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Fitopatólogos (Español)
Riley, M. 2003. Microscopía Básica - Una Destreza Importante para Fitopatólogos. Trans. José Carlos Ureta R. 2008. The Plant
Health Instructor. DOI: 10.1094/PHI-I-2008-0715-01
Melissa B. Riley, Department of Plant Pathology and Physiology, Clemson
University
Traductor: José Carlos Ureta R. Departamento de Protección Vegetal –
Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Panamá, Panamá.
OBJETIVOS:
• Familiarizar al estudiante con los componentes de los microscopios
comúnmente utilizados por fitopatólogos.
• Enseñar el cuidado y mantenimiento apropiado de los microscopios.
• Aprender los pasos de un adecuado manejo del enfoque y observación de
especimenes con los microscopios.
• Determinar la magnificación de los microscopios.
INTRODUCCIÓN:
Usted va a embarcarse en la aventura de su vida en el laboratorio de
fitopatología. El microscopio es una de las herramientas más útiles que tiene
un fitopatólogo, cuando trata de identificar al agente causal de una
enfermedad en plantas. Algunas veces el microscopio le brindará información
que le permitirá conocer exactamente la causa de una enfermedad en plantas.
En otros casos, pueden ser importantes para determinar que ciertos
fitopatógenos no están causando un problema fitopatológico.
El uso adecuado de un microscopio es una de las destrezas más importantes
que debe aprender un estudiante que se inicia en el estudio de la
fitopatología. Los microscopios se desarrollaron a finales del siglo XVII y hoy en
día, continúan siendo importantes para la identificación de hongos y algunos
otros agentes causales de enfermedades en plantas. Aunque el estudio de los
microscopios se les ha enseñado en sus cursos introductorios de las materias
científicas, frecuentemente los estudiantes no aprenden como utilizarlos y
cuidarlos adecuadamente. Es más, en ciertos cursos se les indica que los
microscopios ya están preparados e instalados en su sitio y que no se les
recomienda que cambien nada de lo ya establecido, fuera de efectuar el
enfoque correspondiente. Esta publicación les proveerá con información
básica e instrucciones en como preparar, usar y cuidar de microscopios,
técnicas esenciales para estudiantes de Fitopatología.
Figura 1. Partes de un Microscopio Compuesto. Haga clic en imagen para una visión más detallada.
Figura 2. Partes de un Microscopio de Disección. Haga clic en imagen para una visión más detallada.
MATERIALES:
• Microscopio Compuesto.
• Microscopio de Disección.
• Portaobjetos y Cubreobjetos.
• Tijeras.
• Botella de agua con gotero.
• Aceite de Inmersión.
• Letras “e” escritas en un tamaño de letra #6 e impresas en papel blanco, luego
se reduce a un 50% sobre un acetato que puede ser cortado en letras “e”
individuales para cada estudiante (tamaño final de la letra “e” es 0.6 x 0.45 mm)
PROCEDIMIENTO:
PARTES DEL MICROSCOPIO.
Se debe familiarizar con las distintas partes de los microscopios antes de
utilizarlos, porque se necesitará conocer en donde se ubican las mismas en los
diferentes microscopios. Algunos de estos componentes pueden ubicarse en
sitios ligeramente diferentes dependiendo del modelo de microscopio de que
se trate. Tómese algunos minutos para estudiar las figuras 1 y 2 antes de
proceder. Las principales partes del microscopio compuesto y del de disección
y sus usos se encuentran establecidas en la Tabla 1. Anote las diferencias entre
estos microscopios antes de continuar.
Pregunta: ¿Qué componentes están presentes en el microscopio
compuesto que no están presentes en el microscopio de disección, tome
como base las figuras 1 y 2?
Pregunta: ¿Qué componentes están presentes en el microscopio de
disección que no están presentes en el microscopio compuesto?
Tabla 1. Principales componentes de los microscopios, descripción general y usos
Componente Descripción
Base Parte de metal o plástico sobre la cual descansa el resto de las partes del m
Plataforma plana unida a la parte inferior del brazo sobre la cual se coloca
Platina
observar.
Tabla 1. Principales componentes de los microscopios, descripción general y usos
Componente Descripción
Cierre del Diafragma o Manija debajo de la abertura de la platina que consiste de un grupo de piez
Condensador obturador que regula la cantidad de luz que atraviesa al portaobjetos coloc
No está presente en todos los microscopios – colecta los rayos de luz del i
Condensador
incrementa la resolución, aumenta el contraste de la muestra.
Cabezal Parte cilíndrica/vertical unida en la parte superior del brazo que sostiene e
Plato giratorio que sostiene los objetivos (lentes), unido a la parte inferior
Revólver
vuelta para cambiar los lentes (objetivos).
Botón grande que mueve el cabezal hacia arriba y abajo para observar la m
Ajuste del macrométrico
macrométrico.
Ajuste de Dioptría Ajuste usado para compensar la diferencia de observación de los ojos.
