de los tres
orbitales p está ocupado por un par de electrones (2e))
pero por razones complejas de cinética atómica (ver 444)
los dos orbitales p restantes tienen electrones
individuales (por lo tanto, 8e)en total). el exterior 2e)
tienen la misma energía y como cada uno ocupa un
porbital separado, giran en una dirección paralela. El
oxígeno atómico se denota así (1s)2(2s)2(2p)4. Di-oxígeno
molecular (O2) se forma por la unión de dos átomos de
oxígeno y se considera un -bi-radical- estable, porque
tiene 16 electrones (ocho por átomo) ocupando dos capas
atómicas, pero la exterior 2e)están desemparejados. Hay
dos orbitales s enconcha-1,dos orbitales s en concha-2,y
los 8e restantes)ocupan orbitales p en los que 6e)están
emparejados con espines opuestos y el exterior 2e)
ocupan orbitales individuales (porque esto consume
menos energía) y, como el oxígeno atómico, tienen un
espín paralelo. El resultado es una molécula con el deseo
de aparear sus electrones externos no apareados (por lo
tanto, un poderoso agente oxidante) pero debido a la
-restricción de espín- inherente al oxígeno de su 2e
externo no apareado.), que tienen espín paralelo, no
puede aceptar pares de electrones, porque 2e)no existen
de forma aislada con espines paralelos (conservación de
la energía atómica) para emparejarse con el exterior 2e)
de oxígeno ¿Porque es esto importante? Se vuelve simple
entender la relación entre el oxígeno y las ROS derivadas

162

Figura 2.La organización de los electrones dentro de las capas y orbitales del oxígeno atómico y molecular. Tenga en cuenta que los dos electrones exteriores
ocupan espines paralelos tanto en el oxígeno atómico como en el molecular (restricción de espín).
de él, en términos atómicos. La adición de una e)al
oxígeno resulta en la formación del anión superóxido:
O2þmi-!O-- 2:
La adición de una segunda e)resulta en la formación del
peróxido de hidrógeno ROS (H2O2):
O2--þmi-þ2Hþ!H2O2:
La adición de una tercera e)resulta en la formación
del radical hidroxilo (•OH):
H2O2þmi-!-OHþOH-:
La adición de una cuarta e)resulta en la formación
de agua (H2O):
- antioxidantes mitocondriales para eliminar el superóxido. La
OHþmi-þHþ!H2O:
Orígenes y formación de ROS y
radicales de oxígeno
Los detalles de la formación y eliminación de radicales de
oxígeno y ROS se han revisado previamente (ver 39, 64,
80, 434). Las fuentes exógenas incluyen calor, trauma,
ultrasonido, luz ultravioleta, ozono, tabaquismo, gases de
escape, radiación, infección, ejercicio excesivo y
ROS y antioxidantes en la periodontitis
fármacos terapéuticos (64, 105, 185). Las fuentes endógenas son
principalmente:
• subproductos de vías metabólicas: fuga de electrones
de los sistemas de transporte de electrones
mitocondriales que forman superóxido;
• generación funcional por células de defensa del
huésped (fagocitos) y células de los tejidos conectivos
(osteoclastos y fibroblastos).
El metabolismo celular implica el consumo de oxígeno y su
utilización a través de la glucólisis para formar piruvato (Fig.
3) dentro de las mitocondrias. El ciclo de aminoácidos sigue y
se genera ATP. Sin embargo, los electrones se escapan de
sus transportadores a una velocidad constante, reduciendo
el oxígeno al anión superóxido. La reducción incompleta de
oxígeno se estima en 1 a 3% del oxígeno consumido (63, 300)
y a una tasa que supera la capacidad del eliminador de
superóxido dismutasa 2, que depende del manganeso,
funciona para eliminar los radicales superóxido que se
forman. Sin embargo, el daño del ADN mitocondrial por ROS
y especies reactivas de nitrógeno (RNS) todavía ocurre y es
un proceso que se cree que es importante en ciertas
enfermedades crónicas y en el envejecimiento (380). Por lo
tanto, las mitocondrias son una fuente importante de ROS
derivadas del metabolismo.en vivo y el ADN mitocondrial
parece sufrir daño más fácilmente que el ADN nuclear (96)
debido a su
163
chapple y matthews
Fig. 3.Una representación esquemática de la derivación de
NADPH-oxidasa (hexosa-monofosfato), que demuestra el uso de
glucosa-6-fosfato (G6P) y NADPH para efectuar la reducción de
un solo electrón de oxígeno a superóxido. PFK, fósforo
la proximidad a las ROS generadas, la falta de proteínas
histonas para eliminar radicales y quizás ineficiencias en
los mecanismos de reparación del ADN poli(ADP-ribosa)
polimerasa que reparan roturas de hebras (360).
La producción funcional de superóxido implica la
activación de la derivación de hexosa-monofosfato (o
NADPH-oxidasa), que desvía la glucosa-6-fosfato de la
vía de la glucólisis (Fig. 3) y utiliza oxígeno molecular y
NADPH (Fig. 3 y 4)
para formar el anión radical superóxido (O-- 2). Esta
El proceso comprende el llamado estallido respiratorio dentro de
los leucocitos polimorfonucleares neutrofílicos (neutrófilos) y es
estimulado por una variedad de mitógenos/antígenos/citocinas y
otros mediadores como el factor estimulante de colonias de
granulocitos y macrófagos. Activadores importantes son
partículas opsonizadas que activan FcCreceptores (FcCR), ADN
bacteriano que puede activar receptores tipo Toll (por ejemplo,
TLR-4, TLR-9) (446), pequeños péptidos de bacterias, comoF
MetLeuPhe y agonistas de la proteína quinasa C, como el acetato
de miristato de forbol. La NADPH-oxidasa tiene una estructura
compleja que incluye subunidades citosólicas (por ejemplo,
p47phox, p40phox, p67phox) y subunidades que están unidas
dentro de la membrana lipídica (por ejemplo, gp91phox,
164
for-fructoquinasa-1; GA3P, gliceraldehído-3-fosfato; PEP,
fosfoenolpiruvato; PK, piruvato quinasa; LDH, lactato
deshidrogenasa; PDH, piruvato deshidrogenasa; NADP,
nicotinamida adenina dinucleótido fosfato.
p22phox). Las vías proximales que unen los receptores de la
superficie celular con la oxidasa difieren en el
comportamiento temporal y los componentes bioquímicos,
pero las vías aguas abajo parecen converger en los puntos de
activación citosólica de la NADPH-oxidasa (372). Una vía
involucra la fosforilación de p47phox, luego de lo cual las
subunidades citosólicas se reubican en la membrana
vacuolar formando la oxidasa catalíticamente activa. El
superóxido solo se produce en la zona de la membrana
plasmática que está en contacto con la partícula fagocitada y,
hasta hace poco, nadie había podido reconciliar la actividad/
toxicidad relativamente baja del superóxido y el peróxido de
hidrógeno (que también son de larga duración) con la
naturaleza eficiente de la destrucción microbiana después de
la activación de la oxidasa. Un artículo reciente de Ahluwalla
et al. (6) sin embargo, proporcionó evidencia de que el
proceso de producción de ROS dentro de los neutrófilos
puede destruir partículas opsonizadas indirectamente,
mediante la activación de proteasas lisosomales.
Demostraron que el Ca citosólico elevado2+los niveles
resultantes de la estimulación del receptor de la superficie
celular, abrió Ca2+-dependiente K+canales en la membrana
del fagolisosoma (vacuola). Al mismo tiempo, la NADPH-
oxidasa bombeaba superóxido (e)) en el

Figura 4.Una representación esquemática de las interacciones
bioquímicas entre el superóxido de neutrófilos (a través de la
NADPH-oxidasa) y los sistemas de enzimas antioxidantes de
neutrófilos, con énfasis en el glutatión, su peroxidasa y
vacuola (fagolisosoma) desde su ubicación en la
membrana vacuolar, despolarizando la membrana y
generando un gradiente iónico, lo que resultó en un
flujo hacia el interior de K+iones El K hipertónico+Se
propone un ambiente alcalino rico (pH elevado) dentro
de la vacuola para activar las proteasas lisosomales
dentro, y esas proteasas provocan la destrucción
microbiana (341).
La activación de la oxidasa y la subsiguiente generación de
superóxido y la cascada de ROS aguas abajo se ilustran en la
figura 5. En individuos sanos, el cebado de neutrófilos puede
surgir de forma periférica o local dentro de los tejidos,
después de lo cual la estimulación de neutrófilos induce el
estallido oxidativo. El superóxido se forma inicialmente y
luego se dismuta espontáneamente a peróxido de hidrógeno
(una reacción rápida a pH 7,4) o se convierte activamente en
peróxido de hidrógeno por uno de los tres sistemas de
enzimas superóxido dismutasa. La superóxido dismutasa
(SOD) se ha localizado dentro del ligamento periodontal
humano (208) y puede
ROS y antioxidantes en la periodontitis
reductasa. G-6PDH, glucosa-6-fosfato deshidrogenasa;
NADPH, nicotinamida adenina dinucleótido fosfato-H; PMNL,
leucocito polimorfonuclear neutrofílico.
representan un importante mecanismo de defensa dentro de
los fibroblastos gingivales contra la liberación excesiva de
superóxido (384). Este último activa la conversión hasta
10.000 veces más rápido que la reacción de dismutación
espontánea (39):
• superóxido dismutasa 1 - un Cu2+/Zn2+-enzima dependiente
que se encuentra dentro del citosol;
• superóxido dismutasa 2 – el Mn2+-enzima
dependiente ubicada dentro de las mitocondrias;
• superóxido dismutasa 3 – enzima extracelular, que se
encuentra en niveles extracelulares bajos.
O2--þO-- þS!
þ 2H-O 2þH2O2(Fig. 4):
sobredosis1
2
Una vez formado, el peróxido de hidrógeno actúa como
sustrato para la mieloperoxidasa de neutrófilos, que lo
convierte en ácido hipocloroso (HOCl), otra ROS. Este último
posee una gran variedad de actividades biológicas, además
de sus propiedades microbicidas (447), algunas
proinflamatorias y otras antiinflamatorias (ver 254 para
165
chapple y matthews
Figura 5.El papel de las bacterias y sus productos en la producción de
ROS de neutrófilos mediada por receptores, aumentada por las
interacciones AGE/RAGE. LBP, proteína de unión a lipopolisacáridos
(LPS); GM-CSF, granulocitos-macrófagos colonia-sti-
revisión) formando cloraminas como taurina-norte-
monocloramina y aldehídos citotóxicos. La actividad del ácido
hipocloroso depende de su concentración, las altas
concentraciones son citotóxicas, pero incluso a bajas
concentraciones (10-20yoMETRO) el ácido hipocloroso puede
oxidar e inactivara1-antitripsina (447), activa la colagenasa de
neutrófilos (396) e interrumpe una variedad de funciones de
proteínas (366). El peróxido de hidrógeno también puede
sufrir -reacciones de Fenton- en presencia de Fe2+o Cu2+iones,
formando el más potente de todos los radicales de oxígeno,
el radical hidroxilo (•OH).
Fe2þþH2O2! Fe3þþ-OHþOH-
(reacción de Fenton simplificada):
Esta reacción es una de las más importantes en la biología de los
radicales libres (398). Da lugar a la formación de radicales hidroxilo
específicos del sitio (97) porque el peróxido de hidrógeno sin carga
puede difundirse a través de las membranas lipídicas y, por lo tanto,
las reacciones de Fenton pueden convertir una ROS de baja actividad
y en gran parte débil en un potente radical hidroxilo en las
proximidades de las células vitales. estructuras
166
factor de modulación; AGE, productos finales de glicación
avanzada; RAGE, receptor para productos finales de glicación
avanzada; PMNL, leucocito polimorfonuclear neutrofílico.
y macromoléculas (por ejemplo, ADN). Hierro ferroso normalmente soluble
(Fe2+) no es presenteen vivo,se une estrechamente a las proteínas, pero
puede producirse dentro de las células (por ejemplo, las mitocondrias o el
citosol) por la acción del superóxido sobre el hierro férrico (Fe3+) dentro de
las proteínas de almacenamiento de hierro.
Fe3þþO-- 2! Fe2þþO2:
La dismutación del peróxido de hidrógeno también da lugar a
las ROS denominadas oxígeno singlete (1O2). El oxígeno singlete
es oxígeno molecular que ha recibido una entrada de energía,
que a su vez permite una inversión de la dirección de espín de
uno de los dos electrones no apareados exteriores para ocupar
un estado de alta energía (espín antiparalelo). Esto crea una
situación en la que ahora es posible que los dos electrones no
apareados exteriores se apareen, porque es posible la
adquisición de dos electrones no apareados con espines
opuestos (ver la sección anterior -Oxígeno atómico y molecular -
principios básicos-). El oxígeno singlete, aunque no es un
verdadero radical, es por lo tanto altamente reactivo y capaz de
iniciar la peroxidación lipídica (236) de las cadenas laterales de
los ácidos grasos poliinsaturados. Los eosinófilos son una fuente
de oxígeno singlete (215)

Figura 6.Las interacciones entre el superóxido y el óxido nítrico para formar el anión peroxinitrito y los efectos moleculares y
celulares de estas especies reactivas. NF-jB, factor nuclear kappa B; LTB4, leucotrieno B4.
pero la reacción del ozono con las biomoléculas también puede
dar lugar al oxígeno singulete (214). La eliminación del oxígeno
singulete se logra mediante pigmentos carotenoides, que
absorberán la energía del oxígeno singulete y liberarán calor
(136).
Superóxido y óxido nítrico
La formación y las acciones del superóxido se han
discutido anteriormente y en otros lugares (39, 64, 79, 82,
434), pero su interacción con el óxido nítrico (NO) merece
una mención específica. El óxido nítrico se sintetiza a
partir deL- arginina por una familia de enzimas llamadas
óxido nítrico sintasas. Hay tres formas:
• óxido nítrico sintasa tipo 1 – enzima cerebral (bNOS);
• óxido nítrico sintasa de tipo 2: enzima inducible (iNOS), que
se encuentra en los macrófagos;
• óxido nítrico sintasa tipo 3 – enzima de células
endoteliales (eNOS).
La óxido nítrico sintasa de las células endoteliales causa la
relajación del músculo liso dentro de los vasos sanguíneos
(vasodilatación) porque el óxido nítrico es una pequeña
molécula lipofílica que ingresa fácilmente a las células y se
une al hierro unido al grupo hemo, extrayéndolo del anillo de
porfirina. Esto, y las interacciones citosólicas posteriores,
conducen al secuestro de calcio celular, una caída en los
niveles de calcio intracelular y la posterior relajación del
músculo liso (205, 279). Sin embargo, la óxido nítrico sintasa
inducible derivada de macrófagos es de interés; cuando se
libera simultáneamente con el superóxido, forma el anión
peroxinitrito de la especie nitrogenada reactiva (45).
NO-þO-- 2! ONOO-
Si bien el peroxinitrito no es un verdadero radical, ahora se
cree que es responsable de muchos de los efectos citotóxicos.
ROS y antioxidantes en la periodontitis
efectos previamente atribuidos al óxido nítrico y al
superóxido (71, 401). Estas actividades incluyen:
• Peroxidación lipídica;
• agotamiento del glutatión por oxidación;
• formación de nitrotirosina que puede inhibir la actividad
de la superóxido dismutasa;
• daños en el ADN por nitrosilación, desaminación y
oxidación;
• altas concentraciones causan necrosis celular rápida
(53);
• bajas concentraciones causan apoptosis (53, 357). La
amplia gama de actividades biológicas que pueden
surgir de la interacción del óxido nítrico, el superóxido y
el peroxinitrito fueron resumidas por Cuzzocrea et al. (96)
en su excelente revisión de la que se toma la Fig. 6. El
superóxido establece un estado proinflamatorio de varias
maneras, como desencadenar el factor nuclear.j
Transcripción B de citocinas proinflamatorias. Otros
ejemplos incluyen:
• daño de las células endoteliales (120);
• aumento de la permeabilidad vascular (173);
• quimiotaxis de neutrófilos a través de la formación de leucotrieno
B4 (104);
• peroxidación lipídica (113);
• La hebra de ADN se rompe (114).
Peróxido de hidrógeno
El peróxido de hidrógeno es un ROS débil, cuyo potencial para
causar daño tisular se limita a su interacción con los iones de
metales de transición a través de la química de Fenton o la luz
ultravioleta, cuando forma el radical hidroxilo más potente. A
menos que las concentraciones superen los 50yoMETROla
citotoxicidad del peróxido de hidrógeno es limitada (187) y su
significado biológico es más como una molécula de señalización
celular (3). El peróxido de hidrógeno juega un papel
167
chapple y matthews
papel como segundo mensajero en el factor nuclearj
Activación B (ver sección sobre -Vías de señalización
sensibles a redox y enfermedad periodontal-) en algunas
células (33, 367) y donde hay inflamación puede:
• aumentar la expresión de moléculas de adhesión (348);
• provocar la proliferación celular;
• inducir la apoptosis (89, 190);
• modular la agregación plaquetaria (292).
Las principales enzimas encargadas de eliminar el peróxido de
hidrógeno son las enzimas antioxidantes catalasa, que actúa
predominantemente intracelularmente, la glutatión peroxidasa,
que opera dentro de las mitocondrias y extracelularmente, y las
peroxidasas ligadas a la tiorredoxina (187). El peróxido de
hidrógeno también se ingiere en altas concentraciones en el té y
el café y se cree que se difunde en las células de la mucosa oral
(186). También es producido por bacterias orales y el peróxido de
hidrógeno salival es utilizado por el sistema de peroxidasa salival
para oxidar el tiocianato en productos antimicrobianos (68).
El radical hidroxilo
El hidroxilo (•OH) radical y el perhyd-
radical roxilo (HO-- 2) son las especies más potentes
conocido por causar daño y destrucción a una variedad de
componentes celulares y tisulares. Específicamente, el daño
puede afectar objetivos celulares y extracelulares. Los
objetivos celulares incluyen:
• lípidos -a través de la peroxidación de lípidos (ver más abajo);
• carbohidratos -formar radicales carbohidrato o
despolimerizar mucopolisacáridos;
• daño a las proteínas -puede resultar de varios ROS (ver más
abajo), pero el radical hidroxilo es el culpable más potente de
la oxidación de los aminoácidos alifáticos y la creación de
derivados hidroxilados de cadenas laterales de proteínas
(hidroperóxidos de proteínas) (144, 233). La característica de la
actividad del radical hidroxilo es la hidroxilación de tirosina,
triptófano, fenilalanina (211) y también histidina (423). Las
reacciones posteriores de Fenton crean hidrocarburos
aromáticos y productos alifáticos;
• ADN -el daño por peroxinitrito se ha discutido
previamente, pero el daño al ADN y al ARN mediado
por radicales hidroxilo se considera el más significativo;
• oxidación de antiproteasas –La peroxidación lipídica
mediada por radicales hidroxilo (ver más abajo) crea
intermediarios radicales capaces de inactivara1-antitripsina
por oxidación de metionina-358 (275);
• especies de bajo peso molecular –la especie de bajo peso
molecular más importante que se cree que controla el
potencial redox intracelular y la subsiguiente actividad del
factor de transcripción es el glutatión reducido (GSH), que,
dada su importancia estratégica para la NADPH-oxidasa
(Fig. 4), así como la eliminación de ROS
168
y la transcripción de genes (de moléculas proinflamatorias y
antiinflamatorias) se discutirán específicamente más adelante. Los
objetivos extracelulares incluyen:
• componentes de la matriz extracelular –en particular
degradación de la cadena de proteoglicanos y
glicosaminoglicanos constituyentes (revisada en 434);
• colágenos y proteínas estructurales –Los sitios de prolina en el
colágeno parecen especialmente propensos a la degradación
mediada por radicales hidroxilo (277) y como el colágeno
contiene un 16% de residuos de prolina (mientras que las
proteínas humanas promedio contienen solo un 5,6%) (117), el
colágeno tipo 1 del ligamento periodontal puede ser
particularmente sensible a degradación oxidativa (320).
Mecanismos de daño tisular.
Daño a proteínas
La biología del daño proteico mediado por ROS es muy compleja
y sigue sin comprenderse bien. Decano et al. (102) revisaron
exhaustivamente el campo y señalaron que algunas proteínas
oxidadas son mal manejadas por las células, por lo que se
acumulan durante el envejecimiento y en condiciones crónicas
como la diabetes. Los efectos de tal acumulación pueden
conducir a la inactivación funcional, que puede ser reversible o
no reversible, ya una mayor susceptibilidad a la degradación por
proteasas (175). El ataque de radicales puede afectar a C¼Los
enlaces C crean intermediarios radicales centrados en el carbono,
que pueden interactuar y crear pliegues en las proteínas,
alterando así su estructura y función. Las dos especies formadas
por fisión homolítica de un C¼El enlace C puede tomar un
electrón cada uno, formando así radicales intermedios
individuales con carga neutra. Esto requiere una gran entrada de
energía y, normalmente, las abstracciones de electrones dan
lugar a la formación de una especie radical con carga positiva y
otra con carga negativa. Los grupos tiol ()SH) también son
objetivos en proteínas para la actividad de ROS y se forman
puentes disulfuro después de la eliminación de hidrógeno (S¼S),
creando de nuevo entrecruzamientos. Los efectos de ROS sobre
las proteínas se resumen simplemente en la Fig. 7 (adaptado de
Dean et al.) (102) e incluyen:
• plegamiento o despliegue de proteínas (que puede o no
ser reversible);
• reacciones de fragmentación y polimerización de
proteínas;
• degradación por proteasa de la proteína modificada;
• formación de radicales proteicos;
• formación de ROS unidas a proteínas;
• formación de productos finales estables, por ejemplo,
compuestos carbonílicos como oxoácidos o aldehídos (por
ejemplo, alanina a acetaldehído) (98).

Figura 7.Una vista esquemática de los efectos de ROS en
proteínas y aminoácidos (adaptado de Dean et al.) (102).
La Figura 8 es una representación esquemática de algunas
interacciones propuestas.
Peroxidación lipídica
La peroxidación lipídica es una de las reacciones más
importantes de las especies de radicales libres. El más efectivo
para activar este proceso es el radical hidroxilo y también
Figura 8.Algunos efectos del ataque de ROS sobre los núcleos de proteínas y las cadenas laterales, lo que ilustra la formación de grupos carbonilo estables.
ROS y antioxidantes en la periodontitis
anión peroxinitrito (ONOO)) como se discutió
anteriormente. La figura 9 ilustra una secuencia de
eventos, iniciada por un radical hidroxilo, que da lugar a
la reacción en cadena de peroxidación lipídica. Krinsky
(236) describe seis etapas, pero Halliwell (175) simplifica
la reacción a tres etapas principales:
• iniciación;
• propagación;
• terminación.
El radical hidroxilo (o peroxinitrito) ataca una cadena
lateral de ácido graso poliinsaturado (por ejemplo, ácido
araquidónico) en la membrana lipídica (iniciación) y extrae un
átomo de hidrógeno, formando un radical centrado en el
carbono (L•). Este último puede reorganizarse para formar un
dieno conjugado o puede combinarse con otro radical de
cadena lateral de ácido graso poliinsaturado para formar un
enlace covalente, creando así enlaces cruzados y alterando la
estructura y función de la membrana (esto puede conducir a
una entrada de Ca2+iones y posterior activación de Ca2+
-proteasas dependientes). Sin embargo, lo más común es
que el radical de la cadena lateral reaccione con el oxígeno
formando un radical peroxilo lipídico (LOO•) que luego puede
atacar otra cadena lateral de ácido graso poliinsaturado
(propagación) generando otro radical centrado en el carbono
y un hidroperóxido lipídico (LOOH). El radical de cadena
lateral forma otro radical peroxilo lipídico en presencia de
oxígeno, que ataca a otra cadena lateral de ácido graso
poliinsaturado y así continúa la reacción en cadena,
formando
169
chapple y matthews
Figura 9.La reacción en cadena de peroxidación lipídica iniciada por radicales hidroxilo (ver texto). PUFA, ácido graso poliinsaturado.
cientos de hidroperóxidos lipídicos, que se descomponen en
aldehídos citotóxicos y aldehídos menos tóxicos (p. ej.,
malondialdehído). La acumulación de hidroperóxidos lipídicos
interrumpe la función de la membrana celular provocando su
colapso. La terminación se logra de manera más efectiva con la
vitamina E, un eliminador de radicales soluble en lípidos. (a-
tocoferol), que es vital para la integridad de la membrana.
Los productos de la peroxidación lipídica incluyen una variedad de
moléculas bioactivas:
• dienos conjugados;
• peróxidos de lípidos;
• aldehídos, por ejemplo, malondialdehído, que es un
ejemplo de sustancia reactiva con ácido tiobarbitúrico;
• acroleína;
• isoprostanos, por ejemplo, F2-isoprostanos del ácido
araquidónico (8-Yo asi-PGF2) (346);
• neuroprostanos (F4-isoprostanos);
• hidrocarburos volátiles, por ejemplo, pentano, etano (184).
Daño en el ADN
Los mecanismos de daño del ADN por peroxinitrito y
radicales hidroxilo incluyen:
• roturas de hilo;
170
• mutaciones de pares de bases (bases de purina y pirimidina);
• conversión de guanina a 8-hidroxiguanina (55), que
se mide como marcador de daño en el ADN como el
nucleósido 8-hidroxideoxiguanosina (17);
• eliminaciones;
• inserciones;
• mellar;
• amplificación de secuencias.
Los radicales hidroxilo dañan las cuatro bases y
crean una característica -huella digital de ADN- (179).
Sistemas de defensa antioxidantes
Los sistemas de defensa antioxidantes del cuerpo
humano son complejos y existen varios sistemas de
clasificación. Los sistemas antioxidantes individuales se
han revisado exhaustivamente previamente y se remite al
lector a las siguientes revisiones (39, 79, 80, 96, 102, 167,
182, 236, 298, 381, 406).
Los antioxidantes se pueden clasificar por varios métodos:
• su modo de funcionamiento (tabla 2);
• su lugar de acción (intracelular, membrana celular o
extracelular – Tabla 3);
 ROS y antioxidantes en la periodontitis

Tabla 2.Antioxidantes clasificados por modo de acción

Modo de acción Ejemplos

antioxidantes preventivos Enzimas: enzimas superóxido dismutasa (1, 2 y 3), catalasa, glutatión
peroxidasa, enzimas reparadoras del ADN, p. ej., poli(ADP-ribosa) polimerasa, otras

Secuestradores de iones metálicos: albúmina, lactoferrina, transferrina, haptoglobina,

ceruloplasmina, hemopexina, carotenoides, superóxido dismutasa, catalasa, glutatión
peroxidasa, glutatión reductasa, ácido úrico, flavonoides polifenólicos

Carroñero (romper cadenas) Ascorbato (vitamina C), carotenoides (incluyendo retinol – vitamina A), ácido úrico,
antioxidantes a-tocoferol (vitamina E), polifenoles (flavonoides), bilirrubina, albúmina, ubiquinona (forma
reducida), glutatión reducido y otros tioles (libres o ligados a proteínas)

Tabla 3.Ejemplos de antioxidantes clave clasificados por ubicación

Ubicación Ejemplos

intracelular Enzimas superóxido dismutasa 1 y 2, catalasa, glutatión peroxidasa, enzimas reparadoras del ADN
por ejemplo, poli(ADP-ribosa) polimerasa, otros, glutatión reducido, ubiquinona (forma reducida)

extracelular Superóxido dismutasa enzima 3, selenio-glutatión peroxidasa, reducida

glutatión, lactoferrina, transferrina, haptoglobina, ceruloplasmina, albúmina, ascorbato,
carotenoides, ácido úrico

Asociado a membrana a-tocoferol

NB Los niveles extracelulares de glutatión reducido normalmente son solo 1–2yoM (400). La selenio-glutatión peroxidasa es diferente a la enzima intracelular (30).

• solubilidad (lípidos o agua), aunque existe una interacción lactoferrina dentro del líquido crevicular gingival (5). Los
considerable entre los antioxidantes acuosos y lipofílicos antioxidantes que rompen la cadena son los más
en la protección de las lipoproteínas contra el daño importantes dentro de los fluidos extracelulares. Las especies
oxidativo (194, 306) (Tabla 4); de bajo peso molecular donan electrones antes de oxidarse,
• sus dependientes estructurales (Cuadro 5); lo que requiere una reducción o reemplazo posterior para
• su origen/fuente, por ejemplo, fuentes dietéticas o no mantener la capacidad antioxidante del cuerpo. Los
dietéticas (Cuadro 6). antioxidantes liposolubles (a-el tocoferol y los carotenoides)
Los antioxidantes preventivos (Tabla 2) funcionan mediante la actúan a nivel de la membrana celular y protegen contra la
eliminación enzimática de superóxido y peróxido de hidrógeno o peroxidación lipídica, mientras que los secuestrantes
mediante el secuestro de iones metálicos divalentes, evitando las solubles en agua son más importantes dentro de los fluidos
reacciones de Fenton y la subsiguiente formación de radicales tisulares extracelulares.
hidroxilo (183). La lactoferrina es probablemente más importante Sin embargo, es importante reconocer que varios
que la transferrina dentro de los tejidos periodontales, dado el antioxidantes tienen acciones dobles y, a veces, triples.
predominio del infiltrado de neutrófilos (183) y el reconocimiento Por ejemplo, el ascorbato actúa como un antioxidante
de altos niveles de que rompe la cadena o elimina, así como también como
un antioxidante preventivo en virtud de su capacidad
para reciclara-tocoferol (vitamina E) a partir de su forma
Tabla 4.Antioxidantes clave clasificados por solubilidad oxidada (296) y por su capacidad para unir iones
Solubilidad Ejemplos metálicos, respectivamente. De manera similar, las
enzimas intracelulares (superóxido dismutasa, catalasa,
Agua soluble haptoglobina, ceruloplasmina, albúmina,
ascorbato, ácido úrico, flavonoides glutatión peroxidasa) son consideradas por algunos
polifenólicos, glutatión reducido y como antioxidantes preventivos (39, 298). La eficacia de
otros tioles, cisteína, transferrina un antioxidante depende de:
Soluble en lípidos a-Tocoferol, carotenoides, bilirrubina, • su ubicación (intracelular frente a extracelular o unido a la
quinonas (por ejemplo, ubiquinona reducida) membrana celular);
• la naturaleza del desafío ROS;

171
chapple y matthews

Tabla 5.Antioxidantes clasificados por estructuras que protegen

Modo de acción Ejemplos

ADN protector Enzimas superóxido dismutasa 1 y 2, glutatión peroxidasa, enzimas reparadoras del ADN [p. ej.
antioxidantes poli(ADP-ribosa) polimerasa], glutatión reducido, cisteína

Protector de proteínas Secuestro de metales de transición por antioxidantes preventivos

antioxidantes (102)
Barrido por sustratos competidores

Enzimas antioxidantes

Protector de lípidos a-Tocoferol (vitamina E), ascorbato (vitamina C), carotenoides (incluyendo retinol – vitamina A),
antioxidantes ubiquinona reducida, glutatión reducido, glutatión peroxidasa, bilirrubina

NB Los carotenoides (incluidos los derivados de carotenoides) incluyena-, b-yC-caroteno, licopeno, luteína, criptoxantina, zeoxantina, retinol (vitamina A).

