Docente: Nelson Hurtado Gutiérrez

TÍTULO DE LA PRÁCTICA

OPERACION DE UN ESPECTROFOTOMETRO Y OBTENCION DE UNA CURVA DE

TRANSMITANCIA ESPECTRAL. (LEY DE BEER).

1. Objetivos:

- Ilustrar los principios de la espectrofotometria, sobre las formas de operación de

los equipos y sobre las características de absorción de la luz por las soluciones.
- Determinar el procedimiento para establecer cuando una solución cumple la ley de
Beer, y si la cumple a que longitud de onda.

2. Materiales y reactivos:

- Agua destilada
- Nitrato de Cromo III 0,05 M
- Vasos, pipetas volumétricas de 5 y 10 ml
- Matraces aforados de 50 y 100 ml

3. Procedimiento:

Prepare una solución 0,05M de Cromo III y diluya 20 ml de la solución 0,05M con agua
destilada a 50 ml y tome el espectro de absorción de esta solución. Tome como blanco
el agua destilada. Determine la longitud de onda de máxima absorción.

Tome igualmente lecturas a las siguientes longitudes de onda:

400, 405, 415, 425, 440, 445, 470, 490, 500, 540, 550, 550, 570, 575, 580, 600, 625 nm
y determinar para cada una de ellas el valor del %T.

4. Ley de Beer:

De la solución 0,5M de cromo III, prepare las siguientes soluciones:

1) 0,01M
2) 0,02M
3) 0,03M
4) 0,04M

Medir la absorbancia de todas las soluciones a la longitud de onda de máxima

absorbancia y obtener representaciones de Beer (curvas de calibración). Grafique %T y
A (ordenada) Vs concentración (abcisa).

Solicitar una solución incognita de cromo III, medir la absorbancia de esta a la longitud
de onda seleccionada y calcule su concentración. Estime el error con las distintas
curvas de calibración.

Recomendaciones con las cubetas de cuarzo:

- No tocar la parte a través de la cual pasa la luz.

- Enjuagar la cubeta con agua destilada y luego con varias porciones pequeñas de la
solución antes de efectuar una medición.
- Secar las gotas que eventualmente queden en el exterior de la cubeta, con papel
absorbente limpio.
- Inserte la cubeta en el soporte del aparato

5. Preguntas:

- Cuáles son las conclusiones sobre el trabajo realizado ?

- Explique por qué se escoge como longitud de onda de trabajo la correspondiente a
un máximo de absorbancia.
- Entre los varios máximos de absorción de un espectro cuál se escoge como
longitud de onda de trabajo y por qué ?

6. Bibliografía:

SKOOG AND WEST. Fundamentos de química analítica.

TÍTULO DE LA PRÁCTICA

DETERMINACIÓN DE LA ABSORTIVIDAD MOLAR DE UN COMPUESTO CONOCIDO

(tema de investigación).

El estudiante debe seleccionar un compuesto con absortividad molar conocida y

diseñar la práctica para su determinación. En el informe debe anexar una guía de
laboratorio.
Debe Íncluir :

OBJETIVOS

MATERIALES Y REACTIVOS

MARCO TEÓRICO

PROCEDIMIENTO

PREGUNTAS

BILIOGRAFÍA.
TÍTULO DE LA PRÁCTICA

ESPECTROSCOPIA EN LA REGIÓN VISIBLE

1. OBJETIVOS:

- Hallar la constante de equilibrio de un complejo de hierro.

- Calcular la absortividad molar del complejo de hierro formado

- Determinar la concentración de hierro de una muestra desconocida.

2. MATERIALES Y REACTIVOS:

- Solución patrón de Fe+3 de 50 ppm

- Cloruro de Hidroxilamina (solución 10%). NH2OH.HCL

- Acetato de potasio . Solución acuosa saturada. Solución boffer (pH=3-6)
- 1,10 Fenantrolina (Solución alcohólica 0,1% ) C2H8N2.H2O
- Solución problema Fe+3
- Agua destilada.
- 10 balones aforados de 50 ml
- 2 buretas de 25 ml
- 4 pipetas graduadas de 5 ml
- 1 pinza para buretas
- 1 soporte

3. PROCEDIMIENTO:

De la solución patrón de Fe+3 (50 ppm) tome 5 ml y llévelos a un balón aforado de 50

ml. De igual forma tome volúmenes de 4, 3, 2 y 1 ml de solución patrón y llévelos a
distintos balones aforados de 50 ml.

A todos los balones adicione 5 ml de Cloruro de Hidroxilamina al 10% con el fin de

reducir el Fe+3 y llevarlo a la forma Fe+2.

