Identificación y cuantificación de la concentración de una disolución de

CuSO4.5H2O, por espectrofotometría de UV-Vis, mediante regresión lineal

simple (RLS), aplicando el método de estándar externo.

Mendoza Stefhany1, Monserrat Sebastián2

1Estudiantes del programa de Química y Farmacia, semestre N° IV
Laboratorio de Análisis Instrumental, grupo 5
Docente: Andrea Ramos Hernández

Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del atlántico, carrera 30 Número 8-49 Puerto Colombia - Atlántico

RESUMEN

En el presente informe, se pretende analizar la práctica realizada de forma virtual sobre la

identificación y cuantificación de la concentración de una disolución de CuSO4.5H2O, por
espectrofotometría de UV-Vis, mediante regresión lineal simple (RLS), aplicando el método de
estándar externo. Su objetivo principal fue, determinar la concentración de cada una de las
disoluciones patrones, luego medir el espectro de absorción de la disolución CuSO4.5H2O y determinar
la longitud de onda e identificar donde ocurre la máxima absorción (𝜆𝑚𝑎𝑥). Finalmente, con el
espectrofotómetro UV-Vis medir la absorbancia de las disoluciones, construir la curva de calibrado y
determinar la concentración de la muestra problema mediante regresión lineal simple y la metodología
de estándar externo.

Key words: concentración, disolución, absorbancia, curva de calibrado, estándar externo.

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1. Introducción
En la práctica que realizaremos a continuación se
hará la identificación y cuantificación de la
concentración de una disolución de CuSO4.5H2O
por espectrofotometría UV-Vis, mediante
regresión lineal simple (RLS), aplicando el
método de estándar externo, para ello debemos
tener en cuenta los siguientes conceptos:
El objetivo de la regresión lineal simple es
minimizar la distancia vertical entre todos los
datos y nuestra línea, por lo tanto, para
determinar la mejor línea, debemos minimizar la
distancia entre todos los puntos y la distancia de
nuestra línea. Existen muchos métodos para
cumplir con este objetivo, pero todos estos
métodos tienen un solo objetivo que es el de
minimizar la distancia.
Una forma en que el modelo de regresión
encuentre la mejor línea de ajustes es utilizando
el criterio de mínimos cuadrados para reducir el
error. La técnica de mínimos cuadrado intenta
reducir la suma de los errores al cuadrado,
buscando el mejor valor posible de los
coeficientes de regresión.
Para obtener una curva de calibrado de un
compuesto se preparan soluciones de diferentes
concentraciones del mismo, determinándose para
cada una de ellas el valor de absorbancia a
𝜆𝑚𝑎𝑥. Estos valores de absorbancia se
representan en el eje de abscisas (eje de x) y los
de concentración en el eje de ordenadas (eje de
y). Se observará que, a bajas concentraciones, el
aumento de concentración se corresponde con un
incremento lineal en la absorbancia (zona de
cumplimiento de la ley de Lambert-Beer). A
concentraciones altas la linealidad se pierde y se
observa que la línea se aplana, por lo que las
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Laboratorio de Análisis Instrumental
medidas son poco fiables. La representación de
Lambert-Beer como se observa en la ecuación 1,
nos permitirá calcular el valor del coeficiente de
extinción molar, que corresponde a la pendiente
de la recta.
Ec. [1]
A = ε·c·l
En la calibración con un estándar externo, la
muestra se prepara por separado del estándar. La
propiedad analítica medida (S) depende de
manera conocida y reproducible de la
concentración del analito (CA). En teoría, la
medida de la propiedad es directamente
proporcional a la concentración según la
ecuación 2.
Ec. [2]
𝑆 = 𝐾 𝑥 𝐶𝐴.
Salvo dos excepciones, los métodos analíticos
instrumentales requieren la determinación
empírica de K con estándares o patrones del
analito. La determinación del valor de K se
denomina calibración. En una primera
aproximación es posible obtener el valor de K
con el uso de un único estándar externo y
seguidamente calcular el contenido de analito en
la muestra problema.
Los estándares externos se usan para calibrar
instrumentos y procedimientos cuando no hay
efectos de interferencias de los componentes de
la matriz en la disolución del analito. Se preparan
una serie de estándares externos de distintas
concentraciones conocidas del analito.
Idealmente se utilizan tres o más disoluciones en
el proceso de calibración.
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2. Parte experimental

Inicio Medir la absorbancia de la muestra problema por

Preparar 50 mL de disolución madre de
CuSO4.5H2O 100 mM, a partir del soluto
sólido de CuSO4.5H2O, teniendo en
cuenta la pureza del soluto (98.6%).
triplicado y mediante regresión lineal simple
determinar la concentración de la MP.
Medir la absorbancia de la muestra blanco (agua
destilada) 10 veces, con la absorbancia del blanco
determinar los límites de detección y límite de
cuantificación.

A partir de la disolución madre, preparar

5 disoluciones estándar con diferentes
Fin
alícuotas de esta disolución, siguiendo el
esquema de la figura 1.
Figura 1. Procedimiento [autores Mendoza

Determine por dilución la concentración Stefhany y Monserrat Ardila]

de cada una de las disoluciones patrones.