Tabla 6.Algunos antioxidantes clave clasificados por su origen

Solubilidad Ejemplos

Antioxidantes exógenos (obtenidos Carotenoides, ácido ascórbico, tocoferoles (a B C D),polifenoles (por ejemplo, flavonoides,
sólo a través de la dieta): catequinas como epigalocatequina-galato), ácido fólico, cisteína
fitonutrientes (259)

Antioxidantes endógenos Catalasa, superóxido dismutasa, glutatión peroxidasa, glutatión-S-transferasa,

(sintetizado por el cuerpo) glutatión reducido, ceruloplasmina, transferrina, ferritina, glucosilasas,
peroxisomas, proteasas

Sintético NORTE-acetilcisteína, penicilinamina, tetraciclinas (449)

• otras especies antioxidantes importantes en las interacciones • reformaa-tocoferol de su radical;

cooperativas (176);
• otras condiciones ambientales (por ejemplo, pH, tensión de
oxígeno).
El cuerpo también está compartimentado con respecto
a las especies antioxidantes. Por ejemplo, las enzimas
superóxido dismutasa, catalasa y glutatión peroxidasa
contribuyen poco a la eliminación de superóxido y
peróxido de hidrógeno en el entorno extracelular (180) y
Brock et al. (58) demostraron un perfil antioxidante muy
diferente para el líquido crevicular gingival que para los
compartimentos de saliva o plasma.
Ácido ascórbico (vitamina C)
El papel de la vitamina C como antioxidante en las enfermedades
inflamatorias se ha discutido en revisiones anteriores (39, 79,
182). Sus actividades se pueden resumir en:
• captación de radicales peroxilo solubles en agua;
• captación de radicales superóxido y perhidroxilo;
• prevención del daño mediado por radicales hidroxilo sobre
el ácido úrico;
• eliminador de ácido hipocloroso;
• disminuye la descomposición del grupo hemo y la posterior Fe2+
liberación previniendo así las reacciones de Fenton;
• depurador de oxígeno singulete y radicales hidroxilo;
• protege contra la liberación de ROS del humo del cigarrillo.
Otros efectos relevantes informados recientemente incluyen la
capacidad de reducir la expresión de moléculas de adhesión de
monocitos mediada por proteína C reactiva (340, 443) y la
capacidad de disminuir la expresión de genes proinflamatorios a
través de efectos sobre el factor nuclear-jFactor de transcripción
B (159). La vitamina C es un nutriente esencial y los niveles
plasmáticos son de aproximadamente 30 a 60yoMETRO(351),
reduciéndose en fumadores (51, 134). Las razones de este último
hallazgo se relacionan en parte con la reducción del consumo de
vitamina C (473), pero también son el resultado de una menor
absorción y una mayor destrucción (262). Se ha informado que
los niveles de líquido crevicular gingival son tres veces más altos
que los niveles plasmáticos (269) y se ha demostrado que la
vitamina C previene la activación de la colagenasa de neutrófilos
(396). La vitamina C es un nutriente esencial con una ingesta
diaria recomendada de 40 a 60 mg (247).
El ascorbato se convierte por ataque de radicales en el radical
ascorbilo, que luego se descompone en deshidroascorbato (48).
El dehidroascorbato se puede volver a convertir en ascorbato
directamente mediante GSH reducido o mediante el sistema
enzimático NAD-semi-dehidroascorbato reductasa, que también
utiliza GSH. Estos sistemas son intracelulares y por lo tanto
ascorbato dentro de la

172

los fluidos extracelulares se agotan rápidamente (se oxidan) en
condiciones de estrés oxidativo (143) a menos que haya niveles
adecuados de GSH (sin embargo, los niveles de GSH extracelular
normalmente son solo 1–2yoMETRO) (400).
a-Tocoferol (vitamina E)
La vitamina E se considera generalmente como el
antioxidante soluble en lípidos más importante y eficaz.
en vivo, vital para mantener la integridad de la
membrana celular contra la peroxidación de lípidos (Fig.
9) por la eliminación de radicales peroxilo (168). Su
comportamiento antioxidante es el resultado de un único
grupo OH fenólico, que al oxidarse da lugar al radical
vitamina E (tocoferilo). Este último requiere otras especies
antioxidantes para reconstituir la vitamina E, siendo la
más eficaz la forma reducida de la coenzima Q10
(ubiquinol) en el entorno lipídico y el ácido ascórbico en la
fase acuosa (298). La vitamina E es un término que en
realidad se usa para describir siete subespecies de
tocoferoles, que se comportan de manera similar aa-
tocoferol (440). La vitamina E posee propiedades
antiinflamatorias y antioxidantes y Brock (57) las revisó:
• inhibición de la proteína quinasa C y posterior
agregación plaquetaria;
• inhibición de la producción de óxido nítrico por el
endotelio vascular;
• inhibición de la producción de superóxido por macrófagos
y neutrófilos (32), por inhibición de la fosforilación de
p47phox durante la activación de la NADPH oxidasa (véase
antes).
Las limitaciones de la eficacia de la vitamina E como
antioxidante son el resultado de:
• su movilidad limitada dentro de las membranas celulares (296);
• su falta de solubilidad en agua (muchas ROS se
generan en la fase acuosa).
Al igual que con la vitamina C,a-los niveles de tocoferol en plasma están
significativamente comprometidos en los fumadores (249).
carotenoides
Los carotenoides son tetraterpinas con más de 600
variantes (406). Estos incluyen, entre otros (ver Tabla 5):
• licopeno;
• a-caroteno;
• B-caroteno;
• luteína;
• criptoxantina;
• retinol (vitamina A1);
• dehidroretinol (vitamina A2).
Derivado únicamente de la dieta (vegetales verdes,
tomates, frutas), el licopeno predomina en el plasma
(148), siendo los tomates la principal fuente dietética
en humanos (otras fuentes incluyen toronjas rojas y
sandías). Los carotenoides son lipofílicos y más altos
ROS y antioxidantes en la periodontitis
se ha demostrado que las concentraciones plasmáticas protegen
contra diversas enfermedades inflamatorias y malignas (406).
Como muchos otros antioxidantes extracelulares,B- los niveles de
caroteno (85, 417) y la ingesta (364) se reducen en los fumadores,
mientras que otros, como el licopeno, no parecen verse
afectados por el tabaquismo.B-caroteno es eficiente en la
eliminación de oxígeno singlete (1O2) y otras actividades
antioxidantes de carotenoides incluyen la eliminación de
radicales peroxilo (395). La vitamina A es controvertida como
antioxidante porque su comportamiento depende de la tensión
de oxígeno del entorno inmediato. A las bajas presiones parciales
de oxígeno que se encuentran en la mayoría de los tejidosB-el
caroteno actúa como antioxidante, pero esta actividad inicial es
seguida por un comportamiento prooxidante a tensiones de
oxígeno más altas, asociado con efectos perjudiciales
sustanciales sobre los tejidos circundantes (196, 305).
Coenzima Q10
La coenzima Q10 existe en forma oxidada (ubiquinona o
CoQ) y en forma reducida (ubiquinol o CoQH2), los cuales
poseen actividad antioxidante (409). Datos considerables
respaldan poderosas actividades antioxidantes. Battino et al.
(39) revisaron brevemente más de 15 estudios en animales y
humanos realizados tanto en sus laboratorios como en los de
sus compañeros de trabajo, que demuestran evidencia
sustancial y sólida de un importante papel antioxidante para
la coenzima Q10 en enfermedades neurodegenerativas
mediadas por radicales libres. Curiosamente, se ha
demostrado la deficiencia de coenzima Q10 en los tejidos
gingivales de sujetos con periodontitis (192, 248), pero
actualmente faltan estudios de intervención en periodontitis
humana para corroborar el beneficio terapéutico clínico;
estos son necesarios.
Ácido úrico
El ácido úrico es uno de los principales eliminadores de
radicales en el plasma, la orina y la saliva (58, 177, 281). Sus
actividades antioxidantes incluyen:
• depurador de oxígeno singulete (18);
• eliminador de radicales hidroxilo (18);
• eliminador de ácido hipocloroso (452);
• proteccion DEa1-antitripsina cuando se combina con
ascorbato (257);
• unión de iones metálicos divalentes que impiden la química de
Fenton (101).
Normalmente, el ácido úrico se oxida a alantoína
enzimáticamente o por radicales hidroxilo, pero la ruta
enzimática no ocurre en humanos, por lo tanto, la formación
de alantoína se usa como marcador de oxidación de urato
por ROS (medida como la relación alantoína:urato) (161) y se
cree que la alantoína ser importante para la capacidad
antioxidante del uratoen vivo (177).
173
chapple y matthews
polifenoles
Los flavonoides polifenólicos han sido revisados por
Battino et al. (39) y se absorben tras la ingesta
dietética de, en particular, verduras, vino tinto y té
(343). Hay más de 4.000 flavonoides conocidos (327),
siendo los más investigados la catequina soluble en
agua, el galato de epigalocatequina, y el polifenol, la
quercetina, que tiene más de 140 derivados. Los
polifenoles funcionan por:
• barrido radical;
• terminación de la peroxidación lipídica;
• quelación de hierro;
• ahorrando vitamina E;
• restauración de la vitamina C.
Sin embargo, actualmente no hay datos sobre los efectos de
las altas dosis de polifenoles dietéticos en las enfermedades
inflamatorias.
glutatión
El glutatión es un tripéptido no esencial (Fig. 10) en el
sentido de que puede sintetizarse dentro de la célula; sin
embargo, sus aminoácidos constituyentes son
-esenciales- y se obtienen a través de la dieta. El glutatión
existe en forma oxidada (GSSG) y reducida (GSH) y el GSH
es un tiol ubicuo que juega un papel importante en la
fisiología y patología humana, por varias razones:
• es uno de los depuradores de antioxidantes intracelulares
más vitales;
• es esencial para el sistema enzimático antioxidante
glutatión peroxidasa, que elimina el peróxido de
hidrógeno al convertir dos moléculas de GSH en una
molécula de GSSG y agua (Fig. 4; revisado en 80,
169, 333);
• juega un papel importante en el mantenimiento del equilibrio
redox intracelular y, por lo tanto, en la regulación de las vías de
señalización que se ven afectadas por el estrés oxidativo;
Figura 10.La estructura del glutatión reducido tripéptido
(GSH) que ilustra sus aminoácidos constituyentes y la
importancia estratégica de la cisteína.
174
• actúa como un neurotransmisor que rige las funciones
neuroinmunes-endocrinas;
• es importante para la preservación y restauración de otras
especies antioxidantes, por ejemplo, vitamina C y vitamina
E;
• regula la expresión/activación de factores de
transcripción sensibles a redox como el factor
nuclear-jB y activando la proteína-1, controlando así
la producción de citoquinas inflamatorias y otras
actividades (Tabla 8).
Este último papel es complejo (ver más adelante), porque la síntesis
de GSH en sí misma también puede ser regulada por citocinas (170,
169).
El GSH de la dieta y el aminoácido central responsable de la
mayoría de las actividades biológicas del GSH, la cisteína, se
absorben intactos en el intestino delgado y aumentarán los
niveles de GSH en plasma y tejidos (408). Sin embargo, por el
contrario, el GSH no se transporta de manera eficiente a la
mayoría de las células de mamíferos; hay algunas excepciones,
como las células epiteliales alveolares pulmonares (106), una
propiedad que es vital para el manejo terapéutico basado en GSH
de las enfermedades pulmonares inflamatorias. Las razones
detrás de la escasa absorción de GSH por la mayoría de las
células se encuentran en su vía de síntesis intracelular. El
ensamblaje de GSH a partir de cisteína,C-el ácido glutámico y la
glicina requieren dos enzimas intracelulares y una enzima unida
a la membrana.
C-SGC
C-Ácido glutamico -!C-glu-cis SHþcisteína
GSH sintetasa
-! C-glu-cys-gly (GSH):
La cisteína es el sustrato limitante de la velocidad yC-glu-
cisintetasa (C-GCS) es la enzima limitante de la velocidad en la
síntesis de GSH. la conversión deC-glu-cis aC-glu-cys-gly (GSH
en sí) es rápido e involucra a la glutatión sintetasa. Se cree
que el 80% deC-La glu-cys-sintetasa se une al GSH dentro del
citosol y es inactiva. Cuando se agotan los niveles de GSH
citosólico, elC-se libera glu-cys-sintetasa y sintetiza más GSH
(201). La tercera enzima se encuentra en la membrana y se
llama C-glutamil-transpeptidasa y esta enzima descompone
el GSH extracelular (de la dieta o liberado después de la
muerte celular) a sus aminoácidos constituyentes (158). La
cisteína puede transportarse a través de la membrana celular
y esto desencadena la síntesis de GSH. Desafortunadamente,
la administración dietética de cisteína no es posible porque
es neurotóxica y se oxida rápidamente a cistina, que no
atraviesa la membrana celular (216). La droga sintética (y
agente de rescate de sobredosis de paracetamol)NORTE-la
acetil-cisteína se usa para entregar cisteína a las células
porque reducirá la cistina a cisteína (333).
Dada la importancia del GSH en la homeostasis
fisiológica, existen otras formas de aumentar

niveles intracelulares además de la síntesis. El GSH forma el
sustrato de la enzima antioxidante glutatión peroxidasa, pero
se reconstituye a partir del GSSG por la glutatión reductasa
(Fig. 4). Estas reacciones cíclicas no solo son vitales para el
estado redox de las células, sino también directamente para
la NADPH-oxidasa. Por lo tanto, fisiológicamente, la reacción
de la reductasa impulsa fuertemente a favor de GSH creando
una relación intracelular del 90% de GSH:GSSG.
Los niveles intracelulares de GSH suelen ser altos (1 a 10 mM), lo
que representa el 90 % de los tioles no proteicos intracelulares (265,
358) y los niveles extracelulares son bajos (1 a 4 mM).yoMETRO
en plasma) (94, 400). Por lo tanto, es interesante que el
líquido de revestimiento epitelial de los alvéolos pulmonares
contenga de 200 a 400yoMETROGSH y este se reduce en
enfermedades pulmonares crónicas y se eleva como
mecanismo protector en fumadores crónicos (revisado en
333). El descubrimiento de niveles milimolares de GSH en el
fluido crevicular gingival (83) y altos niveles que contribuyen
al estado antioxidante total del epitelio cervical (93), ha
llevado a la hipótesis de que el GSH puede representar una
estrategia de defensa innata y fundamental en las superficies
epiteliales expuestas. (79, 83). Curiosamente, algunos
patógenos periodontales (ciertosFusobacterias,
Peptostreptococcus micros,yTreponema denticola)
metabolizar GSH y convertirlo en sulfuro de hidrógeno
citotóxico (69, 87, 256, 318), y recientemente, distintas vías
metabólicas que subyacen a este proceso enT. denticola
fueron reportados (86).
También se ha informado que fumar un solo cigarrillo es
capaz de inducir una reducción significativa de la
concentración de glutatión salival (469, 470) y existen datos
similares para el plasma (333). Se ha demostrado que los
linfocitos polimorfonucleares circulantes de los fumadores de
cigarrillos liberan más superóxido (334). Se han revisado los
efectos perjudiciales del tabaquismo sobre los niveles de GSH
en células y tejidos (333). Existen datos similares para la
periodontitis con una reducción dependiente de la dosis del
GSH del ligamento periodontal como resultado del
tabaquismo (77) y se ha demostrado que el GSH protege
contra las acciones citotóxicas de la nicotina en los
fibroblastos del ligamento periodontal (76).
Defensa antioxidante global
Los sistemas antioxidantes del cuerpo están altamente
integrados y son complejos y, si bien el estudio de sistemas y
especies individuales mejora en gran medida nuestra
comprensión de su papel en las enfermedades humanas,
ignora sus actividades cooperativas y puede presentar una
imagen que no representa con precisión elen vivosituación.
Como resultado de su ubicuidad celular y extracelular y sus
rápidas tasas de oxidación de sacrificio, los captadores de
radicales libres confieren una protección sustancial a las
macromoléculas vitales (182). También trabajan en concierto.
ROS y antioxidantes en la periodontitis
a través de reacciones de ciclo redox, regenerándose
entre sí a partir de sus respectivas especies de
radicales (79, 407). La Figura 11 ilustra este proceso,
GSH regenerando a-tocoferol y vitamina C de sus
radicales, previniendo una mayor peroxidación lipídica
y daño celular (131, 312, 382). Por lo tanto, se han
desarrollado varios ensayos de defensa antioxidante
global o capacidad antioxidante total para reducir la
tarea costosa y lenta de medir especies antioxidantes
individuales. Dichos ensayos también brindan
información sobre la eficacia combinada de especies
individuales (la capacidad antioxidante total puede ser
mayor que la suma de los antioxidantes individuales) y
también pueden explicar la influencia de sustancias
antioxidantes que aún no se han descubierto o que
son técnicamente difíciles de analizar. Estos ensayos
brindan una descripción general de las interacciones
biológicas entre las especies de antioxidantes
individuales y brindan una medida de la capacidad de
los sistemas biológicos para resistir el ataque
oxidativo y se discutirán más adelante.
Halliwell (178) destacó los problemas asociados con el
establecimiento definitivo de la participación de ROS y la
reducción de las actividades antioxidantes en varias
enfermedades humanas. También señaló que el entorno oral
ofrecía oportunidades para explorar la biología de los radicales
libres y los antioxidantes más fácilmente que otros
compartimentos/sistemas del cuerpo. En particular, la capacidad
de aplicar antioxidantes por vía tópica y crear concentraciones
significativas localmente dentro de los tejidos ofrece
oportunidades interesantes para nuevas terapias de modulación
del huésped. Parecería apropiado expandir esta actividad, en
vista de la importancia de la salud periodontal para la salud de la
población del Reino Unido (178).
Antioxidantes dietéticos vs. suplementación individual
Ritchie y Kinane (344) revisaron brevemente el papel de la
nutrición en la lesión inflamatoria de la periodontitis y
Enwonwu y otros (129, 130, 293) revisaron exhaustivamente
los aspectos de la desnutrición y las enfermedades
periodontales. Como se hará evidente, los primeros estudios
de suplementos vitamínicos individuales en las décadas de
1970 y 1980 fueron, en el mejor de los casos, limitados en
cuanto a su éxito en la mejora de los resultados
periodontales y la mayoría fracasó en lograr algún beneficio
clínico. Estos datos son consistentes con los de otras
enfermedades inflamatorias crónicas y existe el argumento
de que los compuestos artificiales -neutracéuticos- no
proporcionan los cofactores necesarios que
175
chapple y matthews
Figura 11.El papel de la vitamina E en la protección de las membranas
celulares contra la peroxidación de lípidos y la reconstitución de la
vitamina E a partir de su radical por antioxidante cooperativo
la nutrición de alimentos integrales sí. De hecho, algunos pueden
provocar reacciones adversas graves, como se destacó
anteriormente, como resultado de la formación de prooxidantes.en
vivo.Dado el comportamiento cooperativo de los antioxidantes, puede
ser necesaria una cascada de antioxidantes para disminuir el daño
causado por las ROS, algo que los suplementos individuales pueden
no lograr. Si las deficiencias en fitonutrientes individuales (sustancias
químicas nutricionales) (259) pueden vincularse definitivamente a
condiciones específicas, entonces los suplementos individuales
pueden ser beneficiosos. Esto es cierto para GSH en el manejo de la
neuropatía diabética (424) y cisteína/GSH en el manejo de la
enfermedad del VIH.
(118). Este conflicto se hizo evidente cuando los intentos de reducir el
estrés oxidativo como resultado de la formación de peróxido lipídico
con cinco dosis diferentes de vitamina E no mostraron ningún
beneficio (263), pero los concentrados de alimentos integrales de
frutas y verduras redujeron los peróxidos lipídicos.
176
reacciones en las fases solubles en agua y en lípidos. Tenga en cuenta el
papel de GSH como una especie antioxidante que rompe la cadena.
en un 75% en general y hasta niveles indetectables en un tercio
de los sujetos (453).
Medición de ROS y antioxidantes en
vivo
Actualmente no existen métodos estándar de oro para
medir la capacidad antioxidante o el daño tisular mediado
por ROS en biología humana. Todos los sistemas utilizan
diferentes índices de medición y la especificidad del
biomarcador empleado dictará la medición obtenida, que
difiere entre ensayos y entre diferentes muestras
biológicas y sus componentes. Sin embargo, uno debe
comenzar en alguna parte y la siguiente sección revisa
brevemente el estado de la disciplina y las limitaciones de
los respectivos sistemas de ensayo.

Medición de ROS y estrés/daño
oxidativo en muestras biológicas
Los radicales libres y otras especies reactivas tienen vidas medias
extremadamente cortas.en vivo (10)6–10)9s) y simplemente no se
puede medir directamente.in vitroLos sistemas llamados
-trampas de espín- se utilizan para medir especies radicales, pero
actualmente no hay trampas de espín/sondas adecuadas
disponibles para en vivomedición de la producción de ROS en
humanos, debido a su toxicidad desconocida.Ex-vivoSe pueden
usar trampas giratorias y estas incluirían:
• ácido ascórbico, que forma semideshidroascorbato
cuando atrapa un radical (ver más arriba);
• trampas aromáticas, como los salicilatos y la fenilalanina.
Sin embargo, dichas trampas carecen de especificidad
para el radical hidroxilo y el peroxinitrito y no se considera
posible la cuantificación;
• urato, que se oxida a alantoína, que se puede medir
en varios fluidos (p. ej., plasma, orina, líquido
cefalorraquídeo) en enfermedades cuyo inicio y
curso están asociados con el estrés oxidativo.
La mayoría de los estudios clínicos emplean biomarcadores de
estrés oxidativo o daño tisular a macromoléculas vitales, en lugar
de trampas de espín. Halliwell y Whiteman (184) revisaron
exhaustivamente estos ensayos recientemente y esta sección
proporciona una breve descripción general del campo, basada en
su revisión. Se recomienda encarecidamente a aquellos que
deseen obtener más información sobre cómo medir la actividad
de ROS y el daño tisular que lean la excelente revisión de Halliwell
y Whiteman.
Como se mencionó anteriormente en -mecanismos de
daño tisular-, las principales fuentes de biomarcadores de
actividad de ROS son:
• Peroxidación lipídica;
• oxidación de proteínas/aminoácidos;
• daño por carbohidratos;
• Daño en el ADN.
Biomarcadores de peroxidación lipídica
Actualmente no se cree que la peroxidación lipídica sea el resultado
de la actividad del superóxido, el peróxido de hidrógeno o el óxido
nítrico porque se considera que estas especies reactivas son
demasiado débiles para causar daño a los lípidos. Los biomarcadores
comúnmente empleados son:
• dienos conjugados;
• sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (en particular,
malondialdehído);
• isoprostanos;
• etano/pentano y otros hidrocarburos volátiles. Las sustancias
reactivas al ácido tiobarbitúrico se han vuelto obsoletas como
medida del daño de las ROS (184), porque carecen de
especificidad para la actividad de las ROS, ya que se forman por
mecanismos distintos a la peroxidación de lípidos.
ROS y antioxidantes en la periodontitis
El malondialdehído se puede medir directamente o por
cromatografía líquida de alta presión y es más específico
para la actividad de ROS que las sustancias reactivas al
ácido tiobarbitúrico. Otro aldehído formado por
peroxidación de lípidos es la acroleína, que es más
citotóxica que el malondialdehído y puede ser un mejor
biomarcador (422).
Los isoprostanos se forman después de la peroxidación de
las cadenas laterales de ácidos grasos poliinsaturados de los
lípidos (Fig. 9) y actualmente se consideran los mejores
biomarcadores de la peroxidación lipídica (p. ej., F2-
isoprostanos) (346). Para la cuantificación se puede utilizar la
espectroscopia de masas o los ensayos de inmunoabsorción
ligados a enzimas, aunque existen dudas sobre la fiabilidad
de algunos ensayos de inmunoabsorción ligados a enzimas
(328). isoprostanos específicos (p. ej., 8-Yo asi-PGF2a) se
pueden medir en plasma como marcadores de estrés
oxidativo en todo el cuerpo, o más específicamente en un
sitio dentro de tejidos como el líquido sinovial (38), el
condensado del aliento (332) y el líquido cefalorraquídeo
(280). De hecho, los isoprostanos se han utilizado como
biomarcadores para demostrar una fuerte asociación entre el
estrés oxidativo y la obesidad y la hipercolesterolemia (184).
Sin embargo, los isoprostanos se metabolizan rápidamente
cuando se forman y no tiene sentido intentar evaluar las
correlaciones entre los marcadores de daño de los lípidos y
los del ADN o la oxidación de proteínas, dados los diferentes
cursos de tiempo de su eliminación.en vivo.
El etano y el pentano pueden ser biomarcadores
útiles del estrés oxidativo, en particular el etano (99),
pero su recolección y medición son engorrosas y
técnicamente desafiantes.
Biomarcadores de daño en el ADN
Los productos del ataque de radicales hidroxilo sobre bases
de ADN (purinas y pirimidinas) y fracciones de carbohidratos
(desoxirribosa) se pueden medir por varios métodos
(cromatografía líquida de alta presión: gas o líquido),
cromatografía líquida o métodos de anticuerpos (115). No se
debe utilizar ningún producto de reacción individual como
único índice del daño del ADN (184), pero a pesar de ello, la
8-hidroxidesoxiguanosina se utiliza con frecuencia de esta
manera (92); La 8-hidroxidesoxiguanosina se puede formar
durante la preparación y el análisis del ADN por medios
artificiales y sigue siendo un biomarcador controvertido.
El ensayo del cometa (121, 132) se puede utilizar para medir
roturas de cadenas de ADN mediante la aplicación directa a
preparaciones de células individuales. En el ensayo, un pequeño
número de células tratadas suspendidas en un emparedado delgado
de agarosa se lisan y someten a electroforesis a pH alcalino, antes de
teñirlas con un tinte fluorescente de unión al ADN. Roto/presa-
177
chapple y matthews
los fragmentos de ADN envejecidos migran a diferentes
velocidades según su tamaño y, por lo tanto, según la extensión
del daño, y forman colas de cometa. Las células se clasifican por
la longitud de la cola, sin embargo, la escisión enzimática del
ADN durante la apoptosis y la actividad de las enzimas de
reparación del ADN también pueden crear cometas.
Biomarcadores de daño proteico
El daño a las proteínas puede afectar la homeostasis biológica de
varias maneras:
• función proteica alterada (debido al plegamiento);
• creación de radicales secundarios (radicales centrados en
carbono);
• inactivación de importantes inhibidores de la proteasa, lo que
permite que la actividad de la proteasa permanezca prácticamente
inalterada;
• creación de subproductos inmunológicamente activos;
• Daño a las enzimas reparadoras del ADN.
La figura 8 ilustra cómo se pueden formar radicales peroxilo y
alcoxilo a partir del ataque de ROS a estructuras de aminoácidos
o proteínas. La ingestión de alimentos cocidos puede complicar
la interpretación de los datos de los tejidos humanos porque la
cocción misma oxidará los aminoácidos. Además, el proteosoma
elimina rápidamente las proteínas oxidadas, lo que vuelve a
complicar la interpretación de los datos de los estudios de
biomarcadores.
El ensayo de carbonilo mide los grupos carbonilo de proteínas
formados como productos finales relativamente estables de la
oxidación de proteínas por ROS. Existen tanto ensayos
inmunoabsorbentes ligados a enzimas como ensayos
espectrofotométricos (62, 246), pero nuevamente, los carbonilos
no son biomarcadores específicos del daño por ROS porque
también se miden los aldehídos unidos a proteínas y las
proteínas glicosiladas (184). De hecho, la acroleína es un aldehído
unido a proteínas que se ha utilizado ampliamente para medir el
daño oxidativo. En el mejor de los casos, los niveles de carbonilo
proporcionan medidas promedio del daño a las proteínas por
ROS en tejidos y fluidos humanos.
Medición del estado antioxidante de
muestras biológicas
Diferentes especies de antioxidantes se reparten dentro de
diferentes compartimentos del cuerpo. Los antioxidantes
liposolubles se asocian con las porciones lipídicas de las
células, tejidos o fluidos (p. ej., tocoferoles, carotenoides), los
antioxidantes hidrofílicos se asocian con fracciones solubles
en agua (p. ej., ácido úrico, proteínas) y algunos pueden unir
ambos compartimentos (p. ej., urato, ascorbato ). Diferentes
ensayos miden diferentes antioxidantes, algunos lipofílicos y
algunos hidrofílicos; algunos ensayos evalúan los sistemas
antioxidantes preventivos y otros evalúan los antioxidantes
depuradores. Los ensayos también varían con respecto
178
a su sensibilidad hacia diferentes especies dentro de un
compartimento. Por ejemplo, en el ensayo TRAP (parámetro
antioxidante de captura de radicales totales), las proteínas
antioxidantes contribuyen entre un 10% y un 50% de la capacidad
antioxidante total (442), mientras que el ensayo de capacidad
antioxidante total de quimioluminiscencia mejorada (82, 448) es
más sensible a los compuestos no antioxidantes eficientes.
secuestrantes de radicales proteicos. Por lo tanto, se requiere
mucho cuidado al interpretar los datos de diferentes ensayos,
que emplean diferentes índices de daño oxidativo. Algunos de los
sistemas disponibles fueron revisados recientemente (465).
Si bien se pueden establecer asociaciones importantes entre el
estado de la enfermedad y los antioxidantes individuales en los
sistemas biológicos, existen importantes inconvenientes para este
tipo de enfoque. Primero, los sistemas antioxidantes se comportan
cooperativamente y no de forma aislada (ver la sección sobre
- Defensa antioxidante global- y Fig. 11); la suma de las
actividades antioxidantes individuales no representa su
capacidad global para eliminar ROS y efectuar la reparación
de tejidos. En segundo lugar, no se tienen en cuenta las
interacciones entre los antioxidantes hidrofílicos y lipofílicos,
y en tercer lugar, se ignoran las especies de antioxidantes no
descubiertas hasta ahora. Por estas razones, se han
desarrollado ensayos de capacidad antioxidante total y esta
revisión discutirá estos sistemas en lugar de los diversos
sistemas para medir especies antioxidantes individuales o
enzimas antioxidantes. En términos generales, los ensayos
miden los antioxidantes solubles en lípidos o solubles en
agua, aunque se han desarrollado ensayos más recientes
que miden los antioxidantes de ambos compartimentos y
también parecen evaluar la cooperación entre los
antioxidantes de la fase acuosa y los lípidos (9).
Ensayos para antioxidantes solubles en agua
Yeum et al. (465) describieron dos enfoques amplios para
medir las especies antioxidantes hidrófilas. El primer enfoque
utiliza un prooxidante hidrofílico o especies inductoras de
radicales como 2,2¢-dihidrocloruro de azobis(2,4-
amidinopropano), que se descompone espontáneamente a la
temperatura corporal para producir radicales peroxilo (a
través de la interacción con especies radicales centradas en
el carbono). Se pueden usar varios sustratos como
indicadores de la actividad del radical peroxilo soluble en
agua y los ejemplos comunes serían:
• R-Pe (diacetato de diclorofluoresceína, ficoeritrina):
una proteína fluorescente (65);
• DCFH (2¢,7¢,-diclorodihidrofluoresceína), que proporciona una
señal fluorescente, por ejemplo, ensayo de parámetros
antioxidantes de captura de radicales totales (149, 427) y ensayo
ORAC (capacidad de absorción de radicales de oxígeno) (65);
• crocina: produce una reacción de blanqueo cuando se
expone a radicales peroxilo, que se puede medir como un
cambio de absorbancia (418).