Eje giratorio del espejo Usado para ajustar el espejo para que refleje la luz a través de la muestra.
Figura 4. Botón de aumento a un costado del microscopio de disección usado para incrementar/disminuir el aumento. (Cortesía de M. B. Riley)
Figura 5a. Métodos de ajuste del ancho de los oculares A: Botón entre los oculares, se mueve para ajustar el ancho.
Figura 5b. Simplemente se empuja o hala a los lados, en donde se sostiene los oculares para ajustar el ancho. (Cortesía de M. B. Riley)
Figura 6. Botón de ajuste del micrométrico utilizado para proporcionar un mayor acceso a la platina y el ajuste inicial de la imagen. (Cortesía de M. B. Rile
Figura 7. Rotación del revólver para colocar en posición al objetivo deseado. (Cortesía de M. B. Riley)
Figura 8. Perilla del condensador para ajustar el nivel de luz que pasa a través de la muestra. (Cortesía de M. B. Riley)
10. Utilizando el botón respectivo, levante el condensador, hasta que la punta del
mismo se encuentre a una distancia de la placa de aproximadamente el grosor
de una lámina de papel toalla. (Figura 9).
Figura 10. Botón del ajuste del micrométrico usado para obtener el enfoque máximo. (Cortesía de M. B. Riley)
Figura 11. Adición de aceite de inmersión previo al cambio al lente de inmersión. Observe que el revólver se encuentra a media distancia entre los objetiv
(Cortesía de M. B. Riley)
21. Si se necesita usar aceite de inmersión, se requiere usar una gota del mismo
en la placa, en el sito que se desea observar. (Aceite mineral u otros aceites no
deben ser utilizados). Al mover el revólver hacia la posición del objetivo de
inmersión, deténgase a media distancia entre el objetivo anterior y el de
inmersión. (Figure 11).
22. Añada la gota de aceite de inmersión sobre el centro de la placa en
observación.
23. Mueve el revólver de manera que el objetivo de inmersión esté directamente
sobre la placa. La gota de aceite de inmersión debe formar un “puente” entre
el objetivo y la placa.
24. Use el tornillo micrométrico para observar una imagen nítida de su muestra.
25. Tal vez se requiera de ajustar el condensador, incrementando o disminuyendo
la cantidad de luz que proviene del condensador utilizando la manija del
diafragma. (Figura 8).
26. Nota importante: Asegúrese de que los otros objetivos no se impregnen de
aceite de inmersión, ya que se pueden dañar.
27. Cuando termine la observación con el lente de inmersión, levante el cabezal o
baje la platina, según sea el caso de acuerdo a su microscopio, limpie de
inmediato el objetivo del aceite adherido y remueva la placa con el aceite.
Limpie el aceite de las placas si se van a volver a utilizar o si son placas
permanentes de laboratorio. Los objetivos se pueden limpiar con papel de
lente u agua destilada. Solamente use papel de lente para limpiar los objetivos
ya que otros materiales como, papel toalla, toallitas, otros, pueden dañarlos.
28. Cada vez que se requiera de remover una placa, siempre levante el cabezal o
baje la platina, para posteriormente remover la placa observada. Para evitar
que de manera descuidada se dañe el objetivo al rozarlo con la placa.
Pregunta: ¿Nota las diferencias en la observación de la letra “e” a medida
que va pasa a un aumento superior o diferente? _________________________
USO DEL MICROSCOPIO DE DISECCIÓN:
Existen varias diferencias entre un microscopio compuesto y un microscopio
de disección (algunas veces se le denomina estereo microscopio, debido a que
es como dos juegos de microscopios para enfocar en un punto, proveyendo
una observación tridimensional o vista estereoscópica del espécimen).
Generalmente la mayoría de los microscopios de disección no poseen un
botón de ajuste micrométrico. La fuente de luz (iluminador) puede estar
separada del microscopio y puede ser colocada en el brazo, debajo de la
platina o a nivel de la platina. Se le harán recomendaciones específicas para el
tipo de microscopio que se maneja en el laboratorio. Muchos microscopios de
disección no tienen objetivos separados para incrementar el aumento, pero
tienen un botón de aumento (zoom) que puede aumentar o disminuir dicho
aumento. Nota: Algunos microscopios de disección tienen además lentes
auxiliares o suplementarios en la parte inferior de la cubierta de los objetivos o
del cabezal. Si estos lentes se encuentran presentes deben ser incluidos en la
determinación del aumento.
Las muestras son colocadas sobre la platina y se les mueve a mano. La luz
puede ser transmitida a través de la placa, ajustando el espejo debajo de la
muestra o la muestra puede observarse con luz proveniente de la parte
superior. Use los pasos que se indican a continuación, ignorando a aquellos
que no aplican para su microscopio.
Figura 12. Microscopio de disección con la fuente de luz posicionada de manera tal que es transmitida hacia arriba desde la parte inferior a través de la m
ajustar el ángulo del espejo para reflejar la luz. (Cortesía de M. B. Riley)