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Fitoquímica 70 (2009) 1504–1510

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fitoquimica
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Lipoxigenasas - Estructura y mecanismo de reacción.

Alexandra Andreou, Ivo Feussner *
Universidad Georg-August, Instituto Albrecht-von-Haller de Ciencias Vegetales, Departamento de Bioquímica Vegetal, D-37077 Göttingen, Alemania

información del artículo resumen

Historial del artículo:
La oxidación de lípidos es una reacción metabólica común en todos los sistemas biológicos, que aparece en el desarrollo
Recibido el 5 de marzo de 2009
procesos regulados y como respuesta a estreses abióticos y bióticos. Productos derivados de la oxidación lipídica
Recibido en forma revisada el 13 de mayo de 2009
Los procesos se denominan colectivamente oxilipinas. La oxidación lipídica inicial puede ocurrir por reacciones químicas
Disponible en línea el 18 de septiembre de 2009
o se deriva de la acción de enzimas. En las plantas esta reacción es catalizada principalmente por la lipoxigenasa
(LOX) enzimas y durante los últimos años el análisis de diferentes plantas LOX reveló información sobre su
Palabras clave:
mecanismo enzimático. Esta revisión tiene como objetivo brindar una descripción general de los conceptos que explican el
Dioxigenasas
mecanismo catalítico de las LOX, así como las diferentes especificidades regionales y estereoscópicas de estas enzimas.
Peroxidación de ácidos grasos
Peroxidación lipídica 2009 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
octadecanoides

Dioxigenación estereo y regio-específica

Especificidad del sustrato

Contenido

1. Introducción 2. .................................................... .................................................... .... 1504

Enzimas LOX. . . . . . . . . . . . . . . .................................................... ...................................... 1504
2.1. Regio-especificidad. .................................................... ............................................ 1505
2.2. Estereoespecificidad. .................................................... ............................................ 1509
3. Perspectivas ............................................... .................................................... ....... 1509
Agradecimientos . . . . . . . . . . .................................................... ...................................... 1509
Referencias . .................................................... .................................................... .... 1509

1. Introducción oxilipinas denominadas selectivamente y las vías metabólicas involucradas

Los ácidos grasos, los principales bloques de construcción de los lípidos, son los
principales componentes de las membranas y los lípidos de almacenamiento. Aparte de la facturaciónsu formación, así como su función fisiológica
de ácidos grasos dentro de los lípidos y su uso como carbono y energía
fuente, la oxidación de ácidos grasos insaturados es una reacción importante en
metabolismo de los lípidos (Feussner y Wasternack, 2002). La formación
de hidroperóxidos de ácidos grasos puede ocurrir ya sea por oxidación química o
por la acción de enzimas como la lipoxigenasa (LOX) (And reou et al., 2009b;
Mosblech et al., 2009). Los metabolitos que
derivan de la oxidación de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) a través de
un paso catalizado por LOX, así como aquellos metabolitos que se derivan de
reacciones de oxidación alternativas y reacciones posteriores son col
en la formación de oxilipina se denominan colectivamente vía de la oxilipina. En
una serie de revisiones de la diversidad de oxilipinas, las enzimas implicadas en
en no mamíferos se ha resumido (es decir, Andreou et al.,
2009b; Blée, 2002; Gerwick et al., 1999; Howe y Jander, 2008;
Liavonchanka y Feussner, 2006; Mosblech et al., 2009; Oliva,
2002; Pohnert, 2005; Schneider et al., 2007b; Stumpe y Feussner, 2006;
Tsitsigiannis y Keller, 2007; Wastenack, 2007). Las secuencias recientes del
genoma arrojan nueva luz sobre la estructura y
mecanismo de reacción de las LOX. En consecuencia, nuestro conocimiento sobre
LOXs en un número cada vez mayor de organismos se ha comprobado
y aquí se revisan nuevos aspectos.

2. enzimas LOX
Abreviaturas: HPODE, ácido hidroperoxi octadecadienoico; LA, ácido linoleico; SALMÓN AHUMADO,
lipoxigenasa; PUFA, ácido graso poliinsaturado.
* Autor correspondiente. Tel.: +49 551 395743; fax: +49 551 395749.
Las LOX son una familia de dioxigenasas que contienen hierro no hemo.
Dirección de correo electrónico: ifeussn@unigoettingen.de (I. Feussner). (Brash, 1999; Schneider et al., 2007b). Catalizan la inserción.

