Universidad del Valle de Guatemala

Facultad de Ciencias y Humanidades

Análisis Instrumental
Primer Ciclo, 2020
Instructor: Lic. Ángel Ramírez
Auxiliar: Karla Li

Práctica 1 / Caso 1
Determinación del Contenido de Cafeína en una Bebida

Alan Roberto Samayoa Juárez

Carné 19243
Sección 31
Fecha de Realización: 14/07/20
Fecha de Entrega: 21/07/20

1
Sumario:

Se planteó como objetivo utilizar la espectrofotometría UV-VIS para determinar espectros de

cromóforos y también cuantificar el contenido de cafeína mediante el uso de la curva de
calibración. Todo esto fue aplicado al caso de la empresa “Super Cool” que fue acusada de tener
cafeína en exceso en sus bebidas. El equipo que se utilizó para realizar el barrido espectral fue: un
baño ultrasónico para desgasificar la bebida y un espectrofotómetro Génesis 10s. En cuanto a la
cristalería utilizada para preparar las soluciones se usaron: 2 balones de 50 ml, un beaker de 100ml
y uno de 500ml y una pipeta volumétrica. Para el análisis se preparó una solución de muestra y
otra con la bebida energizante de la empresa. Se trabajó con 5 soluciones hijas de diferentes
concentraciones para obtener una curva de calibración. De dicha curva de calibración se obtuvo
que la concentración de la bebida carbonatada para que al final determináramos un total de 169.1
±3.575 ppm (60±0.447 mg de cafeína por cada lata de 355ml). De esta forma se pudo demostrar
que la información dada en el artículo era falsa, ya que se determinó que la bebida no sobrepasa
los 400mg que la FDA ha establecido como el límite de cafeína. Por lo tanto, concluimos que la
empresa “Super Cool” si cumple con los lineamientos establecidos y que sus bebidas no provocan
daños a la salud. Las principales fuentes de error se atribuyen a las incertidumbres de la cristalería
y el equipo utilizado.

Marco Teórico:

La cafeína es un compuesto orgánico considerado importante para la salud ya que desempeña

diversas funciones que ayudan a los sistemas de nuestro organismo. Se sabe muy bien que la
cafeína puede estimular el sistema nervioso, cardiovascular y respiratorio, lo que ayuda a mejorar
el funcionamiento de estos y así, reducir el cansancio. Además de esto, existen otros estudios que
indican que la cafeína tiene otros beneficios para el cuerpo, tales como: Ayuda a la secreción de
endorfinas, al crecimiento del pelo, tratamientos hepáticos y tratamientos para prevenir
Parkinson, sin embargo, todos estos beneficios se dan solo si se consume la dosis recomendada
diaria. (Infosalus, 2019)

La Administración de Medicamentos y Alimentos (FDA, por sus siglas en inglés) Declara que la
dosis recomendada de cafeína para un adulto es de 75 a 400 miligramos por día, sin embargo, no
es una dosis universal, ya que puede variar según el estado de salud o edad del consumidor (FDA,
2018).

La técnica de espectrofotometría UV es la forma más sencilla y efectiva para determinar si las

concentraciones de cafeína son las permitidas. Es posible usar esta técnica ya que la cafeína, al ser
un compuesto cromóforo, se puede excitar fácilmente con radiación electromagnética, siempre y
cuando se encuentre en el rango UV/Visible (Skoog,2015)

Ecuaciónes:

Ecuación No.1 – Relación entre concentración y volúmenes

C 1 V 1=C 2 V 2
Donde: C1 = Concentración de la solución 1

2
 V1 = Volumen de la solución 1

C2 = Concentración de la solución 2

V2 = Concentración de la solución 2

Ecuación No.2 – Media Muestral

N

∑ Xi
x= i=1
N
Donde: x = Media

Xi = Todos los datos obtenidos

N = Número de datos obtenidos

Ecuación No.3 – Desviación Estándar

s=
√ ∑ ( X− Xi) 2

n−1
Donde: s = Desviación Estándar

X = Media

Xi = Valor obtenido

n = Número de datos obtenidos

Ecuación No.4 – Coeficiente de Variación

S
C . Variación= ∗100
X
Donde: S = Desviación Estándar

X = Media

Ecuación No.5- Prueba Q en valores de absorbancia

| Xc− Xv|
Q=
w
Donde: Xc = Dato Atípico

Xv = Dato más cercano

w = rango

Ecuación No.6 – Propagación de error

3
 √ ( ) ( ) ( )
Incertidumbre 2 Incertidumbre 2 Incertidumbre 2

∆ Concentración=Concentración + +
Concentración volumen del balon Volumen de la bebidausados
¿

Ecuación No.7 – Intervalo de confianza del 95% para la media

S
X ± tα ( )
2 √n
Donde: X = Media

Tα/2 = Valor T

S = Desviación Estándar

n = Número de datos

Resultados:

Cuadro No.1 – Concentraciones de cafeína en bebidas carbonatadas

Miligramos de Cafeína en la muestra de 355 59.990 ± 0.447

ml
Rango de miligramos de Cafeína recomendada 75mg-400mg
por la FDA
Desviación Estándar 0.90 mg
Coeficiente de Variación 1.5%
Intervalo de Confianza del 95% 59.99 ± 2.24mg

Ecuación No.7 – Ecuación de la recta obtenida

Y = 0.0566x – 0.0008 ± 0.00446617

Ecuación No.8 – Ecuación de la Regresión lineal (Gráfica No.1)

R2 = 0.99957565 ± 0.00425833

Discusión:

Para la práctica de esta semana se planteó el objetivo de aplicar la espectrofotometría para

determinar cromóforos y sus respectivos espectros. Asimismo, se propuso el objetivo de
cuantificar la cafeína usando el espectrofotómetro UV-VIS y elaborando una Curva de calibración.
Todo este trabajo se hizo enfocado en el caso de la Empresa “Super Cool” la cual nos ha
contratado para hacer pruebas en sus bebidas, ya que se reportó en un artículo que sus bebidas
tenían exceso de cafeína y estaban causando daños a la salud.

4
Para realizar este análisis, se elaboraron 5 soluciones hija de 2, 4, 6, 8 y 10 ppm a partir de una
solución madre 100 ppm y se usó la solución de 2ppm para llevar a cabo un barrido espectral. Los
picos obtenidos en el espectro se utilizaron para elaborar la curva de calibración. La ley de beer
establece que la absorbancia es proporcional a la concentración de la muestra cuando las
concentración es son muy pequeñas, tal y como se muestra en la Gráfica No.1 (Skoog,2015). Esto
nos permitió desarrollar una ecuación de la recta de la cual íbamos a poder obtener la
concentración de las muestras de la bebida de la empresa.

Se trabajó en triplicado las muestras de cafeína con el fin de tener resultados que sean
respaldados con su respectivo análisis estadístico. De las absorbancias obtenidas que se muestran
en el Cuadro No.4, fue calculada la media muestral para obtener una absorbancia de 0.382±0.001.
A partir de esto se determinó que la muestra tenía una concentración de cafeína de 6.763 ±0.143
ppm. Los Cálculos No.6 y No.7 presentan que la concentración de cafeína de una lata de bebida
es , lo que equivale a 59.99±0.447 mg de cafeína por cada lata de 355ml.

Según la FDA, la dosis recomendada de cafeína al día es de 75 a 400mg (FDA,2018) y según el

intervalo de confianza del 95% obtuvimos un valor de 5.990mg ±2.24 mg. Luego de comparar
resultados podemos ver que las Bebidas de la Empresa “Super Cool” podemos ver que la empresa
tiene menos de la dosis recomendada, contrario a lo que se dijo en el artículo. El análisis de error
indica que la incertidumbre de la concentración fue de ±3.575 ppm, el coeficiente de variación fue
de 1.5% y la desviación estándar fue de ±0.9mg, demostrando así que los resultados tuvieron un
margen de error mínimo. Las posibles fuentes de error de este caso pueden ser las incertidumbres
de la cristalería y equipo utilizado ya que se trabajó con concentraciones de cafeína muy
pequeñas.

