INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INGENIERÍA EN SISTEMAS AMBIENTALES

ㅇ Microbiología Ambiental ㅇ

Práctica 8. “Procesos microbianos del ciclo del nitrógeno”.

Integrantes:

● Hoyos Estrada Jocelyn Desirée

● Torres Figueroa Juan Carlos

Profesoras:

● Dra. Jane Castillo Vera

● M. en C. Gisela Boll Argüello
● Dra. Yanelly Trujillo Cabrera
● M. en C. Paulina Dotor Vázquez

Equipo 10

Grupo 5AV1
 Objetivos
1. Determinar experimentalmente los principales procesos metabólicos involucrados en el
ciclo del nitrógeno.
2. Enumerar formas fisiológicas de bacterias involucradas en estos procesos, en diferentes
muestras de suelo.

Resultados
1. Con los datos obtenidos de su muestra llene las tablas 8.1 y 8.2 u realice los cálculos
necesarios para reportar el número de microorganismos por g de suelo en base seca.
2. Recabe la información de todos los sitios de muestreo y llene la tabla 8.3.
3. Elabore gráficas de los resultados de la zona de muestreo usando el logaritmo de las UFC
o del NMP por g de suelo BS.
4. Analice y concluya los resultados de su estación y de la zona de muestreo.

Tabla 8.1. Número de microorganismos participantes de los procesos del ciclo

del nitrógeno (cuenta en placa).
- Proteólisis; medio de cultivo agar leche.
Estación Humedad Dilución Alícuota Cuenta Cuenta UFC/g UFC/g
% placa 1 placa 2 (B.H) (B.S)

1 10 10−6 0.1 mL 12 18 1.5 ×108 1.6 ×108

2 5 10−3 0.1 mL 4 7 5.5 ×10 4 5.7 ×10 4
3 7 10−5 0.1 mL 21 15 1.8 ×107 1.9 ×107
4 15 10−2 0.1 mL 3 9 6 ×10 3 7.05 ×103
5 9 10−4 0.1 mL 87 94 9 ×10 8 1.1 ×109

Nota: Se saca promedio de las placas.

Cálculos para UFC/g BH:

colonias∗1
∗1
dilución
UFC / gSH=No .
alícuota

15∗1
∗1
10−6
UFC / gSH= =1.5× 108
0.1mL
 5.5∗1
∗1
10−3
UFC / gSH= =5.5× 104
0.1mL

18∗1
∗1
10−5
UFC / gSH= =1.8 ×107
0.1mL

6∗1
∗1
10−2
UFC / gSH = =6× 103
0.1 mL

90.5∗1
∗1
10−6
UFC / gSH= =9 ×10 8
0.1 mL

En base seca:

UFC / gSS=(UFC /gSH∗100)/(100−%H )

UFC / gSS=(1.5 ×108∗100)/(100−10)=1.6 × 108

UFC / gSS=(5.5 ×104∗100)/(100−5)=5.7 ×10 4

UFC / gSS=(1.8 ×107∗100)/(100−7)=1.9× 107

UFC / gSS=(6 ×103∗100)/(100−15)=7.05× 103

UFC / gSS=(9 ×10 8∗100)/(100−19)=1.1× 109

Tabla 8.2. Número de microorganismos participantes de los procesos del ciclo

del nitrógeno (Número Más Probable).
- Amonificación.
Estación Tubos positivos por dilución NMP de NMP/g NMP/g
tabla (B.H) (B.S)

10−3 10−4 10−5

1 3 1 0 43 4.3 × 106 4.7 × 106
2 3 3 0 240 2.4 × 104 2.5 ×10 4
 3 3 2 1 150 1.5 ×10 4 1.6 ×10 4
4 0 3 0 9.4 9.4 × 102 1.1 ×103
5 3 3 2 1100 1.1 ×105 1.3 ×105

Nota: Como las diluciones son diferentes a las que se encuentran en la tabla, se
aplica la siguiente fórmula para calcular NMP/g tanto en base húmeda como en
base seca.