Se debe preparar una solución blanco (sin solución de Fe+3).

A continuación adicione 5ml de Acetato de potasio en solución acuosa saturada en
cada uno de los 6 balones, con el propósito de llevar la solución a un pH controlado
entre 3 y 6.

Posteriormente adicione 5 ml de 1,10- Fenantrolina, en solución alcohólica al 0,1% en

todas las soluciones y afore todos los balones con agua destilada hasta 50 ml. (Deje
reposar por 10 minutos).

En otros 3 balones aforados de 50 ml proceda de la misma forma, agregando a todos

5ml de solución patrón, 5 ml de agente reductor y 5 ml de solución Boffer, pero solo
añada 3,5 ml de agente ligante en el primer balón, 2,5 ml en el segundo y 1,5 ml en el
tercer balón. Afore luego cada balón con agua destilada hasta 50 ml. (Deje reposar
por 10 minutos).

Reacciones:

4Fe+3 + 2NH2OH.HCl 4Fe+2 + N2O + H2O + 4H+ + HCl

Formacion del complejo:

Fe+2 + 3(C12H8N2 ) Fe (C12H8N2)3+3

Determine luego la longitud de onda de máxima absorbancia del complejo formado

haciendo la medición en toda la región visible. ( use una de las soluciones patrón).

Una vez determinada la longitud de onda de máxima absorbancia mida las

absorbancias de todas las muestras patrón preparadas y de la muestra desconocida.
(tome el blanco como referencia).

Con todos los datos obtenidos, calcule la constante de formación del complejo y su
respectiva absortividad molar.

Elabore tablas con los resultados obtenidos y adjunte en el informe los espectros
obtenidos en esta práctica.

4. BIBLIOGRAFIA

R.A. Day, A.L. Underwood. Quantitative Analysis.

SKOOG/WEST/HOLLER . Química Analítica.

TÍTULO DE LA PRÁCTICA

ESTUDIO ESPECTROSCOPICO DE UN INDICADOR ÁCIDO - BASE.

1. Objetivos:

- Determinar la Ka y Kb para un indicador Acido-Base.

- Determinar la Absortividad para la longitud de onda de máxima absorción.
- Hallar la absortividad del indicador en el punto Isosbéstico.

2. Materiales y Reactivos:

- Azul de Bromotimol
- NaH2PO4, K2HPO4
- NaOH
- 7 Balones de 25 ml con tapa.
- PH metro.

3. PROCEDIMIENTO:

a) Disuelva 0.1 gramo de Azul de Bromotimol en 100 ml de etanol al 20%.

b) Disuelva 2,4 gramos de NaH2PO4 en agua y diluya a 100 ml ( la solución es 0.2 M)
c) Disuelva 3,4 gramos de K2HPO4 en agua y diluya a 100 ml (la solución es 0,2 M)
d) Prepare 10 ml de una solución 3M de NaOH.
e) Prepare una serie de soluciones Boffer asi:

Marque 7 balones de 25 ml y en cada uno de ellos coloque 1ml de la solución de Azul

de Bromotimol. Adicione los siguientes volúmenes de la solución de fosfato a cada
balón. (mida cada volumen con pipetas volumétricas).
Balón Mililitros de KH2PO4 Mililitros de Na2HPO4

1 2,5 0
2 2,5 0,5
3 5,0 2,5
4 2,5 5,0
5 0,5 2,5
6 0,5 5,0
7 0,0 2,5

- Al balón numero 7 adicione 1 gota de solución 3M de NaOH.

- Diluya cada solución hasta el afore y agite fuertemente. Mida el pH de cada
solución usando un pHmetro.
- Para determinar el espectro de absorción del azul de Bromotimol a bajo pH (el
espectro de HIn ) , mida la absorbancia de la solución 1 en la región comprendida
entre (400- 600) nm, usando agua como referencia.
- Para determinar el espectro de absorción a alto pH (el espectro de In- ) mida de la
misma forma la absorbancia de la solución 7.
- Si la absorbancia leída a la longitud de onda máxima es mayor de (0.8 – 1.0 )
deben diluirse las soluciones de azul de Bromotimol.
De los espectros tomados anteriormente seleccione dos longitudes de onda y haga
las mediciones de las absorbancias de las 7 soluciones preparadas anteriormente.
- Elabore gráficas de Absorbancia Vs pH (para ambas longitudes de onda ).
- Halle la relación [ In- ] / [ Hin ] en las soluciones (2-6).
- Elabore gráficas de Log [ In- ] / [ Hin] Vs pH y obtenga el valor de pKa.
- Reporte el valor de Ka y Kb del indicador.
- Determine la absortividad a la longitud de onda máxima y en el punto isosbéstico.