0031-9422/$ - consulte el material preliminar 2009 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
doi:10.1016/j.phytochem.2009.05.008
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A. Andreou, I. Feussner / Fitoquímica 70 (2009) 1504–1510
de oxígeno molecular en PUFA que contienen uno o más (1Z, 4Z)-
fracciones de pentadieno para producir los correspondientes (1S,2E,4Z)-hidroperóxidos
(Liavonchanka y Feussner, 2006). Las LOX se encuentran de manera ubicua en
plantas y mamíferos, y solo recientemente se han identificado.
detectado en coral, musgo, hongos y una serie de bacterias también
(Andreou et al., 2009b; Oliw, 2002). Los hidroperóxidos de ácidos grasos derivados
de LOX se pueden metabolizar aún más en aldehídos volátiles y
jasmonatos en plantas (Mosblech et al., 2009), en dioles y lactonas
en hongos (Tsitsigiannis y Keller, 2007) y en lipoxinas y leucotrienos en mamíferos
(Samuelsson et al., 1987; Sigal et al., 1994).
Estas moléculas juegan un papel importante como señales en la cicatrización de
heridas y procesos de defensa en las plantas, mientras que en los mamíferos están
involucradas en la inflamación, el asma y las enfermedades del corazón. En los hongos, ellosmembrana de la envoltura del cloroplasto; IMS, espacio intermembrana. Esquema
desempeñar un papel en la regulación de la producción de micotoxinas y de la sexual
y ciclo de vida asexual (Tsitsigiannis y Keller, 2007). Nada es
conocido hasta ahora acerca de la función biológica de estas enzimas en
procariotas
Las LOX vegetales son proteínas monoméricas de alrededor de 95–100 kDa que
consta de dos dominios. El dominio amino-terminal de aproximadamente
25–30 kDa es un dominio de barril b que está estructuralmente relacionado con los
llamados dominios C2 (Corbin et al., 2007). Su función exacta aún se desconoce,
pero se ha identificado una implicación en la unión a la membrana o al sustrato.
discutido (May et al., 2000; Tatulian et al., 1998). El dominio car boxy-terminal de
aproximadamente 55–65 kDa consiste principalmente en
a-hélices y alberga el sitio catalítico de la enzima (Schneider
et al., 2007b). Las enzimas LOX contienen un átomo de hierro por molécula de
proteína. Además, se han descrito LOX procedentes de hongos
que albergan un átomo de manganeso en su lugar, en el sitio activo (Andreou
et al., 2009b; Oliw, 2002). El metal del sitio activo del hierro es un no hemo.
hierro que está coordinado octaédricamente por 5 lados de cinco aminoácidos
cadenas y un ligando de agua o hidróxido (Fig. 1). En caso de planta
LOX estos residuos son siempre tres histidinas, una asparagina
y el grupo carboxi de la isoleucina carboxi-terminal. Sin embargo, en las LOX de
mamíferos, el hierro está coordinado por cuatro histidinas
y de nuevo la isoleucina carboxi-terminal. Las LOX son catalizadores versátiles,
porque son enzimas multifuncionales que catalizan a
menos tres reacciones diferentes: (i) oxigenación de sustratos (reacción de diox
ygenasa), (ii) conversión secundaria de hidroperoxi lípidos
(reacción de hidroperoxidasa), y (iii) formación de epoxi leucotrienos (reacción de
leucotrieno sintasa). Sin embargo, bajo condiciones fisiológicas, la primera reacción
es más frecuente en las plantas.
(Liavonchanka y Feussner, 2006).
2.1. Regio-especificidad
Durante años, las LOX se han clasificado según su pH óptimo. Los que tenían un
pH alcalino óptimo fueron designados como
tipo 1-LOX, mientras que las isoformas tipo 2-LOX tienen un pH óptimo
alrededor de pH neutro (Siedow, 1991). Durante los últimos años, sin embargo,
Las LOX de las plantas se clasifican de dos maneras alternativas: (i) según
Fig. 1. Esfera de coordinación del sitio activo de las LOX de la planta. La figura muestra el
sitio activo de soja LOX2 y fue adaptado de http://metallo.scripps.edu/
PROMESA/2SBL.html.
1505
Figura 2. Localización intracelular de las reacciones de la vía LOX. OM/IM, exterior e interior
modificado según Froehlich et al. (2001).
su localización subcelular: enzimas extraplastidiales que albergan
sin péptido de tránsito y con una alta similitud de secuencia (> 75%)
a otro. Se designan nuevamente como tipo 1-LOX. (ii) LOX plasmáticos que portan
una secuencia peptídica de tránsito de cloroplasto. Estas
las enzimas muestran solo una similitud de secuencia general moderada (> 35%)
entre sí y se han clasificado como tipo 2-LOX (Shibata
et al., 1994). Estas últimas formas LOX pertenecen todas hasta la fecha a la subfamilia
de 13-LOX (Fig. 2). Además, hay que subrayar que
en el caso de las LOX de tipo 1, solo se han encontrado de forma ubicua 9-LOX
hasta aquí.
Una segunda forma de clasificar las LOX de las plantas es con respecto a su
especificidad posicional de oxigenación de ácidos grasos contra el ácido linoleico.
(LA). Con LA como sustrato se puede introducir oxígeno molecular
ya sea en el átomo de carbono 9 (9-LOX) o en el átomo de carbono 13 (13-LOX)
de la columna vertebral de hidrocarburos, lo que conduce a la formación de 9-
hidroperoxi y 13-hidroperoxi derivados de LA (9- y 13-
HPODE), respectivamente (Liavonchanka y Feussner, 2006) (Fig. 3).
Los dos regioisómeros diferentes de los ácidos grasos hidroperoxi pueden resultar de
dos propiedades independientes de la catálisis (Hamberg y
Samuelson, 1967). (i) Eliminación estereoselectiva de hidrógeno. Para
plantas una serie de estudios han demostrado que en C-18 PUFA esto es
casi solo es posible en C-11 (Feussner y Kühn, 2000). (ii) Selectividad del sitio de
inserción de oxígeno antarafacial a través de reordenamiento
del radical ácido graso intermedio. En consecuencia, cuando se extrae hidrógeno en
C-11, se puede introducir oxígeno molecular en
posición [+2] o [2] que conduce a la inserción de dioxígeno en C-13 o C 9. En los
mamíferos, las LOX se clasifican de manera similar según su
especificidad posicional de la oxigenación del ácido araquidónico, que puede
tener lugar en las posiciones C-5 (5-LOX), C-8 (8-LOX), C-9 (9-
LOX), C-11 (11-LOX), C-12 (12-LOX) o C-15 (15-LOX) (Schneider
et al., 2007b). Además de la alta especificidad regional, la inserción de
el oxígeno exhibe también una alta estereoespecificidad dependiente de la secuencia
primaria de la enzima, que se prevé que determine
la orientación y la profundidad de penetración del sustrato en el activo
sitio (Feussner y Kühn, 2000; Schneider et al., 2007b). Sin embargo,
cabe recalcar que hasta el momento no existe un concepto unificador
explicando la base estructural para la región-especificidad de todas las plantas
LOX. Este es incluso el caso de las LOX que no tienen especificidad regional o dual.
Pertenecen principalmente al grupo de 13-LOX citosólicas de leguminosas y
solanáceas (ie, Hughes et al., 2001a,b). Además,
existen LOX que muestran una alta especificidad de producto contra C-18
PUFA mientras que no tienen o tienen una especificidad diferente contra los AG PU
C-20 y viceversa (Andreou et al., 2009a; Feussner y Kühn,
1995).
Durante la última década, se han identificado una serie de aminoácidos críticos.
identificado en el sitio activo de isoenzimas LOX seleccionadas, que influyen en la
especificidad regional de este grupo de enzimas (Liavonchanka
y Feussner, 2006; Schneider et al., 2007b). Además, la llamada hipótesis de
orientación del sustrato puede ser el modelo preferido para explicar la especificidad
regional de las LOX de las plantas, ya que el hidrógeno es
solo se extrae en C-11 en el caso de todos los sustratos C-18 disponibles
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1506 A. Andreou, I. Feussner / Fitoquímica 70 (2009) 1504–1510

Fig. 3. La reacción LOX y la regioespecificidad del mecanismo de reacción.