La oxidación del reportero es inhibida por el sistema
antioxidante que está expuesto a la reacción generadora
de radicales y la capacidad antioxidante se determina
calculando el retraso o perfil (por ejemplo, área bajo la
curva) de la reacción. Cuanto mayor es la capacidad
antioxidante, mayor es el retraso en la actividad del
reportero y, por tanto, en la generación de la señal.
El segundo enfoque utiliza sistemas que generan
reacciones en cadena de radicales libres.in vitroutilizando
un oxidante (p. ej., peróxido de hidrógeno en lugar de un
prooxidante) y un sustrato oxidable (p. ej., luminol) y
luego evalúa la capacidad de un sistema antioxidante
para eliminar los radicales producidos. La disminución de
la señal o el período de tiempo durante el cual la señal
está ausente se usa como medida del estado antioxidante
y una especie antioxidante estándar se usa como
calibrador. El calibrador que se usa con más frecuencia es
el ácido 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcroman-2-carboxílico
(Trolox), análogo de la vitamina E soluble en agua.
Ejemplos serían:
• ensayo de capacidad de reducción férrica del plasma
(FRAP), que mide la producción de un complejo coloreado
producido por la reducción de iones de hierro trivalente
(férrico) a iones divalentes (ferroso) (46);
• El ensayo de capacidad antioxidante equivalente de
Trolox (TEAC), mide la eliminación/extinción del
ABTS (2,2¢-catión radical azinobis(3-
etilbenzotiazolin-6-sulfonato) (271);
• ensayo de quimioluminiscencia mejorada (ECL) (82,
448), que mide la capacidad del sistema antioxidante para
inhibir la señal de luz mejorada producida después de la
oxidación del sustrato quimioluminiscente luminol por
peróxido de hidrógeno, usando peroxidasa de rábano
picante como catalizador. Trolox se usa como el calibrante
como de hecho lo es para el parámetro antioxidante de
captura de radicales totales y los ensayos de capacidad
antioxidante equivalente de Trolox.
En el ensayo de quimioluminiscencia mejorado, utilizar un
punto en la curva de recuperación de luz (que señala el
agotamiento gradual de los antioxidantes dentro de la muestra
añadida) como punto final puede proporcionar diferentes
medidas de la capacidad antioxidante total. La convención es
utilizar un punto final temprano, de modo que solo se midan los
eliminadores de radicales más eficientes; sin embargo, la
utilización de un punto final posterior también incluiría
secuestrantes menos eficientes y produciría un índice diferente
de capacidad antioxidante total. En el ensayo de parámetros
antioxidantes de captura de radicales totales, ABAP (2,2¢-
clorhidrato de azobis[2-amidinopropano]) se descompone
espontáneamente para liberar radicales peroxilo solubles en
agua, que inducen la peroxidación lipídica. El retraso en la
inducción de la peroxidación lipídica (después de agregar una
solución que contiene antioxidantes) se mide por
ROS y antioxidantes en la periodontitis
consumo de oxígeno y en comparación con un estándar
Trolox. El ensayo de parámetros antioxidantes de captura de
radicales totales es complejo de realizar, requiere experiencia
dedicada, y también requiere mucho tiempo y es sensible a la
detección de especies antioxidantes de proteínas. El ensayo
ha sido modificado para emplear quimioluminiscencia para
detectar radicales peroxilo (266). El ensayo de
quimioluminiscencia mejorado descrito por nuestro grupo es
rápido y económico, pero requiere la síntesis de un stock de
potenciador, no se ha evaluado exhaustivamente por su
capacidad para medir las especies antioxidantes solubles en
lípidos y es más sensible a las especies antioxidantes no
proteicas.
Ensayos de antioxidantes solubles en lípidos
Niki (297) introdujo un inductor de radicales prooxidantes
llamado 2,2¢-azobis(2,4-dimetilvaleronitrilo) (AMVN) para
generar radicales peroxilo solubles en lípidos en lugar de
2,2¢-dihidrocloruro de azobis(2,4-amidinopropano), que
generó radicales peroxilo solubles en agua (véase antes).
Luego se midió la peroxidación lipídica (y su inhibición
por los antioxidantes solubles en lípidos) evaluando la
producción de dienos conjugados, donde los sustratos
incluían DCFH o difenil-1-pirenilfosfina (471).
La excelente revisión de ensayos de antioxidantes
realizada por Yeum et al. (465) destaca las modificaciones
realizadas en los ensayos de capacidad antioxidante
equivalente de Trolox y capacidad de absorción de radicales
de oxígeno, para incorporar mejor los antioxidantes solubles
en lípidos en las medidas de resultado de estos índices de
actividad antioxidante. El mismo grupo (9) también informó
sobre el desarrollo de un ensayo de capacidad antioxidante
total que mide los compartimentos antioxidantes lipofílicos e
hidrofílicos del plasma, y que también mide la interacción
entre estos compartimentos.
En resumen, actualmente existe una serie compleja de
ensayos de actividad antioxidante global, todos con
especificidades para diferentes moléculas biológicas en
diferentes compartimentos de tejidos/líquidos del cuerpo.
Los que se basan en especies de radicales hidrófilos y
sustratos (sondas) miden predominantemente antioxidantes
solubles en agua y los que se basan en radicales lipófilos y
sondas medirán predominantemente antioxidantes
liposolubles. Más recientemente, se han desarrollado
sistemas que medirán tanto los antioxidantes solubles en
agua como en grasa, pero sus sensibilidades relativas a las
especies individuales dentro de esos compartimentos aún no
se han explorado en gran medida. Además, la mayoría de los
ensayos dependen dein vitromodelos de estrés oxidativo
(generación de radicales en un tubo de ensayo) y la extensión
del estrés oxidativo, su tiempo de inicio o, de hecho, la
duración de su inhibición por antioxidantes que contienen
179
chapple y matthews
muestras, se utiliza como la medida de la actividad
antioxidante total. Diferentes ensayos producen
diferentes medidas y también difieren en su
sensibilidad a los principales antioxidantes conocidos,
así como en su capacidad para detectar especies
antioxidantes actualmente no caracterizadas. Hay
pocas dudas de que los ensayos de la capacidad
antioxidante total ofrecen la ventaja de evaluar de
manera más holística la capacidad de un sistema
biológico para resistir el estrés oxidativo y explicar
hasta cierto punto las interacciones antioxidantes
cooperativas reconocidas desde hace mucho tiempo,
pero diferentes tensiones oxidativas producen
resultados diferentes. Cuando se intenta analizar
datos de estudios de capacidad antioxidante total, es
imperativo que el lector tenga claro qué ensayo se ha
utilizado y cuál es la sensibilidad de ese ensayo a los
antioxidantes lipofílicos e hidrofílicos.
Evidencia de la presencia y el papel de
ROS en el daño tisular periodontal
La idea de que las ERO están asociadas con la patogenia de
una variedad de enfermedades inflamatorias y tienen un
papel (directo o indirecto) en el daño tisular se ha convertido
en un área importante de investigación durante la última
década, como lo demuestran las búsquedas electrónicas en
la literatura. Sin embargo, la evidencia que respalda su papel
en el daño tisular es a menudo indirecta y circunstancial. De
hecho, pocos informes cumplen alguno o todos los
postulados de Halliwell, que son los criterios que deben
cumplirse antes de que se pueda concluir que las ERO son
mediadores clave de la lesión tisular en una enfermedad
determinada (178, 184). Los cuatro criterios propuestos por
Halliwell, similares a los propuestos por Robert Koch en 1884
(231) para establecer una relación causal entre un organismo
y una enfermedad, son:
• ROS o el daño oxidativo causado debe estar presente
en el sitio de la lesión;
• el curso temporal de la formación de ROS o el daño
oxidativo causado debe ocurrir antes o al mismo
tiempo que la lesión tisular;
• aplicación directa de ROS durante un curso de tiempo
relevante a los tejidos en concentraciones encontradas
en vivo debe reproducir un daño similar al observado
en el tejido enfermo;
• eliminar o inhibir la formación de ROS debería
disminuir el daño tisular en un grado relacionado con
su acción antioxidanteen vivo.
180
Esta sección revisará la literatura que reporta estudios que
brindan evidencia del papel de ROS en la patogénesis de las
enfermedades periodontales y que tienen como objetivo
cumplir con uno o cualquier combinación de los primeros
tres criterios. La mayoría de los estudios que respaldan el
último criterio se revisarán en la siguiente sección (Estudios
sobre antioxidantes y enfermedad periodontal) junto con
estudios que informan cambios en el estado antioxidante
donde los niveles reducidos pueden implicar una mayor
presencia de ROS.
Los cuatro criterios propuestos por Halliwell parten de la
suposición subyacente de que las ROS se generan a un nivel
que provoca daño directo a los componentes del tejido. En
este sentido, son limitados porque no todos podrían
cumplirse si las bajas concentraciones de ROS fueran
importantes para causar daño tisular indirecto a través de la
activación de vías de señalización dependientes de redox
dentro de las células. Por lo tanto, algunas evidencias que
implican a las ROS como un potencial mediador indirecto del
daño tisular en las enfermedades periodontales también se
revisarán en una sección separada (-Vías de señalización
sensibles a redox y enfermedad periodontal-).
Producción de ROS por neutrófilos y otras
células en la enfermedad periodontal
La evidencia actual indica que la enfermedad periodontal
ocurre en individuos predispuestos con una respuesta
inflamatoria/inmune aberrante a la placa microbiana. Debido
a que los neutrófilos son las células inflamatorias
predominantes en el tejido conectivo gingival, el epitelio de
las bolsas y dentro del surco gingival (273), se han realizado
una gran cantidad de estudios que investigan las posibles
asociaciones entre la función de los neutrófilos y la
enfermedad periodontal. Hace tiempo que se sabe que los
defectos en la función de los neutrófilos predisponen a
algunas formas de enfermedad periodontal, por ejemplo, en
individuos con síndrome de Chediak-Higashi (52) o
neutropenia crónica (304). Sin embargo, tales defectos están
menos definidos en las formas crónicas y agresivas más
comunes de la enfermedad que no están asociadas con una
condición sistémica subyacente. En general, se piensa que las
condiciones inflamatorias crónicas están asociadas con un
aumento del estrés oxidativo, estando implicados los
fagocitos (particularmente los neutrófilos) en la patogénesis
de la enfermedad debido a la generación del estallido
oxidativo durante la fagocitosis y la muerte. Originalmente,
se pensó que las ROS eran directamente microbicidas, pero
la evidencia reciente indica que su función es establecer un
entorno en la vacuola fagocítica adecuado para matar y
digerir mediante enzimas liberadas en la vacuola desde los
gránulos citoplasmáticos (371; véase

- Orígenes y formación de ROS y radicales de oxígeno-). Sin
embargo, las ROS normalmente se generan como parte del
funcionamiento fisiológico de todas las células y ahora se
considera que su papel como mediadores en la señalización
celular es crucial para mantener la salud (119). Aunque esta
sección se concentrará en revisar los datos sobre la
generación y liberación de ROS por parte de los neutrófilos
en las enfermedades periodontales, se incluirán algunos
datos que implican a otras células que contribuyen al estrés
oxidativo para completar.
En vivocondiciones requeridas para la producción de ROS por
los neutrófilos
La generación significativa de ROS por parte de los neutrófilos requiere una tensión mínima de
oxígeno de alrededor del 1 % y un pH de 7,0 a 7,5 (12, 145). Ambas condiciones se encuentran
dentro de las bolsas periodontales (123, 267), lo que indica que la producción crónica o excesiva
de ROS es posible en este importante sitio de daño del tejido periodontal. Esto, junto con una
variedad de estudios que demuestran la reducción en los niveles locales de antioxidantes que
rompen cadenas y sistemas de enzimas antioxidantes en enfermedades (7, 58, 126), sugiere que
cualquier ROS generado podría acumularse y causar daño adicional. Además, los productos de
oxidación producidos localmente por ROS de neutrófilos (p. ej., lipoproteínas de baja densidad
oxidadas) podrían amplificar aún más la generación de ROS de neutrófilos directamente, así como
regular al alza las moléculas de adhesión (244, 363, 413). Esto último podría aumentar el tiempo
que tardan los neutrófilos en transitar por los tejidos aumentando efectivamente la carga
oxidativa local. Además, los factores presentes en niveles elevados en los sitios afectados pueden
aumentar la producción local de ROS por parte de los neutrófilos. Por ejemplo, las poliaminas se
encuentran en altos niveles dentro del periodonto enfermo (240, 437) y tienen la capacidad de
mejorar la generación de ROS por parte de los neutrófilos (339, 438). Por otro lado, los neutrófilos
tienen la capacidad de resistir el entorno hostil de la bolsa periodontal. Por lo tanto, los
neutrófilos pueden funcionar e iniciar una actividad de explosión respiratoria en presencia de
sulfuro en los niveles tóxicos que se encuentran en los sitios enfermos (88). las poliaminas se
encuentran en altos niveles dentro del periodonto enfermo (240, 437) y tienen la capacidad de
aumentar la generación de ROS por parte de los neutrófilos (339, 438). Por otro lado, los
neutrófilos tienen la capacidad de resistir el entorno hostil de la bolsa periodontal. Por lo tanto,
los neutrófilos pueden funcionar e iniciar una actividad de explosión respiratoria en presencia de
sulfuro en los niveles tóxicos que se encuentran en los sitios enfermos (88). las poliaminas se
encuentran en altos niveles dentro del periodonto enfermo (240, 437) y tienen la capacidad de
aumentar la generación de ROS por parte de los neutrófilos (339, 438). Por otro lado, los
neutrófilos tienen la capacidad de resistir el entorno hostil de la bolsa periodontal. Por lo tanto,
los neutrófilos pueden funcionar e iniciar una actividad de explosión respiratoria en presencia de
sulfuro en los niveles tóxicos que se encuentran en los sitios enfermos (88).
Aspectos ambientales y metodológicos de la
generación de ROS por neutrófilos
Los datos publicados sobre la producción de ROS por los
neutrófilos en la enfermedad periodontal se derivan, con
pocas excepciones (50, 163, 250), de estudios basados en el
análisis de neutrófilos en sangre periférica (ver Tabla 7). Por
lo tanto, cualquier diferencia detectada sugiere un efecto
sistémico más que local. Además, la mayoría de los estudios
se basan en la quimioluminiscencia dependiente del luminol,
que proporciona una evaluación de la generación total de
ROS (intracelular y extracelular) porque
ROS y antioxidantes en la periodontitis
El luminol tiene la capacidad de atravesar las membranas
celulares. Si bien se considera que es uno de los sustratos
quimioluminiscentes más efectivos para detectar la
generación de ROS por parte de los neutrófilos (234), el
luminol no detecta el superóxido directamente, sino que
primero debe oxidarse mediante la eliminación de un
electrón por especies como los radicales hidroxilo,
peroxinitrito y peróxido de hidrógeno (en presencia de
peroxidasa) (184). El isoluminol, utilizado en un solo estudio
hasta la fecha (142), es similar al luminol pero más hidrofílico
y, por lo tanto, no puede atravesar las membranas celulares.
Es el sustrato quimioluminiscente de elección para detectar
la generación extracelular de ROS (234, 253).
Los resultados obtenidos con estos métodos
quimioluminiscentes para detectar ROS pueden mostrar una
variación considerable de un día a otro, lo que hace que la
inclusión de un control emparejado por edad y género, cuyos
neutrófilos se analicen simultáneamente con los del paciente, sea
importante si se quieren obtener resultados consistentes y
comparables. obtenido (24, 25, 50, 462). Una variedad de factores
metodológicos también pueden afectar los resultados (49). En
particular, la presencia de cationes divalentes en los tampones de
ensayo puede anular el efecto de cebado del factor de necrosis
tumoral.a (TNF-a)en FCCActivación de neutrófilos mediada por R
y aumento de la producción de luz (28, 142).
Los otros métodos utilizados para estudiar la producción de
ROS de neutrófilos en la enfermedad periodontal se basan en el
diacetato de diclorofluoresceína, que produce un producto
altamente fluorescente después de la desacetilación y la reacción
con ROS (particularmente radicales hidroxilo y peroxinitrito en
lugar de peróxido de hidrógeno como se cita a menudo en los
artículos) (375), detección indirecta de superóxido mediante
quimioluminiscencia dependiente de lucigenina y un ensayo
colorimétrico para superóxido que implica la reducción de
ferricitocromo inhibible por superóxido dismutasa c.
in vitroGeneración de ROS por neutrófilos en
salud y enfermedad periodontal
Los estudios de generación de ROS por los neutrófilos de
sangre periférica en la enfermedad periodontal han utilizado
una variedad de grupos de pacientes, diferentes vías de
activación y métodos de detección de ROS (Tabla 7). Por lo
tanto, no sorprende que, en general, no haya acuerdo sobre
si la generación de ROS está alterada en la enfermedad
periodontal. La mayoría de los primeros estudios (1984-1992)
investigaron pacientes con periodontitis juvenil y utilizaron
bacterias o zymosan, con y sin opsonización con suero
autólogo o heterólogo. La mayoría de los datos respaldaron
la opinión de que la generación de ROS en los neutrófilos
estaba asociada con la enfermedad, pero un estudio (197)
sugirió que el efecto era el resultado de la actividad opsónica
del suero del paciente en lugar de una función de las propias
células. Sin embargo, si bien hay evidencia de que
181
182
Tabla 7.Estudios que investigan la producción de ROS a partir dein vitroneutrófilos periféricos activados

Referencia Estado de la enfermedad1 método de ensayo2 Estímulo a Estimulantes y resultado (enfermedad periodontal vs salud)
y numeros proporción de celdas o

Autólogo No- yo o fMLP AMP Ninguna

chapple y matthews

concentración
suero autólogo histona II* o
opsonizado suero opsonizado AP*
opsonizado

Asman et al. JP; 8 M, 6 F con controles LDCL3utilizando la señal 100:1 Látex «

1984 (24) emparejados por edad/sexo de pico HBSS S. aureus>

Ellegard et al. JP; 12 Citocromo c Zymosan « « DAKOTA DEL NORTE

1984 (125) PC; 10 reducción usando Zymosan «

Control S; 22, edad/ HBSS
emparejado por sexo

Enrique et al. JP4; 26 sujetos asiáticos LDCL3utilizando la señal 5mg/106células Zymosan › Zymosan «
1984 (197) emparejados por edad/sexo de pico HBSS (1,1 mg/ml) Zymosan5«
control S

Asman et al. JP4; 5M, 8F con controles LDCL3 200:1 S. aureus > S. aureus >
1986 (25) emparejados por edad/sexo señal pico

Van Dyke et al. LJP; 14 pacientes y 17 Citocromo c 6,7 mg/ml Zymosan «

1986 (429) controles reducción

Asman 1988 JP; 6M, 6F (después de un LDCL3usando HBSS 200:1 S. aureus > S. aureus > «
(22) tratamiento exitoso) solo en el ensayo FMLP 12,5 norteMETROfMLP

emparejados por edad/sexo %CL basado en

control S señal pico

Asman et al. JP; 3M, 7F con controles LDCL3utilizando la señal 200:1 S. aureus
1988 (26) emparejados por edad/sexo de pico HBSS

Whyte et al. PC joven; norte¼8 con controles LDCL usando HBSS 100yol de OD6251.0 F. nucleatum › F. nucleatum ›
1989 (450) emparejados por edad señal pico suspensión/106células E. coli > E. coli >
PC antiguo; 8 pacientes Asunto PMNL F. nucleatum F. nucleatum
con la misma edad ensayado individualmente E. coli E. coli
control S con PMNL de un
- estándar- donante

Mattout et al. JP NK NK Florida «

19906(261)
 Tabla 7.Continuado

Referencia Estado de la enfermedad1 método de ensayo2 Estímulo a Estimulantes y resultado (enfermedad periodontal vs salud)
y numeros proporción de celdas o

concentración Autólogo No- yo o fMLP PMA Ninguna

suero autólogo histona II* o

opsonizado suero opsonizado AP*
opsonizado

Guarnieri et al. PC; 14 pacientes con Citocromo c NK

1991 (163) 16 controles reducción
crevicular gingival
PMNL fluidos › «
PMNL periféricos Florida ›
Shapira et al. PPR; 4 M, 1 F con la Citocromo c 0.5–1yog/ml PMA Estreptococo ›* «
1991 (376) misma edad reducción Bacterias NK
control S utilizando HBSS
LDCL usando HBSS Estreptococo ›* «
cpm a los 5 min

Zafiropolous PPR; 19 pacientes LDCL 0,35 mg/1,4·105 Zymosan « Zymosan «

et al. 1991 JP; 10 pacientes señal pico células (0,35 mg/ml) Zymosan « Zymosan «
(468) PC; 10 pacientes Zymosan « Zymosan «
Todos con edad/sexo-
controles emparejados

Asman y JP; 4 pacientes con LDCL3 200:1 S. aureus ( ) S. aureus ( )

Bergström controles %CL basado en la señal
1992 (23) JP; 3 pacientes con pico S. aureuso S. aureuso
controles A. actinomycetemcomitans A. actinomycetemcomitans
oP. gingivalis ( ) oP. gingivalis ( )

Kimura et al. LJP; 15 pacientes diclorofluoresceína- 100ng/ml () «

1993 (227) GJP; 13 pacientes oxidación de diacetato y () «
PC; 52 pacientes citometría de flujo con () «
Controles inigualables; sangre entera
30, edad¼30,5 ± 0,9

Gómez et al. PPR; 3 o 5 pacientes JP; LDCL3usando la 0,32 mg/ml Zymosan « «*

1994 (153) 3 o 4 pacientes PC; 3 o señal HBSS Peak y 5·10)6 METROAP Zymosan fl «*
4 pacientes Todos con CL total Zymosan « «*
edad/sexo-
controles emparejados
ROS y antioxidantes en la periodontitis

183
184
Tabla 7.Continuado

Referencia Estado de la enfermedad1 método de ensayo2 Estímulo a Estimulantes y resultado (enfermedad periodontal vs salud)
y numeros proporción de celdas o

Autólogo Ninguna
chapple y matthews

concentración No- yo o fMLP AMP

suero autólogo histona II* o
opsonizado suero opsonizado AP*
opsonizado

Leino et al. LJP; 3M, 6F con controles LDCL usando Ca2+/mg2+- 50yog/105células sin opsonizar Zymosan7( ) Zymosan ( ) › ()
1994 (245) emparejados por edad/sexo HBSS y leucocitos libres (100yog/ml) zimosano › Zymosan7› Zymosan ›
Señal máxima 76 norteMETROfMLP (solo mujeres) (solo mujeres)
80 norteMETROAMP

Mouynet et al. GRAMO; 8 pacientes LDCL en PMNL y NK Zymosan « «

1994 (286) PC; 8 pacientes sangre entera Zymosan « «
POE; 17 pacientes Señal pico e índice Zymosan « «
Controles inigualables; 7 CL

gustafsson y PC; 9M, 5F con controles LDCL3utilizando PBS con 300:1 S. aureus >
Asman 1996 emparejados por edad/sexo albúmina humana al 0,25%
(164) Señal máxima expresada
como relación con el control emparejado

Gustafsson et al. Como arriba: Gustafsson Como anteriormente 300:1 como arriba S. aureus >
1997 (165) y Asman 1996 (164) con cebado8 después de cebar

Fredriksson et al. PC9; 8M, 9F con controles LDCL utilizando PBS con albúmina cebado 300:1± S. aureus >
1998 (139) emparejados por edad/sexo humana al 0,25 % con TNF-ay LPS ± cebado
señal pico
Oxidación de diclorofluoresceína- S. aureus "
diacetato y citometría de flujo ± cebado

Hurtia et al. LJP; 5F (4 en fase de tratamiento LDCL usando Ca2+/mg2+-Señal de pico 50yog/105células sin opsonizar
1998 (204) de mantenimiento) con HBSS libre (100yog/ml) zimosano ( )
controles pareados por edad/sexo

Biasi et al. 1999 GEOP; 6M, 9F con controles Reducción de citocromo c en HBSS 0,1 mg/ml Zymosan « Florida « «
(50) emparejados por edad/sexo con 0,2% de albúmina humana más 10)7 METROfMLP

Ca2+/mg2+ PMA de 10 ng/ml

Fredriksson et al. PC; 8M, 9F con LDCL utilizando PBS con albúmina 300:1 S. aureus >
1999 (141) controles pareados por edad/sexo humana al 0,25 %
señal pico
 Tabla 7.Continuado

Referencia Estado de la enfermedad1 método de ensayo2 Estímulo a Estimulantes y resultado (enfermedad periodontal vs salud)
y numeros proporción de celdas o

concentración Autólogo No- yo o fMLP PMA Ninguno

suero autólogo histona II* o
opsonizado suero opsonizado AP*
opsonizado

Fredriksson et al. PC, no fumador; 21 y 29 LDCL utilizando PBS con albúmina 300:1 S. aureus >
1999 (140) controles humana al 0,25 %
PC, tabaquismo; 19 y señal pico S. aureus ( )
14 controles
Florida10
Gainet et al. 1999 PPR; 6M, 4F Oxidación de diclorofluoresceína- 10)6 METROfMLP

(146) LJP; 4M, 4W diacetato y citometría de flujo ««10 «

PC; 5M, 3F usando sangre total ««10 «
Controles inigualables; 14

Gustafsson et al. PC; 20 (8 fumadores, 12 LDCL utilizando PBS con albúmina humana 300:1 S. aureus ( )
2000 (166) no fumadores) con al 0,25 % utilizando leucocitos Señal
18 controles inigualables máxima
(6 fumadores, 12 no fumadores)

Fredriksson et al. CP (tratado con éxito,
2003 (142) periodontalmente sano), no
fumador; 10M, 5F con controles
emparejados por edad/sexo
Gronert et al. 2004 VUELTA; 4
(160) miembros de la familia sin
VUELTA; 4
PC; 6
Controles inigualables; 10
LDCL utilizando PBS con albúmina 300:1S. aureus Zymosan11( )S. aureus > ()
humana al 0,25 % 2 mg/ml de zimosán
iLDCL utilizando HBSS con cationes 2 pmol/ml PMA S. aureus
divalentes y albúmina al 0,25 % Señal
máxima
12
Reducción del citocromo c, no se LTB4, IL-8, fMLP, PMA
proporcionan detalles experimentales Cantidades NK
« «12
« «12

Zekonis y Zekonis CP (¿sin tratar?); 9 M, 13 F 2004 LDCL utilizando células de capa leucocitaria LPS de 0,2 ng/ml13 E. coli LPS› ›
(472) con 16 controles inigualables y HBSS. variable ensayada número de 6·106E. coli/ml E. coli flor
células; Datos de CL ajustados
retrospectivamente para el número de celda
ROS y antioxidantes en la periodontitis

185
186
chapple y matthews

Tabla 7.Continuado

Referencia Estado de la enfermedad1 método de ensayo2 Estímulo a Estimulantes y resultado (enfermedad periodontal vs salud)
y numeros proporción de celdas o

concentración Autólogo No- yo o fMLP AMP Ninguna

suero autólogo histona II* o

opsonizado suero opsonizado AP*
opsonizado

Sadzeviciene diabetes tipo 1 y Dependiente de lucigenina 6·106S. aureus oE. S. aureus>

et al. 2005 periodontitis severa; CL utilizando células de capa coli/ml E. coli >>
(355) 38 con 27 controles leucocitaria y HBSS. Número
inigualables de células analizadas
variable; Datos CL
ajustado retrospectivamente por
número de celda

Respuesta en comparación con las células de control: › y , aumento grande y pequeño; fl y , disminución grande y pequeña; ", ninguna diferencia. Las flechas entre paréntesis indican tendencias que no fueron estadísticamente significativas o se basaron en números de muestra pequeños. DAKOTA DEL NORTE¼no
detectado.

PMNL, leucocito polimorfonuclear neutrofílico (neutrófilo); LPS, lipopolisacárido; TNF, factor de necrosis tumoral; PDB, Forbol-12,13-dibutirato; PMA, forbol-12-miristato-13-acetato; NK, desconocido; LDCL, quimioluminiscencia
dependiente de luminol; HBSS, solución salina balanceada de Hanks; RGDS, péptido Arg-Gly-Asp-Ser.
1JP,
periodontitis juvenil; LJP, JP localizado; GJP, JP generalizada; RPP, periodontitis rápidamente progresiva; PC, periodontitis crónica; GEOP, periodontitis generalizada de inicio temprano; LAP, periodontitis agresiva localizada; G,
gingivitis.
2Usar neutrófilos aislados de sangre periférica y solución salina tamponada con fosfato u otro tampón sin cationes divalentes, a menos que se indique lo contrario. La solución salina balanceada de Hanks no modificada generalmente contiene Ca2+y magnesio2+. Los cationes
divalentes pueden afectar la quimioluminiscencia dependiente de la luz (142) y las interacciones entre zymosan y CR3 (245).
3Pares de células de control coincidentes y del paciente analizados al mismo tiempo.