4. BIBLIOGRAFIA:

R.A. Day, A.L. Underwood. Quantitative Analysis.

SKOOG/WEST/HOLLER . Química Analítica.

TÍTULO DE LA PRÁCTICA

DETERMINACION POR ESPECTROFOTOMETRIA DE LA CONCENTRACIÓN DE COBALTO

Y NIQUEL EN UNA MEZCLA

1. INTRODUCCIÓN

Frecuentemente es preciso analizar mezclas de dos o más sustancias. A veces es

posible hacerlo a través de determinaciones espectrofotométricas simultáneas, en
lugar de efectuar las separaciones físicas o químicas necesarias para analizar los
componentes puros por separado.

Se conocen varios métodos para determinar las concentraciones de sistemas con dos o
más compuestos, el más conocido requiere de establecer los picos de absorción de
cada componente y que cada uno de ellos se encuentre prácticamente libre de
absorciones de los otros compuestos, además, se debe considerar que las
absorbancias de cada uno son aditivas. Existe otro método para sistemas en los cuales
las curvas de absorción se traslapan, de manera que requieren un barrido de las dos
longitudes de onda. En este caso se debe utilizar la metodología propuesta por Blanco
et al (1989), en la cual se establece una correlación lineal que permite con base en la
pendiente y la ordenada al origen conocer las concentraciones de mezclas binarias.

En esta práctica se utilizará el primer método para casos en que las longitudes de onda
de máxima absorbancia no se traslapan. En la determinación de las concentraciones de
dos o más sustancias hay que tener cuidado, ya que los pequeños errores
experimentales se suman rápidamente. Un error de lectura de absorbancia en una
longitud de onda puede disminuir la precisión en el resultado final.

2. OBJETIVO

El alumno aplicará los conocimientos sobre la espectrofotometría para la

cuantificación de una mezcla de dos compuestos.

3. MATERIALES Y REACTIVOS

Espectrofotómetro

Celdas UV-Vis

2 matraces aforados 100 ml

2 matraces volumétricos de 25 ml
2 vasos de precipitados de 100 ml

2 pipetas graduadas de 5 ml

Vidrio de reloj

Agitador de vidrio

Balanza analítica

Espátula

Agua destilada

Co(NO3)2.6H2O y Ni(NO3)3.6H2O

4. PROCEDIMIENTO

1. Preparar las siguientes disoluciones

A) 100 ml de Co(NO3)2.6H2O 0,09 M
B) 100 ml de Ni(NO3)3.6H2O 0.09 M
2. Verificar que las longitudes de onda de máxima absorción no se sobrepongan.
El Ni(NO3)3.6H2O tiene un máximo de absorción en 395 nm y el Co(NO3)2.6H2O
en 510 nm.
3. Medir la absorbancia del nitrato de cobalto y del nitrato de niquel en 510 y 395
nm
4. Medir la absorbancia de una mezcla problema en 510 y 395 nm.

5. TRATAMIENTO DE DATOS EXPERIMENTALES

- Realice varias determinaciones de la absorbancia y tome el promedio

- Con estos datos calcule los coeficientes de extinción molar de los dos iones en
las dos diferentes longitudes de onda
- Calcule la concentración molar de cada componente. Para obtener mejores
resultados efectúe los cálculos conservando tres cifras después del punto
decimal. Reporte los resultados en molaridad y en mg de Ni/ml y mg de Co/ml.
TÍTULO DE LA PRÁCTICA

ANÁLISIS DE ÁCIDOS GRASOS POR CROMATOGRAFÍA DE GASES (GC-FID)

1. OBJETIVO

Aislar y cuantificar los ácidos grasos presentes en una muestra problema

2. MATERIALES Y REACTIVOS

Cromatografo de gases SHIMADZU GC-17-A

Gas portador: He 1 ml/min

Patrón de FAME

Solución H2SO4 / MeOH 5% v/v

Sulfato de sodio anhidro

Hexano

Columna: Supelcowax 30m x 0.25 mm x 0.25 m

Detector FID: 280°C

Temperatura del inyector: 250°C, split: 20:1

Micropipeta

3. PROCEDIMIENTO

Debido a la baja volatilidad los ácidos grasos, una vez aislados de deben derivatizar, en
esta práctica se van a obtener los ésteres metílicos de los respectivos ácidos grasos. El
procedimiento para la esterificación de los ácidos es el siguiente: la muestra (0.2 g) se
disuelve en 20 ml de éter etilico o hexano y la mezcla se concentra sometiéndola a
50°C (baño maria) hasta un volumen de 2-3 ml, posteriormente se adicionan 10 ml de
de agente derivatizante (solución de H2SO4 / metanol 5% v/v). La mezcla se somete
luego a reflujo por dos horas a 70°C. Después de las dos horas se adiciona agua
destilada y se separan las dos fases formadas empleando éter etílico como solvente. Al
extracto orgánico se le adiciona sulfato de sodio anhidro con el fin de retirar el agua.
Tomar 1 l de este extracto e inyectarlo al cromatógrafo de gases bajo las condiciones
ilustradas a continuación.