Determinar el espectro de absorción de la

disolución madre, en el rango del visible
[1000-600] nm, e identifique la 𝜆𝑚𝑎𝑥,
donde ocurre la máxima absorción
molecular.

Luego, tomar una celda de 1 cm de paso

óptico y llenarla ¾ de su capacidad con la
disolución madre y medir su espectro de
absorción en el rango establecido.

Seleccionar en el equipo Shimadzu UV-

1900 la metodología fotométrica y medir
la absorbancia de las disoluciones Figura 2. Preparación de las disoluciones
estándar o patrón a la 𝜆𝑚𝑎𝑥. estándar.

Construir la curva de calibrado y

determine la regresión lineal, ecuación de
la recta y coeficiente de regresión lineal.

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3. Análisis y discusión Se puede decir que para preparar 50mL de

disolución de CuSO4 5H2 O a 100mM se necesitan
3.1 Indique las frases de seguridad para el 1,2626 g de CuSO4 5H2 O y para preparar la
analito estudiado.
disolución se necesitó realizar los siguientes
Frases de riesgo cálculos:
R 22 Nocivo por ingestión. Datos
R 36 Irrita los ojos.
𝐶 = 100𝑛𝑀 = 0,1𝑀
R 38 Irrita la piel.
R 50 Evítese la exposición. Atender 𝑉 = 50𝑚𝑙 = 0,05𝐿
instrucciones especiales antes del uso. 𝑃𝑀 = 249,68 𝑔 𝑚𝑜𝑙

Frases de seguridad
S 22 No respirar el polvo. Procedimiento
S 24 Evite el contacto con la piel. Ec. [3]
S 25 Evite el contacto con los ojos.
𝒏 𝒎𝒐𝒍𝒆𝒔 = 𝑴 × 𝑳
S 26 En caso de contacto con los ojos, lávese
𝑚𝑜𝑙
inmediata y abundantemente con agua y acuda a 𝑛 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 = 0,1 ∗ 0,05 L
un médico. 𝐿
S 36/37/39 Use indumentaria y guantes 𝑛 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 = 0,005 𝑚𝑜𝑙
adecuados y protección para los ojos/ la cara. 1mol CuSO4 5H2 O
0,005𝑚𝑜𝑙𝐶𝑢𝑆 𝑂4 ×
S 60 Elimine el producto y/o recipiente como 1mol CuSO4
residuos peligrosos. 249,68 g CuSO4 5H2 O
S 61 Evítese su liberación al medio ambiente. ×
1 𝑚𝑜𝑙 CuSO4 5H2O
Remítanse a las instrucciones específicas de la
ficha de datos de seguridad. = 1,245 CuSO4 5H2O
Ec. [4]
Frases de peligro 𝒈 𝒑𝒖𝒓𝒐
%𝑷 = × 𝟏𝟎𝟎
H 302 Toxicidad aguda. 𝒈 𝒊𝒎𝒑
H 319 Lesiones oculares graves o irritación 1,245 CuSO4 5H2 O
ocular. %𝑃 = × 100
98.6
H 315 Irritación o corrosión cutáneas. %𝑃 = 1,2626 𝑔
H 400 Peligroso para el medio ambiente acuático.
H 410 Peligroso para el medio ambiente acuático.
3.3 Cálculos para determinar la concentración
de las disoluciones estándar preparadas a
3.2 Cálculos de los gramos de CuSO4.5H2O partir de la disolución madre de CuSO4.5H2O
necesarios para preparar la disolución de 100 100 mM.
mM.

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Datos 5 25 5 0,020
𝑆𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑀𝑎𝑑𝑟𝑒 = 100 𝑚𝑀 = 0,1𝑀
Tabla 1. Concentración de las disoluciones.
Procedimiento
3.4 Espectro de absorción del CuSO4.5H2O
Ec. [5] desde 1000 nm hasta los 600 nm.
𝑪𝒅𝒊𝒔 𝑽𝒅𝒊𝒔 = 𝑪𝒔𝒕𝒐𝒅𝑽𝒔𝒕𝒐𝒅
𝑪𝒅𝒊𝒔𝑽𝒅𝒊𝒔 ESPECTRO DE ABSORCIÓN
𝑪𝒔𝒕𝒐𝒅 =
𝑽𝒔𝒕𝒐𝒅 0,35

100 mM × 1 ml 0,3
𝑪𝒔𝒕𝒐𝒅(𝒄𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊𝒐𝒏 𝟏) =
25mL 0,25