Cálculos para NMP/g BH:

NMP de tabla
NMP= ∗factor de dilución intermedio
100

43
NMP= ∗10000=4.3 ×106
100

240
NMP= ∗10000=2.4 ×10 4
100

150
NMP= ∗10000=1.5× 104
100

9.4
NMP= ∗10000=9.4 ×10 2
100

1100
NMP= ∗10000=1.1 ×105
100

En base seca:

NMP=(4.3 ×10 6∗100)/(100−10)=4.7 × 106

NMP=(2.4 ×10 4∗100)/(100−5)=2.5 ×10 4

NMP=(1.5 ×104∗100)/(100−7)=1.6 ×10 4

NMP=(9.4 × 102∗100)/(100−15)=1.1× 103

NMP=(1.1× 105∗100)/(100−19)=1.3 ×105

Tabla 8.2.1. Número de microorganismos participantes de los procesos del ciclo
del nitrógeno (Número Más Probable).
- Nitrificación.
Estación Tubos positivos por dilución NMP de NMP/g NMP/g
tabla (B.H) (B.S)

10−2 10−3 10−4

1 1 2 0 11 1.1 ×102 1.2 ×102
2 3 1 2 120 1.2 ×103 1.2 ×103
3 3 0 0 23 2.3 ×102 2.4 × 102
4 3 3 0 240 2.4 × 103 2.8 ×103
5 3 0 3 95 9.5 ×10 2 1.1 ×103

Cálculos para NMP/g BH:

NMP de tabla
NMP= ∗factor de dilución intermedio
100

11
NMP= ∗1000=1.1× 102
100

120
NMP= ∗1000=1.2× 103
100

23
NMP= ∗1000=2.3× 102
100

240
NMP= ∗1000=2.4 ×103
100

95
NMP= ∗1000=9.5 ×102
100

En base seca:

NMP=(1.1× 102∗100)/(100−10)=1.2 ×102

NMP=(1.2× 103∗100)/(100−5)=1.2 ×103

NMP=(2.3 ×102∗100)/(100−7)=2.4 ×102

NMP=(2.4 ×10 3∗100)/(100−15)=2.8 ×103

NMP=(9.5 ×102∗100)/(100−19)=1.1 ×10 3

Tabla 8.2.2. Número de microorganismos participantes de los procesos del

ciclo del nitrógeno (Número Más Probable).
- Desnitrificación.
Estación Tubos positivos por dilución NMP de NMP/g NMP/g
tabla (B.H) (B.S)

10−5 10−6 10−7

1 3 3 1 460 4.6 × 106 5.1 ×106
2 3 3 2 1100 1.1 ×107 1.1 ×107
3 2 3 2 44 4.4 ×105 4.7 × 105
4 3 0 0 23 2.3 ×105 2.7 ×10 5
5 3 1 0 43 4.3 × 105 5.3 ×105

Cálculos para NMP/g BH:

NMP de tabla
NMP= ∗factor de dilución intermedio
100

460
NMP= ∗1000000=4.6× 106
100

1100
NMP= ∗1000000=1.1 ×107
100

44
NMP= ∗1000000=4.4 × 105
100

23
NMP= ∗1000000=2.3× 105
100
 43
NMP= ∗1000000=4.3 ×105
100

En base seca:

NMP=(4.6 × 106∗100)/(100−10)=5.1 ×106

NMP=(1.1× 107∗100)/( 100−5)=1.1 ×107

NMP=(4.4 × 105∗100)/(100−7)=4.7 ×105

NMP=(2.3 ×105∗100)/(100−15)=2.7 × 105

NMP=(4.3 ×10 5∗100)/(100−19)=5.3× 105

Tabla 8.3. Número de microorganismos participantes de los procesos del ciclo

del nitrógeno en la zona de muestreo (UFC o NMP/g de suelo en base seca).
PROCESO
Estación
Proteólisis Amonificación Nitrificación Desnitrificación
(UFC/g) (NMP/g) (NMP/g) (NMP/g)

1 1.6 ×108 4.7 × 106 1.2 ×102 5.1 ×106

2 5.7 ×10 4 2.5 ×10 4 1.2 ×103 1.1 ×107
3 1.9 ×107 1.6 ×10 4 2.4 × 102 4.7 × 105
4 7.05 ×103 1.1 ×103 2.8 ×103 2.7 ×10 5
5 1.1 ×109 1.3 ×105 1.1 ×103 5.3 ×105
Gráficas.
Gráfica 1. Resultados de la zona de muestreo; logaritmo UFC/g en BS. Proteólisis.

Gráfica 2. Resultados de la zona de muestreo; logaritmo UFC/g en BS. Amonificación,

nitrificación y desnitrificación.

Tabla 3.4.Valor en logaritmo de UFC y NMP en BS.