4Pacientes jóvenes (18-35 años) con enfermedad localizada y generalizada.

5Opsonizado con suero inactivado por calor (56- durante 30 min).
6Datos tomados de Fredriksson et al. (142).
7Zymosan opsonizado con complemento utilizando suero empobrecido en inmunoglobulinas.
8Los agentes de cebado utilizados fueron factor de necrosis tumoral-a (TNF-a),RDGS, lipopolisacárido (LPS) yFMetLeuPhe a niveles que no causaron activación.
9Pacientes tratados que tenían‡Pérdida de inserción de 5 mm en seis o más sitios.
10H2O2producción después del tratamiento con IL-8 (50 ng/ml) seguido deFMetLeuPhe (fMLP); la interleucina-8 (IL-8) sola no tuvo efecto. Otros estudios demostraron que H2O2la producción no difirió entre ninguno de los grupos de pacientes y controles
después del tratamiento con necrosis tumoral.a (TNF-a) (100 U/ml) o lipopolisacárido (LPS) (5yog/ml) ±FMetLeuPhe (fMLP).

11Zymosan opsonizado con complemento de cobayo.

12Resultados similares encontrados con interleucina-8 y leucotrieno-B4tratamiento.
13En comparación con los controles, las células de los pacientes mostraron un aumento significativo de más de cuatro veces en respuesta aE. colilipopolisacárido.

- factores de cebado - pueden estar aumentados en el suero
en algunas formas de enfermedad periodontal (p. ej.,
proteína de unión a lipopolisacáridos en la periodontitis
rápidamente progresiva) (377, 391), esta no puede ser la
explicación completa porque los neutrófilos de los pacientes
con periodontitis juvenil aún exhiben una mayor producción
de ROS que los controles emparejados después de la
estimulación con estafilococo aureusopsonizado con una
preparación de inmunoglobulina purificada comercialmente
disponible (22, 23, 28). Desde estos primeros estudios, la
opsonización con una preparación de inmunoglobulina
purificada en lugar del suero del paciente o de control se ha
utilizado normalmente en Fc.CExperimentos de estimulación
R con bacterias (normalmenteS. aureus;Tabla 7). Estos
estudios, esencialmente realizados por un solo grupo de
investigación en Suecia, han demostrado consistentemente
un nivel pequeño pero significativamente más alto de
generación de quimioluminiscencia dependiente de luminol
por FcCNeutrófilos periféricos estimulados por R aislados de
pacientes con periodontitis crónica en comparación con
controles emparejados por edad y género (139, 140–142,
164, 165). Controle las estimulaciones con unopsonizedS.
aureusno provocó quimioluminiscencia dependiente de
luminol detectable. Curiosamente, aunque solo Fc muy bajoC
La generación de ROS estimulada por R puede detectarse en
el compartimiento extracelular usando isoluminol, se
encontró una diferencia similar entre pacientes y controles
(142). Resultados recientes de nuestro laboratorio, tanto en
Fc total como extracelularCLa producción de ROS estimulada
por R en pacientes con periodontitis crónica está de acuerdo
con lo discutido anteriormente (459). Así, los neutrófilos en la
periodontitis tanto crónica como juvenil muestran un
fenotipo hiperreactivo con respecto a la quimioluminiscencia
dependiente del luminol después de FcCEstimulación R
usando bacterias opsonizadas con inmunoglobulina G.
Un estudio reciente que investiga los efectos de las
bacterias no opsonizadas (S. aureusyEscherichia coli; 6·10
6/ml) sobre la quimioluminiscencia dependiente de
lucinógeno en pacientes con diabetes tipo 1 y
periodontitis grave detectó una generación significativa
de ROS por parte de los leucocitos de sangre periférica,
que fue de ocho a 90 veces mayor en pacientes que en
controles no emparejados (355). Sin embargo, los
ensayos, realizados en presencia de plasma autólogo
fresco, que contendría opsoninas, no son equivalentes a
los no opsonizados.S. aureuscontroles discutidos
anteriormente. Esencialmente, elS. aureuslos resultados
son similares a los publicados previamente para
periodontitis en ausencia de enfermedad sistémica (23,
25, 26, 450). Un problema similar existe en la
interpretación de los hallazgos obtenidos para -no
opsonizados-E. coliyE. colilipopolisacárido en pacientes
con periodontitis crónica (472; Tabla 7).
ROS y antioxidantes en la periodontitis
La base subyacente del fenotipo hiperreactivo de los
neutrófilos periféricos con respecto a FcCLa generación de
ROS reestimulada que se observa en la periodontitis no está
clara. Varios estudios no han podido detectar diferencias en
la expresión de membrana de FcCR III/CD16 (23, 29, 164, 245)
o asociaciones con FcCPolimorfismos R (142, 229). Del mismo
modo, el fenotipo hiperreactivo no parece verse afectado por
in vitro cebado con una variedad de agentes (TNF-a,
lipopolisacárido,FMetLeuPhe, péptido Arg-Gly-Asp-Ser) (139,
165) o ser el resultado del método de preparación de
neutrófilos (141). La periodontitis juvenil/agresiva localizada
puede estar asociada con un defecto constitucional en la
actividad de la diacilglicerol quinasa (160, 203, 421). Primeros
datos investigando FcCLa generación de ROS estimulada por
R en pacientes tratados con éxito (es decir, periodontalmente
sanos) con periodontitis juvenil demostró que la
hiperreactividad estaba presente antes y después del
tratamiento, lo que respalda la presencia de dicho defecto
constitucional (26). Los datos más recientes sobre pacientes
con periodontitis crónica después de un tratamiento exitoso
sugieren además que FcCLa hiperreactividad de ROS
reestimulada es constitucional más que reactiva (142). El
único otro estudio relacionado con el tratamiento sugirió que
la generación inicial de ROS por parte de los neutrófilos en
pacientes con diabetes y periodontitis se redujo 12 semanas
después de la terapia no quirúrgica (8). Sin embargo, faltan
detalles de cómo se realizaron los ensayos de
quimioluminiscencia y no se realizaron ensayos de control
emparejados. Por lo tanto, los resultados de las
comparaciones antes y después se basan en la salida de luz
real, que se sabe que muestra una variación considerable
con el tiempo y dentro de un individuo (24, 25, 462). Los
datos preliminares de nuestro laboratorio sugieren que la
hiperreactividad, en términos de quimioluminiscencia total
dependiente del luminol producida después de FcCR, puede
reducirse parcialmente con la terapia, pero los neutrófilos de
pacientes con periodontitis crónica exhiben una mayor
liberación de ROS extracelular no estimulada en la línea de
base (quimioluminiscencia dependiente de isoluminol) que
no se ve afectada por la terapia (460). Además, los neutrófilos
periféricos no estimulados de pacientes con periodontitis
crónica generalizada también exhiben un fenotipo molecular
distinto (461). Serán necesarios más estudios a nivel de
expresión génica para caracterizar los procesos subyacentes
responsables.
Los datos sobre la generación de ROS en periodontitis
usando zymosan, no opsonizado u opsonizado usando suero
(autólogo y heterólogo) o complemento (humano y cobayo),
son más difíciles de interpretar. Seis de los nueve informes
encontrados en la literatura (Tabla 7) esencialmente no
encuentran diferencias en la generación de ROS entre
187
chapple y matthews
neutrófilos del paciente y del control en un rango de
concentraciones de zymosan (0.1–6.7 mg/ml; suero opsonizado)
en formas tanto crónicas como agresivas de enfermedad
periodontal. Otros dos estudios informaron una mayor
quimioluminiscencia dependiente del luminol utilizando
zimosano no opsonizado y con complemento opsonizado en
neutrófilos de un grupo pequeño (n¼5) de pacientes con
periodontitis juvenil (204) y de 15 pacientes con enfermedad
crónica (142), respectivamente, pero los hallazgos no fueron
estadísticamente significativos. El único estudio que
aparentemente muestra un fenotipo de neutrófilo hiperreactivo
después de la estimulación con zimosano no opsonizado, así
como suero, complemento y opsonizado con IgG es el de Leino y
colaboradores en pacientes con periodontitis juvenil (245). Sin
embargo, este estudio se realizó en una preparación de
leucocitos de sangre periférica en lugar de neutrófilos aislados.
Por lo tanto, los datos actualmente disponibles sugieren que la
generación de ROS por parte de los neutrófilos a través de la
estimulación de zymosan/CR3 (receptor del complemento-3) no
se altera en la enfermedad periodontal.
Se han publicado varios informes que investigan el efecto
del péptido quimiotácticoFMetLeuPhe en la generación de
ROS en formas crónicas y agresivas de enfermedad
periodontal. Los dos estudios en los que participaron
pacientes con periodontitis crónica no encontraron
diferencias en la generación de ROS en comparación con
controles no emparejados (146, 160). Los datos obtenidos del
análisis de neutrófilos de pacientes con periodontitis agresiva
(periodontitis juvenil, periodontitis juvenil localizada,
periodontitis rápidamente progresiva y periodontitis
generalizada de inicio temprano) son inconsistentes, con
niveles de producción de ROS aumentados, disminuidos y
similares (Tabla 7). Estos hallazgos se encuentran en un
contexto de evidencia que demuestra defectos en la función
de los neutrófilos, incluida la locomoción, la adherencia y la
fagocitosis (399, 428), así como la expresión alterada deF
Receptor de superficie MetLeuPhe (317, 429). La evidencia
sugiere que la actividad de la diacilglicerol quinasa, una
enzima que controla los niveles celulares de diacilglicerol que
es importante en el control de muchas respuestas celulares,
incluido el estallido respiratorio, está alterada en los
neutrófilos periféricos en la periodontitis juvenil localizada
(160, 421). Más recientemente, se ha demostrado que el
bloqueo de la actividad de la diacilglicerol quinasa en los
neutrófilos de donantes sanos aumentó significativamente la
actividad del estallido respiratorio después deFEstimulación
con MetLeuPhe. Además, solo tres de cinco pacientes con
periodontitis juvenil localizada estudiados parecían tener un
defecto de diacilglicerol quinasa (203), lo que sugiere que la
variabilidad en algunos estudios deFLa generación de ROS
estimulada por MetLeuPhe en la enfermedad puede ser el
resultado de tal variación individual del paciente. Una
inconsistencia similar en los resultados también es
188
evidente en estudios que investigan agentes que activan
directamente la proteína quinasa c (acetato de miristato de forbol
y dibutirato de forbol-12,13; Tabla 7). Sin embargo, a excepción
de un informe (163), todos los estudios indican que no hay
diferencia en la generación de ROS estimulada por miristato de
forbol/acetato de forbol-12,13-dibutirato o un nivel ligeramente
más alto (pero generalmente estadísticamente insignificante) de
producción en pacientes en comparación con control S.
Si bien las células de control no estimuladas normalmente
se han incluido en todos estos estudios, los informes que
demuestran la generación de ROS detectable -espontánea-
normalmente se basan en métodos de detección no
quimioluminiscentes (Tabla 7). En aquellos estudios donde se
evaluaron los niveles detectables de generación de ROS no
estimulada (n¼6) hay tres informes que sugieren niveles más
altos en la enfermedad (146, 163, 472). Si estos informes
representan laen vivoSe desconoce la situación o son
consecuencia de la preparación de neutrófilos y las
condiciones del ensayo.
Por lo tanto, el hallazgo más consistente de los estudios
sobre neutrófilos periféricos en la periodontitis es que la
enfermedad se asocia con una mayor respuesta de ROS a FcC
estimulación R. Los estudios preliminares también indican
que los neutrófilos periféricos de pacientes con periodontitis
crónica exhiben un bajo nivel de producción de ROS
extracelular que es significativamente mayor que el de los
controles (459). Se desconoce si tal diferencia está presente
en los neutrófilos dentro del surco gingival. Las únicas
investigaciones de neutrófilos creviculares han examinado la
producción de ROS inducida por acetato de miristato de
forbol en la periodontitis crónica (163, 250). Si bien los
neutrófilos creviculares de los pacientes demostraron una
respuesta mayor en comparación con los de los controles
sanos (163), la comparación de las respuestas celulares
aisladas de la sangre y de los sitios enfermos, tratados y
sanos dentro de los pacientes sugirió que tanto la generación
inicial de ROS como las respuestas de acetato de miristato de
forbol fueron más bajas en sitios enfermos (250). El
tratamiento pareció aumentar tanto la producción inicial de
ROS como la respuesta al acetato de miristato de forbol,
restaurando un fenotipo similar al que se encuentra en la
periferia. Estos datos podrían indicar que se inhibe la
respuesta de los neutrófilos aislados de sitios enfermos o
queen vivoactivación y generación de ROS han reducido su
capacidad de respuestain vitro.
Factores que pueden afectar la generación de ROS por parte de los
neutrófilos en los sitios de la enfermedad
Las bacterias de la placa y sus productos son una fuente
obvia de factores que podrían estimular la infiltración de
neutrófilos en los tejidos periodontales. Generación
mejorada de ROS por neutrófilos periféricos de pacientes

con enfermedad tanto crónica como agresiva se puede
estimular con bacterias opsonizadas asociadas con la
enfermedad periodontal (Fusobacterium nucleatum,
Actinobacillus actinomycetemcomitans)de manera similar a
los estudios que utilizanS. aureus (23, 450). Este hallazgo
sugiere que el fenotipo hiperreactivo de los neutrófilos
periféricos podría tener consecuencias perjudiciales para los
tejidos locales. Otros estudios han demostrado que varios
aislados de dos cepas de fusobacteria (F. nucleatumyF.
necrophorum)puede estimular la generación significativa de
ROS (en presencia de plasma), citocinas [interleucina-1B (IL-1
B),TNF-a,IL-8] y producción de elastasa por neutrófilos
aislados de individuos sanos (378). Este grupo también ha
demostrado queF. nucleatum,en ausencia de plasma,
también podría estimular la producción de grandes
cantidades de ROS e inducir la peroxidación de lípidosin vitro
(379). EseF. nucleatum podría ser fundamental en el daño
tisular inducido por ROS dependiente de neutrófilos dentro
del periodonto también está respaldado por el hallazgo de
que la fagocitosis de
F. nucleatuminduce una generación de ROS significativamente
mayor que la fagocitosis dePorphyromonas gingivalisoA.
actinomycetemcomitans (219). Curiosamente, aunqueP.
gingivalispuede tener un efecto inhibidor sobre la generación de
ROS por neutrófilos (467), su capacidad para escindir la
transferrina y liberar hierro o fragmentos de péptidos que
contienen hierro puede contribuir a la destrucción de tejidos al
catalizar la formación del radical hidroxilo tóxico a través de las
reacciones de Fenton (156; véase
- Orígenes y formación de ROS y radicales de oxígeno-). Los
sitios de enfermedad también se asociarán con niveles
elevados de una variedad de citocinas y quimiocinas
producidas por células inflamatorias (incluidos los
neutrófilos) y la población de células residentes normales
dentro de los tejidos periodontales. Una variedad de
citocinas proinflamatorias (TNF-a,Se ha demostrado que el
factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos,
el factor estimulante de colonias de granulocitos, IL-8, IL-1,
IL-6), los factores de crecimiento (p. ej., el factor activador de
plaquetas) y los lipopolisacáridos tienen un efecto de
preparación en el estallido oxidativo de los neutrófilos
humanos tantoin vitroyen vivo (124, 224). Además, ciertas
combinaciones de citocinas (p. ej., factor estimulante de
colonias de granulocitos y macrófagos y TNF-a)son sinérgicos
en su actividad de cebado paraFGeneración de ROS
estimulada por MetLeuPhe (224). Aunque potencialmente
importante en la producción local de ROS, no se cree que
tales efectos de cebado sean la causa de la FcCR fenotipo
hipersensible de neutrófilos periféricos en la enfermedad
periodontal crónica (139, 165). TNF-apuede preparar para la
generación de ROS por neutrófilos de pacientes con
periodontitis crónica y agresiva, así como individuos
periodontalmente sanos (28, 139, 146, 165). Por el contrario,
ROS y antioxidantes en la periodontitis
IL-8 puede cebar paraFProducción de ROS de neutrófilos
estimulada por MetLeuPhe en salud, enfermedad crónica y
periodontitis juvenil localizada, pero no en enfermedad
rápidamente progresiva (146). Estos datos sugieren que las
citoquinas pueden modular la actividad de explosión respiratoria
de los neutrófilos y tienen un papel en la determinación del
estrés oxidativo localmente dentro de los tejidos.
Efectos del tabaquismo en la producción de ROS por
neutrófilos
Aunque fumar es un factor de riesgo conocido para el
desarrollo de periodontitis y el humo del cigarrillo contiene
una mezcla de especies reactivas, el consumo de tabaco se
ha tenido en cuenta recientemente en los estudios de
producción de ROS de neutrófilos. Dado que el efecto del
tabaquismo sobre la respuesta inmunitaria en la enfermedad
periodontal es el tema de una revisión complementaria a
esta (353), solo se revisarán los artículos que investigan el
estallido oxidativo de los neutrófilos y el tabaquismo
directamente. in vitroLos estudios han demostrado que la
exposición de neutrófilos, de donantes médicamente sanos y
periodontalmente sanos, al humo del cigarrillo redujo la
generación de ROS estimulada por acetato de miristato de
forbol (ROS detectadas por métodos de ferricitocromo c y
diacetato de diclorofluoresceína/citometría de flujo). Por el
contrario, al inicio, la producción de ROS no estimulada
aumentó con la exposición al humo, aunque parecía haber
dos poblaciones celulares distintas (productoras altas y bajas
de ROS) (354). Un reciente estudio de quimioluminiscencia
dependiente de luminol deFMetLeuPhe y neutrófilos
estimulados con zimosano opsonizado aislados de
fumadores y nunca fumadores encontraron resultados
similares, y los fumadores tenían niveles significativamente
más bajos de producción de ROS pero una quimiotaxis más
alta (392). Mientras que la deficiencia en la respuesta de ROS
se restauró por un período de 20 días de abstinencia, la
actividad quimiotáctica se mantuvo alta. En contraste con
estos informes, un estudio de 82 hombres sanos, 41
fumadores crónicos de cigarrillos y 41 no fumadores, ha
demostrado una mayor tasa de generación de ROS por los
neutrófilos periféricos estimulados con acetato de miristato
de forbol (reducción del citocromo c) de los fumadores, junto
con un aumento GSSG y niveles reducidos de GSH en plasma
(373). Este estudio también sugirió que el suero de los
fumadores causaba necrosis de los neutrófilos.in vitro.
En un estudio de la FcCRespuesta de quimioluminiscencia
dependiente de luminol estimulada por R de leucocitos de
sangre periférica, no se detectaron diferencias entre
fumadores y no fumadores, independientemente de la
presencia de enfermedad periodontal (140). Sin embargo, los
leucocitos de sangre periférica de pacientes de control
periodontalmente sanos que fumaban mostraron un nivel
medio más alto de luminol-dependiente químico.
189
chapple y matthews
luminiscencia (no significativa) que las de los no fumadores.
Esta diferencia redujo el nivel de FcCHiperreactividad
estimulada por R al comparar pacientes y controles en el
grupo de fumadores porque los pacientes que fumaban
tenían niveles similares de quimioluminiscencia dependiente
de luminol de leucocitos en sangre periférica que aquellos
que no fumaban. Otros estudios realizados por el mismo
grupo han confirmado este hallazgo y han demostrado que
el TNF-atiene un mayor efecto de cebado para FcC
Generación de ROS inducida por leucocitos de sangre
periférica de fumadores que de no fumadores (166).
Los datos discutidos son inconsistentes y difíciles de
reconciliar. Es posible que las diferencias metodológicas,
como la validación del estado de fumador, el nivel de
tabaquismo, el ensayo y el método de estimulación de ROS,
puedan explicar la disparidad en los resultados. Se justifican
más estudios en esta área relacionada con las enfermedades
periodontales.
Mieloperoxidasa derivada de neutrófilos en la enfermedad
periodontal
La mieloperoxidasa se libera en el fagosoma y
extracelularmente durante la fagocitosis y la activación de
los neutrófilos cuando es importante para generar ácido
hipocloroso y otras ROS (20, 228), que tienen potencial
para dañar los tejidos (ver -Orígenes y formación de ROS
y radicales de oxígeno-) . Se ha demostrado que una
variedad de bacterias orales opsonizadas estimulan la
liberación de las tres isoformas de mieloperoxidasa (274)
y se han informado niveles elevados en el fluido
crevicular gingival de sitios enfermos en gingivitis (66),
periodontitis crónica (60, 445, 454), periodontitis
rápidamente progresiva (307), periodontitis juvenil
localizada (397) y periodontitis agresiva (59, 61). Estos
estudios han demostrado una relación entre el nivel de
mieloperoxidasa en el líquido crevicular gingival y las
medidas clínicas de la enfermedad (61, 445, 454) y que los
niveles se reducen después de un tratamiento exitoso
(59–61, 397, 454). Si bien la presencia de niveles elevados
de mieloperoxidasa en los sitios de la enfermedad es un
marcador potencialmente útil de la infiltración de
neutrófilos en los tejidos, su presencia sugiere
inevitablemente la generación local de ácido hipocloroso
y otras ERO, lo que puede aumentar la carga oxidativa y
promover el daño tisular.
Otras fuentes celulares de ROS
Aunque todas las células producen ROS durante las funciones
fisiológicas normales (119), son los fagocitos mononucleares y
polimorfonucleares neutrófilos los que producen altos niveles
para facilitar la eliminación y destrucción de microbios (371). En
consecuencia, la mayoría de las investigaciones sobre el papel de
las ROS en el daño tisular
190
se han concentrado en la actividad de tales células. Sin
embargo, existe evidencia de que otras células que
normalmente residen dentro de los tejidos periodontales
pueden contribuir al estrés oxidativo local y en esta sección
se revisarán algunos hallazgos relevantes. Los fibroblastos,
que representan la mayor población de células en la encía
sana y el ligamento periodontal, pueden liberar
espontáneamente niveles detectables de ROS en medios de
cultivo que contienen Ca2+(289, 384). El curso temporal de
esta producción espontánea de ROS parece ser comparable
en forma y magnitud a la detectada en neutrófilos y células
endoteliales no estimuladas (289). Los estudios de
estimulación indicaron que una variedad de agentes
aumentan la generación de superóxido tanto en la piel como
en los fibroblastos gingivales, con IL-1B,factor de crecimiento
transformante -B,acetato de miristato de forbol, y el ionóforo
de calcio A23187 siendo estimuladores débiles yE. coli
lipopolisacárido,FMetLeuPhe, paredes celulares de
estreptococos del grupo A y TNF-ainduciendo una producción
significativa de ROS. La generación de superóxido por
fibroblastos estimulados parece estar bien regulada porque
los niveles producidos son equivalentes a los que estimulan
el crecimiento y la proliferación de células de fibroblastos
(289). Además, las células estimuladas responden
aumentando sus niveles de superóxido dismutasa
mitocondrial, protegiéndolas así del daño inducido por ROS
(384). Curiosamente, el nivel de inducción de superóxido
dismutasa difería entre los estimulantes, lo que sugiere que
en vivo filos broblastos podrían estimularse para producir
niveles dañinos de ROS mediante factores derivados de la
placa.
Otro aspecto de este trabajo que puede ser importante en vivo
es la necesidad de Ca2+para la producción detectable de ROS por
fibroblastos. Los niveles de calcio son altos en las lagunas de
Howship (383) y la actividad osteoclástica en la cresta alveolar
podría resultar en un aumento local de Ca2+niveles que
promueven la producción de ROS por parte de los fibroblastos
gingivales en una región potencialmente expuesta a las bacterias
de la placa y sus componentes.
El epitelio de unión y crevicular se encuentran en el
-primera línea- en términos de defensa contra la entrada de
bacterias de la placa y sus productos en los tejidos
periodontales. Si bien existe un creciente cuerpo de evidencia
que demuestra que las células epiteliales participan
activamente en las respuestas inmunitarias/inflamatorias al
producir una variedad de citoquinas, su contribución directa
al estrés oxidativo solo se ha apreciado recientemente. Tanto
la piel como las líneas celulares epiteliales gingivales
expresan una hemo-flavoproteína NADPH oxidasa (Nox),
distinta de la isoforma Phox de los fagocitos. Aunque la
actividad de esta NADPH oxidasa es 20 veces menor que la
reportada para la oxidasa de fagocitos, la producción crónica
de superóxido por parte del epitelio dentro del