Longitud de onda
= 0,004
0,2

0,15
100 mM × 2 ml
𝑪𝒔𝒕𝒐𝒅(𝒄𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊𝒐𝒏 𝟐) = 0,1
25mL
0,05
= 0,008
0
100 mM × 3 ml
𝑪𝒔𝒕𝒐𝒅(𝒄𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊𝒐𝒏 𝟑) = 600 700 800 900 1000
25mL Absorción
= 0,012
100 mM × 4 ml Gráfica 1. Espectro de absorción.
𝑪𝒔𝒕𝒐𝒅(𝒄𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊𝒐𝒏 𝟒) =
25mL
Se muestra que la máxima absorción molecular
= 0,016 ocurre a una abs de 0,2877.
100 mM × 5 ml
𝑪𝒔𝒕𝒐𝒅(𝒄𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊𝒐𝒏 𝟓) = 3.5 Curva de calibrado: Abs vs [estándar]
25mL
= 0,020 para cada uno de los estándares preparadas
de CuSO4.5H2O.
Estos resultados los podemos ver reflejados en
De acuerdo a los datos que nos dieron en la tabla
la Tabla 1. 1, podemos realizar la curva de calibrado que
Disolución V Alícuotas (Cstod) observamos en la gráfica 2.
(mL) (mL)
1 25 1 0,004
2 25 2 0,008
3 25 3 0,012
4 25 4 0,016

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Procedimiento
CURVA DE CALIBRACIÓN
Ec. [1]
0,0700
0,0600 y = 2,8875x + 0,0001 A = ε·c·l
0,0500 R² = 0,9991 A
Absorción

0,0400 ε=
l×C
0,0300
0,2877
0,0200 𝜀=
𝑚𝑜𝑙
0,0100 1𝑐𝑚 × 0,1 𝐿
0,0000
0,000 0,005 0,010 0,015 0,020 0,025 𝐿
Estándar
𝜀 = 2,877
𝑚𝑜𝑙 × 𝑐𝑚

Gráfica 2. Curva de calibrado. Abs Vs Estándar. 3.8 ¿Cuál es la importancia de la regresión

lineal simple?, ¿cuándo es adecuado usarla?
3.6 Determinación de la concentración de la
muestra problema de CuSO4.5H2O, mediante La regresión lineal simple es la técnica más
regresión lineal simple, método estándar utilizada, es una forma que permite modelar una
externo. relación entre dos conjuntos de variables. Y su
importancia radica en que determina la relación
Ec. [6] lineal entre la señal analítica y la concentración
𝒚 = 𝒎𝒙 + 𝒃 de una muestra problema.
Este modelo se considera un predictor x y una
𝒚−𝒃
𝒙= variable dependiente o respuesta Y. Imaginemos
𝒎 que la verdadera relación entre Y y x es una línea
Procedimiento recta y que la observación Y en cada nivel x es
una variable aleatoria.
0,0265 − 0,0001 El modelo de regresión lineal simple se
𝑥=
2,8875 caracteriza por predecir la variable dependiente a
𝑥 = 0,0092 través de la siguiente ecuación:
Ec. [7]
𝐸(𝑌/𝑥) = 0 + 𝛽1 𝑥
3.7 Determinar el coeficiente de absortividad
Donde la ordenada al origen β0 y la pendiente β1
molar del CuSO4.5H2O en L/mol*cm.
son coeficientes desconocidos de la regresión.
Datos
El análisis de regresión lineal es adecuando
𝐴𝑏𝑠 𝑚𝑎𝑥 = 0,2877 usarlo cuando se trata de estudiar el efecto de una
𝑏 = 1,000 𝑐𝑚 variable independiente sobre una única variable
dependiente de la primera. Empleando la
𝐶 = 0,100
ecuación de regresión lineal simple se puede

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realizar una estimación basándose en los datos 5. Agradecimientos

obtenidos.
3.9 ¿Qué información entrega el R2, la
pendiente y el intercepto en una regresión
lineal simple?
El R2 indica qué tan cerca están los datos de la
línea de regresión ajustada., en este caso la
absorbancia Vs la concentración, que entre más
cercano a 1 significa que existe una excelente
relación.
La pendiente indica el grado de inclinación de la
curva, este es un valor constante.
El intercepto indica el lugar en el que la
pendiente se cruza con un eje, son los errores
aleatorios.
Le agradecemos a la Universidad del Atlántico
por permitirnos este espacio de aprendizaje y a la
profesora Andrea Ramos Hernández por los
conocimientos adquiridos durante la práctica y
por guiarnos en la realización de este informe el
cual nos será de ayuda para nuestra formación
profesional.
6. Referencias
[1] Skoog, D.A, Holler, F.J, Crouch, S.R.
Principios de Análisis Instrumental. Sexta
edición. 11-15.
[2] Tony Owen, Fundamentos de la
espectroscopía UV-Visible. 22-25.

4. Conclusiones
• Mediante el método de adición estándar
se construyó la curva de calibrado
graficando Absorbancia Vs Disolución
patrón.
• En el laboratorio se logró determinar el
espectro de absorción del CuSO4.5H2O;
como también la determinación de
longitud de onda donde ocurre la
absorción máxima.
• Al momento de preparar las disoluciones
es importante es importante reforzar
conceptos de disoluciones, en este
laboratorio se logró con éxito reforzarlos,
obteniendo así los resultados esperados
con bajo nivel de error relativo.
• Se preparó la solución madre y soluciones
estándares requeridas para este
laboratorio de forma correcta, siguiendo
las indicaciones que propone el método
de adición estándar.