Discusión
En la proteólisis, la diferencia entre los resultados de UFC/g tanto en base seca como base
húmeda, no fue muy significativa, esto seguramente debido a los porcentajes de humedad
presentados, los cuales tampoco son altos.
En la amonificación, nitrificación y desnitrificación tampoco difirieron significativamente los
valores entre el NMP/g en base seca y base húmeda. No obstante, se realizaron algunos
cambios respecto al Número Más Probable ya que las diluciones realizadas (de 10−2 a 10−7 )
son diferentes a las de la tabla mostrada en el apéndice del manual (de 10−1 a 10−3 ). Por lo
tanto, para la obtención del Número Más Probable en dichas diluciones se aplicó la siguiente
ecuación:

NMP de tabla
NMP= ∗factor de dilución intermedio
100

Obteniendo dicho NMP pudo sacarse el respectivo NMP/g tanto en base seca como base
húmeda.

Por otro lado, también puede observarse que los valores de proteólisis fueron altos en las
estaciones 1, 3 y 5; los valores del NMP/g de desnitrificación resultaron ser altos en todas las
estaciones mientras que la nitrificación se mantuvo baja y la amonificación en un punto
intermedio.

Los valores bajos de nitrificación pueden indicar que el suelo de las estaciones de donde se
obtuvieron las muestras no se encuentran bien aireados por lo que no pudo llevarse a cabo el
proceso de nitrificación como debería. Pasaría lo contrario con la desnitrificación, la cual se
encuentra favorecida en el suelo de estas estaciones.

Conclusión
Todas las formas de vida dependen del nitrógeno; es el componente esencial de proteínas,
los ácidos nucleicos y otras macromoléculas fundamentales del metabolismo al igual que es
el principal reservorio en la atmósfera. El 78% de la atmósfera es N2 gaseoso.
A pesar de que las etapas del ciclo del nitrógeno pueden llevarse a cabo en condiciones óxicas
y anóxicas, hay algunas que se ven más favorecidas que otras, dependiendo de las
características del suelo donde se esté llevando a cabo. En este caso, la nitrificación (proceso
biológico aireado) se presentó en bajos niveles, demostrando que no hubo un notorio
proceso de oxidación del amoniaco. Por otro lado, la desnitrificación (proceso llevado a cabo
en ausencia de oxígeno) se vio favorecida mostrando mayor actividad de nitrato
transformándose en nitrógeno gaseoso.

Cuestionario
1. ¿Qué factores pueden alterar el número de microorganismos involucrados
en el ciclo del nitrógeno?
La temperatura y disponibilidad de recursos, la cual puede verse alterada por actividades
antropogénicas como la agricultura y la introducción de contaminantes. La humedad y el pH
también alteran la presencia de dichos microorganismos.
2. ¿Cómo afecta la presencia o ausencia de oxígeno en los diferentes procesos
del ciclo del nitrógeno? Realizar una tabla.

Condiciones óxicas Condiciones anóxicas

La nitrificación es el proceso que realizan En el proceso de desnitrificación los

las bacterias para obtener energía del microorganismos reducen los nitratos para
amonio transformándolo en nitrato. Una obtener nitrógeno gaseoso. Dicho proceso
elevada cantidad de oxígeno inhibe el se realiza en condiciones anaerobias
componente II de la nitrogenasa. (ausencia de oxígeno).

3. La adición de fertilizantes nitrogenados puede tener consecuencias en los

procesos globales de contaminación. Indique cuáles consideraría usted que
son esas consecuencias.
- Los componentes de dichos fertilizantes no persisten únicamente en el suelo, por
lixiviación también terminan en cuerpos de agua y el exceso de nutrientes provoca su
eutrofización.

4. Escriba las ecuaciones químicas que se llevan a cabo en cada uno de los
procesos biológicos analizados.

Amonificación

→
N H 2−CO−N H 2+ H 2 O C O 2 +2 N H 3
ureasa
Los compuestos orgánicos pasan a ser orgánicos, en este caso, amonio.

Nitrificación

1
Nitritación → N H 3 +1 O 2 → N O 2+ H 2 O
2
1
Nitratación → N O 2 + O 2 → N O 3
2
Procesos de oxidación.

Desnitrificación

N O3 → N O2 → NO → N 2 O→ N 2
Proceso de reducción de nitrato a nitrógeno.

Bibliografía
- Nora Iñón. (2018 ). Ciclo del nitrógeno. , de Sitio web:
http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2018/Q
uimicaBiol/1528215167.pdf