Fig. 4. Comparación de los dos modelos diferentes de alineación de sustrato que explican la especificidad posicional de las LOX. Modelo relacionado con el espacio: alineación recta del sustrato en el
sitio activo de LOX para ambos isómeros posicionales. Modelo dependiente de la orientación: orientación de sustrato directa e inversa en el sitio activo de LOX para los dos diferentes
isómeros posicionales.

tabla 1
Alineación de residuos de aminoácidos que determinan la especificidad posicional en LOX de plantas.

Enzima Número de acceso Posición de los residuos de aminoácidos Residuos de aminoácidos

9-LOX
Solanum tuberosum LOX P37831 575/576 Thr/Val
Arabidopsis thaliana LOX1 Q06327 576/577 Thr/Val
Hordeum vulgare LOXA L35931 574/575 Thr/Val
Cucumis sativus LOX CAB83038 594/595 Thr/Val
Solanum lycopersicum LOXA AAA53184 578/579 Thr/Val

13-LOX
Glicina max LOX1 P08170 556/557 Thr/Phe
Oryza sativa LOX1 BAA03102 678/679 ser/fe
Arabidopsis thaliana LOX4 CAC1964 642/643 Cis/Phe
Physcomitrella patens LOX CAE47464 654/655 Su/Phe
Mormordica charantia AM930395 598/599 Jue/Gln
Nicotiana atenuada LOX3 AAP83138 629/630 Cis/Phe
Solanum tuberosum H3 CAA65269 631/632 Cis/Phe
Solanum tuberosum H1 CAA65268 614/615 ser/fe
Solanum lycopersicum LOXC AAB65766 611/612 ser/fe
Solanum lycopersicum LOXD AAB65767 625/626 Cis/Phe
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A. Andreou, I. Feussner / Fitoquímica 70 (2009) 1504–1510 1507

Fig. 5. La reacción LOX y la estereoquímica del mecanismo de reacción.

(Liavonchanka y Feussner, 2006). De acuerdo con este modelo, un ácido tom del bolsillo del sustrato. Este grupo guanidino puede entonces ser capaz
graso sustrato puede penetrar en el sitio activo con su extremo metilo por de formar un puente salino con el grupo carboxílico del sustrato, favoreciendo
delante, lo que lleva a la lipoxigenación del linoleato 13 (Fig. 4, panel superior). una orientación inversa del sustrato de cabeza a cola (Hornung et al., 1999).
Alternativamente, el sustrato puede ingresar al sitio activo en una orientación Este papel especial de este residuo de arginina también puede estar
inversa de "cabeza a cola" y la 9-lipoxigenación del linoleato se vuelve respaldado por el hecho de que está altamente conservado en las LOX de las
plausible (Gardner, 1989) (Fig. 4, panel inferior). plantas. En conjunto, el espacio dentro del sitio activo y la orientación del
Al principio, los conceptos que explican esta regioespecificidad de la sustrato son determinantes importantes para la especificidad posicional de las
reacción LOX se desarrollaron sobre la base del análisis de la estereoquímica LOX de las plantas y se modifican por factores adicionales como la
de la extracción de hidrógeno y la inserción de oxígeno (Egmond et al., 1972; concentración del sustrato (Kühn et al., 1990), la estado químico del sustrato
Gardner, 1989; Veldink et al., 1972). Posteriormente, se utilizaron datos (Began et al., 1999), pH (Gardner, 1989) o temperatura (Georgalaki et al.,
estructurales y modelos de interacción enzima sustrato (Browner et al., 1998). 1998). Recientemente, el modelo dependiente de la orientación se ha aplicado
En el caso de las LOX de plantas, primero se corroboraron mediante modelado para analizar nuevamente la orientación del sustrato para LOX1 de la soja
estructural y datos de mutagénesis dirigida al sitio para el cuerpo lipídico 13- (Ruddat et al., 2004). Aunque la enzima es una 13-LOX a pH alcalino, el
LOX del pepino (Hornung et al., 1999). En la parte inferior del bolsillo de unión sustrato parece unirse en una orientación inversa con su grupo carboxilato
al sustrato, se identificó un residuo de histidina o fenilalanina que llena el dentro del sitio activo.
espacio, que ocurre en casi todas las 13-LOX de plantas (Tabla 1), pero Además, se proporciona evidencia de que el grupo carboxilato forma un
Sloane et al. lo identificaron por primera vez para la LOX de reticulocitos de puente salino con la arginina 707 que se identificó por primera vez en el
humanos . (1991). Por el contrario, para todas las 9-LOX de plantas se cuerpo lipídico LOX (Hornung et al., 1999). Además, una isoforma de LOX de
identificó un pequeño residuo de valina en esta posición de aminoácido (Hornung etlas al.,semillas
1999). de Mormordica charantia que lleva una glutamina en la posición
En el cuerpo lipídico 13-LOX, esta histidina en el bolsillo de unión al sustrato donde otras LOX de plantas albergan residuos de histidina/fenilalanina
se identificó como el principal determinante de la especificidad posicional y su (linoleato 13-LOX) o valina (linoleato 9-LOX) (Hornung et al., 2008 ) clonado y
reemplazo por residuos que llenan menos espacio, como la valina o la caracterizado. Al analizar la selectividad de reacción de esta enzima, resultó
metionina, alteró la especificidad posicional de un linoleato 13- LOX en un 9- que presenta una especificidad posicional variable de la oxigenación de LA
LOX. El modelado estructural de la interacción enzima/sustrato sugirió que según el pH de la mezcla de reacción. Por debajo de pH 7,5, la enzima mostró
esta mutación puede desenmascarar un grupo guanidino cargado positivamente actividad 9-LOX, mientras que a pH más alto la actividad 13-LOX fue dominante.
de un residuo de arginina en el bot

