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Creative Commons-BY.
 Una modificación adicional del medio de
montaje de Dioni para permitir la tinción,
la limpieza y el montaje de Acari.
Andrew IR Chicka
a Facultad de Ciencias Humanas, Universidad de Derby, Kedleston Rd, Derby DE22 1GB, Reino Unido.

ABSTRACTO

Los medios de Dioni modificados se han presentado anteriormente como una alternativa a los medios de montaje
tradicionales Gum Chloral para muestras microscópicas. Este documento tiene como objetivo explorar una
modificación adicional del medio de montaje de Dioni con el objetivo de proporcionar una solución simple para
limpiar, teñir y montar muestras de Acari en regiones donde la obtención de medios a base de hidrato de cloral es
problemática.

Palabras clave Dioni, Hoyer's, Berlese, medios de montaje, tinción, yodo, acarología médica, veterinaria,
forense

Introducción
Las propiedades ópticas de los Acari significan que no son adecuados para ser montados en medios de
montaje microscópicos como el bálsamo de Canadá y, como tales, tradicionalmente se montan en medios
clorales de goma, como Hoyers o Berlese (Chick, 2016). Chick (2011) también menciona el uso del medio de
goma cloral, la modificación de Faure de Berlese, como un montante para Acari. Singer (1967) afirma que
para Acari, los medios de montaje deben tener un índice de refracción inferior a 1,50 o superior a 1,55.
Neuhauset al. (2017) enumeran el índice de refracción de Canada Balsam entre 1.5181 y 1.5447, Brown
(1997) enumera el índice de refracción de Canada Balsam como 1.532, mientras que los medios Gum
Chloral como Hoyers tienen un índice de refracción de 1.419, Berlese de 1.485 y Faure de 1.437 (Neuhaus et
al., 2017). Faraji y Bakker (2008) presentaron un método de tinción y montaje de Acari afirmando que los
medios de montaje Acarológicos tradicionales pueden, a largo plazo, sobre muestras claras, lo que las hace
más difíciles de identificar. Se han recomendado una serie de tintes para Acari en el pasado, Hughes (1973)
recomendó usar lignina rosa en una mezcla de ácido láctico y glicerol para aclarar y teñir Acari antes del
montaje. Evanset al. (1961) afirmaron que la fucsina ácida se puede usar para teñir Acari como una
alternativa a la lignina rosa, Krantz y Walter (2009) sugirieron el uso de la rosa de bengala para teñir ácaros
discretos, sin embargo, Horobin y Kiernan (2002) afirman que tanto la fucsina ácida como la rosa bengala
tiene malas propiedades de resistencia a la luz. El método de Faraji y Bakker (2008) incorporó yodo en los
Recibió 05 junio 2018Aceptado 14 medios de montaje de Hoyers para que actuara como una mancha. Este método también fue utilizado por
de agosto de 2018Publicado xx de
de Lilloet al. (2010) como protocolo recomendado para Eriophyoidea. El yodo fue una de las primeras
septiembre de 2018
tinciones microscópicas, y el protocolo de tinción de Gram se remonta a 1884 (Gurr, 1952).
Autor correspondiente
Andrew IR Chick:
Sin embargo, la obtención de medios de montaje de cloral de goma tradicionales como el de Hoyer puede ser
a.chick@derby.ac.uk
problemática debido a las restricciones impuestas al hidrato de cloral, que es ilegal obtener en algunas áreas sin
Editor académico
receta (Chick, 2010). Clark y Morishita (1950) sugirieron previamente que el ácido láctico se puede usar para limpiar
Farid Faraji
Acari, y lo incorporaron en su CM Medium, sin embargo, Dioni (2003) presentó un medio de montaje de goma
arábiga para el microscopista aficionado que utilizó una solución de goma de mascar de calidad comercial para
DOI artistas. ácido arábigo y láctico como agente de limpieza que reemplaza al hidrato de cloral. Chick (2010) presentó
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una modificación del fluido de Dioni adecuado para aplicaciones entomológicas profesionales utilizando reactivos
Derechos de autor de laboratorio más puros y señaló que se comportaba de manera similar al fluido Berlese comercialmente
Aire de pollito disponible, siendo de un color similar, composición
Distribuido bajo
Creative Commons CC-BY 4.0

