Biotecnología aplicada al mejoramiento

genético de hortalizas

Carlos F. Quirós
Department of Plant Sciences
University of California
Davis, CA 95616
530-752-1734
cfquiros@ucdavis.edu

::
La modificación genética es la continuación de técnicas
más y más refinadas

10,000 BC Domesticacion
S XIX Selección/hibridación
S XX Mutagénesis, colchicina
1940-50s Cultivo de tejidos
1960s Rescate de embriones
1970s Somaclones, haploides
70s-80s Fusión de protoplastos
1980s ADN Recombinante (tabaco
1990s transgénico 1984)
2000 Marcadores moleculares
presente Genómica
Bioinformática
Omicas
Básicamente nuestros antepasados ya
hiceron por nosotros la parte mas difícil
 En resumen
Fitomejoramiento Ingeniería genética
convencional

Cambios en sequencia,orden Cambios en sequencia,orden

y regulacion de genes y regulacion de genes

La cantidad de informacion La cantidad de informacion

genetica incluye miles de genetica que se cambia es
genes muy pequeña

Controla sitio y tiempo de

expresion del gene
Solo por cruzamientos entre Usa material genetico de
especies relacionadas cualquier organismo siendo
posible generar nuevas
combinaciones de genes
misma planta, especies
relacionadas, especies no
relacionadas, virus,
bacteria, animales
¿Cuál es nuestra urgencia de seguir desarrollando la
tecnología de mejoramiento de nuestros cultivos?

D.D. Chiras (2001) Environmental Science. Creating a Sustainable Future. 6th Edition.
Jones and Bartlett, Sudbury, MA.
 Maíz híbrido
Inventado por Shull en 1908 después de
endocriar líneas de maíz antes de cruzarlas

En 1935 sólo el 10% del maíz era híbrido,

en 1940 el 90% era híbrido

Estas variedades aumentaron los

rendimientos >6X

La producción de maíz subió de 20 bu/acre

en 1940 a 120 en el 2000
Principales ventajas de usar biotecnologia basada
en ADN recombinante

9Podemos introducir caracteristicas nuevas a nuestros

cultivos, no existentes en la especie, y asi
hacerlos potencialmente mas eficientes y productivos

9Podemos aumentar la produccion o calidad agregando,

cambiando o apagando uno o unos pocos genes de la
misma o otras especies sin alterar el resto.

9Potencialmente podemos aplicarla en forma sostenible

ayudando a proteger y conservar el ambiente usando
cultivos que dependan menos de pesticidas y otros
productos quimicos.
 Tomate larga vida Flavr Savr

Mas5’ t 35S t
LB KanR e Polygalacturonase e RB
prom r
prom r
m m

Plasmid pCGN1436

Primer producto comercial transgenico, 1994

 Instituto Experimental para la Olericultura,
Pontecagnano, Salerno. Italia

Dr. Vitangelo Magnifico

Gen Caracteristica Cultivo

DefH9iaaM Partenocarpia Berenjena,

tomate

CryIIIB(BT) Resistencia a tomate

gusano

CP (proteina CMV, TSWV tomate

de capsula
viral)

Berenjena Bt resistente a barrenador Leucinodes arbonalis

creada en la India
Partenocarpia usando el gen DefH9iaaM tambien ha
sido aplicado con exito a la frambuesa y fresa

Esto hace prescindir de polinizacion, cuya eficiencia

depende del ambiente, ademas de producir frutas sin
semillas
 Tomate con 3X flavonoides antioxidantes

Factores de transcripcion en el ciclo de antocianinas en

Anthirrhynum, Del y Ros1.

Butelli et al 2008 Nature Biotech 26:1301

 Tomates con antioxidante resveratrol

Gene estilbeno sintetasa de uva con promotor especifico

del fruto introducido a tomate.

Resveratrol: Anti inflamatorio, antiviral, cardio y neuro

protector, anti tumoral, presente en vino tinto.

Institute of Science and Food Technology, Italia

Protección contra virus mediante genes de la cápside

Expresion de genes de la envoltura proteica

interfiere con el ensamblaje y desmontaje
del virus, interfiriendo con su reproduccion
y movimiento.

Produccion de tomates resistentes al tomato

spotted wilt virus (TSWV)
 Papas GM a ser lanzadas en un futuro cercano
Newleaf Monsanto: resistente al Colorado Potato Beetle (Bt
-cry3A), a PVY y a PLRV (coat protein, replicase) desregulada en
1997 y comercializada en USA y Canada hasta 2001 (segregacion
mas cara que produccion).