Fig. 6. Modelo de sitio activo para estereoespecificidad de la reacción LOX aplicando el modelo de orientación inversa del sustrato. En el caso de una orientación de cola primero en el sitio activo
y la reacción comienza con una abstracción de D-hidrógeno. Para las S-LOX, el ataque de oxígeno tiene lugar en el otro lado de la molécula, porque el voluminoso residuo de Ala en el "sitio Coffa"
permite la inserción de oxígeno en el C-9 del ácido graso. Si el Ala se reemplaza por un Gly menos voluminoso, la unión del sustrato tiene lugar en la misma orientación, pero el oxígeno ataca y
da como resultado la oxigenación C-13 "R" y viceversa.
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1508 A. Andreou, I. Feussner / Fitoquímica 70 (2009) 1504–1510

Fig. 7. Análisis filogenético de proteínas LOX de plantas, mamíferos, musgos, corales, algas y cianobacterias. Los círculos indican la agrupación de las enzimas en
subcategorías. El análisis se realizó con Phylip3.5 (Departamento de Ciencias del Genoma, Universidad de Washington) (Felsenstein y Churchill, 1996) utilizando por defecto
parámetros En resumen, las alineaciones se calcularon con ClustalX y el análisis se realizó con Phylip3.5 utilizando un conjunto de datos de 100 bootstrap. El árbol fue construido con
Vista de árbol. Las proteínas mencionadas en el árbol se refieren a los números de acceso correspondientes en el banco de genes. Para aclaración dentro del árbol solo secuencias de distintos
Se han incluido especies de plantas y se les ha renombrado parcialmente según Shibata et al. (1994). Arabidopsis thaliana: LOX1:At:1 (AtLOX1, Q06327), LOX2:At:1 (AtLOX2,
P38418), LOX2:At:2 (AtLOX3, AAF79461), LOX2:At:3 (AtLOX4, CAC19364), LOX1:At:2 (AtLOX5, CAC19365), LOX2:At:4 (AtLOX6, CAG38328); Glicina máx.: LOX1:Gm:1
(soja LOX1, AAA33986), LOX1:Gm:2 (soja LOX2, AAA33987), LOX1:Gm:3 (soja LOX3, CAA31664), LOX1:Gm:4 (soja vlxa, BAA03101), LOX1:Gm:5 (soja
vlxb, AAB67732), LOX1:Gm:6 (soja vlxc, AAA96817), LOX1:Gm:7 (soja vlxd, S13381); Solanum lycopersicum: LOX1:Le:1 (tom-LOXA, P38415), LOX1:Le:2 (tomLOXB,
P38416), LOX1:Le:3 (tomLOXE, AAG21691), LOX2:Le:1 (tomLOXC, AAB65766), LOX2:Le:2 (tomLOXD, AAB65767); Nicotiana tabacum: LOX1:Nt:1 (NtLOX, S57964); Nicotiana
atenuada: LOX2:Na:2 (NaLOX3, AAP83138); Pisum sativum: LOX1:Ps:1 (AAB71759), LOX1:Ps:2 (CAA55318), LOX1:Ps:3 (CAA55319); Solanum tuberosum: LOX1:St:1
(SOLTULOX1, S44940), LOX1:St:2 (STLOX, AAD09202), LOX1:St:3 (StLOX1, P37831), LOX1:St:4 (CAA64766), LOX1:St:5 (CAA64765), LOX1:St: 6 (POTLX-2, AAB67860),
LOX2:St:1 (StLOXH1, CAA65268), LOX2:St:2 (St-LOXH3, CAA65269); Lens culinaris: LOX1:Lc:1: (LLOX, CAA50483); Mus musculus: mm 5-LOX (AAC37673), mm 8-LOX
(CAA75003), Mm 12R-LOX (CAA74714), Mm p12-LOX (AAA20659), Mm e12-LOX (CAA67625.1), Mm l12-LOX (AAA20658); Physcomitrella patens (PpLOX1, CAE47464);
Porphyra purpúrea (LOX Ppu1, AAA61791); Pseudomonas aeruginosa (Q8RNT4); Nitrosomonas europaea (NP_841292); Shewanella denitrificans OS-217 (YP_562687);
Photobacterium profundum 3TCK (ZP_01218321); Myxococcus xanthus (YP_629995); Nostoc punctiforme: NpLOX1 (ZP_00106490), NpLOX2 (ZP_00107030); Nostoc sp.
(NP_478445); Plexaura homomalla: Ph 8R-LOX (O16025); Acariocloris marina: AmFP (YP_001516910); Ostreococcus lucimarinus (ABO97194.1); Cyanothece sp.: CspLOX1
(ZP_02940504), CspLOX2 (ZP_03142690); Synechococcus sp.: SspLOX (EDX83314).

