DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO PARA L.

MONOCYTOGENES

Caso clínico: Un hato Cebú de 125 animales, al ser expuestas a una hembra a la cual no se le realizó ningún trato
específico (como cuarentena), a los 2 meses comenzaron a presentar abortos repentinos y 2 de ellas
presentaron un cuadro clínico nervioso (salivación profusa, tortícolis, estrabismo, marcha compulsiva en
círculos, incoordinación y presión de la cabeza contra objetos) culminando con la muerte de estos 2 ejemplares.

Diagnóstico presuntivo: El cuadro clínico nervioso que ambas vacas presentaron fueron debido a la presencia de
la bacteria L. monocytogenes en su SNC (también conocida como listeriosis nerviosa).

Para poder confirmar nuestro diagnóstico presuntivo se realizó un diagnóstico de laboratorio en las muestras
que se obtuvieron de ambos animales. A continuación, se detallan los pasos que se siguieron para determinar
dicho diagnóstico.

Diagnóstico de laboratorio:

1. Toma de muestra

Todos los diagnósticos de laboratorio comienzan con la toma de muestra. Al ser una sospecha de L.
monocytogenes en el Sistema Nervioso Central (forma neural) se envían al laboratorio muestras del fluido
espinal, tronco encefálico y varios sitios en el bulbo raquídeo. Estas muestras se obtienen durante la necropsia
de ambos ejemplares y deben conservarse a 4 ° C durante un máximo de 48h en el caso de no ser procesadas
inmediatamente.

2. Microscopia directa

Para el estudio histopatológico, las muestras de tejido cerebral fijo deben colocarse en formalina al 10%.
Muchas veces este estudio puede dar un diagnóstico presuntivo de listeriosis neural debido a las lesiones
características.

3. Aislamiento

Las muestras se inoculan en agar tripticasa de soya con 5% de sangre de oveja o buey. También se puede utilizar
una placa de agar MacConkey para detectar cualquier otro patógeno Gramnegativo o contaminantes, aunque
este no es indispensable.

Se realiza un procedimiento de “enriquecimiento en frío” para el aislamiento de las muestras. Este

procedimiento es importante porque selecciona L. monocytogenes debido a que es uno de los pocos patógenos
que son capaces de crecer en temperatura refrigerador. Se basa en homogeneizar pequeños trozos de médula
espinal y realizar una suspensión de 10% en un caldo nutritivo, los cuales se incuban durante 24h en aerobiosis a
30 ° C en estufa.

A veces se realiza una segunda ronda de enriquecimiento y a esto se le conoce como el “procedimiento de
enriquecimiento en dos etapas”. Las placas se incuban por segunda vez y se coloca una alícuota de caldo de
enriquecimiento secundario (FRASER siendo el más común) en un agar selectivo (Oxford Modificado el más
viable). Finalmente, a las 24 y 48 horas se inspeccionan para detectar si hubo crecimiento bacteriano.
4. Características coloniales

Forman colonias de 1 a 2 mm de diámetro, transparentes con bordes lisos que aparecen en el agar de sangre
después de 24 horas, adquiriendo un color blanco grisáceo y un diámetro de 0.5–2.0 mm después de uno o dos
días a 35 ° C. Si existen pequeñas colonias betahemolíticas a las 24 horas en agar de sangre de oveja o buey,
entonces se puede confirmar que se trata de L. monocytogenes.

5. Apariencia microscópica

Se observan medianas, no ramificadas, bacilos Gram positivos cortos, las cuales no forman esporas y no son
ácidas. Miden alrededor de 0.1–0.5 μm de diámetro por 0.5-2.0 μm de longitud. En cultivos o tejidos animales
las células aparecen cocales.

6. Características bioquímicas

Todas las especies de Listeria hidrolizan la a esculina en caldos de esculina en unas pocas horas. Pero sólo L.
monocytogenes muestra la característica "motilidad de volteo" cuando un cultivo de caldo de 2 a 4 horas, que ha
sido incubado a 25 ° C, se examina mediante el método de la gota colgante. Esta motilidad se visualiza como un
movimiento de extremo a extremo de las células individuales con períodos de inactividad. A 35°C éstas dejan de
ser móviles.

7. Identificación

A las colonias con características morfológicas similares a las colonias de Listeria se les realizan diferentes
pruebas para comprobar que es L. monocytogenes, ya que, se debe establecer el diagnóstico diferencial con
respecto a los otros tipos de Listeria, o diferentes patógenos, que puedan tener características similares. Estas
pruebas son: Catalasa (+), Glucosa (+), Manitol (-), Movilidad (+), Pruebas de CAMP (+, con excepciones) y
Oxidasas (-).

Si luego de seguir todos los pasos del diagnóstico de laboratorio correctamente, la bacteria en estudio cumple
con todas las pruebas y características mencionadas anteriormente (Tabla 1), entonces se puede confirmar la
presencia de L. monocytogenes neural en las muestras.

Diagnóstico de certeza: Al finalizar el diagnóstico de laboratorio, la bacteria encontrada en las muestras de

tejido cerebral de ambas vacas cumplió con las pruebas y características de L. monocytogenes neural, lo que
indica que ambas ejemplares estuvieron expuestas a la bacteria. Esto explica los síntomas de infección del SNC
que presentaron.
 PRUEBAS ÁCIDOS OBTENIDOS DE INCUBACIÓN FORMA DE TINCIÓN DE CALDO DE
AERÓBICA DE 7 DÍAS A 35°C CRECIMIENTO GRAM ESCULINA
Beta- Pruebas de CAMP Ribosa L-Ramnosa Manitol D-Xilosa En forma de Bastoncillos Hidroliza la
hemólisis paraguas debajo Gram positivos esculina y
de la superficie que tienden a muestra la
S. aureus R. equi
en medios de mostrar muchas característica de
motilidad formas cocales. “motilidad de
semisólidos. (Imagen 3) volteo” cuando
+ + V - + - - (Imagen 1) se examina
mediante el
método de gota
colgante.
Donde: + = 90% o más de cepas positivas,Anexos
- = 90% o más de cepas negativas, V = variable

Tabla 1. Tabla para identificación de L. monocytogenes.