Conclusiones:

 Se cumplió con el objetivo de la práctica, ya que se pudo determinar el espectro de la

cafeína y al mismo tiempo se pudo cuantificar el contenido de cafeína en una bebida
comercial.
 Se determinó que la información publicada por el artículo es falsa, ya que se demostró con
la técnica de espectrofotometría que las bebidas de la empresa “Super Cool” contienen
aproximadamente 59.99±0.447 mg de cafeína por cada lata de 355ml con un coeficiente
de error de 1.5% y una desviación estándar de 0.9mg, demostrando así que no supera el
límite que la FDA propone.
 En base al intervalo de confianza del 95%, el cual indica un valor de 59.99 ± 2.24 mg y al
dato recomendado por la FDA, podemos ver que las bebidas se mantienen hasta por
debajo de la dosis recomendada, demostrando asi que el artículo está incluyendo
información incorrecta sobre la empresa.

Apéndice:

Procedimiento:

El caso se realizó según:

5
 - Agilent Technologies. Fundamentals of UV-Visible Spectroscopy. 2000.
- Jacques S. L., Phral, S. A. 1998. Some biological Chromophores. Biomedical Optics. Oregon
Graduate Institute.
- c. McDevitt, V. Rodríguez, A. Williams, K. Analysis of Soft Drinks: UV Spectrophotometry,
Liquid Chromatography, and Capillary Electrophoresis. Journal of Chemical Education.
1998,75: 5, 625–629.
- d. Owen, T. Fundamentals of modern UV-visible spectroscopy. Primer. USA. Agilent
Technologies. C. 2000.

Datos Originales:

Cuadro No.2 – Datos de las soluciones utilizadas

Masa del sólido para la solución madre 0.01±0.00001 gramos

Concentración de la solución madre 100 ppm
Masa de HCl para la solución de HCl 0.1823±0.0001 gramos
Concentración de la solución HCl 0.01 molar

Cuadro No.3 – Datos obtenidos de la curva de calibración Absorbancia vs Concentración de la

cafeína

Concentración de cafeína (ppm) Absorbancia (±0.001)

2 0.108
4 0.229
96 0.343
8 0.451
10 0.563

Cuadro No.4 – Absorbancia de la muestra de la bebida energética comercial

No. de disolución Absorbancia (±0.001)

1 0.375
2 0.386
3 0.384

Figuras y Gráficas:

Figura No.1 – Barrido espectral de la cafeína de 190 a 1100 nm.

6
Gráfica No.1 – Absorbancia vs Concentración de la Cafeína

Figura No.2 – Estadísticas de regresión de la Grafica No.1

7
Referencias bibliográficas:

Skoog, D y West, D (2015). Introducción a la Química Analítica. 9.na . Edición. México. Cengage
Learning.

Diaz, N (Sin Fecha) Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de

biomoléculas. Extraído de
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf

Infosalus (2019) Cafeína: ¿beneficios o perjuicios? Extraído de

https://www.infosalus.com/nutricion/noticia-cafeina-beneficios-perjuicios-20190801083440.html

U.S Food & Drug Administration (2018) Al grano: ¿cuánta cafeína es demasiada? Extraído de
https://www.fda.gov/consumers/articulos-en-espanol/al-grano-cuanta-cafeina-es-
demasiada#:~:text=4.,relaciona%20con%20efectos%20negativos%20peligrosos.

Muestras de Cálculo:

Cálculo No.1 - Preparación de 100ml de la solución madre 100 PPM

ml∗1 L
∗1000 mg
1000ml
∗1 g
1L
100 =0.1 gramos de cafeína
1000mg
Se utilizó estequiometría para determinar la cantidad en gramos del reactivo para preparar la
solución.