Además, debe tenerse en cuenta que durante mucho tiempo se ha varias configuraciones favorecidas termodinámicamente pero sólo
considerado que las LOX oxigenan principalmente los PUFA libres, pero uno de estos confórmeros puede constituir la conformación catalíticamente
varios estudios ahora proporcionan evidencia de que al menos ciertas LOX productiva. Hasta el momento casi no hay datos experimentales
oxigenar también sustratos de ácidos grasos esterificados, como fosfolípidos caracterizar el grado de flexibilidad de movimiento de los sustratos
o galactolípidos (Brash, 1999; Maccarrone et al., 1994; o sus intermedios de reacción, cuando se unen en el sitio activo de
Murray y Brash, 1988; Perez-Gilabert et al., 1998), triacilgliceroles (Feussner la enzima La dispersión de rayos X de ángulo pequeño sugirió una mayor
et al., 1997, 1998; Fuller et al., 2001; Gerhardt grado de flexibilidad de movimiento de la enzima de conejo en comparación
et al., 2005; Holtman et al., 1997) o ésteres de colesterol (Belkner con la LOX1 de soja (Dainese et al., 2005; Hammel
et al., 1991, 1998). Todos estos estudios tomados en conjunto sugieren que et al., 2004). Tiempo de vida de fluorescencia comparativa más reciente
la alineación de ácidos grasos en el sitio activo parece ser crucial las mediciones de las dos enzimas confirmaron estos hallazgos
para la comprensión de la regioquímica. Sin embargo, la mayoría de los y también proporcionó evidencia que sugería un mayor grado de
conceptos no consideran el hecho de que esta alineación es una dinámica. flexibilidad de movimiento del sustrato dentro del sitio activo (Mei
proceso, los sustratos de ácidos grasos son moléculas flexibles y las et al., 2008). Para la interpretación de futuros experimentos dinámicos.
simulaciones de dinámica molecular son necesarias para visualizar este alto características de la interacción proteína sustrato deben ser cada vez más
grado de flexibilidad de movimiento. Los sustratos de ácidos grasos pueden adoptarconsiderado.
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2.2. Stereo-especificidad
Si bien la regioespecificidad de las LOX ha sido el foco de varios estudios,
publicaciones recientes tratan sobre el mecanismo de control de la
estereoespecificidad de la reacción LOX. En la Fig. 5 se muestra una descripción
general de los cuatro posibles isómeros y enantiómeros en caso de que LA sea
el sustrato . Curiosamente, solo un único aminoácido conservado en el sitio
activo de la enzima parece estar involucrado en esta parte de la reacción . en
todas las LOX analizadas hasta ahora (Coffa et al., 2005).
Se informa que el llamado “sitio Coffa” es un residuo de alanina conservado en
las LOX específicas de S y una glicina en todas las LOX de R. Los estudios
mutacionales que convierten la glicina en alanina en enzimas de esta última
categoría lograron cambiar parcialmente la posición de oxigenación y quiralidad
del producto, convirtiendo así una enzima 13S- en una 9R-LOX (Coffa et al.,
2005). Esto puede explicarse nuevamente por el modelo de orientación inversa
del sustrato como se muestra en la Fig. 6 y la suposición de que en todas las
variantes enzimáticas el oxígeno se introduce desde el mismo lado. En el caso
de las enzimas 13S- y 9R-LOX, el sustrato penetra en el bolsillo de unión del
sustrato con su extremo metilo primero (Fig. 6, panel superior). Mientras que en
una 13S-LOX la posición C-9 está protegida por el grupo metilo de un residuo
de alanina, esta cadena lateral falta en una 9R-LOX (intercambio alanina/glicina),
lo que da como resultado la dioxigenación preferida en C-9. En el caso de las
enzimas 9S- y 13R-LOX, el sustrato se alinea en una orientación de "cabeza a
cola" (Fig. 6, panel inferior) y aquí la posición C-13 está protegida por el grupo
metilo de un residuo de alanina . resultando en actividad 9S-LOX. En particular,
este modelo tiene pocas excepciones. Entre las enzimas S-en, una excepción
es la 12S-LOX tipo plaqueta de ratón, que tiene una serina en esta posición
(Coffa y Brash, 2004). Recientemente, de la cianobacteria Nostoc (Anabaena)
sp. Se aisló PCC 7120, una LOX que pertenece a una clase separada de
proteínas de fusión catalasa-LOX con alta homología con la proteína de fusión
caracterizada AOS-LOX del coral Plexaura homomalla (Koljak et al., 1997; Lang
et al., 2008; Schneider et al. al., 2007a). Se demostró que el dominio carboxi-
terminal de esta enzima era una LOX completamente funcional. La alineación de
la secuencia de la proteína reveló que una alanina se alineaba con el "sitio
Coffa", lo que sugiere que la proteína sería una 13S-LOX, pero convirtió LA en
(9R)-HPODE (Lang et al., 2008; Zheng et al. , 2008). Sin embargo, cuando el
residuo de alanina fue reemplazado por un residuo de isoleucina más voluminoso,
el análisis de los productos de reacción mostró que este mutante producía casi
exclusivamente 13S-HPODE. Un análisis más detallado reveló que la orientación
del sustrato no se alteró y, a partir de las alineaciones de secuencias con otras
13-LOX, parece muy probable que esta (9R)-LOX única haya evolucionado a
partir de una (13S)-LOX procariótica mediante la eliminación de una o más