la grieta/bolsa podría representar una fuente importante
de ROS local (73).
Presencia local de ROS en la enfermedad
periodontal
Se considera que la mayor parte de la destrucción tisular en
la periodontitis es el resultado de una respuesta
inflamatoria/inmune aberrante a la placa microbiana
adyacente al margen gingival y que implica la liberación
prolongada de enzimas de neutrófilos y ROS. Si bien hay
datos en la literatura sobre la presencia de los primeros en
los sitios enfermos (425), no se han publicado estudios que
investiguen directamente la presencia y los niveles de ROS en
los tejidos periodontales, el fluido crevicular gingival, la saliva
o la sangre en la salud y la enfermedad periodontal. . Aunque
no sorprende, dadas las dificultades para detectar ROS
directamente (revisado en 187), existen posibilidades para la
detección local de ROS utilizando trampas de espín
moleculares endógenas, como el urato. La alantoína es uno
de los productos de oxidación del urato que se ha
demostrado que está elevado en condiciones asociadas con
el estrés oxidativo y la enfermedad periodontal, como
diabetes (47), enfermedad pulmonar en bebés prematuros
(303), artritis reumatoide (161, 463) y insuficiencia cardíaca
crónica (116). De particular importancia es que la alantoína se
ha detectado con éxito mediante cromatografía líquida de
alta presión en muestras pequeñas (4yol) de líquido de
microdiálisis cerebral (258), haciendo del análisis del líquido
crevicular gingival en salud y enfermedad un objetivo
tangible.
Una segunda vía potencial de investigación es la detección
directa de peróxido de hidrógeno, un ROS relativamente estable,
al tomar muestras del aire dentro de la cavidad bucal. Los
estudios han demostrado que el peróxido de hidrógeno se puede
detectar en el aire exhalado y en el condensado del aliento, y que
los niveles parecen correlacionarse con la inflamación (revisado
en 332).
Debido a las dificultades inherentes a la detección y
cuantificación de ROS directamente en cualquier enfermedad, la
mayor parte de la investigación se ha concentrado en medir los
productos (biomarcadores) generados por las ROS que
reaccionan con los lípidos, el ADN o las proteínas del cuerpo. Hay
una variedad de biomarcadores generalmente aceptados,
algunos de los cuales han sido estudiados en el contexto de las
enfermedades periodontales. La siguiente sección se basa en las
búsquedas bibliográficas descritas en el -Contexto de la revisión-
más búsquedas subsidiarias utilizando PubMed con
- Periodonto*- como término de búsqueda vinculado
individualmente a todos los biomarcadores de daño oxidativo (n
¼33) discutido por Halliwell y Whiteman (184). Es importante
recordar que ninguno de estos marcadores es absolutamente
específico para el daño de ROS (es decir, pueden ser
ROS y antioxidantes en la periodontitis
generados por medios distintos a la reacción con ROS) o
específicos de los tejidos periodontales o periodontitis.
Presencia sistémica y local de los
productos de reacción de ROS con
biomoléculas
La mayoría de los trabajos publicados en la literatura
periodontal se han centrado en los marcadores de reacciones
de ROS con lípidos. De los tres principales marcadores de
peroxidación lipídica de uso común (sustancias reactivas del
ácido tiobarbitúrico, malondialdehído, isoprostanos – ver
-Biomarcadores de peroxidación lipídica-), los isprostanos se
consideran los mejores disponibles (133, 346). Hasta la fecha,
solo se han investigado las sustancias reactivas del ácido
tiobarbitúrico y el malondialdehído en la periodontitis crónica
(314, 416, 419). Es importante destacar que, debido a los
posibles efectos de confusión del consumo de tabaco debido
a la gran cantidad de especies oxidativas contenidas en el
humo del cigarrillo (329), los fumadores fueron excluidos de
los dos últimos estudios.
Todos los estudios publicados han sugerido que los
pacientes con periodontitis crónica tienen niveles más altos
de peroxidación lipídica que los controles periodontalmente
sanos. Por lo tanto, las sustancias reactivas al ácido
tiobarbitúrico se generaron en pacientes tanto
sistémicamente en plasma y eritrocitos (314) como
localmente en tejidos homogeneizados (314, 419). Más
importante aún, teniendo en cuenta la insuficiencia de las
sustancias reactivas del ácido tiobarbitúrico como marcador
aceptable de la peroxidación lipídica (184), también se
encontró que el malondialdehído se elevaba en el líquido
crevicular gingival y en la saliva de los pacientes en
comparación con los controles (416). Ambos estudios que
investigaron sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico
también midieron otros parámetros que respaldan la
afirmación de que los resultados de la sustancia reactiva al
ácido tiobarbitúrico están relacionados con la inflamación.
Por lo tanto,Ben fluido crevicular gingival de esos sitios (419).
Nuevamente, de manera más significativa, los niveles de
malondialdehído en el fluido salival y gingival crevicular
disminuyeron en sujetos después de una terapia de fase 1
clínicamente exitosa (416). Curiosamente, las
concentraciones de malondialdehído/4-hidroxialcanal en el
fluido crevicular gingival informadas por Tsai et al. (416)
fueron de 200 a 400 veces más altas que las respectivas
concentraciones de saliva, y aunque los autores no discuten
este tema, parece probable que refleje una cantidad
sustancialmente mayor de actividad de ROS (por lo tanto,
peroxidación de lípidos) en el fluido crevicular gingival que en
la saliva. , dado que los dos medios biológicos no difieren
mucho en la capacidad antioxidante total (58). Esto plantea
interrogantes sobre
191
chapple y matthews
la idoneidad de la saliva como medio para evaluar la
actividad/efectos de ROS dentro del periodonto.
Los estudios sobre el modelo de periodontitis inducida por
ligadura en ratas que utilizan el ensayo de malondialdehído
respaldan los estudios en humanos y han demostrado una mayor
peroxidación de lípidos en el suero (388) y en los
homogeneizados de tejido gingival (108, 110) de ratas
experimentales en comparación con los controles con operación
simulada . Curiosamente, el desarrollo de la inflamación inducida
por la ligadura y el aumento de malondialdehído podrían
reducirse significativamente usando un inhibidor de la sintasa de
óxido nítrico inducible (aminoguanidina) (108) o un mimético de
superóxido dismutasa que elimina específicamente los aniones
superóxido (110).
Hay una variedad de estudios que investigan la peroxidación
de lípidos en condiciones relacionadas con la enfermedad
periodontal que también brindan apoyo indirecto para el papel
de las ERO en la patogénesis de la enfermedad. Por ejemplo, en
un estudio de una familia afectada por diferentes grados del
síndrome de Papillon-Lefèvre, los niveles de hidroperóxido en
plasma (medidos por el ensayo de oxidación de iones ferrosos
xilenol-2 (FOX-2)) (301) fueron altos en comparación con los
valores de referencia (40 ). Sin embargo, aunque parecía haber
una relación positiva entre los niveles de hidroperóxido y las
manifestaciones fenotípicas de la enfermedad, se necesita
precaución debido al pequeño número de casos y la variabilidad
de los resultados del ensayo de oxidación de iones ferrosos de
xilenol-2 con almacenamiento de muestras (389) . De mayor
trascendencia, dos de los factores de riesgo más importantes
para el desarrollo de la periodontitis, el tabaquismo (311) y la
diabetes (264), puede estar relacionado con alteraciones en las
células gingivales y los niveles de peroxidación lipídica. Se sabe
desde hace algún tiempo que los componentes del humo del
cigarrillo están asociados con la inhibición y destrucción de los
fibroblastos periodontales (por ejemplo, 291, 324, 411). Más
recientemente se ha observado que la nornicotina, un metabolito
que se encuentra en altas concentraciones en el plasma de
fumadores, no solo provoca el desarrollo de productos finales de
glicación avanzada (72, 112) sino que también induce un
aumento en la expresión del receptor para la glucosilación
avanzada. productos finales de glicación por fibroblastos
gingivales humanosin vitro
(220). Además, la expresión del receptor para productos
finales de glicación avanzada por el endotelio y el epitelio
gingival se ha demostrado inmunohistoquímicamente en
sitios enfermos de pacientes con periodontitis con y sin
diabetes tipo 2 (221). Estos hallazgos, junto con estudios
previos en ratones que muestran que la infusión de
albúmina del producto final de la glicación avanzada da
como resultado la deposición del producto final de la
glicación avanzada y una mayor generación de sustancias
reactivas al ácido tiobarbitúrico en varios tejidos,
incluidas las encías (365), proporcionan una
192
vínculo mecánico entre la diabetes, el tabaquismo y la
enfermedad periodontal basado en el estrés oxidativo.
Un método novedoso y potencialmente útil para estimar la
peroxidación de lípidos que puede tener aplicación en las
enfermedades periodontales es el análisis de hidrocarburos
volátiles en el aire exhalado o muestreado en la cavidad oral
(332). Se han informado algunos trabajos de Rusia (432;
artículo en ruso) que sugieren diferencias en los niveles
orales de ácidos grasos de cadena corta y aldehídos entre
pacientes con periodontitis y controles. Las metodologías
para la evaluación de compuestos orgánicos volátiles dentro
de la cavidad oral se han desarrollado en el campo del mal
olor oral y sugieren que los compuestos orgánicos volátiles
predominantes son alcanos y alcanos metilados que podrían
representar los productos finales de la peroxidación lipídica
(322).
La información sobre los marcadores de la reacción de ROS con el
ADN y las proteínas en la periodontitis es limitada. La mayoría de los
datos publicados sobre el daño oxidativo del ADN han sido
informados por un grupo japonés que investigó los niveles de 8-
hidroxideoxiguanosina en la saliva mediante un ensayo
inmunoabsorbente ligado a enzimas. Estos estudios demostraron que
los niveles de 8-hidroxideoxiguanosina en muestras de sujetos con
periodontitis crónica eran significativamente más altos que los de
controles periodontalmente sanos (403). En los pacientes, los niveles
de 8-hidroxideoxiguanosina en saliva se correlacionaron con la
pérdida de inserción clínica y la edad, pero no con el tabaquismo, el
sangrado al sondaje o la profundidad del sondaje. Sin embargo, los
niveles disminuyeron después de una terapia periodontal inicial
exitosa. Otros datos de este grupo sugieren que los niveles salivales
de 8-hidroxideoxiguanosina se correlacionan con los niveles
detectables por la reacción en cadena de la polimerasa de
P. gingivalis (362) y que la 8-hidroxidesoxiguanosina se
puede detectar en el líquido crevicular gingival de algunos
sitios asociados con dientes con compromiso periodontal con
pronóstico desesperado (404). Se sabe que los niveles de 8-
hidroxideoxiguanosina excretados en la orina están
relacionados con el tabaquismo y el género (251), pero no
con la edad (rango de 35 a 65 años) (325). Dado que los datos
publicados sobre la saliva no se han estratificado para estas
variables, se justifican más estudios en esta área.
La información sobre la oxidación de proteínas en la enfermedad
periodontal humana se limita al estudio de cohorte de Sculley y
Langley-Evans (370). sujetos (n¼129) se clasificaron utilizando una
modificación de la puntuación del Índice Periodontal Comunitario de
Necesidad de Tratamiento (CPITN) que se tomó para indicar la
enfermedad (definida como una puntuación combinada para todos
los sextantes de más de 6) o la gravedad de la enfermedad. Los
resultados indican que los carbonilos de proteínas son
significativamente más altos en el tercil de pacientes con una
puntuación CPITN total promedio de‡13 en comparación con el que
tiene una puntuación de£10. Al revés
 ROS y antioxidantes en la periodontitis

Tabla 8.Genes representativos* bajo el control de los factores de transcripción sensibles a redox AP-1 y NF-jB

IL, interleucina; MMP, metaloproteinasa de matriz; TGF, factor de crecimiento transformante; TNF, factor de necrosis tumoral; MIP, proteína intrínseca mayor; PCR, proteína C
reactiva; LBP, proteína de unión a lipopolisacáridos; G-CSF, factor estimulante de colonias de granulocitos; GM-CSF, factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos;
VCAM, molécula de adhesión de células vasculares; ICAM, molécula de adhesión intracelular; NFjB, factor nuclear-jB.
* Datos tomados de Makarov (255), Matt (260) y Yates y Rayner (464). Esta es una lista ilustrativa y no contiene todos los objetivos genéticos para estos factores de transcripción.
Además, debido a que los promotores y potenciadores de los genes dependientes a menudo contienen sitios de unión para otros factores de transcripción, las interacciones entre
estos factores aumentan o disminuyen su capacidad para iniciar la transcripción. El nivel de control regulatorio a menudo aumenta aún más por el requisito de coactivadores
como la proteína de unión a CREB (260).

se encontró para las tasas de flujo de urato y antioxidante total
(capacidad reductora férrica del ensayo de plasma). Los únicos
otros datos disponibles sobre oxidación de proteínas se basan en
la localización inmunohistoquímica de nitrotirosina en tejidos
obtenidos de ratas sometidas a periodontitis inducida por
ligadura (108–110, 252). La nitrotirosina puede estar formada por
peroxinitrito (ver -Orígenes y formación de ROS y radicales de
oxígeno- – -Superóxido y óxido nítrico-) y suele interpretarse
como evidencia de oxidación de proteínas. Aunque a menudo se
piensa que es un marcador específico de la actividad del
peroxinitrito, la nitrotirosina se puede formar a partir de la
tirosina mediante una variedad de especies de nitrógeno reactivo
(184). Los cuatro del animal
los estudios demostraron una mayor presencia de células
inflamatorias y células positivas para nitrotirosina en tejidos
asociados con dientes ligados en comparación con los controles.
Estos cambios se redujeron significativamente, al igual que los
niveles de malondialdehído tisular, mediante un inhibidor
inducible de la óxido nítrico sintasa (aminoguanidina) (108) o un
mimético de la superóxido dismutasa que elimina
específicamente los aniones superóxido (110). En dos de estos
estudios de ligación, se realizó una tinción inmunohistoquímica
para poli(ADP-ribosa) como indicador de la activación de
poli(ADP-ribosa) polimerasa de la reparación del ADN. La tinción
positiva se detectó consistentemente en tejidos asociados con
dientes ligados,

193
chapple y matthews
que se redujo significativamente con el tratamiento con
aminoguanidina (108) y Tempol (un eliminador de radicales
permeable a la membrana) (109), lo que sugiere que el daño
oxidativo al ADN también es un factor en este modelo
animal. Está claro de lo anterior que se requieren estudios
adicionales en la enfermedad periodontal humana para
dilucidar el alcance y la naturaleza de la oxidación de
proteínas y ADN en la enfermedad periodontal.
Efectos de ROS en los tejidos y componentes
periodontales
La acción directa de las ROS sobre los componentes del
tejido conjuntivo se ha estudiado ampliamente en
relación con una variedad de enfermedades inflamatorias
y ha sido objeto de revisiones recientes (64, 434).
Además, recientemente se ha revisado la enumeración de
posibles biomarcadores de los componentes colágenos y
no colágenos de los tejidos conectivos en la enfermedad
periodontal (128, 151, 285). Esta sección se concentrará
en revisar la literatura que se relaciona directamente con
las alteraciones oxidativas de los tejidos periodontales
con el fin de resaltar los aspectos de la patología que
requieren investigación y que podrían sugerir futuros
objetivos terapéuticos y/o marcadores para evaluar el
desarrollo, la progresión o la regresión de la
periodontitis. Hay una serie de informes que investigan
los efectos directos de ROS en las células gingivales y los
componentes del tejido conectivo.in vitro.These studies
often depend upon artificial systems of ROS generation
which substitute for the neutrophil-generated ROS that
are implicated in tissue damage in vivo.
Los efectos dañinos directos de las ROS sobre las células
gingivales han recibido poca atención. Los fibroblastos
gingivales y las monocapas de células epiteliales expuestas a
neutrófilos no estimulados de sujetos médicamente y
periodontalmente sanos experimentan un desprendimiento
o daño mínimo (14, 103). Los neutrófilos estimulados con
acetato de miristato de forbol interrumpieron el
desprendimiento de células epiteliales sin lisis por un
mecanismo que involucra proteólisis en lugar de cualquier
efecto directo de ROS. Por el contrario, las ROS generadas
utilizando un sistema de mieloperoxidasa, cloruro, glucosa y
glucosa oxidasa de neutrófilos provocaron la lisis de
objetivos epiteliales que podrían inhibirse con azida y
catalasa (14). Esta observación tiene implicaciones
importantes para la patogenia de la enfermedad, pero la
evidencia de queen vivolevels of ROS production by
neutrophils in periodontitis cause such an effect are lacking.
Similarly, there appear to be no studies comparing ROS-
mediated damage to cells or extracellular matrix components
by neutrophils isolated from patients and periodontally
healthy controls, despite the growing evidence
194
base que los neutrófilos en la periodontitis muestran un
fenotipo hiperactivo/reactivo con respecto a la
producción de ROS (ver -in vitroGeneración de ROS por
neutrófilos en salud y enfermedad periodontal).
Aunque los efectos de las ROS sobre la resorción ósea no se
han estudiado en la enfermedad periodontal, se ha demostrado
que ciertas ROS (superóxido y peróxido de hidrógeno) activan los
osteoclastos (44, 174) y promueven la formación de osteoclastos
(147). Además, los osteoclastos producen ROS en la interfaz del
borde del volante/hueso, lo que sugiere un papel más directo en
la reabsorción (223, 393). Este papel directo en la resorción ósea
en la periodontitis está respaldado por el hallazgo de que los
radicales hidroxilo y, en menor medida, el peróxido de hidrógeno
pueden degradar los proteoglicanos del hueso alveolar.in vitro
(284).
Gran parte de los datos disponibles sobre la degradación de la
matriz extracelular de los tejidos conectivos mediada por ROS se
ha centrado en investigar la patología y la patogenia de la artritis
reumatoide (revisado en 434). Por lo tanto, muchos de los
estudios se relacionan con los componentes de la membrana
sinovial, particularmente los componentes no colagenosos del
líquido sinovial y el cartílago (es decir, los proteoglicanos). ROS,
generadas artificialmente o producidas por neutrófilos
estimuladosen vitro,se ha demostrado que degrada
preferentemente los componentes proteicos (núcleo y enlace) de
los proteoglucanos, lo que da como resultado que los
glicosaminoglucanos componentes se unan a fragmentos
peptídicos más pequeños. Además, los propios
glicosaminoglicanos pueden degradarse, pero difieren en sus
susceptibilidades al ataque, siendo los glicosaminoglicanos
sulfatados más resistentes que las moléculas no sulfatadas.
Estudios específicos sobre los componentes de la matriz
extracelular de los tejidos periodontales han demostrado lain
vitrocapacidad de las ERO para degradar los proteoglicanos
extraídos de la encía porcina, así como dentro de secciones
congeladas intactas de tejido (37). Estudios más recientes de
Moseley y colaboradores han investigado los efectos de una
gama de ROS sobre los glicosaminoglicanos y proteoglicanos
presentes en los tejidos blandos y calcificados del periodonto.
Sus hallazgos demostraron que todos los glicosaminoglicanos
experimentan un grado variable de despolimerización de cadena
y modificación de residuos (especialmente en presencia de
radicales hidroxilo) y que los glicosaminoglicanos sulfatados eran
más resistentes a la degradación de ROS que el hialuronano de
glicosaminoglicanos no sulfatados (282, 283). Además, se
demostró que los proteoglicanos de sulfato de condroitina del
hueso alveolar eran particularmente susceptibles al daño por
radicales hidroxilo, lo que provocó la degradación tanto de las
proteínas centrales como de las cadenas de glicosaminoglicanos
(284). Por el contrario, el peróxido de hidrógeno causó más
selectivo

damage with core proteins being more susceptible
than glycosaminoglycan chains. A similar pattern of
ROS damage is said to occur with proteoglycans
isolated from gingival soft tissue (434).
La evidencia acumulada sugiere claramente que las ROS
en niveles fisiológicos pueden dañar selectivamente los
proteoglicanos asociados con los tejidos periodontales
blandos y el hueso alveolar. Además, el hecho de que estos
componentes de la matriz extracelular se degradan en la
enfermedad periodontal está respaldado por datos de un
gran número de estudios basados en el análisis de extractos
de tejido y líquido crevicular gingival para sus productos de
degradación (revisado en refs 128, 434). Lo que está menos
claro es si la degradación de los proteoglicanos en la
enfermedad periodontal es, al menos en parte, el resultado
del daño oxidativo. Los componentes de proteoglicanos que
se encuentran en el líquido crevicular gingival de los casos de
periodontitis avanzada parecen originarse en el hueso
alveolar, en lugar de los tejidos blandos periodontales (433).
Son productos de degradación parcial en los que se ha
producido la escisión de las proteínas centrales sin una
alteración significativa de las cadenas de
glicosaminoglicanos. Este hallazgo es consistente con el
patrón de daño oxidativo a los proteoglicanos del hueso
alveolar observadoin vitro (284). Similarly, biochemical
analysis of gingival proteoglycans in inflamed gingivae
demonstrates a similar pattern of degradation of the core
proteins with retention of relatively intact sulfated
glycosaminoglycan chains (36, 127, 330). In contrast to its
sulfated counterparts, the ubiquitous non-sulfated
glycosaminoglycan hyaluronan, found to be most susceptible
to ROS damage in vitro (282, 283), is completely degraded in
inflamed gingival tissue (36, 127, 330). Thus, the pattern of
proteoglycan and glycosaminoglycan degradation seen in
periodontitis reflects the in vitro data on the effects of ROS
and is consistent with a role for oxidative damage to non-
collagenous components of both the hard and soft tissues of
the periodontium.
Similarly, studies have demonstrated that ROS have a
variety of effects on type I collagen in vitro incluida la
fragmentación directa y la polimerización, así como la
producción de modificaciones oxidativas, lo que hace que la
molécula sea más propensa a la proteólisis (287, 434). La
estructura del colágeno, con su alto contenido de prolina/
hidroxiprolina, es particularmente susceptible al daño por
ROS. Los aniones superóxido y los radicales hidroxilo pueden
dividir el colágeno en pequeños péptidos en los residuos de
prolina e hidroxiprolina, liberando péptidos que contienen
hidroxiprolina (276). En muchos tejidos, incluidos los vasos
sanguíneos, el corazón, los pulmones, los riñones y la
placenta, se cree que el colágeno se
ROS and antioxidants in periodontitis
tected from the action of superoxide by the expression of
high levels of extracellular superoxide dismutase which
binds to heparin and type I collagen (320). Loss of
extracellular superoxide dismutase activity contributes to
a number of diseases associated with tissues that are
associated with high levels of constitutive enzyme
expression (e.g. atherosclerosis, hypertension, coronary
artery disease, and diabetic vasculopathy) (302). Although
periodontal disease is associated with increased levels of
superoxide dismutase-1 (found in the cytoplasm and
nuclei of cells) in gingival extracts, there have been no
studies of the extracellular isoenzyme (superoxide
dismutase-3) in periodontitis (7, 314). Increased local
breakdown of collagen in periodontal disease has been
suggested from investigating gingival crevicular fluid for
collagen metabolites such as hydroxyproline (193),
NORTE-propéptido (54) y enlaces cruzados de colágeno
(piridinolina y desoxipiridinolina) (150, 313). Si bien es
probable que la presencia de estos metabolitos de
colágeno en el líquido crevicular gingival sea el resultado
de una combinación de proteólisis por parte de las
colagenasas bacterianas y del huésped, el daño oxidativo
puede contribuir directa o indirectamente a su
producción.
Si bien el colágeno puede ser susceptible al ataque directo de
ROS, se ha demostrado que el colágeno, junto con otras
proteínas, puede interactuar con productos de peroxidación de
lípidos como el malondialdehído (386). En circunstancias
normales, el colágeno y otros componentes de la matriz
extracelular son importantes para controlar el movimiento de las
células y la función de las células del tejido conjuntivo (356). Sin
embargo, la modificación del colágeno y las proteínas séricas
indirectamente por ROS, a través de la interacción con productos
de peroxidación de lípidos como el malondialdehído, puede
alterar significativamente las funciones de los fibroblastos, como
la adhesión, la proliferación y la longevidad (345). Tales
alteraciones deen vivo fiDebe esperarse una función broblástica
en la enfermedad periodontal debido al aumento documentado
en la peroxidación de lípidos dentro de los tejidos gingivales
(revisado anteriormente).
La glicación y la glioxidación de proteínas para producir
productos finales de glicación avanzada dependen de
procesos oxidativos (209) y ocurren en la diabetes (295) y el
tabaquismo (72, 112), dos factores de riesgo importantes
para la periodontitis. En los tejidos conectivos, los colágenos
son particularmente susceptibles a la glicación. En el caso del
colágeno tipo I, la glicación modifica sus propiedades
estructurales (410) y altera sus interacciones con las
moléculas y células de la matriz extracelular circundante,
incluidos los preosteoblastos (217) y los neutrófilos (278). De
especial importancia para la patogenia de la enfermedad
periodontal es el hallazgo de quein vitrola glioxidación del
colágeno tipo I aumentó significativamente los neutrófilos
195
chapple y matthews
adhesión y quimiotaxis de los neutrófilos, además de tener
un efecto de cebado en la estimulación posterior conNORTE-
formil-metionil-leucil-fenilalanina (278). Estos resultados
sugieren que los cambios dependientes de la oxidación en el
colágeno dentro de los tejidos conectivos periodontales
podrían retardar la migración de neutrófilos a través de los
tejidos y aumentar su potencial para producir ROS, dos
factores que pueden ser importantes en la patogénesis de la
enfermedad periodontal.
Otros estudios sobre los efectos de las ROS en el plasma han
sugerido que el superóxidoin vitropuede modificar un factor
extraíble con cloroformo unido a la albúmina sérica que hace que
el plasma y su albúmina purificada cromatográficamente sean
altamente quimiotácticos para los neutrófilos in vitroyen vivo (
321). La modificación mediada por ROS de la albúmina del líquido
tisular dentro de los tejidos periodontales podría contribuir a la
entrada de neutrófilos que se observa en la enfermedad.
Además, el desequilibrio de las metaloproteinasas y sus
inhibidores tisulares en el fluido crevicular gingival y en los
tejidos asociados con la enfermedad (326, 390, 420) podría ser el
resultado del daño directo del inhibidor tisular de las
metaloproteinasas de matriz por ROS (171) o alteraciones
inducidas por ROS en metaloproteinasa de matriz e inhibidor
tisular de la expresión de metaloproteinasa de matriz por células
dentro del periodonto (189, 222, 361). En cualquier caso, los
aumentos relacionados con ROS en la actividad de la
metaloproteinasa de la matriz podrían desempeñar un papel
importante en la destrucción de las proteínas tanto nativas como
oxidativamente alteradas dentro de la matriz extracelular.
Si bien las acciones de las ROS sobre el ADN están bien
documentadas, parece haber solo un informe publicado que
investiga el daño del ADN en los tejidos gingivales en la salud y la
enfermedad periodontal (394). Los resultados, basados en el
análisis de la reacción en cadena de la polimerasa del ADN total
extraído de las encías, encontraron deleciones dentro del ADN
mitocondrial solo en muestras de pacientes con periodontitis. Es
bien sabido que las mutaciones del ADN mitocondrial, como las
deleciones resultantes del daño oxidativo, están asociadas con el
envejecimiento y varias enfermedades crónicas (309). Además,
una vez dañado, el estrés oxidativo dentro de la célula puede
amplificarse debido a la disminución de la expresión de proteínas
críticas para el transporte de electrones, lo que lleva a la muerte
celular (430).
Vías de señalización sensibles a redox y
enfermedad periodontal
Tradicionalmente, la producción de ROS por parte de los
fagocitos se ha asociado con la defensa del organismo frente a
las infecciones, ya que son esenciales para la destrucción eficaz
de los microbios. Por el contrario, las ROS en niveles elevados o
producidas de forma crónica pueden causar estrés oxidativo.
196
dentro de los tejidos y resultar en daño directo a las células y la
matriz extracelular. Posteriormente, los productos de este daño
oxidativo, como los productos finales de glicación avanzada y las
proteínas modificadas con peróxido de lípidos, pueden conducir
a un mayor daño inducido por ROS por sus acciones de cebado y
quimiotácticas sobre los neutrófilos (ver
-Efectos de las ROS sobre los tejidos y componentes
periodontales-). Sin embargo, ahora es evidente que las ROS
desempeñan un papel importante en el funcionamiento
fisiológico normal de todas las células y están involucradas en
una variedad de vías de señalización mediadas por receptores en
las que activan o inhiben las fosfatasas y quinasas involucradas
en la transducción de señales, además de afectar directamente la
unión final. de algunos factores de transcripción a sus objetivos
de ADN (119, 210, 260, 349). En particular hay dos
- redox-sensitive- transcription factors of potential
importance in the pathogenesis of periodontal disease,
namely nuclear factor-jB y proteína activadora 1. Pueden
ser activados por una variedad de estímulos, incluidos
productos bacterianos, proteínas virales, citocinas,
factores de crecimiento, radiación, isquemia/reperfusión
y estrés oxidativo (255). Después de la activación, regulan
la transcripción de genes importantes en la inflamación,
remodelación de tejidos, proliferación celular, apoptosis y
reparación (Tabla 8). Los niveles de GSH endógeno y
antioxidantes exógenos que contienen tiol pueden alterar
las respuestas celulares a los estímulos inflamatorios (p.
ej., 155, 232), lo que indica una vía de investigación
potencialmente fructífera para la prevención y el
tratamiento de enfermedades inflamatorias como la
periodontitis. La siguiente sección discutirá brevemente
el papel fisiológico de ROS y glutatión en las vías de
señalización en general antes de considerar la activación
de la proteína-1 y el factor nuclear-jB y su papel potencial
en la patogenia de las enfermedades periodontales.
señalización redox
En condiciones fisiológicas normales, la respuesta celular a la
unión de un ligando a su receptor dentro de la membrana celular
inicia una cascada de eventos que a menudo dan como resultado
una expresión génica alterada. Se ha demostrado que las ROS
exógenas o estimuladas por receptores alteran numerosas vías
de señalización, incluidas, por ejemplo, todas las proteínas
quinasas activadas por mitógenos (415) que fosforilan sustratos
proteicos. Se cree que la regulación normal de las cascadas de
señalización de los receptores de membrana depende de la
generación local de ROS que, posiblemente a través de la
oxidación y reducción del glutatión, provocan la modificación
postraduccional de las proteínas (p. ej., fosforilación) que da
como resultado una función alterada (p. ej., permite que la
proteína realice la función siguiente paso en una cascada de
reacciones o permitir/

mejorar un factor de transcripción de proteína para unirse al
ADN). Los objetivos precisos de las ROS en este proceso se
desconocen en gran medida, pero probablemente incluyan
las tiorredoxinas, las peroxirredoxinas y la proteína tirosina
fosforilasa que tienen un residuo de cisteína en el tiolato (es
decir, ionizado; S)) se forman en sus sitios activos. Los
tiolatos, a diferencia de los tioles (SH), son muy reactivos con
los hidroperóxidos en condiciones fisiológicas normales,
después de lo cual pueden participar en reacciones de
intercambio de disulfuro con, por ejemplo, GSH (137). En la
Fig. 12 se ilustra un posible mecanismo por el cual las ROS
producidas en el sitio de interacción receptor-ligando
podrían regular (es decir, activar y desactivar) una vía de
señalización específica que involucra la fosforilación de
proteínas intermedias. En la célula no estimulada, el
Figura 12.Posible modelo de señalización redox [adaptado de
Forman et al. (137)]. En el estado no estimulado, la proteína
intermedia no está fosforilada debido a la mayor actividad de
la fosfatasa (proteína tirosina fosfatasa (PTP)) frente a la
quinasa (proteína tirosina quinasa (PTK)):vía apagada. Ligand
binding causes receptor-associated NADPH oxidase (NOX) to
generate hydrogen peroxide that inactivates PTP resulting in
formation of the phosphorylated protein intermediate by
ROS y antioxidantes en la periodontitis
el intermediario de señalización se mantiene en su forma
no fosforilada porque la actividad de la proteína tirosina
fosfatasa es mayor que la actividad de la proteína tirosina
quinasa (es decir, la vía está desactivada). En la
interacción ligando-receptor, las ROS producidas
localmente inactivan la proteína tirosina fosforilasa diana
al oxidar un tiolato reactivo (proteína tirosina fosfatasa-S))
dentro del sitio activo, produciendo un sulfenato
(proteína tirosina fosfatasa-SO)) que posteriormente
forma un disulfuro mixto con GSSG (proteína tirosina
fosfatasa-SSG; la formación de un disulfuro mixto a
menudo se denomina -glutatión-) (35). Luego, la enzima
se reactiva mediante otra reacción de intercambio con
GSH. Por lo tanto, en presencia de ROS, la actividad de la
fosforilasa se inhibe permitiendo la producción de la
PTK: pathway turned ON. Switching on may also involve a
second signal from the ligand–receptor interaction that
activates PTK. The pathway switches off when hydrogen
peroxide is no longer produced by receptor-associated NOX
and active PTP dephosphorylates the protein intermediate
faster than it is being produced. Again, this may be further
helped by the activity of PTK being reduced because the
ligand-receptor activation signal stops. GSSG, oxidised
glutathione; GSH, reduced glutathione.
197
Chapple & Matthews
intermedio de proteína fosforilada que puede
desencadenar el siguiente evento de señalización en la
vía (es decir, vía activada). Al cesar la producción de
ROS, la fosforilasa vuelve a su forma activa normal y
restaura la proteína intermedia a su estado no
fosforilado, desactivando efectivamente la señal. Se
cree que varios de estos eventos de señalización son
importantes en la activación de factores de
transcripción sensibles a redox, como el factor
nuclear.jB y proteína activadora-1 (119, 137, 210).
De lo anterior debe quedar claro que las cascadas de
señalización del receptor en la función celular normal están
controladas por cambios locales en el equilibrio redox e implican
la oxidación de GSH. La evidencia de este papel, a diferencia del
papel normalmente citado del GSH dentro de la célula como
antioxidante que protege a la célula contra el estrés oxidativo, se
está acumulando ahora (137, 138, 336). Sin embargo, el equilibrio
redox general dentro de la célula es mantenido por el glutatión y
la proporción de GSH:GSSG juega el papel principal en el
mantenimiento del estado reducido de la mayoría de las
moléculas dentro de las células. La relación GSH:GSSG está
regulada por la glutatión peroxidasa, la glutatión disulfuro
reductasa, la nueva síntesis más las reacciones de conjugación e
intercambio (ver Fig. 4) (119, 137). Estrés oxidativo, como
resultado de la generación excesiva de ROS dentro de una célula
o exposición a fuentes exógenas de ROS, tiene la capacidad de
activar vías de señalización sensibles a redox en ausencia de una
interacción ligando-receptor específica y, en circunstancias
extremas, de causar daño irreversible a las proteínas celulares al
superar el efecto estabilizador del GSH intracelular. Por lo tanto,
en la enfermedad periodontal, es probable que las vías
dependientes de redox como las que culminan en la activación
del factor nuclearjB y la activación de la proteína-1 implicarán
tanto la señalización redox verdadera (a través de la interacción
con las citocinas y los factores de crecimiento con sus receptores
específicos) como las reacciones no enzimáticas, potencialmente
irreversibles, inducidas por el estrés oxidativo.
Proteína activadora-1 y factor nuclear-jB
Como estas familias de factores de transcripción han sido
objeto de muchas revisiones en las que se han descrito su
estructura y vías de activación (por ejemplo, refs. 210,
255, 464), aquí solo se incluirán breves detalles.
El factor nuclear-jLa serie B de factores de transcripción
comprende homo y heterodímeros de proteínas
pertenecientes a la familia Rel. En el estado no activado,
el factor nuclear-jB se encuentra en el citoplasma unido a
una proteína inhibidora IjB. Unión del ligando a una
variedad de receptores de la superficie celular (por
ejemplo, TNF-receptor-1, TNF-receptor-2 y TLR-4, TLR-9)
198
(235, 260, 439), o estrés oxidativo (por ejemplo, peróxido
de hidrógeno) (138), activa IjB quinasa, que fosforila dos
residuos de serina críticos en IjB, marcándolo para una
rápida ubiquitinación y degradación por IjB ubiquitina
ligasa y proteosoma 26S respectivamente. El factor
nuclear libre resultantejB se transloca rápidamente al
núcleo donde se une a sitios en las regiones promotoras/
potenciadoras de los genes diana. Si bien esto puede ser
suficiente para la inducción de la transcripción génica,
muchos estímulos (p. ej., IL-1, TNF-a)require interactions
with other transcriptional co-activators (e.g. CREB-binding
protein) (260) regulated by other kinases (e.g. protein
kinase A, p38 mitogen-activated protein kinase) (255).
Activating protein-1 is a heterogeneous group of
dimeric transcription factors consisting of Jun (c-Jun,
JunB, JunD), Fos (c-Fos, FosB, Fra1, Fra2), or activating
transcription factor (ATF2, ATF3, B-ATF) proteins.
Unlike nuclear factor-jB, activating protein-1 activity is
regulated via an increase in transcription of Jun and
Fos genes as well as by post-translational
phosphorylation of Jun and Fos proteins by
mitogenactivated protein kinases, protein kinase A,
and protein kinase C. Phosphorylation alters the
DNAbinding capacity of the proteins and modulates
their transcriptional activity (464).
Hay dos puntos importantes a entender cuando se
considera la activación de los factores de transcripción y el
resultado funcional (es decir, qué genes se transcriben y el
nivel de transcripción). Primero, en el caso de la activación de
la proteína-1 y el factor nuclear- jB, hay múltiples puntos en
la cascada de activación que pueden estar bajo control redox
y la generación de ROS puede ser necesaria en diferentes
sitios dentro de la célula (210). En segundo lugar, es posible
que un solo estímulo provoque la activación de varias vías de
señalización y active varios factores de transcripción
diferentes. Por ejemplo, la unión al receptor de TNF-a (
receptores de TNF 1 y 2) o la interacción lipopolisacárido-TLR
puede inducir la activación tanto del factor nuclear- jB y
proteína activadora-1 (260). Además, los elementos
reguladores (promotor y potenciador) de la mayoría de los
genes contienen sitios de unión para varios factores de
transcripción, cuyas actividades combinadas determinarán
en última instancia la transcripción génica (255).
Presencia y papel de la activación del factor de
transcripción sensible a redox en la
enfermedad periodontal
La literatura publicada sobre el factor nuclearjSolo B ha
crecido exponencialmente desde su descubrimiento hace
unos 15 años. Su importancia potencial en periodon-