Cómo citar este artículo Chick AIR (2018), una modificación adicional del medio de montaje de Dioni para permitir la tinción,
la limpieza y el montaje de Acari. Acarologia 58 (4): 795-800; DOI 10.24349 / acarologia / 20184286
 y tiene una acción de aclarado suave, con menos formación de burbujas que los medios comerciales Berlese. Chick
(2011) continuó recomendando el uso de Modified Dioni como medio de montaje para el Acari. Este documento
tiene como objetivo evaluar la modificación adicional del fluido de Dioni para que actúe como un medio de
limpieza, tinción y montaje de una etapa para el Acari.

Materiales y métodos
Medios de montaje

La fórmula de Chick (2010) para Dioni se enumeró como:

Goma arábiga 3 g
Agua destilada 10 mL
Glicerina 5 mL
Glucosa líquida 2,5 ml
Ácido láctico 6 ml
Antiséptico * 1 mL
* El antiséptico se utiliza para prevenir la formación de moho. Chick (2010) utilizó un antiséptico
comercial llamado TCP

Chick (2010) comenta que el medio de montaje de Dioni se comporta de manera similar al medio de montaje
Berlese disponible comercialmente, con la presencia de ácido láctico ayudando a limpiar la muestra con el tiempo,
pero es menos propenso a la formación de burbujas.
El artículo actual sugiere sustituir el Antiséptico por una tintura de yodo para proporcionar una
acción antiséptica y colorante dando la siguiente fórmula:
Goma arábiga 3 g
Agua destilada 10 mL
Glicerina 5 mL
Glucosa líquida 2,5 ml
Ácido láctico (80%) 6 ml
Tintura de yodo 3 ml *
* La tintura de yodo utilizada fue de grado de la Farmacopea Británica (BP) y los ingredientes enumerados
son: yodo BP 2.5% p / v, yoduro de potasio BP 2.5% p / v, etanol BP 89% v / v, agua purificada BP al 100% .
Esto convertiría el tinte activo en una solución al 0.3% en el medio de montaje. Se realizó una prueba
inicial con una solución de tinte al 0,1% en el medio.

Los ingredientes se combinan y se calientan entre 30 ° C y 40 ° C durante la noche para mezclar. Chick
(2010) recomendó usar una estera térmica de vivero. El medio de Dioni es normalmente de color pajizo
(como Berlese / Hoyers), mientras que esta modificación tiene un color más marrón anaranjado debido a la
presencia del yodo. El medio se puede filtrar y decantar en un frasco nuevo para evitar que las impurezas
que son comunes en la goma arábiga, como los restos de madera y los pequeños geles (Henshaw, 1981),
afecten a las preparaciones.
Las muestras ligeramente esclerotizadas se pueden montar directamente en el medio de montaje o con
alcohol. Las muestras más pigmentadas se pueden calentar suavemente en ácido láctico antes de montar para
limpiar la muestra.
Las muestras se montan de la misma manera que los medios tradicionales de goma cloral como Hoyers. El autor
actual deja sus diapositivas en un horno de calentamiento de diapositivas a entre 35 y 40 ° C durante una semana para que
el medio esté completamente fraguado y selle sus diapositivas una vez que el medio se haya fraguado utilizando un plato
giratorio y pintura esmaltada del modelador.