secuencias que conducen a una geometría alterada del sitio activo (Andreou et
al., 2008; Lang et al., 2008; Zheng et al., 2008).
3. Perspectivas
Los últimos avances genómicos ciertamente estimularán el campo de la
enzimología de oxilipina y en la Fig. 7 se muestra un análisis de árbol filogenético
donde algunas de las enzimas LOX conocidas de plantas y animales se comparan
con formas LOX nuevas y principalmente putativas de procariotas. El aislamiento
y la caracterización de estas nuevas enzimas formadoras de oxilipinas
proporcionarán más información sobre el mecanismo de reacción de las LOX y
su contribución a la formación de especies de oxilipinas poco conocidas o incluso
nuevas con funciones aún desconocidas en el desarrollo celular y la respuesta
al estrés.
Agradecimientos
Pedimos disculpas a los científicos cuyo trabajo pasamos por alto. Nuestro
trabajo sobre las oxilipinas fue apoyado por la Fundación Alemana de
Investigación y la Comisión Europea. AA cuenta con el apoyo del programa
internacional de maestría/doctorado en biología molecular (Goettingen)
1509
y por International Research Training Group 1422 Sitios metálicos en
biomoléculas: estructuras, regulación y mecanismos.
Referencias
Andreou, A.-Z., Vanko, M., Bezakova, L., Feussner, I., 2008. Propiedades de una mini lipoxigenasa
9R de Nostoc sp. PCC 7120 y sus formas mutantes. Fitoquímica 69, 1832–1837.
Andreou, A.-Z., Hornung, E., Kunze, S., Rosahl, S., Feussner, I., 2009a. Sobre la unión al sustrato de
linoleato 9-lipoxigenasas. Lípidos 44, 207–215.
Andreou, A.-Z., Brodhun, F., Feussner, I., 2009b. Biosíntesis de oxilipinas en no mamíferos. prog.
Lipid Res.. doi:10.1016/j.plipres.2009.1002.1002.
Began, G., Sudharshan, E., Rao, AGA, 1999. Cambio en la especificidad posicional de la lipoxigenasa
1 debido a la inserción de ácidos grasos en micelas mixtas de desoxicolato de fosfatidilcolina.
Bioquímica 38, 13920–13927.
Belkner, J., Wiesner, R., Kühn, H., Lankin, VZ, 1991. La oxigenación de los ésteres de colesterol por
la reticulocito lipooxigenasa. FEBS Lett. 279, 110–114.
Belkner, J., Stender, H., Kühn, H., 1998. La 15-lipoxigenasa de conejo oxigena preferentemente los
ésteres de colesterol LDL, y esta reacción no requiere vitamina E.
J. Biol. química 273, 23225–23232.
Blée, E., 2002. Impacto de las fitooxilipinas en la defensa de las plantas. Tendencias Plant Sci. 7, 315–
322.
Brash, AR, 1999. Lipoxigenasas: ocurrencia, funciones, catálisis y adquisición de
sustrato J. Biol. química 274, 23679–23682.
Browner, MF, Gillmor, SA, Fletterick, R., 1998. Enterrar una carga. Nat. Estructura. mol.
Biol. 5, 179.
Coffa, G., Brash, AR, 2004. Un solo residuo de sitio activo dirige la estereoespecificidad de la
oxigenación en las lipoxigenasas: el estereocontrol está relacionado con la posición de la
oxigenación. proc. nacional Academia ciencia EE. UU. 101, 15579–15584.
Coffa, G., Schneider, C., Brash, AR, 2005. Un modelo integral de control posicional y estéreo en
lipoxigenasas. Bioquímica Biografía. Res. común 338, 87–92.
Corbin, JA, Evans, JH, Landgraf, KE, Falke, JJ, 2007. Mecanismo de direccionamiento específico de
membrana por dominios C2: grupos localizados de lípidos objetivo mejoran la afinidad de Ca2+ .
Bioquímica 46, 4322–4336.
Dainese, E., Sabatucci, A., van Zadelhoff, G., Angelucci, CB, Vachette, P., Veldink, GA, Agro, AF,
Maccarrone, M., 2005. Estabilidad estructural de la lipoxigenasa-1 de soya en solución como
sondeado por dispersión de rayos X de ángulo pequeño. J. Mol.
Biol. 349, 143–152.
Egmond, MR, Vliegenthart, JFG, Boldingh, J., 1972. Estereoespecificidad de la abstracción de
hidrógeno en el átomo de carbono n-8 en la oxigenación del ácido linoleico por lipooxigenasas de
germen de maíz y soja. Bioquímica Biografía. Res.
común 48, 1055–1060.
Felsenstein, J., Churchill, GA, 1996. Un enfoque de modelo de Markov oculto para la variación entre
sitios en la tasa de evolución. mol. Biol. Evol. 13, 93–104.
Feussner, I., Kühn, H., 1995. La lipoxigenasa corporal lipídica de plántulas de pepino
muestra una especificidad de reacción inusual. FEBS Lett. 367, 12–14.
Feussner, I., Kühn, H., 2000. Aplicación de lipoxigenasas y enzimas relacionadas para la preparación
de lípidos oxigenados. En: Bornscheuer, UT (Ed.), Enzymes in Lipid Modification. Wiley-VCH,
Weinheim, Alemania, págs. 309–336.
Feussner, I., Wasternack, C., 2002. La vía de la lipoxigenasa. año Rev. Plant Biol.
53, 275–297.
Feussner, I., Balkenhohl, TJ, Porzel, A., Kühn, H., Wasternack, C., 1997. Elucidación estructural de
lípidos de almacenamiento oxigenados en cotiledones de pepino: implicación de la lipoxigenasa
del cuerpo lipídico en la movilización de lípidos durante la germinación. J. Biol.
química 272, 21635–21641.
Feussner, I., Bachmann, A., Höhne, M., Kindl, H., 1998. Las tres fracciones acilo de la trilinoleína se
oxigenan de forma eficiente mediante la lipoxigenasa de cuerpo lipídico recombinante etiquetada
con His in vitro. FEBS Lett. 431, 433–436.
Froehlich, JE, Itoh, A., Howe, GA, 2001. La sintasa de óxido de aleno de tomate y la hidroperóxido de
ácido graso liasa, dos citocromos P450 implicados en el metabolismo de la oxilipina, están