Amflora BASF: amylose-free (anti-sense GBSS) para industria

de papel, aprobada para uso industrial. Alemania acaba de aprobar
su plantacion.

Variedades con resistencia a rancha BASF, ABSPII, DuRPh, and

CIP. Cisgenic, usa genes RB de resistencia de especies silvestres.
Libre de marcadores de seleccion. Lista para 2009

Bt-spunta (cryV) MSU (ABSPI): resistencia a polilla del tuberculo,

posible produccion en 2009 en So Africa.
Informacion de Marc Ghislain
Informacion de Marc Ghislain

Resistencia a prodredumbre blanda, Erwinia, maiginin 2, contra

microorganismos, New Zealand Institute for Plant & Food Research
Ltd
Gorgojo Colorado de la papa

Glandular trichomes alone

Dave Douches, MSU NYL235-4
 Glandular trichomes + Bt-cry3A
Dave Douches, MSU NYLcry3A.3
 Impacto de la polilla del
tubérculo

• Adultos
– Ponen huevos en el follaje y
tuberculos
– Ponen huevos en tuberculos
almacenados
• Larva
– Tuneles en hojas
– Penetran tuberculos en campo
– Crecen y viven en almacenes
D. Douches MSU
Lanzamiento Humanitario de Bt Spunta G2
(resistente a polilla) in Africa

• Caracterizacion
molecular
• Validacion en
laboratorio de
resistencia foliar y de
tuberculo
• Evaluacion en campo
• Conducta agronomica
similar a Spunta no-
transgenica
• Analisis de seguridad
alimenticia
D. Douches MSU
 Redución de moretones y acrilamida

• Silenciamiento papa Ranger Russet de

genes de polifenol oxidasa (Ppo), asociados
a sintesis de almidon R1, y fosforilasa-L
(PhL).
• Modificacion genetica en base a genes
nativos de papa sin insercion de genes
foraneos.
• Resultado: Papas fritas de mejor calidad,
menos quemadas y con menor contenido de
acrilamida.
Rommens et al 2006, J. Agr Food Chem 54: 9882-87
 Papas fritas y chips con bajo nivel de acrilamida

„ Silenciamiento de dos genes de asparagina

sintetasa (asparagina es precursor de acrilamida)
„ Reduccion en 95% de acrilamida en papas fritas y
chips. Mantiene rendimiento y calidad.
„ Lanzamiento en 5 años

Rommens et al. 2008. Plant Biotechnology Journal. 6:843-53.

Glucosinolatos (GSL) y sus derivados:
Metabolitos secundarios importantes en
cruciferas
Roles:

• Actividad antimicrobiana y preventivos de

cancer vs actividad inflamatoria y bocio

• Repelentes de insectos herbivoros vs atrayentes

de otros insectos especializados

•Sabor y aroma
Objectivo:

Desarrollo de lineas de brocoli, coliflor y otras

hortalizas similares con contenidos optimos de
isotiocianatos para propositos multiples: Alimentos
funcionales y biofumigantes.

Plan de investigacion:
Mapeo, identicacion y clonacion de gene mayores en
el ciclo biosintetico de glucosinolatos (GSL)
alifaticos y de sus derivados los isotiocianatos
(ITC), en Brassica oleracea.

Primer paso para producir lineas de brocoli con alto

contenido de sulforafano, envuelto en proteccion
contra en cancer en mamiferos
 Genes en el ciclo de GSL alifáticos en A. thaliana

Chain elongation

chloroplast

Methylthioalkylmalate
BoGSL-pro/
Synthase (MAM) BoGSL-elong
AF399834
CYP79F2
At1g16400
ER CYP79F1
At1g16410
aldoximes

CYP83A1,At4g13770
oxidation of aldoximes

C-S lyasa conjugation with S donor

Cytosol cysteine?)
S-GT
At1g24100
adapted from from Chen et al Sulpho
Plant J. (2003) 33: 923 Transferasa
At1g79230

Short and long chain GSL

 Ruta de Glusinolatos Alifáticos en Brassicas
Methionine
Gsl-PRO Gsl-elong
3C 4C

Glucoiberin Glucoraphanin Myrosinase

(3-methylsuphinylpropyl) ( 4-ethylsulphinylbutyl)
Gsl-alk Gsl-alk ESP/ESM1
Hydrolysis
ITC
Sinigrin Gluconapin
Sulforaphane
(2- propenyl) (3- butenyl)
:Allyl ITC Gs-oh

Progoitrin
:Allyl ITC (2-hydroxy-3 butenyl)

