----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- Técnicas Moleculares --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- l

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Tecnologia del ADN Genoticas: colección de clones

Vectores Hibridación que contiene todo el genoma PCR
Enzimas de restricción Secuenciación recombinante
humano

Capacidad de realizar Determinación del orden exacto de los Reacción en cadena de

Vectores de clonación: CARACTERISTICAS Vectores de expresión: Se
pares de bases de una región específica de Proceso de renaturalización de
cortes al interior de Moleculas transportadoras - Replicación autónoma utilizan para producir una dos cadenas sencillas de una polimerasa: amplificar
DNA 1. Primera Etapa (Insertos de DNA): preparación del DNA , Tipos de genotecas:
una molecula de ADN que transfieren y replican - Marcador genético de proteína recombinante y
molécula de DNA masivamente región blanco o
ADN selección contiene un promotor, generar un fragmento de DNA que se quiere clonar. - Genómicas
target
- Sitios únicos de entrada al ribosoma, así
La secuenciación brinda la información genetica
2. Preparación del vector: facilitar entrada a la celula y - Parciales
restricción como secuencia de replicarse más el inserto que nos da el DNA recombinante - ADNc, Colección de ARNm
de un segmento especifico de DNA
- DNA no esencial mnimo poliadelinación 3. Union del DNA al vector
- Genes Proceso que se lleva a cabo por
- Regiones reguladoras 4. Introducción del DNA recombinante en una celula anfitriona Reactivos:
Reconocen regiones calentamiento para la desnaturalización Tipos de vectores:
- Cambios que pueden causar enfermedades 5. Prolongación celular y selección del clon con el gen de - Muestra de DNA
especificas PROMOTORES: Para la renaturalización se lleva a cabo - Plásmidos (Genotecas parciales)
proceso de enfriamiento lente interés - Taq polimerasa
Inducidos por diversos 6. Aplicaciones médicas - Fagos (Genotecas genómicas pequeñas
- Cloruro de Magnesio
factores Secuenciación y de ADNc)
- Primers
química: ruptura Secuenciación - Cósmidos, BAC (genotecas genómicas
- dNTPs
Inductores: de material enzimatica: Secuenciación complejas)
Palindromos: mecanismo de - Buffer
- Corte Romo: se obtienen - Calor genetico con automatizada:
Se lee de igual tratamuentos replicación Tipos de ensayos - Coadyuvantes
dos fragmentos de igual - Fuente de carbono Se le agregan
forma en Vectores basados en Vectores de alta normal de la
- Presencia de algun químicos, marcadores - Hibridación en fase
ambas hebras forma plasmidos: Transportar capacidad:
fragmentando celula, se
- BAC, vector usado para compuesto inductor flourecentes líquida
del ADN - Corte cohesivo: corte de una secuencia de ADN a en uno o dos de adiciona un
clonar fragmentos de - Hibridación en
manera desigual una célula huésped los cuatro ddNTP
ADN en Escherichia soporte solido Pasos:
deseada, como parte de coli, básado en el nucleotidos.
un procedimiento de - Hibridación in situ - Desnaturalización inicial: Evitar la
pásmido factor-F.
- YAC: Vector que amplificación no especifica de la
Tipo l: Emplean energia Tipo ll: cortan clonación molecular .
Tipo lll: Cortan en regiones pretende imitar polimerasa
y cortan regiones cerca de las distales alas de restricción caracteristicas de un - Desnaturalización: muestras de DNA
distales regiones de cromosoma normal de desnaturalisadas en el medio
y requieren energia
una levadura
restricción , no (eucariota), portando un - Alineación: primers reconocen sus
requieren centrómero y telómero respectivas zonas y forman enlaces
energia terminales de hidrogeno con muestra de DNA
- Extensión: Toma dNTPs en el medio y
empareja con hebra que toma como
Nomenclatura: moldeEstos forman un ciclo completo
Tres letras: 1a letra de género de la bacteria donde se encontró
2a y 3a letra especie de la bacteria donde se encontró