dirigidas a diferentes membranas de la envoltura del cloroplasto.
Fisiol vegetal. 125, 306–317.
Fuller, MA, Weichert, H., Fischer, AM, Feussner, I., Grimes, HD, 2001. La actividad de las isoformas de
la lipoxigenasa de soja frente a los ácidos grasos esterificados indica una especificidad funcional.
Arco. Bioquímica Biografía. 388, 146–154.
Gardner, HW, 1989. La lipoxigenasa-1 de soja forma enzimáticamente hidroperóxidos 9(S) y 13(S) a
partir del ácido linoleico mediante un mecanismo dependiente del pH.
bioquimica Biografía. Acta 1001, 274–281.
Georgalaki, MD, Bachmann, A., Sotiroudis, TG, Xenakis, A., Porzel, A., Feussner, I., 1998.
Caracterización de una 13-lipoxigenasa a partir de aceite de oliva virgen y cuerpos oleosos de
endospermo de oliva. Fett/lípido 100, 554-560.
Gerhardt, B., Fischer, K., Balkenhohl, TJ, Pohnert, G., Kühn, H., Wasternack, C., Feussner, I., 2005.
Metabolismo de lípidos de almacenamiento mediado por lipoxigenasa en cotiledones de girasol
en germinación y b- oxidación del ácido (9Z,11E,13S)-13-hidroxi-octadeca-9,11-dienoico por los
glioxisomas cotiledonarios. Planta 220, 919–930.
Gerwick, WH, Roberts, MA, Vulpanovici, A., Ballantine, DL, 1999. Biogénesis y función biológica de las
oxilipinas de algas marinas. Adv. Exp. Medicina. Biol. 447, 211–218.
Hamberg, M., Samuelsson, B., 1967. Sobre la especificidad de la oxigenación de ácidos grasos
insaturados catalizada por la lipoxidasa de soja. J. Biol. química 242, 5329–5335.
Hammel, M., Walther, M., Prassl, R., Kühn, H., 2004. Flexibilidad estructural del dominio de barril ß N
terminal de 15-lipoxigenasa-1 sondeado por dispersión de rayos X de ángulo pequeño.
Consecuencias funcionales para la regulación de la actividad y la unión a la membrana. J. Mol.
Biol. 343, 917–929.
Machine Translated by Google
1510 A. Andreou, I. Feussner / Fitoquímica 70 (2009) 1504–1510
Holtman, WL, Vredenbregt-Heistek, JC, Schmitt, NF, Feussner, I., 1997.
La lipoxigenasa-2 oxigena los lípidos almacenados en embriones de cebada en germinación.
EUR. J. Bioquímica. 248, 452–458.
Hornung, E., Walther, M., Kühn, H., Feussner, I., 1999. Conversión de linoleato de pepino 13-
lipoxigenasa en una especie 9-lipoxigenante mediante mutagénesis dirigida al sitio. proc.
nacional Academia ciencia EE. UU. 96, 4192–4197.
Hornung, E., Kunze, S., Liavonchanka, A., Zimmermann, G., Kuhn, D., Fritsche, K., Renz, A.,
Kühn, H., Feussner, I., 2008. Identificación de un aminoácido determinante de la
regioespecificidad del pH en una lipoxigenasa de semilla de Momordica charantia. Fitoquímica
69, 2774–2780.
Howe, GA, Jander, G., 2008. Inmunidad de las plantas a los insectos herbívoros. año Rev. Plant
Biol. 59, 41–66.
Hughes, RK, Lawson, DM, Hornostaj, AR, Fairhurst, SA, Casey, R., 2001a.
Mutagénesis y modelado de unión de linoleato a lipoxigenasa de semilla de guisante.
EUR. J. Bioquímica. 268, 1030–1040.
Hughes, RK, West, SI, Hornostaj, AR, Lawson, DM, Fairhurst, SA, Sanchez, RO, Hough, P.,
Robinson, BH, Casey, R., 2001b. El sondeo de una nueva lipoxigenasa de papa con
especificidad posicional dual revela los determinantes principales de la unión al sustrato y
los requisitos para un bucle hidrofóbico superficial y tiene implicaciones para el papel de las
lipoxigenasas en los tubérculos. Bioquímica J. 353, 345–355.
Koljak, R., Boutaud, O., Shieh, BH, Samel, N., Brash, AR, 1997. Identificación de una proteína de
fusión de peroxidasa-lipoxigenasa natural. Ciencia 277, 1994–1996.
Kühn, H., Sprecher, H., Brash, AR, 1990. Sobre la especificidad posicional singular o dual de las
lipoxigenasas. El número de productos quirales varía con la alineación de los grupos metileno
en el sitio activo de la enzima. J. Biol. química 265, 16300– 16305.
Lang, I., Göbel, C., Porzel, A., Heilmann, I., Feussner, I., 2008. Una lipoxigenasa con actividad
de linoleato diol sintasa de Nostoc sp. PCC 7120. Bioquímica. J. 410, 347– 357.
Liavonchanka, A., Feussner, I., 2006. Lipoxigenasas: ocurrencia, funciones y
catálisis. J. Plant Physiol. 163, 348–357.
Maccarrone, M., Van Aarle, PGM, Veldink, GA, Vliegenthart, JFG, 1994. Oxigenación in vitro de
biomembranas de soja por lipooxigenasa-2. bioquimica Biografía.
Acta 1190, 164–169.
May, C., Höhne, M., Gnau, P., Schwennesen, K., Kindl, H., 2000. La estructura de barril N-
terminal b de la lipoxigenasa de cuerpo lipídico media su unión a liposomas y cuerpos
lipídicos. EUR. J. Bioquímica. 267, 1100–1109.
Mei, G., Di Venere, A., Nicolai, E., Angelucci, CB, Ivanov, I., Sabatucci, A., Dainese, E., Kühn, H.,
Maccarrone, M., 2008. Propiedades estructurales de Lipoxigenasas de plantas y mamíferos.
Alteraciones conformacionales dependientes de la temperatura y capacidad de unión a la
membrana. Bioquímica 47, 9234–9242.
Mosblech, A., Feussner, I., Heilmann, I., 2009. Oxilipinas: metabolitos estructuralmente diversos
de la oxidación de ácidos grasos. Fisiol vegetal. Biochem.. doi:10.1016/ j.plaphy.2008.1012.1011.
Murray, JJ, Brash, AR, 1988. La lipoxigenasa de reticulocito de conejo cataliza la oxigenación
específica de 12(S) y 15(S) de araquidonoil-fosfatidilcolina. Arco.
Bioquímica Biografía. 265, 514–532.