240°C

30°C/min

130°C

15°C/min

40°C
TÍTULO DE LA PRÁCTICA

APLICACIÓN DE LA CROMATOGRAFÍA DE GASES AL ANÁLISIS CUALITATIVO Y

CUANTITATIVO DE UNA MEZCLA DE COMPUESTOS ORGÁNICOS

1. REACTIVOS

- metanol puro
- fenol (solución 15 g/L)
- tolueno
- ciclohexano
- solución problema

2. PROCEDIMIENTO

ANÁLISIS CUALITIVO

Prepare las siguientes muestras como se indican:

(1) 1ml de metanol puro tomado con una pipeta de 1 ml y 15 gotas de la disolución
madre de fenol (15 g/l en metanol) tomadas con una pipeta Pasteur.

(2) 1 ml de metanol tomado con una pipeta de 1 ml y 1 gota de tolueno, añadida con
una pipeta Pasteur.

(3) 2 ml de metanol tomados con una pipeta de 2 ml y 1 gota de ciclohexano, añadida

con una pipeta Pasteur.

(4) 2 gotas de la mezcla problema y 1 ml de metanol.

A continuación se introduce 1 μl de cada vial en el cromatógrafo de gases, lo cual

permitirá identificar los componentes presentes en la muestra problema. Obtener los
cromatogramas a 60 y 70 ºC.

CUANTIFICACIÓN

Posteriormente intente cuantificar el tolueno presente en una nueva muestra

problema, para lo que se realizará una recta de calibrado a partir de las siguientes
disoluciones patrón:
a) A 1 ml de disolución madre de tolueno, tomado con una pipeta de 1 ml, se le
añaden 5 ml de disolución madre de ciclohexano, tomados con una pipeta de 5 ml, y el
conjunto se enrasa en matraz aforado de 25 ml por adición de metanol.

b) El mismo procedimiento, pero empleando 2 ml de tolueno en lugar de 1 ml,

añadidos con una pipeta de 2 ml.

c) Igual pero empleando 5 ml de tolueno, tomados con una pipeta de 5 ml.

d) Por último, tomando 10 ml de tolueno con una pipeta de 10 ml y siguiendo el mismo

modelo.

La muestra problema fue preparada por otro grupo de estudiantes, colocando una
cantidad hasta ahora desconocida de tolueno en un matraz aforado de 25 ml, a la que
se añadieron 5 ml de disolución madre de ciclohexano, enrasando hasta el aforo por
adición de metanol.

El siguiente paso consiste en obtener los cromatogramas de los patrones y la muestra,

para lo que inyectamos 1 μl de cada disolución en el cromatógrafo.

a) Anotar los tiempos de retención para cada uno de los picos cromatográficos
separados cuando la temperatura de la columna es 60°C.
b) Anotar los tiempos de retención para cada uno de los picos cromatográficos
separados cuando la temperatura de la columna es 70°C.
c) ¿Qué ocurre con los tiempos de retención cuando la temperatura pasa de 60°C
a 70°C? ¿Qué ocurre con los anchos de los picos?
d) ¿Cuál de las dos temperaturas considera que es más adecuada para realizar la
separación? ¿Por qué?
e) Buscar los puntos de ebullición de cada uno de los componentes de la mezcla
problema y del disolvente. Basándote en ellos, proponga el orden de elución de
dichos compuestos, teniendo en cuenta que la columna cromatográfica es
apolar.
f) A partir de los tiempos de retención obtenidos para los picos del metanol,
tolueno, fenol y ciclohexano, identifica dichos compuestos en el cromatograma
de la mezcla problema.
g) Calcula la relación de áreas para el tolueno y el estándar interno (ciclohexano)
para cada una de las disoluciones patrón de tolueno.
h) Represente la relación de áreas frente a la concentración de tolueno en cada
una de las disoluciones patrón, obteniendo la ecuación de la curva de calibrado
por el método de mínimos cuadrados.
i) A partir de la relación de áreas calculada para la muestra problema preparada
por el otro grupo de estudiantes, calcule la concentración de tolueno en la
misma.