Preparación de probetas
Los ácaros de prueba utilizados para esta investigación fueron Poecilochirus spp. (Acari: Parasitidae) recolectado de
un escarabajo enterrador (Nicrophorus humator) antes del montaje, las muestras se calentaron en un 80%

Chick AIR (2018), Acarologia 58 (4): 795-800; DOI 10.24349 / acarologia / 20184286 796
 ácido láctico durante siete días para replicar los efectos del aclarado excesivo. Las muestras se montaron en un
medio de montaje simple de Dioni (fórmula de Chick's 2010) como control negativo, una solución de tinte de yodo
al 0,1% en Dioni y una solución de yodo al 0,3% en Dioni. Se montó una muestra adicional sin un paso de aclarado
previo en medio de Dioni (con yodo al 0,3%) como control positivo. Después de que el medio se hubo asentado
durante varios días, los portaobjetos se sellaron con una pintura de esmalte de modelismo y las muestras se
examinaron utilizando microscopía de contraste de fase y campo brillante.

Fotomicrografía
Contraste de fase Las muestras se fotografiaron utilizando un microscopio de contraste de fase Patholette
de Vickers instruments utilizando un objetivo Vickers PH x40. Se tomaron fotografías de campo claro
utilizando un microscopio trinocular M15C de Vickers instruments (con un factor de aumento de x1,6) y un
objetivo Vickers de x20. Las fotomicrografías se capturaron utilizando una cámara Nikon D7100 DSLR con
un ocular fotográfico x2,5. El pulvillus posterior de los ejemplares fue la zona fotografiada en todos los
casos. Las barras de escala se agregaron usando Fiji-ImageJ (Schindelinet al., 2012), el balance de blancos
se corrigió automáticamente con Adobe Lightroom 5, la placa se compiló en Photoshop Creative Suite 5.

Resultados

Las imágenes presentadas en la Figura 1 A – H muestran el pulvillus posterior de las muestras de prueba bajo
diferentes tratamientos. Como puede verse en la Figura 1 A – B, el medio de Dioni tradicional (control negativo),
proporciona un contraste entre la muestra y el medio, sin embargo, la acción de preclarado causa una falta de
claridad, incluso cuando se usa contraste de fase para mejorar el espécimen. La Figura 1 C – D muestra cómo la
adición de ayudas de yodo con contraste incluso en la muestra se ha superado. La definición aparece mejor con
una solución de yodo al 0,3% en el medio Dioni. Con la Figura 1 E que muestra un mayor nivel de detalle fino
utilizando iluminación de campo brillante, con características alrededor de 1μmetro en tamaño. Se pueden ver más
detalles usando el contraste de fase (figura 1 F). Las Figuras G – H muestran la absorción de la mancha y la limpieza
de una muestra fresca sin limpieza previa (control positivo) para simular los efectos del almacenamiento a largo
plazo. Como se puede ver, la muestra todavía absorbe una gran cantidad de tinte y se mejoran los detalles.

Ventajas de los medios de montaje de Dioni en comparación con otros medios

El Dioni modificado tiene una serie de ventajas sobre otros medios de montaje como PVA y
algunos de los medios Gum Chloral.
Como se indicó anteriormente, la sustitución del hidrato de cloral por ácido láctico hace que los medios de
Dioni sean adecuados para lugares donde el hidrato de cloral está restringido, en lugares como el Reino Unido,
muchos entomólogos aficionados realizan el monitoreo de varios invertebrados y la preservación de los
portaobjetos podría ser un problema. Chick (2010) comentó que en comparación con el fluido "Berlese" de un
proveedor entomológico, el fluido de Dioni sin yodo era menos propenso a la formación de burbujas en el monte.
El presente autor señala que la adición de yodo no afecta la formación de burbujas en la montura en comparación
con los medios simples de Dioni.
Brown (1997) comenta que da la fórmula de PVA como una mezcla de PVA acetona, glicerina y ácido
láctico, y afirma que el medio relacionado Polivinil lactofenol no se usa en el NHM debido a la tendencia del
PVA a continuar encogiéndose, dañando la muestra. Así como los portaobjetos cristalizan y se vuelven
opacos. Debido a la falta de propiedades de archivo de los medios basados en PVA, Dioni no se comparó
directamente con PVA.