Oliw, EH, 2002. Lipoxigenasas vegetales y fúngicas. próstata Oth. Mediadores lipídicos 68–
69, 313–323.
Pérez-Gilabert, M., Veldink, GA, Vliegenthart, JFG, 1998. Oxidación de dilinoleoil fosfatidilcolina
por lipooxigenasa 1 de soja. Arco. Bioquímica Biografía. 354, 18–23.
Pohnert, G., 2005. Interacciones de diatomeas/copépodos en el plancton: la defensa química
indirecta de las algas unicelulares. ChemBioChem 6, 1–14.
Ruddat, VC, Mogul, R., Chorny, I., Chen, C., Perrin, N., Whitman, S., Kenyon, V., Jacobson, MP,
Bernasconi, CF, Holman, TR, 2004. Triptófano 500 y la arginina 707 definen la unión del sitio
activo del producto y el sustrato en la lipoxigenasa-1 de soja. Bioquímica 43, 13063–13071.
Samuelsson, B., Dahlen, S.-E., Lindgren, JA, Rouzer, CA, Serhan, CN, 1987.
Leucotrienos y lipoxinas: estructuras, biosíntesis y efectos biológicos.
Ciencia 237, 1171–1176.
Schneider, C., Niisuke, K., Boeglin, WE, Voehler, M., Stec, DF, Porter, NA, Brash, AR, 2007a.
Síntesis enzimática de un ácido graso de biciclobutano por una proteína de fusión de
hemoproteína lipoxigenasa de la cianobacteria Anabaena PCC 7120. Proc.
nacional Academia ciencia Estados Unidos 104, 18941–18945.
Schneider, C., Pratt, DA, Porter, NA, Brash, AR, 2007b. Control de la oxigenación en catálisis de
lipoxigenasa y ciclooxigenasa. química Biol. 14, 473–488.
Shibata, D., Slusarenko, A., Casey, R., Hildebrand, D., Bell, E., 1994. Lipoxigenasas.
Planta Mol. Biol. Rep. 12, S41–S42.
Siedow, JN, 1991. Lipoxigenasa vegetal: estructura y función. Ana. Rev. Plant Physiol. Planta
Mol. Biol. 42, 145–188.
Sigal, E., Laughton, CW, Mulkins, MA, 1994. Oxidación, Lipoxigenasa y Aterogénesis. Academia
de Nueva York. Ciencias, Nueva York.
Sloane, DL, Leung, R., Craik, CS, Sigal, E., 1991. Un determinante primario para la especificidad
posicional de la lipoxigenasa. Naturaleza 354, 149–152.
Stumpe, M., Feussner, I., 2006. Formación de oxilipinas por enzimas CYP74.
Fitoquímica. Rev. 5, 347–357.
Tatulian, SA, Steczko, J., Minor, W., 1998. Descubriendo un mecanismo de unión a membrana
regulado por calcio para la lipoxigenasa-1 de soja. Bioquímica 37,
15481–15490.
Tsitsigiannis, DI, Keller, NP, 2007. Las oxilipinas como hongos del desarrollo y del huésped
señales de comunicación Tendencias Microbiol. 15, 109–118.
Veldink, G., Garssen, GJ, Vliegenthart, JFG, Boldingh, J., 1972. Especificidad posicional de la
lipoxigenasa de germen de maíz en función del pH. Bioquímica Biografía. Res. común 47,
22–26.
Wasternack, C., 2007. Jasmonatos: una actualización sobre biosíntesis, transducción de señales
y acción en la respuesta al estrés, el crecimiento y el desarrollo de las plantas. Ana. Bot.
100, 681–697.
Zheng, Y., Boeglin, WE, Schneider, C., Brash, AR, 2008. Una minilipoxigenasa de 49 kDa de
Anabaena sp. PCC 7120 conserva la funcionalidad catalíticamente completa. J. Biol. química
283, 5138–5147.
Alexandra-Zoi Andreou estudió química en la Universidad
Aristóteles de Tesalónica, Grecia, y obtuvo su título en
2003. Con el patrocinio del Servicio Alemán de
Intercambio Académico (DAAD), asistió al programa de
maestría en Biología Molecular en la Universidad Georg-
August de Göttingen, Alemania y Realizó su tesis de
maestría en el Departamento de Biología del Desarrollo
Molecular (Profesor Principal H. Jäckle) del Instituto
Max Plank de Química Biofísica, Göttingen, Alemania,
centrándose en los mecanismos del metabolismo de
los lípidos en Drosophila mela nogaster. Desde 2006
lleva a cabo su investigación de doctorado en el
Departamento de Bioquímica Vegetal de la Universidad
Georg-August de Göttingen con el Prof. I. Feussner
sobre la caracterización de lipoxigenasas procarióticas.
Su trabajo cuenta con el apoyo de IRTG 1422 Metal
Sites in Biomolecules: Structures, Reg ulation and
Mechanisms.
Ivo Feussner estudió química en la Universidad
Philipps en Marburg, Alemania, y se graduó en 1990.
En 1993 completó su doctorado en Química en el
Departamento de Bioquímica con el Prof. Dr. H. Kindl
trabajando en la degradación de lípidos almacenados
en plantas. Después de trabajar durante cuatro años
como postdoctorado (1993–1994 con el Prof. Dr. W.
Roos en la Universidad Martin Luther de Halle-
Wittenberg, Alemania en transportadores de aminoácidos
fúngicos y 1995–1996 en el Instituto de Bioquímica
Vegetal con el Prof. Dr. C. Wasternack en biosíntesis
de ácido jasmónico), pasó tres años más (1997–1999)
como investigador asociado en el Instituto de Bioquímica
Vegetal en el Departamento del Prof. Dr. B. Parthier
trabajando en procesos de peroxidación de lípidos en
plantas . En 2000, se trasladó como investigador
asociado al Instituto de Genética Vegetal e Investigación
de Plantas de Cultivo en Gatersleben, Alemania (Jefe de Departamento Prof. Dr. Uwe Sonnewald).
En 2001 recibió el premio Schering Young Investigator de la Sociedad Alemana de Bioquímica y
Biología Molecular. Desde 2002, es Profesor Titular de Bioquímica Vegetal en la Universidad
Georg-August de Göttingen, Alemania. Sigue estando principalmente interesado en los procesos
de peroxidación de lípidos y en las vías metabólicas de los lípidos.
Desde 2009 es miembro de la Academia de Ciencias de Sajonia, Leipzig, Alemania.