se ha aludido a la titis en una revisión sobre la activación
del factor nuclearjB en aterogénesis, donde se ha
sugerido que la producción de ROS y la oxidación de
lipoproteínas de baja densidad es un factor etiológico
importante en la formación de estrías grasas (294). Por lo
tanto, esta sección revisará la literatura reciente que
investiga específicamente la presencia y el papel de los
factores de transcripción sensibles a redox que activan la
proteína-1 y el factor nuclear-jB en la enfermedad
periodontal y/o en las respuestas de las células que
normalmente se encuentran dentro del periodonto a los
componentes asociados con la placa. Las células
directamente involucradas en la inmunidad innata o
específica (es decir, neutrófilos, macrófagos, células
dendríticas y linfocitos) no se incluirán porque los datos
disponibles constituirían varias revisiones por sí mismos.
Además, la acumulación de evidencia que vincula tanto la
reabsorción ósea como el daño del cartílago con la
activación del factor nuclear-jB y activando la proteína-1 a
través del activador del receptor del factor nuclear-jB
(RANK) y su ligando (RANKL) no se incluirán porque se ha
revisado en otra parte (290, 405). Baste decir que los
datos actuales demuestran un papel importante para el
factor nuclear.jVías de señalización B en la inducción de
osteoclastos y actividad osteoclástica por lipopolisacárido
y receptor activador del factor nuclear-jB ligando ambosin
vitroyen vivo (213, 466). Además, estos estudios indican
que la resorción ósea puede ser inhibida por un péptido
sintético que interfiere con el Ijcomplejo K-quinasa (213) y
un factor nuclear naturaljInhibidor B que se encuentra en
hierbas medicinales (466). Tales hallazgos no solo son
importantes para nuestra comprensión de los
mecanismos que controlan la resorción ósea en la
periodontitis, sino que también indican nuevas y
emocionantes terapias potenciales.
Hasta donde sabemos, parece haber un solo informe
sobre la presencia y distribución del factor nuclear.jB en
tejidos gingivales en salud y enfermedad (16). Este estudio
inmunohistológico indica una mayor incidencia de factor
nuclear nuclear.jTinción B (p50 y p65) en las capas
suprabasales del epitelio (sitio no especificado) en la encía de
los pacientes (87,5 % positivo) en comparación con los
controles (17,5 % positivo). Por el contrario, el nivel de I
citoplásmicojLa tinción B fue más baja en los tejidos de los
pacientes (el 5 % de las muestras fueron positivas en
comparación con el 35 % de las muestras de control). La alta
tasa de muestras de control que resultaron negativas para Ij
B sugiere un problema de sensibilidad o recuperación de
antígenos, ya que yojB debe estar presente dentro del
citoplasma de las células dentro de todas las muestras de
control (es decir, solo se degrada cuando el factor nuclear-jB
está activado). factor nuclear
ROS y antioxidantes en la periodontitis
colina-jTambién se encontró reactividad B en células
dentro de la lámina propia y, aunque no se indicó,
presumiblemente se asoció con células inflamatorias.
Estos resultados son similares a los encontrados en el
liquen plano (oral y cutáneo) (359) y sugieren que la
periodontitis está asociada con la activación epitelial del
factor nuclear.jB.
Esa activación del factor nuclear-jB en las células epiteliales de
unión y creviculares que están adyacentes a la placa que contiene
patógenos periodontales es probablemente respaldada porin
vitroexperimentos sobre las respuestas de las células epiteliales
orales (cultivos primarios y líneas celulares). Los experimentos en
líneas de células epiteliales orales demostraron la activación de
células epiteliales del factor nuclear-jB, probablemente a través
de la producción de TLR-2 e IL-8 después del desafío conS. aureus
peptidoglicano,
P. gingivalisextracto sónico,P. gingivalis fimbriae, un
péptido fimbrial yNORTE-acetilmuramil-L-alanilo-D-
isoglutamine (a common component of peptidoglycans in
parasitic bacteria) (21, 238). Interestingly, infection of
primary oral keratinocyte cultures with
P. gingivalis resulted in up-regulation of c-Jun kinase (JNK)
and down-regulation of protein kinase-ERK1/ 2, no
activation of nuclear factor-jB and lack of IL-8 secretion
(100, 441). Furthermore, stimulation of primary oral
epithelial cell cultures with a cell wall extract of F.
nucleatum results in TNF-a production, via activation of
nuclear factor-jB, and b-producción de defensina-2 a
través de la activación de la proteína activadora-1 (237).
Estos resultados ilustran el hecho de que el epitelio de
unión/crevicular puede tener respuestas diferentes y/o
múltiples a estímulos que dependen de su naturaleza. Un
extracto bacteriano, un componente de la pared celular o
células bacterianas enteras muertas pueden causar
diferentes respuestas de células epiteliales entre sí,
ninguna de las cuales puede ser la misma que la inducida
por el organismo vivo.
Además de los estudios sobre células epiteliales, hay una
serie de informes que investigan las respuestas del factor de
transcripción de las células del ligamento periodontal y los
fibroblastos gingivales al desafío bacteriano periodontal. Las
células del ligamento periodontal parecen responder,
utilizando el factor nuclear-jVía B, a la estimulación con las
principales proteínas de superficie de las espiroquetas orales
(Treponemaspp.) yA. actinomycetemcomitanslipopolisacárido
para producir IL-6, IL-8, molécula de adhesión intercelular-1
(241) y metaloproteinasa de matriz activa-2 (412),
respectivamente. Otros estudios han demostrado que los
fibroblastos gingivales producen IL-6 y TNF-aen un factor
nuclear- jRespuesta mediada por B a un extracto de
lipoproteínas de Tannerella forsitiainvolucrando TLR-2 (195),
similar a las respuestas de células epiteliales mencionadas
anteriormente.
199
chapple y matthews
Por el contrario,P. gingivalisEl lipopolisacárido parece causar
la activación tanto de la proteína activadora 1 como del factor
nuclear.jVías B en fibroblastos gingivales, vía CD14 y TLR-4, y
producción de citocinas inflamatorias (439). Como se indicó
anteriormente, la activación de la proteína activadora-1 y el
factor nuclear-jB puede ser el resultado de una variedad de
estímulos, incluidos productos cuyos genes están
controlados por los propios factores de transcripción (por
ejemplo, IL-1, TNF-a).Por lo tanto, las citocinas producidas
por el epitelio suprayacente en respuesta a las bacterias
podrían ser importantes para estimular células como los
fibroblastos y las células endoteliales más profundas en los
tejidos. Por ejemplo, IL-1Bpuede estimular la expresión del
gen de la colagenasa y la producción de proteínas a través de
la activación de la proteína-1 activadora en los fibroblastos
gingivales (188). En tal situación, la degradación del colágeno
sería el producto de dos interacciones receptor-ligando
diferentes en dos tipos de células separadas físicamente,
ambas utilizando vías de señalización sensibles a redox. Por
lo tanto, parece posible que la terapia antioxidante para
Figura 13.Diagrama simplificado que ilustra un papel central de
ROS en la generación de inflamación crónica y daño tisular en
respuesta a patógenos periodontales. MMP, metaloproteinasa de
matriz; TIMP, inhibidor tisular de la metaloproteinasa de matriz;
NF-jB, factor nuclear kappa B; AP-1,
200
prevenir la degradación del colágeno en este ejemplo podría
actuar en dos sitios diferentes, a saber, dentro de los tejidos o
dentro de la grieta gingival.
Se han realizado estudios de estimulación similares
usando células endoteliales de la vena umbilical humana
para investigar las respuestas potenciales de la vasculatura
periodontal a la infección conP. gingivalis (84, 230, 436). Los
tres estudios demostraron la activación del factor nuclear.jB y
producción de quimiocinas inflamatorias, moléculas de
adhesión y osteoprotegerina. Este último estudio demostró
queP. gingivalis La producción estimulada de células
endoteliales de proteína quimioatrayente de monocitos-1 se
asoció con la activación tanto de la proteína activadora-1
como del factor nuclear-jB. Curiosamente, el pretratamiento
de las células con NORTE-acetilo-L-cisteína (10 mMETRO) o GSH
(10 mMETRO) redujo significativamente la expresión del gen de
la proteína 1 quimioatrayente de monocitos y la producción
de proteínas. El tratamiento con un inhibidor de la NADPH
oxidasa redujo la expresión génica y proteica por debajo del
valor inicial no estimulado
proteína activadora-1; PDL, ligamento periodontal; TNF,
factor de necrosis tumoral; IL, interleucina; GM-CSF, factor
estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos; LPS,
lipopolisacárido; ROS, especies reactivas de oxígeno.

niveles (es decir, ROS requerido para la señalización redox fue
-neutralizados-, no permitiendo que se produzca una
señalización eficiente (Fig. 12). Estos resultados indican el
potencial del uso de antioxidantes para inhibir la activación
mediada por receptores de factores de transcripción sensibles a
redox en enfermedades.
Que el exceso de ROS endógenas, producidas por
neutrófilos o fibroblastos hipersensibles (ver -Producción de
ROS por neutrófilos y otras células en la enfermedad
periodontal-), dentro de los tejidos periodontales podría
activar la proteína-1 activadora y el factor nuclear-jB con los
efectos proinflamatorios y dañinos para los tejidos
resultantes que se observan en la enfermedad periodontal
no se ha demostrado. Sin embargo, que tales eventospudo
ocurren como resultado de dicho estrés oxidativo (Fig. 13) y
podrían ser inhibidos por compuestos de tiol está
ampliamente respaldado por la literatura (por ejemplo, refs.
2, 31, 137, 138, 368). Del mismo modo, los factores exógenos,
como el tabaquismo, podrían provocar estrés oxidativo en
los tejidos periodontales e iniciar o potenciar el daño tisular,
especialmente como nicotina, a niveles fisiológicos (0,8yo
METRO), se ha demostrado que activa la proteína quinasa-
ERK-2 en las células de cáncer de pulmón (198) y provoca la
producción de ROS y el factor nuclear.jActivación B en una
línea celular de adenocarcinoma de colon (95).
Evidencia de la presencia y el papel de los
antioxidantes en la protección/reparación
del tejido periodontal
La visión tradicional de la importancia estratégica de los
antioxidantes para el mantenimiento de la homeostasis y
la viabilidad de células y tejidos se ha relacionado con su
capacidad para prevenir y reparar el daño mediado por
ROS. Si bien esta sigue siendo una propiedad de vital
importancia, definir los antioxidantes solo por esta
función es un concepto anticuado. Es probable que el
papel de los antioxidantes en el control de la
transcripción de genes regulados por redox sea tan
importante, o incluso más, para el estado proinflamatorio
o antiinflamatorio de las células y los tejidos. De hecho,
donde existe un papel probado y sustantivo para las ERO
en la patogenia de una enfermedad, en particular
enfermedades asociadas con -hiperinflamación- tales
como enfermedades pulmonares inflamatorias,
enfermedades neurodegenerativas, diabetes tipo 2,
enfermedad cardiovascular, resultado adverso del
embarazo, enfermedad reumatoide artritis y
periodontitis,
Al considerar los enfoques antioxidantes para el
manejo de las enfermedades (periodontales), se deben
considerar una serie de factores (Cuadro 1):
ROS y antioxidantes en la periodontitis
Recuadro 1. Factores a tener en
cuenta al contemplar enfoques
antioxidantes para la terapia
1. Debe haber evidencia de producción excesiva de ROS
asociada con la presencia de enfermedad (idealmente
localmente en los tejidos enfermos);
2. Debe haber evidencia de daño tisular mediado
por ROS ya sea por:
(a) Efectos directos de la actividad de ROS (biomarcadores)
medidos localmente;
(b) Efectos indirectos de la actividad de ROS a través de la
hiperinflamación como resultado de la actividad del
factor de transcripción sensible a redox local y los
desequilibrios posteriores del comportamiento de las
citocinas proinflamatorias y antiinflamatorias;
3. Debe haber vínculos mecánicos claros entre el
estrés oxidativo, el daño tisular observado y el
modo de actividad del antioxidante candidato;
4. La suplementación con el antioxidante debería
reducir la incidencia de enfermedades en el sitio o
tejidos afectados;
5. La suplementación con el antioxidante debería reducir la
recurrencia de la enfermedad;
6. Los sujetos con la enfermedad deben tener una
deficiencia local demostrable del antioxidante o de
la capacidad antioxidante total;
7. Los sujetos sin enfermedad no deben tener deficiencia
de antioxidantes;
8. La restauración del nivel de antioxidantes localmente
debería mejorar las medidas clínicas de la enfermedad;
9. El uso adyuvante del antioxidante con las terapias
tradicionales debería proporcionar mejores resultados
de tratamiento que la terapia no quirúrgica sola;
10. Los marcadores de actividad local de ROS deberían disminuir
con la terapia antioxidante.
Considerar el uso profiláctico de antioxidantes en per-
Los pacientes con iodontitis deben cumplir los criterios 1 a
5. Considerar el uso de antioxidantes en periodos activos
se deben cumplir los criterios de terapia dental 5-10.
Estudios de asociación
Los estudios de asociación son importantes para ayudar a
establecer relaciones entre la enfermedad y un
determinado factor de riesgo, pero son limitados porque
no permiten sacar conclusiones sobre la -causalidad-. Los
estudios longitudinales ayudan a establecer relaciones
temporales entre la aparición de una enfermedad y una
201
chapple y matthews
factor de riesgo particular, pero finalmente los estudios
de intervención nos permiten determinar el valor de un
enfoque terapéutico particular. Los estudios que han
explorado las asociaciones entre las actividades
antioxidantes individuales y totales y la periodontitis se
resumen en la Tabla 9. Al interpretar estos datos, es
importante apreciar:
• la probabilidad de sesgo del informador, es decir, las asociaciones
negativas no se informan con tanta frecuencia como las
asociaciones positivas;
• la interpretación del resultado del estudio con respecto al
fluido biológico/tejido investigado. Como se discutió
anteriormente, los perfiles antioxidantes de los diferentes
compartimentos del cuerpo varían considerablemente y
las deficiencias en los antioxidantes del plasma pueden
tener implicaciones muy diferentes a las deficiencias
dentro de los tejidos periodontales, donde predominan las
actividades locales de ROS. Los estudios del fluido
crevicular gingival deben considerarse significativamente
más pertinentes para la patogenia de la enfermedad
periodontal que los que involucran saliva e, idealmente, los
estudios que involucran biopsias gingivales deben tener el
mayor peso. Sin embargo, dadas las implicaciones éticas
de recolectar muestras de biopsias controladas, las
dificultades asociadas con la elección del sitio de biopsia y
los problemas relacionados con el manejo de tejidos para
prevenir la oxidación de especies antioxidantes lábiles,
Studies of plasma antioxidant status
Early studies of individual antioxidant micronutrients
were unconvincing in their associations between dietary
antioxidant intake and periodontitis, (11, 67, 352, 435).
However, many of these studies relied upon dietary
questionnaires rather than plasma biochemistry and
questionnaires were less sophisticated than those
currently in use, which have been extensively validated
for major epidemiological studies (e.g. National Health
and Nutrition Examination Surveys – NHANES in the
U.S.A., National Diet and Nutrition Survey in the UK –
NDNS). Epidemiological and casecontrol studies (426)
support the finding that serum vitamin C intake is
reduced in periodontitis subjects, in particular in smokers
(299) and older patients (15). Furthermore, it has been
suggested that vitamin C deficiency is an etiological factor
contributing to periodontal disease in diabetes (10). In
order to determine whether serum antioxidant
concentrations were associated with altered relative risk
for periodontitis, we employed multiple logistic
regression for dual case definitions (both mild and severe
disease) of periodontitis in an analysis of 11,480 NHANES
III adult participants (>20 years) (81). Mild disease (1567
cases)
202
se definió según los criterios de Tomar y Asma (414) y
enfermedad grave (609 casos) como‡2 sitios
mesiovestibulares con pérdida de inserción clínica de‡5 mm
y uno o más sitios mesiovestibulares con profundidad de
sondaje de‡4 mm (modificado de la propuesta del Grupo de
trabajo de los CDC). Las concentraciones séricas de vitamina
C, bilirrubina y capacidad antioxidante total (TAOC) se
asociaron inversamente con la periodontitis, siendo la
asociación más fuerte en la enfermedad grave. La vitamina C
y la TAOC siguieron siendo protectoras en los no fumadores.
En la subpoblación de no fumadores el efecto protector fue
más pronunciado, 0,38 (0,26, 0,63, vitamina C) y 0,55 (0,33,
0,93, TAOC). Cuando se realizó un nuevo análisis para los que
nunca habían fumado, solo se mantuvieron relaciones
inversas significativas para la vitamina C y la bilirrubina. En
resumen, los pocos estudios que han explorado los
secuestrantes de antioxidantes individuales en suero o
plasma han mostrado niveles levemente comprometidos en
sujetos con periodontitis en relación con controles sanos,
excepto cuando fumar es un cofactor.
Hasta donde sabemos, solo tres estudios han investigado
la capacidad antioxidante total en suero/plasma de pacientes
con periodontitis y controles, y uno de ellos fue en perros
(316). Todos demostraron una capacidad antioxidante total
significativamente más baja en muestras de suero y plasma
de sujetos con periodontitis (58, 83, 316). Brock et al. (58)
encontraron que la concentración reducida de la capacidad
antioxidante total del suero en la periodontitis no alcanzó
significación, mientras que las diferencias en los niveles
plasmáticos sí lo hicieron, lo que puede reflejar diferencias en
los métodos de preparación para el suero y el plasma (el
suero se prepara a fuerzas centrífugas más altas y es más
propenso a a la oxidación) o los efectos de la eliminación del
factor de coagulación, o incluso un número de muestras
relativamente pequeño. Curiosamente, La capacidad
antioxidante total del plasma fue significativamente más baja
que la capacidad antioxidante total del suero y se encontró
que esto era enteramente el resultado de la capacidad
antioxidante total del plasma más baja en los sujetos con
periodontitis en relación con las muestras de suero pareadas.
Panjamurthy et al. (314) encontraron niveles más bajos de
vitamina C, vitamina E y GSH en plasma en pacientes con
periodontitis, incluso después de ajustar los niveles de
proteína, mientras que los niveles de enzimas antioxidantes
aumentaron, y los autores atribuyeron esto a una respuesta
protectora al estrés oxidativo (los niveles de sustancia
reactiva del ácido tiobarbitúrico en sujetos con periodontitis).
Por el contrario, Sobaniec y Sobaniec-Lotowska (388)
encontraron que los niveles de enzimas antioxidantes en
suero se redujeron durante la periodontitis inducida por
ligadura en un modelo de rata. Curiosamente, Pussinen et al.
P. gingivalis.
 Tabla 9.Estudios de asociación que investigan antioxidantes individuales y la capacidad antioxidante total y la enfermedad periodontal

Muestras biológicas Referencia Diseño del estudio Números de asunto Salir

Estudios en suero/plasma

Niveles séricos de vitamina E y enfermedad Slade et al. 1976 (385) Estudio de casos y controles 12 casos de periodontitis y 12 No hay diferencia en los niveles séricos de
periodontal controles vitamina E entre casos y controles

Niveles de vitamina C en el líquido crevicular gingival Meyle y Kapitza 1990 Ejemplo conveniente 21 voluntarios sanos Niveles de vitamina C GCF en sitios sanos en voluntarios
en salud (269) sanos (207,3yoMETRO) > plasma (72yoMETRO)

Prevalencia de bolsas y enfermedad Vaananen et al. 1993 Estudio de casos y controles 75 sujetos dentados con vitamina ›prevalencia de bolsas > 4 mm en casos
periodontal en pacientes con niveles bajos y (426) C baja (625yoMETRO) y 75 controles (60%) vs controles (37%). El 5% de los casos
altos de vitamina C en plasma emparejados con vitamina C en y el 18% de los controles tenían tejidos
plasma > 50yoMETRO periodontales sanos.

Niveles plasmáticos de vitamina C yP. gingivalis Pusinen et al. 2003 Estudio de población dual 431 hombres ) ve correlación entreP. gingivalis niveles
serología (331) (Finlandia y Rusia) de anticuerpos y concentración de
vitamina C

Niveles séricos de vitamina C en Amarasena et al. 2005 Estudio de población 413 sujetos Relación inversa entre la vitamina C
ancianos japoneses y periodontitis (15) sérica y la pérdida de inserción clínica

Periodontitis inducida por ligaduras y Sobaniec y Sobaniec- modelo animal Estudio en ratas Reducción de superóxido dismutasa,
enzimas AO Lotowska 2000 (388) glutatión peroxidasa, glutatión
reductasa y aumento
malondialdehído en suero

Niveles de coenzima Q y vitamina E e Battino et al. 2001 (40) Reporte de un caso 1 familia extensa Proband tenía baja coenzima Q y a-
hidroperóxido en una familia extendida tocoferol (la madre tenía coenzima Q baja)
del síndrome de Papillon-Lefèvre y los niveles más altos de hidroperóxido
estaban en el probando y la madre

Niveles de coenzima Q y vitamina E e
hidroperóxido en una familia del
síndrome de Papillon-Lefèvre
Battino et al. 2003 (42) Reporte de un caso 1 grupo familiar Niveles elevados de hidroperóxido, niveles
reducidos de antioxidantes, coenzima Q
alterada ya-niveles de tocoferol. Niveles
bajos de ácidos grasos poliinsaturados y
altos de ácidos grasos monosaturados

Polimorfismos en el gen de la Kim et al. 2004 (226) Estudio de casos y controles 115 periodontitis y Mayor riesgo entre glutatión-Stransferase-M1+
glutatión-S-transferasa 126 controles fumadores para periodontitis (odds ratio 3.1,
IC 1.5–6.6) y riesgo moderado casi significativo
entre M1+no fumadores (odds ratio 1,8, IC
1,0-3,1)

Capacidad antioxidante total de la Chapple et al. 2002 Piloto de casos y controles 10 casos de periodontitis Los sujetos con periodontitis tenían una
periodontitis plasmática y controles (83) (no fumadores) avanzada y 10 controles capacidad antioxidante total en plasma más
baja que los controles sanos
ROS y antioxidantes en la periodontitis

203
 Tabla 9.Continuado

204
Muestras biológicas Referencia Diseño del estudio Números de asunto Salir

Capacidad antioxidante total de periodontitis Brock et al. 2004 (58) Estudio de casos y controles 17 casos de periodontitis y 17 Mayor capacidad antioxidante total en suero y plasma
plasmática y sérica y controles (no fumadores) controles para controles sanos que en casos de periodontitis, solo
significativo para plasma
chapple y matthews

Capacidad antioxidante total del suero en Pavlica et al. 2004 (316) Estudio de cohorte en perros. 41 perros La capacidad antioxidante total en periodontitis fue
perros menor que en salud/gingivitis. )ve correlación entre
la capacidad antioxidante total y los parámetros
periodontales

Niveles de enzimas antioxidantes y Panjamurthy et al. 2005 Estudio de casos y controles 25 sujetos con periodontitis Los pacientes con periodontitis tenían › sustancias reactivas
secuestrantes y sustancia reactiva con (314) y 25 controles al ácido tiobarbitúrico y niveles de enzimas antioxidantes.
ácido tiobarbitúrico Sin embargo, los antioxidantes secuestrantes fueron más
bajos en los sujetos con periodontitis que en los controles.

Estudios de saliva

El ácido úrico se correlaciona con la Meucci et al. 1998 (268) estudio de cohorte Sujetos sin periodontitis antes y La concentración de ácido úrico en saliva en pacientes
capacidad antioxidante total de la saliva después de la diálisis hemodializados se correlaciona con la capacidad
antioxidante total de la saliva

Efecto de fumar un solo cigarrillo Zappacosta et al. 2002 Ejemplo conveniente 20 fumadores voluntarios Fumar un solo cigarrillo compromete la función protectora
sobre el GSH salival (470) de fumadores del glutatión contra los productos químicos derivados del
humo (aldehídos derivados del humo)

Capacidad antioxidante total de la saliva Moore et al. 1994 (281) Estudio de casos y controles 7 enfermedad periodontal y La capacidad antioxidante total de la saliva no parece
en la periodontitis y la salud 28 sujetos control comprometida en pacientes con enfermedad
periodontal. El ácido úrico aporta el 70% de la
capacidad antioxidante total de la saliva

Estudio piloto de la capacidad antioxidante total Chapple et al. 1997 (82) Piloto de casos y controles 18 casos de periodontitis y 16 La capacidad antioxidante total de la saliva (concentración) se
de la saliva en la periodontitis estudio controles redujo en los casos frente a los controles. Sin embargo, no
hubo diferencia en la producción de la capacidad antioxidante
total (yoMETRO/min) entre grupos

Capacidad antioxidante total de la saliva Sculley y Langley... Estudio de cohorte – 129 pacientes Capacidad antioxidante total más baja en mujeres que en
Evans 2003 (370) salud periodontal como hombres. Los pacientes con periodontitis tenían una capacidad
variable continua y antioxidante total más baja (yoMETRO), tasas de flujo y carbonilos
regresión logística utilizada de proteína más altos (estrés oxidativo) que los controles

Capacidad antioxidante total en Diab-Ladki et al. 2003 Estudio de casos y controles 17 casos de periodontitis y 20 La capacidad antioxidante total disminuyó significativamente en
saliva estimulada salud vs (111) controles los pacientes frente a los controles, pero la albúmina, el ácido úrico
periodontitis y el ácido ascórbico no mostraron diferencias entre los grupos
 Tabla 9.Continuado

Muestras biológicas Referencia Diseño del estudio Números de asunto Salir

Capacidad antioxidante total en Brock et al. 2004 (58) Estudio de casos y controles 17 casos de periodontitis y 17 Capacidad antioxidante total de la saliva
periodontitis salival estimulada y controles (concentración o tasa de producción) sin
no estimulada vs. salud diferencias entre casos y controles

Estudios de OA del FVC

Lactoferrina y transferrina en GCF Adonogianaki et al. experimental de 21 días 6 voluntarios sanos La lactoferrina derivada de PMNL aumenta con
1994 (5) estudio de gingivitis la inflamación

Niveles de vitamina C y vitamina E: Seri et al. 1999 (374) Estudio de cohorte: 41 alumnos (16 no fumadores y La vitamina C se reduce en los fumadores y la vitamina A
efecto de fumar sujetos sin periodontitis 25 fumadores) se reduce de forma no significativa. Sin diferencias en
vitamina E

Niveles de glutatión en periodontitis y Chapple et al. 2002 Piloto de casos y controles 10 casos de periodontitis avanzada Reducción de los niveles de glutatión en GCF en un
salud (83) (no fumadores) y 10 controles rango milimolar en relación conyoMETROen suero. Los
niveles de GCF de glutatión reducido, oxidado y total
son más bajos en pacientes con periodontitis que en
los controles

Niveles de glutatión-peroxidasa Huang et al. 2000 estudio de cohorte 23 pacientes con periodontitis Los niveles de glutatión peroxidasa se
en periodontitis y salud (202) correlacionaron negativamente con la profundidad
de la bolsa y CAL. Aumento de la glutatión
peroxidasa con la terapia periodontal

Liberación de superóxido y capacidad de Guarnieri et al. 1991 Estudio de casos y controles 14 pacientes con periodontitis y 16 Liberación espontánea de superóxido en GCF de
AO en GCF de sujetos y controles con (163) controles sujetos con periodontitis. No hay diferencia en la
periodontitis capacidad antioxidante entre pacientes y controles.