Cálculo No.2 – Preparación de 500ml de solución HCl 0.01M

ml∗1 L
∗0.1 mol HCl
1000ml
∗36.46 g HCl
1L
500 =0.1823 g HCl
1mol HCl
Se utilizó estequiometría para determinar la cantidad de HCl necesario para preparar la solución.

Cálculo No.3 – Preparación de soluciones hijas

8
 V 2 C 2 2 ppm∗50 ml
V 1= = =1ml
C1 100 ppm
Usando esta relación, se pudo determinar el volumen necesario de la solución madre para
preparar soluciones hijas de 50 ml de concentración 2,4,6,8 y 10 ppm.

Cálculo No.4 – Media de la absorbancia de las muestras de la bebida comercial

x 1+ x 2+ x 3 0.375+0.386+0.384
x= = =0.382 ±0.001
N 3
Usando la fórmula de la media muestral se determinó el valor central de la absorbancia.

Cálculo No.5 – Concentración de la cafeína en la muestra de la bebida

y +0.0008 0.382+ 0.0008

x= = =6.763 ± 0.143 ppm de cafeína en la muestra
0.0566 0.0566
Para determinar la concentración de la cafeína en las 3 muestras despejamos x, que representa la
concentración, de la ecuación de la recta obtenida y luego sustituimos la media de absorbancia
por la variable y.

Cálculo No.6 – Concentración de cafeína en la bebida

V 1C 1 50 ml∗6.763 ppm
C 2= = =169.1 ±3.575 ppmde cafeína en la bebida
V2 2 ml
Usando esta relación, se pudo determinar la concentración de cafeína en la bebida carbonatada.

Cálculo No.7 - Conversión de de ppm a mg de cafeína

169 mg
∗355 ml=60.62 ±0.447 mg de cafeína
1000 ml
Se utilizó estequiometría para determinar el contenido de cafeína en una lata de bebida de 355ml.

Análisis de Error:

Cálculo No. 8 – Media de la concentración de cafeína en mg

58.9+60.62+ 60.35
=59.99 mg
3
Cálculo No.8 – Prueba Q en valores de la absorbancia

|0.375−0.384|
Q= =0.818 ∴ si se toma en cuenta el valor crítico
0.386−0.375
Se uso la fórmula de la prueba Q para determinar si se debe utilizar el valor critico obtenido.

Cálculo No.9 – Desviación Estándar de la media

9
 √
2 2 2
(58.93−59.99) +(60.62−59.99) +(60.35−59.99)
S= =± 0.90 mg
3−1
Cálculo No.10 – Coeficiente de Variación

0.90
∗100=¿ 1.5%
59.99
Cálculo No.11 – Intervalo de Confianza de 95% para la Media

59.99 ± 4.303
( )
0.90
√3
=59.99 mg± 2.24

Cálculo No.112 – Propagación de error de la concentración de cafeína

√
2 2
0.143 0.05
∆ Concentración=169.1 ppm ( ) +( ) +¿¿
6.763 50
De esta misma forma se calculó la incertidumbre para la concentración de cafeína en mg

Datos Calculados:

Cuadro No.5 – Masas para preparar las soluciones

Masa del sólido para la solución madre 0.01±0.00001 gramos

Concentración de la solución madre 100 ppm
Masa de HCl para la solución de HCl 0.1823±0.0001 gramos
Concentración de la solución HCl 0.01 molar

Cuadro No.6 – Volúmenes y concentraciones de las soluciones hijas

Volumen (ml) Concentración (ppm)

1 2
2 4
3 6
4 8
5 10

Cuadro No.97– Concentraciones de cafeína en la bebida

Concentración de cafeína en la muestra 6.763±0.143

diluida (ppm)
Concentración de la bebida total (ppm) 169.1±3.959
Concentración convertida (mg/355ml) 60±0.447

10
11