Glucoiberin
:Glucoraphanin
:Progoitrin
Sulforaphane
:Sinigrin
:TOTAL Gsl
 Corresponding
Gene in LG Function Arabidopsis gene
B.oleracea
Bo-PRO 3-carbon side-chains elongation At1g18500
O5
Bo-ELONG 4-carbon side-chains elongation At5g23010
O2
Bo-ALK 2-oxoglutarate-dependent dioxygenase enzyme, controls the At4g03060
O9 conversion of methylsulfinylalkyl glucosinolates to the
alkenyl form

Bo- Short-chain glucosinolates biosynthesis At1g16410

O5
CYP79F1
Bo-S-GT A thiohydroximate S-glucosyltransferase , complete the At1g24100
O3 synthesis of primary GSL

Bo-CS-lyase Mutant will be completely devoid of aliphatic and indole At2g20610

O6 glucosinolates

Bo-GSOH 1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase activity At2g25450

O9
Bo-ESP Nitrile-enhancing myrosinase cofactor At1g54040
O7

Bo-ESM1 Leads to a decreased capacity to produce nitriles and an At3g14210

O5 increased capacity to produce isothiocyanates

Bo-MYB28 Transcription factor of GSL biosynthesis At5g61420

O1 (Hi total GSL content) (Hiral etal, 2007, PNAS)
Complementation analysis by BoGSL-ALK transformation

30 30
Leaves
20 glrap 20
A. thaliana
millivolts

millivolts
Columbia
(control)
10 10
glib

0 0

6 7 8 9 10 11
Minutes

20 20 A. thaliana
glnp Columbia
transformed
15 15

with BoGSL-
millivolts

millivolts
10 10

sin alk+
5
prog 5

0 0

6 7 8 9 10 11
Minutes
 ¿ Posibilidades sin límite … ?

9 Resistencia a patógenos y nemátodos con genes

aislados de varias plantas.

9 Resistencia a salinidad, sequia, heladas, acidez

9 Reduccion de perdidas de almacenamiento

9 Manipulacion de proceso reproductivos: inhibicion

de floracion o su induccion temprana, frutas sin
semillas, esterilidad masculina, apomixis.

9Mejora de la arquitectura de la planta, eficiencia

fotosintentica y asimilacion de N = mayores
rendimientos
 Otras posibilidades …
9 Manipulacion de nutrientes y metabolitos
secundarios: vitaminas, acidos grasos, carbohidratos,
proteina, tabaco sin nicotina, café sin cafeina,
detoxificadores de carcinogenos y alergenos.

9 Mejora de contenido de hierro

9 Sintesis de biopolimeros degradables y nuevos

aceites

9 Desarrollo de plantas biosensoras y limpiadoras de

tierras contaminadas por metales pesados y minas

9Ornamentales con flores de nuevos colores, mas

vistosas y fragantes
 Rosas para ti …
Rosas azules producidas por la compañia Florigene Pty
Ltd y la compañia Japonesa Suntory lanzaron
recientemente la variedad GM Hybrid Tea

Expresa al gen de flavonoide 3'5'-hydroxilasa,

proveniente de Viola, y el de antocianina deTorenia
para color alterado de flores.

Australia y Colombia negociaron con estas compañias

para empezar a producir rosas azules, ¿y por no en el
Peru?

http://www.ogtr.gov.au/internet/ogtr/publishing.nsf/Content/dir090
Yuca resistente a virus
El Namulonge Crops Resource Research Institute
(NaCRRI) de Uganda esta probando yuca transgenica de
alto rendimiento resistente a dos enfermedades virales
mosaico de la yuca (CMV) y raya marron (BSV).
Limitantes de produccion en el Africa.
http://allafrica.com/stories/200901070050.html

Banana resistente a la enfermedad de Panama

Queensland University of Technology en Brisbane,
Australia, obtenida por insercion de un solo gen.

http://www.news.qut.edu.au/cgi-
bin/WebObjects/News.woa/wa/goNewsPage?newsEventID=21450
 Ciruelas sin hueso y floracion temprana

Silenciando genes de lignina

e introduciendo gene de
floracion temprana

Chris Dardick, USDA W. Virginia

Gene de maca, gene Lm-def, defensina tiene actividad
contra Ph. infestans. Solis et al 2007

Uva resistente a nematodos por introduccion del gen

de resistencia del tomate MI, probada nada menos que
en la zona vinicola de Alsacia, Francia en el 2005.

Arroz con mayores rendimientos por introduccion de

genes PPDK y PEPC de maiz que mejoran capacidad
fotosintetica

Lemaux 2008
Mejora de capacidad de asimilacion de N en 30% por
introduccion de factor de transcripcion Dof1,
experimental en Arabidopsis

Resistencia al frio: Genes CBF responsables a la respuesta

al frio

Salinidad: Tomate transgenico sobreexpresando gen que

controla entrada vacuolar de Na+/H+, capaz de crecer en
40% de agua de mar.