Capacidad antioxidante total de GCF Brock et al. 2004 (58) Estudio de casos y controles 17 casos de periodontitis y 17 La capacidad antioxidante total de GCF es
en periodontitis y salud controles cualitativa y cuantitativamente diferente de la del
plasma y la saliva. Capacidad antioxidante total
reducida en periodontitis vs controles

Capacidad antioxidante total de GCF en Pavlica et al. 2004 Estudio de cohorte en perros. 41 perros La capacidad antioxidante total en periodontitis fue
perros (316) menor que en salud/gingivitis. Correlación negativa
entre la capacidad antioxidante total y los
parámetros periodontales

Glutatión peroxidasa y lactoferrina en Wei et al. 2004 (445) Control de caso 19 sujetos con periodontitis y 8 Niveles de glutatión peroxidasa y lactoferrina más
GCF en periodontitis y salud controles altos en periodontitis vs. controles

Actividad de superóxido dismutasa en GCF y Akalin et al. 2005 (7) Estudio de casos y controles 26 sujetos con periodontitis y 16 Sin diferencias en la actividad de la superóxido dismutasa del
tejidos gingivales en pacientes con controles GCF en los pacientes frente a los controles
periodontitis y controles
ROS y antioxidantes en la periodontitis

205
 Tabla 9.Continuado

206
Muestras biológicas Referencia Diseño del estudio Números de asunto Salir

Estudios de biopsia

Niveles de glutatión en la enfermedad Jorge et al. 1992 Control de caso 18 gingivitis marginal Mostró niveles más altos de glutatión en tejidos de sujetos con
chapple y matthews

periodontal (152) estudio sujetos y 16 controles gingivitis frente a controles

Niveles de metalotioneína en Katsuragi et al. 1997 estudio de cohorte 33 pacientes con periodontitis Los niveles de metalotioneína (un antioxidante preventivo y
fumadores y no fumadores con (218) avanzada. 22 fumadores y 11 eliminador) aumentaron en las encías de pacientes con
periodontitis avanzada no fumadores periodontitis fumadores frente a no fumadores

Niveles de superóxido dismutasa y Ellis et al. 1998 estudio de cohorte 44 pacientes programados para Demostró que los niveles de superóxido dismutasa y catalasa disminuyen en los

catalasa (126) extracciones tejidos a medida que aumenta la profundidad de la bolsa

Expresión de hemooxigenasa-1 en Chang et al. 2005 estudio de cohorte 20 pacientes con periodontitis Los niveles de la enzima antioxidante hemooxigenasa-1 fueron
fibroblastos gingivales (78) (10 fumadores y 10 más altos en los fumadores con periodontitis que en los no
no fumadores) fumadores

Niveles de enzimas antioxidantes y Panjamurthy et al. Control de caso 25 sujetos con periodontitis Los pacientes con periodontitis tenían niveles más altos de sustancia
secuestrantes y sustancia reactiva con 2005 (314) estudio y 25 controles reactiva al ácido tiobarbitúrico y enzimas antioxidantes. Sin embargo, los
ácido tiobarbitúrico antioxidantes secuestrantes fueron más bajos en los sujetos con
periodontitis que en los controles.

Superóxido dismutasa en GCF y Akalin et al. 2005 Control de caso 26 sujetos con periodontitis Actividad de superóxido dismutasa en pacientes: tejidos
tejidos gingivales en pacientes con (7) estudio y 16 controles significativamente más altos que los controles
periodontitis y controles

Estudios de ingesta dietética de AO

Ingesta de ascorbato y enfermedad Ismael et al. 1983 Control de caso NHANÉS I La ingesta de ácido ascórbico por encima de la RDA no
periodontal en los EE. UU. (206) estudio pareció estar asociada con una mejor salud periodontal

Ingesta dietética de vitamina C y riesgo de Nishada et al. 2000 Control de caso NHANES III – regresión La ingesta dietética de vitamina C mostró una relación inversa
enfermedad periodontal (299) estudio logística múltiple débil pero significativa con la periodontitis (pérdida de inserción
clínica) en fumadores y exfumadores

Niveles séricos de carotenoides (licopeno) madera y johnson Población NHANES III – varios Se encontró una relación entre la periodontitis y la insuficiencia
e ingesta media de tomate (fuente de 2004 (455) estudio métodos estadísticos cardíaca congestiva, pero el alto consumo de tomate reduce el
licopeno) en periodontitis e insuficiencia riesgo relativo de insuficiencia cardíaca en sujetos con periodontitis
cardíaca congestiva

Morbilidad bucal en adultos mayores y Bailey et al. 2004 estudio de cohorte 22 con problemas Aumento de la morbilidad oral con ingestas más bajas
dieta alterada (34) bucales y 125 sin de vitaminas A y B6

Otros estudios de la OA

Actividad antioxidante de taninos Ho et al. 1999 in vitro 6 taninos Actividades de eliminación y anti-superóxido demostradas
aislados deVaccinium vitis-idaeal (200) estudio para los taninos deVaccinium vitis-idaeal

GCF, líquido crevicular gingival; NHANES, Encuesta nacional de examen de salud y nutrición; PMNL, leucocito polimorfonuclear neutrofílico (neutrófilo).

En general, el balance de la evidencia apoya un
compromiso antioxidante en el plasma de pacientes con
periodontitis, pero si esto refleja una respuesta a la
hiperreactividad de neutrófilos en sangre periférica
demostrada (ver antes) o es el resultado de una ingesta
reducida de antioxidantes en la dieta, malabsorción o
compromiso metabólico debido a de polimorfismos en
enzimas reguladoras redox clave (226) sigue sin estar
claro. Además, se desconoce la relevancia biológica de tal
compromiso antioxidante periférico para los sistemas de
defensa antioxidante dentro de los propios tejidos
periodontales. Es probable que los cambios en los
sistemas de enzimas antioxidantes en el plasma carezcan
de relevancia o importancia dadas sus bajas
concentraciones y tasas de actividad, en relación con los
secuestrantes de antioxidantes.
Battino et al. han informado niveles anormalmente altos
de hidroperóxido y compromisos en la coenzima Q10 sérica y
la vitamina E en sujetos con síndrome de Papillon-Lefèvre, lo
que sugiere un estrés oxidativo sustancial en estos sujetos y
un papel potencial para terapias antioxidantes específicas
(40, 42). Curiosamente, los retinoides se han utilizado para
controlar la hiperqueratodermia en el síndrome de Papillon-
Lefèvre (402) y se ha demostrado que el retinol corrige la
activación defectuosa de los linfocitos T humanos inducida
por CD3.in vitroen pacientes con síndrome de Papillon-
Lefèvre (13). Los retinoides pueden regular directamente la
catepsina-C (CTSC)Se ha identificado la expresión génica
como elementos de respuesta al ácido retinoico en las
regiones promotoras del gen de la catepsina-C (338). Esto
también plantea la posibilidad de modificar la dieta como
una posible estrategia de tratamiento en el síndrome de
Papillon-Lefèvre.
Estudios de capacidad antioxidante salival
Los estudios de antioxidantes salivales (Tabla 9) requieren
una interpretación cuidadosa porque los métodos de
recolección de saliva difieren y existe confusión sobre lo
que representa -saliva no estimulada-. La estimulación de
la saliva puede resultar de la estimulación física de las
glándulas mayores o menores por la comida, el habla y la
actividad muscular o por la estimulación sensorial
mediada por el sistema nervioso parasimpático (a través
del olfato, el gusto, el pensamiento, etc.). colección
dentro del campo de la biología/fisiología oral, es que el
paciente debe estar sentado en una habitación oscura a
temperatura constante, sin estimulación visual o auditiva
externa y la saliva debe recolectarse mediante babeo (sin
uso de la musculatura oral). Esto se ignora con frecuencia
hoy en día y la mayoría de las muestras de saliva -no
estimuladas- de hecho están estimuladas y es probable
que su composición sea radicalmente diferente debido al
proceso de estimulación. es esencial para
ROS y antioxidantes en la periodontitis
determinar las tasas de flujo de saliva y expresar la entrega
de antioxidantes por unidad de tiempo, así como las
concentraciones generales. Nuestro grupo ilustró este punto
en un estudio piloto, donde se encontraron diferencias entre
casos de periodontitis y controles en la capacidad
antioxidante total salival expresada enyoMETRO(menor en
casos) pero no se encontraron diferencias en la entrega de
capacidad antioxidante total (yoMETRO/min) (82). La
estimulación aumentó la liberación de antioxidantes por
unidad de tiempo, pero la concentración disminuyó debido a
los efectos de dilución. Otras variables incluyen saliva entera/
mezclada frente a secreciones de glándulas individuales y
secreciones de glándulas menores.
Los datos sobre la capacidad antioxidante total de la saliva son
contradictorios. Moore et al. (281) fueron los primeros en
explorar salival -capacidad total y concentración- y no
encontraron diferencias entre casos y controles. Sin embargo,
solo se examinaron siete pacientes con enfermedad periodontal
y uno de los criterios para el diagnóstico de la enfermedad fue el
hecho de que los pacientes hubieran sido derivados por su
médico de cabecera a una unidad especializada. No se definieron
pacientes sanos y los autores reconocieron que algunos sujetos
-sanos- tenían inflamación gingival. Sin embargo, Brock et al. (58)
no encontraron diferencias entre la capacidad antioxidante total
de la saliva expresada comoyoMETRO/l y comoyoMETRO/min en un
estudio de casos y controles estrictamente controlado de no
fumadores (aunque hubo una tendencia hacia valores más altos
en sujetos sanos), utilizando un ensayo de quimioluminiscencia
mejorado. Los datos estaban en conflicto con los de un estudio
anterior realizado por el mismo grupo (82), pero el último estudio
no había estratificado a los sujetos según el hábito de fumar.
Tanto Chapple et al. (82) y Brock et al. (58) encontraron que la
entrega de la capacidad antioxidante total (yoMETRO/min) aumentó
con la estimulación del flujo de saliva, pero esa concentración de
capacidad antioxidante total (yoMETRO/l) disminuyó. Un estudio de
cohorte más grande realizado por Sculley y Langley-Evans (370)
encontró tasas de administración de capacidad antioxidante total
más bajas (por la capacidad de reducción férrica del ensayo de
plasma) en muestras de saliva estimulada de mujeres que de
hombres y también en sujetos con periodontitis frente a
controles. Las diferencias de género fueron confirmadas por
Brock et al. (58) para la saliva y también para la capacidad
antioxidante total del suero y plasma. En el estudio de Sculley y
Langley-Evans, las mujeres tenían tasas de flujo de saliva
significativamente más bajas que los hombres, lo que puede
explicar las diferencias específicas de género en la capacidad
antioxidante total. Los niveles de urato también fueron más bajos
en las mujeres que en los hombres, lo que, dada la gran
contribución del urato a la capacidad antioxidante total de la
saliva (281), también puede contribuir a la menor capacidad
antioxidante total de la saliva en general en las mujeres. La
categorización de la enfermedad en este estudio era oscura y no
estaba en consonancia con los sistemas actuales. El ter-
207
chapple y matthews
se usaron mosaicos de puntajes CPITN para clasificar la
enfermedad; los autores expresaron su deseo de considerar la
salud periodontal como una variable continua. Sin embargo, el
estrés oxidativo medido por el ensayo de carbonilo de proteínas
fue mayor en los pacientes enfermos que en los sujetos sanos, de
acuerdo con sus datos de capacidad antioxidante total. Diab-
Ladki et al. (111) encontraron resultados similares a los de Sculley
y Langley-Evans (370) en un pequeño estudio de casos y
controles, la menor capacidad antioxidante total en saliva en
sujetos con periodontitis era independiente de los niveles de
ácido úrico, ascorbato y albúmina en saliva, que no diferían entre
los grupos. .
Moore et al. (281) determinaron que el componente
antioxidante predominante de la saliva era el ácido
úrico (>70% de actividad antioxidante), datos que son
consistentes con informes posteriores (268) y también
con datos de componentes antioxidantes séricos.
Chapple et al. (83) y Brock et al. (58) demostraron que
la capacidad antioxidante total del líquido crevicular
gingival era cualitativa y cuantitativamente diferente
de la saliva y el plasma y confirmaron hallazgos
anteriores de que el GSH era el eliminador de
radicales más dominante en el líquido crevicular
gingival (79, 82). También demostraron que la
capacidad antioxidante total de la saliva era menor
que las muestras pareadas de suero, plasma y fluido
crevicular gingival. Curiosamente, Zappacosta et al.
(470) demostraron que fumar un solo cigarrillo
comprometía el contenido total de glutatión en la
saliva y enfatizaron la importancia del glutatión en la
protección contra las toxinas derivadas del humo del
cigarrillo. Tsai et al.¼22, Tabla 9) y también evaluó el
efecto de la terapia de etapa 1 1 mes después del
tratamiento en 21 sujetos con periodontitis.
Discutieron los niveles de -GSH, pero su ensayo en
realidad midió el glutatión total y no el GSH.
Descubrieron que las concentraciones de glutatión
salival se redujeron significativamente en sujetos con
periodontitis en relación con los controles y que el
tratamiento aumentó las concentraciones de
glutatión. Estos datos son muy difíciles de interpretar
porque no se evaluaron las tasas de flujo de saliva y
no se informaron los niveles diferenciales de GSH y
GSSG.
Overall the relevance of saliva as a medium for
assessing surrogate markers of reactive oxygen and
antioxidant species in periodontitis patients must be
open to question, given its microbiological and
constitutional differences from gingival crevicular
fluid. Moreover, saliva contains gingival crevicular fluid
and the contribution of gingival crevicular fluid
antioxidants to saliva will vary according to the degree
of saliva stimulation (83).
208
Studies of gingival crevicular fluid antioxidant
capacity
Solo tres estudios han investigado la capacidad antioxidante total del líquido crevicular gingival en sujetos con
periodontitis, dos en humanos (58, 163) y uno en perros poodle (316). Guarnieri et al. (163) demostraron la generación
espontánea de superóxido en el fluido crevicular gingival de sujetos con periodontitis, pero no encontraron diferencias en
la capacidad de eliminación de antioxidantes entre casos y controles. Sin embargo, recogieron muestras de fluido
crevicular gingival mediante un método de lavado de grietas, que oxigena las muestras y las muestras se almacenaron a
20 °C, condiciones que demostraron que dan como resultado la pérdida rápida de antioxidantes secuestrantes (82). Brock
et al. (58) demostraron una capacidad antioxidante total significativamente más baja (mediante su ensayo de
quimioluminiscencia mejorado) en sujetos con periodontitis en relación con los controles de la misma edad y sexo. Las
muestras se recogieron en ayunas y se almacenaron en nitrógeno líquido antes del ensayo. La capacidad antioxidante
total del líquido crevicular gingival fue significativamente mayor que en muestras pareadas de suero y plasma en sujetos
sanos, pero esta diferencia no se observó en sujetos con periodontitis. Además, no hubo sesgo de género en la capacidad
antioxidante total del líquido crevicular gingival, a diferencia de las muestras emparejadas de saliva y suero/plasma, lo que
refleja diferencias sustanciales en el compartimento del líquido crevicular gingival en relación con los compartimentos de
saliva o plasma. Pavlica et al. (316) confirmaron los datos anteriores en su estudio de perros poodle miniatura y
encontraron correlaciones negativas significativas entre la capacidad antioxidante total del suero y el líquido crevicular
gingival y la inflamación gingival. La capacidad antioxidante total del líquido crevicular gingival fue significativamente
mayor que en muestras pareadas de suero y plasma en sujetos sanos, pero esta diferencia no se observó en sujetos con
periodontitis. Además, no hubo sesgo de género en la capacidad antioxidante total del líquido crevicular gingival, a
diferencia de las muestras emparejadas de saliva y suero/plasma, lo que refleja diferencias sustanciales en el
compartimento del líquido crevicular gingival en relación con los compartimentos de saliva o plasma. Pavlica et al. (316)
confirmaron los datos anteriores en su estudio de perros poodle miniatura y encontraron correlaciones negativas
significativas entre la capacidad antioxidante total del suero y el líquido crevicular gingival y la inflamación gingival. La
capacidad antioxidante total del líquido crevicular gingival fue significativamente mayor que en muestras pareadas de
suero y plasma en sujetos sanos, pero esta diferencia no se observó en sujetos con periodontitis. Además, no hubo sesgo
de género en la capacidad antioxidante total del líquido crevicular gingival, a diferencia de las muestras emparejadas de
saliva y suero/plasma, lo que refleja diferencias sustanciales en el compartimento del líquido crevicular gingival en
relación con los compartimentos de saliva o plasma. Pavlica et al. (316) confirmaron los datos anteriores en su estudio de
perros poodle miniatura y encontraron correlaciones negativas significativas entre la capacidad antioxidante total del
suero y el líquido crevicular gingival y la inflamación gingival. Además, no hubo sesgo de género en la capacidad
antioxidante total del líquido crevicular gingival, a diferencia de las muestras emparejadas de saliva y suero/plasma, lo que
refleja diferencias sustanciales en el compartimento del líquido crevicular gingival en relación con los compartimentos de saliva o plasma. Pavlica et al.
Se ha demostrado que los niveles de lactoferrina en el líquido
crevicular gingival aumentan en la periodontitis (5, 445), al igual
que los niveles de glutatión peroxidasa (445). Sin embargo,
Huang et al. (202) encontraron que dentro de los sujetos con
periodontitis, los niveles de glutatión peroxidasa se
correlacionaron negativamente con la profundidad de la bolsa y
la pérdida de inserción y aumentaron después de la terapia.
Akalin et al. (7) investigaron los niveles de superóxido dismutasa
en el fluido crevicular gingival en 26 sujetos con periodontitis y 16
controles y no encontraron diferencias significativas entre los
grupos. Esto no sorprende dado que la superóxido dismutasa es
predominantemente un sistema enzimático antioxidante
intracelular, los niveles extracelulares muy bajos (Akalin et al. (6)
encontraron niveles 40 veces y 160 veces más bajos en el líquido
crevicular gingival que en los tejidos emparejados de sujetos de
control y con periodontitis, respectivamente) y se consideraron
de poca importancia para las defensas antioxidantes
extracelulares (182). Los secuestrantes de ROS son más efectivos
que los anti-

sistemas oxidantes en tejidos y fluidos extracelulares y
hemos demostrado que el GSH es el antioxidante más
importante en el fluido crevicular gingival (83) con niveles
1,000 veces más altos que las muestras de plasma pareadas y
significativamente reducido en la periodontitis en relación
con los sujetos de control emparejados. Seri et al. (374)
demostraron que los niveles de vitamina C en el líquido
crevicular gingival (y no significativamente de vitamina A) se
redujeron en fumadores periodontalmente sanos, sin que se
detectaran diferencias para la vitamina E.
Gingival crevicular fluid is the most appropriate fluid
to sample when investigating periodontal status,
because it passes through the tissues and
accumulates biomarkers of tissue events. Data from
gingival crevicular fluid support the conclusion that
local antioxidant scavenging defenses are
compromised in periodontitis, but whether this
represents a predisposition to disease or results from
the inflammatory lesion, requires longitudinal studies
of periodontal therapy to be performed.
Estudios de la capacidad antioxidante del tejido periodontal
Only five studies of gingival biopsies have investigated
antioxidant levels within the periodontal tissues. In
1992 Giorgi et al. (152) investigated what they termed
-GSH levels- in biopsies from gingivitis and healthy
subjects. However, the assay used in this study only
measured total glutathione and GSSG and such assays
are inaccurate to determine GSH levels by subtraction
unless the GSH:GSSG ratio is very high, otherwise the
best that can be achieved is a non-specific measure of
total glutathione. The details of tissue sampling and
preparation were absent from their report and their
data are therefore very difficult to interpret. Katsuragi
et al. (218) investigated the radical scavenging and
preventative antioxidant metallothionein in biopsy
samples from 22 cigarette smokers and 11 non-
smokers during periodontal flap surgery. They found
increased levels of metallothionein in the tissues of
smokers and concluded that this was a protective
response to the increased inflammation in these
patients- gingivae. Unfortunately, they did not
measure any indices of oxidative stress to evaluate the
balance of pro-radical and antiradical activities within
their tissue samples. Increases in the antioxidant
enzyme heme oxygenase-1 were demonstrated in
periodontitis subjects who smoked relative to non-
smoking diseased controls (78), consistent with the
theory of Katsuragi et al. By contrast Ellis et al. (126)
demonstrated decreases in tissue levels of catalase
and superoxide dismutase with increasing pocket
depth in their cohort study. Most recently, an
ambitious case–control study by
ROS y antioxidantes en la periodontitis
Panjamurthy et al. (314) demostraron aumentos en el estrés
oxidativo (sustancias reactivas del ácido tiobarbitúrico) y enzimas
antioxidantes en los tejidos periodontitis en relación con los
tejidos de control sanos, pero los secuestrantes de antioxidantes
fueron significativamente más bajos en la periodontitis que en
los tejidos de control. Un estudio de la actividad de la superóxido
dismutasa dentro de los tejidos gingivales confirmó estos datos,
y se encontró una actividad significativamente mayor en los
tejidos de sujetos con periodontitis en relación con los sujetos de
control (7).
Los estudios de biopsia son difíciles de implementar por
razones éticas y técnicas, pero los datos limitados hasta el
momento confirman la presencia de un estrés oxidativo más
significativo en los tejidos con periodontitis en relación con
los tejidos de control y la aparente regulación positiva de los
sistemas de enzimas antioxidantes. Estos últimos son en
gran medida insignificantes en su eficacia en el entorno
extracelular y esto se refleja en el hallazgo de que sus
concentraciones se redujeron al aumentar la profundidad de
la bolsa. Los sistemas de barrido de radicales más
importantes parecen reducidos en la periodontitis, de
acuerdo con los datos del fluido crevicular gingival, pero
nuevamente la relación temporal entre estos hallazgos y el
desarrollo y progresión de las lesiones de periodontitis no
está clara y requiere estudios de intervención.
Estudios de intervención
Si bien la literatura médica ha evaluado exhaustivamente
los efectos de las intervenciones antioxidantes
individuales en ensayos controlados aleatorios sobre
enfermedades sistémicas (cáncer y enfermedades
inflamatorias mediadas por ROS), la literatura periodontal
es deficiente en tales estudios. La Tabla 10 documenta los
estudios de intervención realizados en sujetos animales y
humanos, así comoin vitroestudios basados en cultivos
celulares y otros sistemas modelo. También se analizan
cuatro resúmenes, dada la escasez de datos disponibles,
pero no se incluyen en la Tabla 10.
Vitamina C
La vitamina C se ha investigado predominantemente en relación
con la gingivitis, aunque los estudios se han centrado en sujetos
que no tenían deficiencia de vitamina C y el número
relativamente pequeño de voluntarios limita el poder de estas
investigaciones. Los estudios de suplementos de megadosis de
sujetos jóvenes periodontalmente sanos y sin deficiencia de
vitamina C no demostraron ningún beneficio de los suplementos
de vitamina C en las medidas de inflamación gingival. Los
estudios diseñados para proporcionar períodos de agotamiento y
reposición de vitamina C en no fumadores periodontalmente
sanos han demostrado efectos beneficiosos solo sobre el
sangrado gingival.
209
 Tabla 10.Estudios de intervención que investigan antioxidantes y micronutrientes antioxidantes en la terapia periodontal
210
Muestras biológicas
Estudios de vitamina C
Megadosis de ácido ascórbico y Woolfe et al.
efectos sobre parámetros clínicos 1984 (456)
etros/sangre/tejidos gingivales
Megadosis de ácido ascórbico (dos veces Vogel et al.
RDA) en 21 días experimentales
estudio de gingivitis
Depleción y suplementación de
ácido ascórbico (alternando)
Dosis normales y altas de ácido ascórbico
frente a agotamiento: efectos sobre la
gingivitis
Agotamiento y reposición de
ácido ascórbico (alternando)
Efecto de la vitamina C sobre
ICAM-1 soluble, neopterina
(marcador de activación de
monocitos) y elastasa PMNL
Estudios de vitamina E
Efectos de las dietas con diferentes
suplementos de vitamina E sobre la
periodontitis inducida por ligadura en
ratas
Efecto de la vitamina E en la cicatrización
de heridas gingivales en ratas
Referencia Diseño del estudio Números de asunto Salir
Seguimiento de 7 semanas, vitamina C 10 materias no deficientes Sin diferencias significativas entre grupos
chapple y matthews
adyuvante de diseño paralelo y terapia (5 suplementados y 5 controles) lo que sugiere que no hay beneficio de la megadosis
no quirúrgica vitamina C en sujetos no deficientes
Diseño paralelo doble ciego 24 estudiantes de odontología Aumentos significativos de vitamina C en plasma
1986 (431) durante gingivitis experimental periodontalmente sanos y sin en el grupo suplementado. Sin diferencias en las
de 4 semanas deficiencias. 2 fases con megadosis de respuestas a la gingivitis experimental
vitamina C administrada en la fase 2
Leggott et al. Prospectivo de 3 meses: dieta alterna de 11 hombres sanos no fumadores Sin efectos sobre la placa o la profundidad de las bolsas.
1986 (242) 7 días durante 3 meses (19-28 años) Inflamación gingival afectada por el estado de ascorbato,
(Transversal) especialmente sangrado intersticial (› con agotamiento y
fl con reposición)
Jacob et al. Estudio cruzado de ingesta dietética Sujetos masculinos Las dosis normales y altas de ascorbato redujeron la
1987 (207) inflamación gingival y el sangrado intersticial en
relación con las dosis deficientes
Leggott et al. Diseño cruzado prospectivo de 13 12 no fumadores saludables Sin cambios en la profundidad de la bolsa de acumulación
1991 (243) semanas. Se usaron 6 dientes índice solo (25-43 años). 32 días de de placa o CAL en todo momento. Sangrado gingival › con
para evaluación agotamiento y 8 de 12 completaron depleción de ascorbato y fl con reposición. Sin cambios en
56 días de agotamiento. Sujetos patógenos periodontales específicos (A.
libres de periodontitis actinomycetemcomitans, P. gingivalis,
B. forsythus, C. rectus, E. sputigena, E. corrodens)
Scott et al. Ensayo aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo, 20 fumadores y 20 no ICAM-1 soluble elevado al inicio del estudio en fumadores
2005 (369) fumadores. no periodontalmente (emparejado por edad y sexo) frente a no fumadores. Ningún efecto de la vitamina C sobre
enfermo los niveles circulantes de sICAM-1, neopterina, elastasa
leucocitaria
Parrish et al. Alimentación paralela (3 grupos) con 36 ratas albinas adultas macho No hay diferencias histológicamente entre los grupos en
1977 (315) dieta baja, media y alta en vitamina E este modelo agudo
durante 8 semanas, luego 6 semanas de
periodontitis inducida por ligadura
Kim y Shklar Estudio diseñado en paralelo de 60 ratas Sprague-Dawley (albinas) Curación más rápida de heridas de gingivectomía en
1983 (225) cicatrización de heridas de gingivectomía macho/hembra. 4 grupos, ratas suplementadas con curación completa
en ratas gingivectomía ± vitamina E (n¼20 a 7 días cada
uno), sin gingivectomía ±
vitamina E¼10 cada uno)
 Tabla 10.Continuado
Muestras biológicas
Efecto del gel tópico de vitamina E al 5%,
placebo y gel de clorhexidina sobre la
placa y la periodontitis
Efecto del estrés, el estado periodontal y la
vitamina E sobre la enfermedad
progresión
Efecto de la vitamina E y el selenio en la
descomposición del colágeno en
modelo de tejido de granulación de
esponja subcutánea
Efecto de la vitamina E en la protección de las
líneas celulares epiteliales orales del daño por
ROS
Estudios de CO-enzima Q10
Efecto de la coenzima Q10 tópica ±
desbridamiento subgingival en las
medidas de resultado clínico
Enzimas antioxidantes
Efecto de la superóxido dismutasa en las
medidas de inflamación inducida por
inyecciones peritoneales y de almohadillas
plantares de bacterias periodontales
Entrega local de superóxido
dismutasa y catalasa encapsuladas
en liposomas y ligadura
periodontitis en beagles
211
Referencia Diseño del estudio
Cohen et al. Estudio paralelo, doble ciego, controlado, de 48
1991 (91) adultos con escala complementaria
y alisado radicular en 2 cuadrantes
Cohen et al. Estudio de intervención
1993 (90) longitudinal – diseño paralelo
Asman et al. Estudio de intervención paralelo
1994 (27)
Royack et al. in vitrodiseño paralelo
2000 (350) con 5 grupos
Hanioka et al. Placebo de boca
estudio de intervención controlado
dividida-1994 (191)
Misaki et al. Estudio de intervención de diseño
1990 (272) controlado y paralelo
Petelín et al. Diseño de boca dividida para 4
2000 (319) modalidades de Tx: supradescamación
y enzimas, supradescamación y
subdescamación y enzimas,
descamación y alisado radicular y
enzimas, solo enzimas
Números de asunto
32 ratas arroceras sometidas a estrés
(prueba) o sin estrés (controles) y
divididas entre dietas altas y bajas en
vitamina E antes del estrés
2 ratas Sprague-Dawley en cada uno de los
2 grupos de prueba y 1 de control
2 líneas primarias de células epiteliales
orales humanas
10 sujetos: 20 sitios de prueba
(aplicación de coenzima Q10) y 10
controles (aceite de soja). Todos los
sujetos tenían desbridamiento
subgingival
115 ratas Wistar. 3 grupos de
prueba (n¼54, 26, 26) y 1 grupo
control (n¼9)
15 perros Beagle. 3 grupos de 5
perros – grp 1¼superóxido
dismutasa, grp 2¼catalasa y
grupo 3¼ambos agentes en liposomas. administración de superóxido dismutasa. También 4
estrategias de tratamiento por grupo como la mayor formación de hueso por digital enumerado en
la celda adyacente
Salir
No se detectaron diferencias entre los tres
grupos a excepción de la clorhexidina, que redujo
significativamente la placa
La suplementación con vitamina E tuvo un efecto
protector significativo contra la pérdida ósea. El efecto
fue más pronunciado en los sitios más susceptibles a la
pérdida ósea
La combinación de vitamina E/selenio redujo la
degradación del colágeno en tejido de granulación
experimental. Efectos protectores sugeridos contra la
degradación del colágeno inducida por ROS
H2O2produjo radicales hidroxilo y alteró el ciclo celular. El
tratamiento previo con vitamina E de las células redujo las
concentraciones de radicales hidroxilo, pero no se observaron
efectos en los cambios del ciclo celular inducidos por los
radicales hidroxilo
Mejoras significativas del desbridamiento en todos los sitios.
Enrojecimiento y sangrado gingival mejorados y actividades
de peptidasa bacteriana más bajas en los sitios de coenzima
Q10 en comparación con los controles
Sistema modelo en ratas que demostró
- efecto curativo- de la superóxido dismutasa sobre
B. gingivalis-inflamación inducida y
cicatrización de heridas periodontales
La mayor supresión de la inflamación, la reducción de la
PPD y la ganancia de adherencia se obtuvieron con el
raspado y alisado radicular + tratamiento local.
radiografía de sustracción en raspado y alisado
radicular + grupo superóxido dismutasa (la catalasa
no proporcionó ningún beneficio adicional sobre la
ROS y antioxidantes en la periodontitis
superóxido dismutasa)
212
Tabla 10.Continuado
Muestras biológicas
Enjuagues bucales y dentífricos antioxidantes
Efecto de la clorhexidina sobre
la quimioluminiscencia de
neutrófilos en sangre periférica
Efecto de varios enjuagues bucales sobre
la peroxidación lipídica
Capacidad antioxidante total de enjuagues
bucales evaluada in vitro mediante
sistemas de ensayo dependientes de
células y libres de células
Efecto antioxidante de los dentífricos Battino et al.
con aditivos antioxidantes en 2005 (43)
sistema de ensayo libre de células y ensayo
cometa para efectos sobre queratinocitos
Otros estudios de intervención
Efecto del azul de metileno sobre los
índices microbiológicos y clínicos en
la periodontitis crónica
Inhibición de tetraciclina de la
activación de procolagenasa
inducida por ácido hipocloroso
(HOCL)
Referencia Diseño del estudio Números de asunto Salir
chapple y matthews
Goultschin y Levyex-vivoestudio de neutrófilos 1986 Número no especificado Concentraciones no tóxicas de
(157) estimulado por polihistidina ± de voluntarios sanos clorhexidina (0.1–1yog/ml) inhibió la
clorhexidina producción de superóxido por parte de
los neutrófilos
Firatli et al. 1994 Estudios sobre extractos de cerebro bovino. Niveles de malondialdehído
in-vitroEstudia La doxiciclina tuvo la mejor actividad antioxidante a
(135) en presencia de extractos de cerebro de buey de diferentes enjuagues niveles bajos, pero se lograron efectos similares con
bucales niveles altos de Sanguinarine y Listerine y, en menor
medida, con tetraciclinas. Sin efectos para la clorhexidina
o el cloruro de cetil-piridio
Battino et al. in-vitroestudio de enjuague bucal 12 disponibles comercialmente Listerine tuvo la mayor actividad antioxidante con este
2002 (41) inhibición de la actividad de ROS y enjuagues bucales de ADN y su sistema de ensayo. Efectos atribuidos al contenido de
daño (ensayo cometa) componentes individuales. salicilato de metilo. Ningún efecto antioxidante de la
Efectos sobre cultivos de clorhexidina en este sistema.
fibroblastos HFL-1
in vitroestudio con ensayo de antioxidantes Comercialmente disponible Solo los dentífricos que contenían fosfato de ascorbilo
libres de células y ensayo cometa para la línea pastas de dientes sódico y 50-80 mg de dentífrico por ml de agua
celular de queratinocitos demostraron actividad antioxidante. Concluyó que la
actividad antioxidante de la pasta dental
los componentes deben ser considerados al
organizar nuevas formulaciones de pasta de dientes
Wilson et al. Diseño de boca dividida usando 6–8 sitios 7 pacientes con periodontitis Azul de metileno redujo las proporciones de (50
1992 (451) enfermos. La mitad tratada con azul de sitios en total) anaerobios gramnegativos, espiroquetas y
metileno y la otra con agua estéril organismos móviles y disminución del flujo de GCF.
durante 7 días No se observan cambios en términos de BOP y PPD
Ramamurthy et al. in vitroestudio con línea celular de Estudio de línea celular La doxiciclina y las tetraciclinas modificadas inhibieron
1993 (337) osteosarcoma osteoblástico significativamente la actividad de la colagenasa en
presencia de HOCl. Las tetraciclinas inhiben la activación
de colagenasa inducida por HOCl
 Tabla 10.Continuado
Muestras biológicas
Efecto de la taurina en la película de quitosano
sobre la cicatrización de defectos óseos
experimentales
Efecto de los nutracéuticos nutricionales y
derivados de plantas en los resultados
periodontales
Efecto de la administración local de catequina de
té verde en un sistema de liberación lenta en los
resultados clínicos y bacilos gramnegativos
pigmentados de negro
Efectos de la aminoguanidina sobre los
marcadores de estrés oxidativo y daño
tisular en un modelo de rata con ligadura
de 8 días
Efectos de M40403 (mimético de superóxido
dismutasa) en marcadores de estrés
oxidativo y daño tisular en un modelo de rata
con ligadura de 8 días
Efectos de Tempol en los marcadores de
estrés oxidativo y daño tisular Modelo de
rata con ligadura de 8 días
RDA, cantidad diaria recomendada; PMNL, leucocito polimorfonuclear neutrofílico (neutrófilo); ICAM, molécula de adhesión intracelular; sICAM, molécula de adhesión intercelular soluble; CAL, pérdida de inserción clínica; PPD, profundidad de sondaje de la
bolsa; Tx, tratamiento; GCF, líquido crevicular gingival; BOP, sangrado al sondaje.
213
Referencia Diseño del estudio Números de asunto Salir
Ozmeric et al. in vitroDefectos óseos experimentales 6 perros Se concluyó que el aumento de los recuentos de células de
2000 (310) inducidos y respuesta de curación macrófagos y PMNL es beneficioso para la reparación/curación
evaluada en grupos de quitosano y de tejidos y los efectos de la taurina son más significativos que
quitosano/taurina el quitosano solo
Muñoz et al. Ensayo clínico paralelo controlado con 63 pacientes – 32 prueba Mejoras significativas en PPD e índice gingival en el
2001 (288) placebo aleatorizado de 2 células - 60 días (comprimido multivitamínico) grupo de suplemento (no para CAL o índice de
y 31 control (placebo) como sangrado). Concluyó que los suplementos nutricionales
complemento de atención domiciliaria multivitamínicos son un complemento beneficioso de
las terapias periodontales establecidas
Hirasawa et al. Diseño de boca dividida con 2 6 voluntarios con PPD y bastoncillos grampositivos pigmentados de negro y la actividad
2002 (199) bolsillos profundos bilateralmente. periodontitis avanzada de peptidasa se redujeron significativamente en los sitios de prueba
Uno tratado con catequina y el otro con respecto al valor inicial, en el grupo de catequina adyuvante pero
con placebo no en los controles. Efectos beneficiosos de la catequina del té verde
utilizada como complemento
DiPaola et al. inducida por ligadura de 8 días 40 ratas; 20 con ligadura, 20 con La aminoguanidina redujo la actividad de la sintetasa de
2004 (108) modelo de periodontitis – controlado operación simulada. En cada grupo, óxido nítrico inducible, la actividad de los mieloperóxidos, la
con placebo. histológico/ 10 recibieron aminoguanidina y 10 nitración de tirosina y los niveles de malondialdehído tisular
estudio quimico recibieron placebo y también la pérdida ósea histológica y radiográfica.
DiPaola et al. Como anteriormente 20 ratas macho Sprague-Dawley M40403 redujo la actividad de la mieloperoxidasa, la
2005 (110) (n¼10 recibieron M40403 y n¼10 nitración de tirosina y los niveles de malondialdehído
recibieron placebo) tisular y también la pérdida ósea histológica y
radiográfica
DiPaola et al. Como anteriormente 20 ratas macho Sprague-Dawley El tempol redujo la actividad de la
2005 (109) (n¼10 recibieron Tempol y n¼10 mieloperoxidasa, la nitración de tirosina y la
recibieron placebo) poli(ADP-ribosa) polimerasa y también la pérdida
ósea histológica y radiográfica
ROS y antioxidantes en la periodontitis
chapple y matthews
aunque estos efectos parecen ser el resultado del papel del ascorbato
en el metabolismo del colágeno dentro de las paredes de los vasos
pequeños, en lugar de los efectos antioxidantes directos. Si bien los
estudios de voluntarios periodontalmente sanos pueden proporcionar
algunos indicadores fisiológicos básicos en cuanto al valor de la
vitamina C en los tejidos periodontales, parece poco probable que
tengan un impacto significativo en las estrategias de manejo
terapéutico, cuando los factores de riesgo clave para los niveles de
ascorbato en el tejido y el plasma humanos se relacionan con :
• Los efectos de fumar cigarrillos;
• Edad creciente;
• Sujetos que son deficientes en vitamina C.
Un estudio reciente de Scott et al. (369) investigaron los
efectos de la suplementación con ascorbato sobre la
expresión de la molécula 1 de adhesión intercelular soluble,
la neopterina (un marcador de activación de monocitos) y los
niveles de elastasa leucocitaria en 20 fumadores y 20
controles emparejados por edad y sexo. Si bien los sujetos no
tenían enfermedad periodontal y eran jóvenes, al menos una
justificación era evidente para el estudio (tabaquismo) y se
utilizó un diseño controlado aleatorio doble ciego. La
suplementación con vitamina C no demostró efectos sobre
los resultados medidos. Hay muchas razones para los
hallazgos anteriores. En primer lugar, en sujetos jóvenes
sanos sin periodontitis, los efectos de la suplementación
pueden ser insuficientes para conferir beneficios, cuando
todos los demás sistemas biológicos relevantes funcionan
normalmente en individuos sin riesgo. Segundo, existe
buena evidencia de la literatura médica de que la expresión
de la molécula de adhesión unida a monocitos está regulada
al alza (molécula de adhesión intercelular-1) por proteínas de
fase aguda como la proteína Creactiva (458). Curiosamente,
la suplementación con ascorbato normaliza la adhesión
monocitos-endotelial en tales sujetos (457). Dada la evidencia
de niveles elevados de proteína C reactiva en plasma en
pacientes con periodontitis (122), puede ser que cualquier
efecto beneficioso de la suplementación con vitamina C solo
sea evidente en sujetos con periodontitis y, de hecho, puede
ser independiente de las actividades antioxidantes del ácido
ascórbico. En resumen, actualmente no hay pruebas
suficientes para apoyar o refutar los efectos beneficiosos de
la suplementación con vitamina C en sujetos con
periodontitis.
vitamina e
De los pocos estudios de intervención realizados con
vitamina E, tres se realizaron en ratas, que no desarrollan
naturalmente la enfermedad periodontal pero en las que se
puede inducir una versión aguda de la enfermedad mediante
ligadura. Kim y Shklar (225) demostraron la cicatrización
acelerada de heridas gingivales en un modelo de rata con
214
suplementos de vitamina E y Goodson y Bowles (154)
demostraron que los pacientes con periodontitis que se
enjuagaron la boca con vitamina E diariamente durante 21
días experimentaron una disminución significativa en el flujo
de líquido crevicular gingival en comparación con un grupo
de control sin suplementos. Dos estudios realizados por
Cohen y colaboradores (91, 90) brindaron una idea de los
efectos potencialmente diferentes de la vitamina E, con
diferentes diseños de estudio. En un estudio en humanos (91)
no se observó ningún beneficio de un gel de vitamina E al 5 %
utilizado como complemento de la terapia. Sin embargo, en
un estudio en ratas, la vitamina E tuvo un efecto protector
significativo contra la pérdida ósea alveolar y este efecto fue
más pronunciado en los sitios con mayor riesgo de pérdida
ósea. Asman et al. (27) demostraron en un modelo de rata
que la combinación de vitamina E y selenio protegía contra la
degradación del colágeno inducida por ROS. Más
recientemente, Royack et al. (350) demostraron que el
pretratamiento con vitamina E de las células epiteliales orales
reducía la producción de radicales hidroxilo (derivados del
peróxido de hidrógeno). En resumen, al igual que con la
vitamina C, no hay evidencia suficiente en la literatura
periodontal para sacar conclusiones sobre la suplementación
con vitamina E y la periodontitis, aparte de que los efectos de
la suplementación pueden diferir entre los regímenes
profilácticos y los destinados a la terapia correctiva
complementaria.
Coenzima Q10
Un estudio de Hanioka et al. (191) informaron sobre la
eficacia de la aplicación tópica complementaria de coenzima
Q10 a las bolsas periodontales en un estudio controlado con
placebo de boca dividida. Se demostraron mejoras en el
enrojecimiento y sangrado gingival y actividades de
peptidasa bacteriana más bajas en los sitios tratados con
coenzima Q10 en comparación con los que recibieron terapia
mecánica sola. En un estudio piloto cruzado, doble ciego,
controlado con placebo, Denny et al. (107) evaluaron los
efectos antioxidantes y antiinflamatorios de 90 mg/día de
coenzima Q10 en 10 voluntarios periodontalmente sanos no
fumadores. También demostraron reducciones en el
sangrado gingival después de 28 días de suplementación,
pero no encontraron cambios en la capacidad antioxidante
total del líquido crevicular gingival, lo que indica que los
efectos potencialmente beneficiosos de la coenzima Q10
pueden ser independientes de su actividad antioxidante.
Enzimas antioxidantes
Dos estudios informaron los efectos de la superóxido dismutasa
en modelos animales. En un modelo de rata, Misaki et al. (272)
propusieron un efecto -curativo- del superóxido