Propiedades ópticas de los medios de Dioni

Si bien una determinación exacta del índice de refracción de los medios de Dioni estaba más allá de los
recursos actuales del presente autor, el difunto Walter Dioni (com. Pers.) Lo estimó en menos de 1,5.

Chick AIR (2018), Acarologia 58 (4): 795-800; DOI 10.24349 / acarologia / 20184286 797
 Figura 1 Comparaciones del pulvillus posterior de Poecilochirus spp., utilizando diferentes tratamientos. A - En los medios de Dioni después de un paso de limpieza
(control negativo) bajo iluminación de campo brillante; B - En los medios de Dioni después de un paso de limpieza (control negativo) usando contraste de fase; C -
Aclarado previamente en ácido láctico y montado en medio Dioni (tinción de yodo al 0,1%) utilizando iluminación de campo brillante; D - Aclarado previamente en ácido
láctico y montado en medio Dioni (tinción de yodo al 0,1%) utilizando iluminación de contraste de fase; E - En medios de Dioni (tinte de yodo al 0.3%) usando
iluminación de campo brillante; F - P se aclara previamente en ácido láctico y se monta en medio de Dioni (colorante de yodo al 0,3%) utilizando iluminación de
contraste de fase; G - En medio de Dioni (colorante de yodo al 0,3%) sin aclarado previo (control positivo) utilizando iluminación de campo brillante; H - En medio de
Dioni (tinte de yodo al 0,3%) sin aclarado previo (control positivo) utilizando iluminación de contraste de fase.

Chick AIR (2018), Acarologia 58 (4): 795-800; DOI 10.24349 / acarologia / 20184286 798
 tabla 1 Los índices de refracción de los componentes del fluido de Dioni.

Constitucion Índice de refracción Referencia

Goma arábiga 1.334 Dafam, et al (2013)

Agua destilada 1,33 Marrón (1997)

Glicerina 1,47 Marrón (1997)

Glucosa líquida 1,47 Marrón (1997)

Ácido láctico (80%) 1.427 Sigma Aldrich (2018)

Al observar los constituyentes relevantes, se puede ver que no hay constituyentes que sean superiores a
1,5 (Tabla 1).

Discusión
Como se puede ver en la figura 1 el pulvillus es un área de las muestras propensa a un aclaramiento
excesivo, la adición de yodo al 0.3% mejora suficientemente el nivel de contraste tanto en las imágenes de
campo claro como de contraste de fase, el autor actual no tuvo acceso a DIC como recomienda Baker
(1999). Sin embargo, como afirman Faraji y Bakker (2008), si bien el contraste de fases es preferible,
muchos acarólogos, en particular los estudiantes o los de laboratorios forenses, médicos o veterinarios, no
tienen acceso al contraste de fases, ya que la mayoría de los laboratorios solo tienen campo brillante. Los
comentarios de Faraji y Bakker (2008) con respecto a la longevidad de los portaobjetos a base de goma
arábiga se repiten aquí, el autor actual ha estado usando el montante Dionis durante poco menos de 10
años sin problemas con la cristalización siempre que el cubreobjetos esté sellado correctamente. Dichos
portaobjetos se rodearon con esmalte de uñas (como sugirió Disney, 1983) o pintura de esmalte de los
fabricantes de modelos. Todos los portaobjetos se almacenaron planos (como sugirió Brown, 1998) en
cajas de portaobjetos de tarjetas fabricadas comercialmente en un ambiente templado. La mayoría de los
medios basados en goma arábiga se clasifican como "semipermanentes" (Upton, 1993). Sin embargo,
como propugna Brown (1997), se debe observar un resumen de vigilancia y se deben revisar los
portaobjetos con regularidad para detectar cualquier signo de degradación. En resumen, el medio de
montaje presentado en este documento es un sustituto adecuado para la solución de limpieza, tinción y
montaje en un solo paso presentada en Faraji y Bakker (2008), con el beneficio adicional de que el medio de
Dioni se puede preparar en áreas donde el hidrato de cloral es difícil de obtener.

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