Mejora nutricional de papa, aumento de Ca.

En tomate aumento de folato.

Lemaux 2008
Zanahoria para combatir osteoporosis, con el gene
sCAX1, de Arabidopsis que codifica por un transportador
de Ca aumentando el nivel de este mineral; Children's
Nutrition Research Center in Houston, Texas.
at http://www.ars.usda.gov/is/AR/archive/nov08/carrots1108.htm

Mani hipoalergenico, por silenciamiento de 2 proteinas

que causan alergia; University of Georgia, Tifton
http://blog.wired.com/wiredscience/2008/11/peanuts-with-le.html

Bayer CropScience ha desarrollado tabaco transgenico

con el gene humano A1AT en el cloroplasto, resultando en
alta acumulacion alfa1-antitripsina que protege el pulmon
contra enfisema
http://www.springerlink.com/content/p51462681u156488/fulltext.pdf
De anuales a perennes

Apagar 2 genes envueltos en el proceso de floracion en

Arabidopsis la convierte de anual a perenne
Flanders Institute of Biotechnology (VIB) and Ghent
University
http://www.vib.be/NR/rdonlyres/E8FB2BC8-3D32-4D76-BFC1-
9609FA07C689/2762/20081107_ENG_Beeckman_bloeiinductie_web.pdf
Gen de ají mejora resistencia a estrés en papa
Cientificos del Plant Genome Research Center y Seoul National
University en Korea demostraron que sobre-expresion del gen de
Capsicum CaPF1 (factor de transcripcion inducido bajo estres)
aumenta tolerancia a heladas, calor, metales pesados y estres
oxidativo en papa.

Yuca biofortificada : A Day's Nutrition in a Single Meal

Genes codificadores de proteina envueltos en transporte de
metales introducidos a la yuca resulta en acumulacion de hierro y
zinc.
Igualmente genes envueltos en sintesis de carotenoides y
terpenoides fortifican la planta en contenido de vitaminas A y E.
El proximo paso es combinar estas caracteristicas en variedad
elite.

Pruebas de campo en Puerto Rico, en 2010 en Nigeria y Kenya.

 Cientificos de la India, U de Baroda, usaron el gene
Dm-AMP1, de Dahlia que produce a la defensina
antifungica usadas para producir arroz resistente a
Magnaporthe oryzae (piricularia) y Rhizoctonia
solani (podredumbre de la vaina).
http://dx.doi.org/10.1007/s11248-008-9196-1

Investigadores del Bose Institute en Calcuta

desarrollaron garbanzo transgenico resistente a afidos
introduciendo gen de lectina de ajo a (asal) que
produce proteinas que se unen a azucares. Estas
bloquean el intestino de los afidos.
http://dx.doi.org/10.1007/s11248-009-9242-7
Cuba posicionada a adoptar Biotecnología

De acuerdo al director del Instituto de Ingenieria

Genetica y Biotecnologia, Carlos Borroto, cultivos
transgenicas seran producidos pronto en Cuba. El pais
espera que adoptando estos cultivos podra reducir sus
importaciones. Cuba al momento importa mas del 50%de
sus alimentos. De acuerdo a Granma Internacional,
maices resistentes a herbicidas e insectos, creados por
cientificos cubanos se estan probando en La Habana,
Santa Clara, Ciego de Avila, Camagüey y Santiago de
Cuba. Tambien estan trabajando en Gm soya, tomate y
papa.
 Conclusiones
La ingenieria genetica de plantas esta realmente aun en pañales.

Aun falta desarrollar esta tecnologia en muchos cultivos que son

dificiles de transformar.

Sin embargo los avances cientificos en esta area son impresionantes,

por ejemplo:
1. Ya se puede prescindir de genes antibioticos como medio de
seleccion.
2. Es posible transformar cloroplastos para evitar transferencia de
transgenes via polinizacion no intencional.
3. Es posible expresar genes solo en ciertos tejidos de la planta.

Estos avances anulan cada vez mas los argumentos de los opositores a
esta tecnologia.

La IG no es la panacea para acabar con la pobreza, como tampoco lo

son la agricultura organica y convencional, sin embargo es una
herramienta con la que los agricultores pueden mitigar problemas de
plagas, enfermedades, sequia, salinidad y degradacion del ambiente.
 “Bienaventurados los que retardan el avance de la
ciencia y de la verdad porque de ellos sera el reino del
olvido y del desprecio”

Dr. Francisco Urteaga Farge