dismutasa enP. gingivalis-inflamación inducida y mejora la
cicatrización de heridas. Petelín et al. (319) utilizaron un diseño
de estudio complejo de cuatro modalidades de tratamiento en 15
perros Beagle (tres grupos de cinco perros) y demostraron que la
superóxido dismutasa adyuvante proporcionó reducciones
significativamente mejores en la profundidad de la bolsa al
sondaje, la pérdida de inserción clínica y la supresión de la
inflamación que el raspado y el alisado radicular. solo. También
se demostró un aumento de la densidad ósea en los grupos de
superóxido dismutasa y la catalasa pareció no ofrecer ningún
beneficio adicional. Es interesante especular si los estudios en
humanos mostrarían un beneficio de la suplementación con
superóxido dismutasa, dada la lenta tasa de actividad de esta
enzima principalmente intracelular en relación con las especies
secuestradoras de radicales del entorno extracelular.
Enjuagues bucales y pastas dentales
Given the rapidly growing evidence base supporting a
significant role for ROS-mediated tissue damage and
antioxidant deficiency in periodontitis patients,
interest has re-emerged recently in the potential
antioxidant effects of mouth rinses and toothpastes.
An initial study by Goultschin and Levy (157)
demonstrated that chlorhexidine demonstrated
antioxidant properties in a bio-assay of superoxide
release by peripheral blood neutrophils. This was
confirmed by Roberts et al. (347) in a cell-free
enhanced chemiluminescence antioxidant assay,
where the ranking of commercially available
mouthwashes (highest to lowest) was, Listerine
(benzoic acid), Oraldine (Hexitidine), Plax closan), (Tri-
Veadent (Sanguinarine) Corsodyl chlorhexidine), (0,2%
Oral-
B anticavity rinse (cetyl-pyridium-chloride) and Tatum
Verde (Benzidamine HCl). Firatli et al. (135) found
similar results using an assay for lipid peroxidation.
Battino et al. (41) looked at individual components of
mouth rinses, in addition to the whole rinse and found
no antioxidant activity from Corsodyl , using a
spectrophotometric cell free assay and also the comet
assay to measure DNA fragmentation by hydrogen
peroxide on HFL-1 fibroblasts. They also found the
antioxidant activity of Listerine to be high, but this was
because of its methylsalycilate content (a phenolic
compound capable of scavenging hydroxyl radicals)
(4). The study by Battino et al. serves to remind us of
two important issues that must be accounted for when
interpreting the results of assays in antioxidant
biology:
• Los diferentes sistemas de ensayo arrojan resultados
diferentes, según el índice de actividad antirradical que se
utilice (por ejemplo, sesgo hacia la proteína antioxi-
ROS y antioxidantes en la periodontitis
antioxidantes frente a secuestrantes de bajo peso molecular, o
antioxidantes solubles en lípidos frente a especies solubles en
agua);
• Es esencial explorar la actividad antioxidante de los
componentes individuales de las preparaciones de
compuestos para determinar las especies antioxidantes
activas. Al mismo tiempo, es importante reconocer que
las actividades biológicas de los compuestos
individuales dentro de formulaciones complejas
pueden cambiar (aumentar o disminuir) como
resultado de interacciones con otros compuestos en la
formulación.
Un estudio reciente abordó la actividad antioxidante de
las formulaciones de pasta de dientes (43) y descubrió
que las pastas que contenían fosfato de ascorbilo sódico
mostraban una clara actividad antioxidantein vitro.Las
actividades antioxidantes de ZnCl y NaF fueron
significativas, lo que se consideró debido a la capacidad
de Zn2+para proteger los grupos tiol y prevenir la
formación de peróxido de hidrógeno y superóxido por
metales de transición (56) y la capacidad de F)a iones de
hierro divalentes complejos (41). En resumen, los estudios
de enjuagues bucales o pastas dentales deben tener en
cuenta los diferentes índices de actividad antioxidante,
así como los componentes individuales del enjuague/
pasta. El beneficio antioxidante debe demostrarse para la
preparación del compuesto, así como para los
componentes individuales y en vivose necesitan estudios
que demuestren actividad antioxidante, así como
beneficios contra la gingivitis/periodontitis.
Otros estudios de intervención (suplementos nutricionales y
de otro tipo)
Muñoz et al. (288) investigaron los efectos complementarios de
un suplemento de fitonutrientes multivitamínicos utilizado como
parte de un régimen de atención domiciliaria en 63 pacientes
periodontales y encontraron mejoras significativas en la
profundidad de sondaje de las bolsas y los índices gingivales en
el grupo suplementado en relación con el grupo placebo.
Hirasawa et al. (199) demostraron los efectos beneficiosos de un
sistema de catequina de té verde de liberación lenta aplicado
localmente utilizando un diseño de boca dividida en seis sujetos
(Tabla 10). También se demostraron las actividades antioxidantes
de las catequinas del té verde.in vitropor Ho et al. (200) y un
estudio de Bailey et al. (34) informaron que los problemas de
salud oral en adultos mayores que viven en la comunidad en
zonas rurales se asociaron con una ingesta deficiente de ciertos
alimentos y nutrientes. En un ensayo controlado aleatorizado que
involucró a 75 fumadores con enfermedad periodontal (162), se
encontraron mejoras significativas en los niveles de apego para
aquellos que tomaban una dosis única de vitamina C/vitamina E/
extracto de semilla de uva (1100 mg de vitamina C, 135 mg de
vitamina E, 42 mg de semilla de uva) y
215
chapple y matthews
suplementos de dosis doble (2200 mg de vitamina C, 270 mg de
vitamina E, 84 mg de semilla de uva) frente a placebo, lo que
proporciona evidencia de que la suplementación con antioxidantes
puede tener un beneficio terapéutico en fumadores con periodontitis.
Recientemente Di Paola et al. (109) investigaron los
efectos del eliminador de radicales Tempol (4-
hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidina-NORTE-oxilo), un
nitróxido de piperidina soluble en agua de bajo peso
molecular y con carga neutra, que es capaz de
atravesar las membranas celulares. Usaron una dosis
diaria de 10 mg/kg (frente al control del vehículo)
inyectada por vía intraperitoneal en ratas macho
Sprague-Dawley que tenían una periodontitis aguda
inducida por ligadura de 8 días que afectaba un lado
de la boca y dientes coincidentes sin ligadura en el
lado contralateral. . Demostraron que Tempol redujo
la actividad de la mieloperoxidasa, la permeabilidad
vascular, la formación de nitrotirosina y la actividad
poli(ADPribosa) polimerasa, además de reducir la
pérdida ósea histológica y radiográfica. Otros estudios
realizados por este grupo usando el mismo modelo de
rata han mostrado efectos beneficiosos similares
usando aminoguanidina, un inhibidor inducible de la
óxido nítrico sintasa (108) y un mimético de la
superóxido dismutasa (110).
En resumen, actualmente faltan estudios de
intervención humana para establecer un cuerpo de
evidencia que respalde la utilidad de las terapias
antioxidantes en el tratamiento de la periodontitis. Los
estudios disponibles hasta la fecha proporcionan
evidencia de efectos significativamente beneficiosos, pero
se necesitan vínculos mecánicos entre las especies
antioxidantes individuales y los mecanismos patogénicos
(punto 3 del recuadro 1), junto con estudios que
involucren la nutrición de alimentos integrales. Dada la
contribución demostrable del exceso de actividad de ROS
y el daño asociado, las deficiencias de antioxidantes a
nivel local y sistémico en pacientes con periodontitis,
junto con las actividades antioxidantes y antiinflamatorias
duales de algunas especies de antioxidantes y su
beneficio comprobado en condiciones médicas asociadas
con estrés oxidativo,
El papel del glutatión
La importancia del glutatión reducido (GSH) para el
estado redox intracelular y como eliminador de radicales
que rompe la cadena se ha discutido anteriormente. El
216
Los niveles milimolares medidos dentro del fluido crevicular
gingival en salud (83) son intrigantes dado que las
concentraciones de GSH extracelular normalmente caen
dentro del 1-5yoMETROrango. Esto, junto con los niveles
significativamente reducidos de GSH en el fluido crevicular
gingival de pacientes con periodontitis que no fuman,
plantea una serie de preguntas importantes.
• ¿Por qué los niveles de GSH son tan altos en el líquido crevicular
gingival?
• ¿Cuáles son las razones de su reducción en la
periodontitis?
• ¿Cuál es la relación entre el GSH en las células y tejidos
periodontales con la actividad y progresión de la
enfermedad?
Ya existen respuestas a la segunda pregunta dentro
de la literatura periodontal. Los estudios sobre la
masticación de nuez de betel y la periodontitis han
demostrado que el alcaloide de la nuez de areca, la
arecolina, inhibe la unión, la propagación y la
migración de los fibroblastos gingivales de manera
dependiente de la dosis y que estos cambios están
asociados con un agotamiento del GSH intracelular
(212). Chang et al. (75) confirmaron que la toxicidad de
los fibroblastos gingivales inducida por arecolina era
el resultado del agotamiento de los tioles
intracelulares y demostraron que se lograba un efecto
sinérgico con la nicotina (74). Llegaron a la conclusión
de que el agotamiento del tiol inducido por la
arecolina en los fibroblastos del ligamento periodontal
puede hacerlos más susceptibles a los efectos de la
nicotina. El mismo grupo (76) demostró que la nicotina
era citotóxica para las células del ligamento
periodontal de cultivos de explantes y reducía la
proliferación celular y la síntesis de proteínas en
función de la dosis. Investigaron las capacidades de
catalasa, superóxido dismutasa y GSH para proteger
contra estos efectos citotóxicos utilizando inhibidores
y promotores de GSH y encontraron que la protección
de GSH negaba la citotoxicidad de la nicotina,
mientras que la catalasa y la superóxido dismutasa no
tenían ningún efecto. Chang et al. (77) demostraron
posteriormente que el humo del cigarrillo disminuía
los niveles de GSH de los fibroblastos del ligamento
periodontal de una manera dependiente de la dosis y
estimulaba los genes específicos del estrés.
Una serie de estudios también ha demostrado que ciertos
patógenos periodontales poseen vías enzimáticas específicas
para el metabolismo de GSH y utilizan GSH para producir
sulfuro de hidrógeno, eliminando una especie antioxidante
protectora y formando un subproducto citotóxico. Person et
al. (318) fueron los primeros en demostrar que de 75
especies,Peptostreptococcus, Eubacterium, Selenomonas,
Centipeda, Bacteroides

yfusobacteriacisteína metabolizada para producir
compuestos volátiles de azufre. Carlson et al. (69, 70)
demostraron que dos subespecies deP. microsy cinco
fusobacteriaspp. usó GSH para generar sulfuro de
hidrógeno. Se ha propuesto que la enzimaC- La glutamil-
transpeptidasa, que descompone el GSH en cys-gly en las
membranas celulares humanas, también está presente en
T. denticolaenvolturas celulares externas y queC-glutamiltranspeptidasa
puede desempeñar un papel en la propagación de
T. denticoladentro de los tejidos periodontales inflamados
(256). Chu et al. (86, 87) confirmaron que GSH podría ser utilizado
porT. denticolapara sintetizar sulfuro de hidrógeno, lo que
confirma que la eliminación de GSH podría ser un mecanismo
importante en la expresión de virulencia deT. denticola.La base
de evidencia respalda el agotamiento de GSH por ciertos
patógenos periodontales, así como por el humo del cigarrillo.
Investigaciones recientes han identificado un riesgo
significativamente mayor de periodontitis en sujetos con el
alelo polimórfico glutatión-S-transferasa-M1 (226). La
glutatión-S-transferasa es una enzima metabolizadora de
xenobióticos vital para las reacciones de desintoxicación
(323) y utiliza GSH libre para lograrlo. Los inductores
químicos de la expresión del gen de la glutatión-S-
transferasa generan ROS mediante procesos metabólicos o
modifican los tioles, lo que provoca un agotamiento del GSH
intracelular libre y activa los factores de transcripción
sensibles a redox. Kim y colaboradores (226) identificaron un
mayor riesgo entre la glutatión-S-transferasa-M1+
fumadores para la periodontitis (odds ratio 3,1, IC 1,5-6,6)
y un riesgo moderado casi significativo incluso entre M1+
no fumadores (odds ratio 1,8, IC 1,0-3,1). Llegaron a la
conclusión de que fumar y el genotipo glutatión-
Stransferase-M1 eran indicadores de riesgo
independientes para la periodontitis. Esta es la primera
evidencia de que el agotamiento de GSH en sujetos con
periodontitis puede tener una base genética.
Los altos niveles de GSH dentro del líquido crevicular gingival
pueden ser el resultado de una mayor síntesis por parte de las
células de los tejidos periodontales, o de mecanismos de
liberación activa, o liberación pasiva secundaria a la actividad de
la proteasa en las células epiteliales gingivales (342). Además, se
ha demostrado que las actividades de ciertos patógenos
periodontales y el tabaquismo reducen los niveles de GSH dentro
de las células periodontales y el estrés oxidativo reduce aún más
el GSH, lo que tiene como consecuencia la activación de los
factores de transcripción sensibles a redox y la creación de un
estado proinflamatorio (Fig. 12). Si existe una base genética
adicional para los niveles reducidos de GSH en tejidos con
enfermedad periodontal, a través de polimorfismos en los genes
que codifican los diversos sistemas enzimáticos responsables de
la síntesis, oxidación/reducción o utilización de GSH dentro de las
células, sigue siendo
ROS y antioxidantes en la periodontitis
estar determinado. Sin embargo, dado el creciente cuerpo de
evidencia que relaciona los niveles reducidos de GSH con la
inflamación periodontal, postulamos que aumentar o preservar
los niveles intracelulares de GSH dentro de las células de los
tejidos periodontales probablemente proporcione una nueva
estrategia complementaria antioxidante y antiinflamatoria a las
terapias periodontales tradicionales. .
Conclusiones y el futuro
El estrés oxidativo se encuentra en el corazón del daño
del tejido periodontal que resulta de las interacciones
huésped-microbiano, ya sea como resultado directo del
exceso de actividad de ROS/deficiencia de antioxidantes o
indirectamente como resultado de la activación de
factores de transcripción sensibles a redox y la creación
de un estado proinflamatorio (Fig. 13). Un cuerpo de
literatura apoya la hiperreactividad de neutrófilos en
sangre periférica en formas crónicas y agresivas de
periodontitis, con respecto a la Fc totalC-Generación de
ROS mediada por receptor. En general, los datos
actualmente disponibles sugieren que esta
hiperreactividad tiene un elemento constitucional en
lugar de ser enteramente el resultado del cebado
periférico (p. ej., por citoquinas o lipopolisacárido).
Además, parece posible que la hiperactividad basal (es
decir, la liberación extracelular de ROS de bajo nivel en
ausencia de un estímulo exógeno) sea también una
propiedad constitucional de los neutrófilos periféricos de
los pacientes con periodontitis. Esto, junto con la
evidencia de una capacidad antioxidante plasmática
comprometida, independientemente del tabaquismo,
sugiere un entorno subyacente de estrés oxidativo en los
pacientes con periodontitis. Además de este compromiso
sistémico, aunque sutil, En los últimos 2 años ha surgido
evidencia considerable de que el estrés oxidativo y la
función antioxidante deprimida son características de los
tejidos y fluidos periodontales en sujetos con
periodontitis. Como se ilustra en la Fig. 13, ahora existen
varias vías de investigación para el desarrollo de nuevos
enfoques basados en antioxidantes para la terapia
periodontal. Además, vías específicas, como la glicación y
la glioxidación de proteínas para producir productos
finales de glicación avanzada (y un aumento del receptor
para la expresión del producto final de glicación
avanzada), dependen de mecanismos oxidativos y son
muy frecuentes en la diabetes tipo 2 y los fumadores, los
dos principales factores de riesgo. Factores de la
periodontitis. Dichos productos de oxidación aumentan la
adhesión, la quimiotaxis y el cebado de los neutrófilos y,
en los neutrófilos hiperactivos/reactivos,
217
chapple y matthews
fumadores Además de las rutas tradicionales en gran parte
inexploradas de aumentar la capacidad antioxidante de los
tejidos periodontales y los fluidos extracelulares para controlar o
prevenir el exceso de daño tisular mediado por ROS asociado con
la hiperinflamación periodontal (por ejemplo, de las actividades
de los neutrófilos y fibroblastos), las rutas más nuevas basadas
en la recientemente ha surgido la modulación de factores de
transcripción redoxsensibles. Tales factores de transcripción
(factor nuclear-jB y la proteína activadora-1) no solo se activan
por vías iniciadas por el ligando del receptor, sino también por
cambios no mediados por el receptor en el estado redox
intracelular, lo que implica en gran medida el agotamiento de
GSH (oxidación/glutationilación) y ROS (p. ej., peróxido de
hidrógeno) como desencadenantes metabólicos. Este conjunto
de vías brinda oportunidades para desarrollar nuevas terapias
antioxidantes que se dirijan a procesos extracelulares, ligados a
la membrana o intracelulares (Fig. 12 y 13) y que funcionen no
solo como antioxidantes en el sentido tradicional, sino también
como poderosos agentes antiinflamatorios.
Esta revisión ha intentado reunir 40 años de
investigación periodontal sobre especies reactivas de
oxígeno y antioxidantes y trabajos más recientes sobre
biología redox, y comparar esto con el enorme cuerpo de
evidencia dentro de la literatura biomédica, para resaltar
vías mecánicas comunes y nuevas oportunidades
emocionantes. para el futuro desarrollo de terapias de
modulación del huésped en periodoncia.
Agradecimientos
Los autores están muy agradecidos con el Sr. M. Sharland
por su minuciosa preparación de las ilustraciones de este
manuscrito.
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