TALLER EN CLASE

TEMA: POLIMORFISMO DE LA LONGITUD DE LOS FRAGMENTOS DE RESTRICCIÓN

(RFLPs)
PROFESOR: ANDERSON RAMÍREZ AYALA
INTRODUCCIÓN
Las técnicas de biología molecular, tienen múltiples aplicaciones, dentro de las cuales se encuentra la causa
de muchas enfermedades que tienen un origen genético. La técnica PCR-RFLPs, se basa en la
identificación de secuencias específicas de un gen amplificado previamente por PCR, que son reconocidas
por enzimas de restricción (E.R), las cuáles cortan en la secuencia de reconocimiento. Una de las
enzimas más empleadas es la Eco RI, la cual se obtiene de la E. coli, y reconoce la secuencia GAA TCC,
por lo tanto entre mayor sea el número de veces que se encuentre la secuencia, mayor será el número de
cortes o restricciones que se observen. El tamaño de la longitud de los diferentes fragmentos que se
producen depende de la distancia que hay entre los sitios de corte. Si tenemos un fragmento amplificado
LINEAL, como los que se producen normalmente en una PCR, y es reconocido una vez por una enzima,
se producen DOS fragmentos, si la enzima encuentra la secuencia diana dos veces, genera TRES
fragmentos, y así sucesivamente. Si amplificamos un fragmento de 1000 pares de bases, y la secuencia de
reconocimiento está en la posición 500, entonces se producen 2 FRAGMENTOS, de 500 pb. En el gel de
agarosa, solo se observará UN FRAGMENTO PORQUE POSEEN EL MISMO TAMAÑO (500PB).
ANTES DE CONTESTAR LAS SIGUIENTES PREGUNTAS, LEER MUY DETENIDAMENTE LA
INTRODUCCIÓN (SI ES NECESARIO LEA DOS O TRES VECES) y déjese llevar por la lógica.
1. De acuerdo a lo anterior responda las siguientes preguntas: Si tiene un plásmido circular de 5000 pares de
bases y lo somete a una E.R, llene el siguiente cuadro, guiándose de la casilla número 3
Número de veces que posee la 1 (2000) 2 (1000 y 3 (500, 4 (100, 5 (500,
secuencia diana y posición de 3500) 1500, 4800) 500, 1000, 1500, 2800,
cortes ( ) 3000) 4800)
Número de fragmentos que se 3
producen
Tamaño de los fragmentos 1000, 3300,
700 pb. ( el
total debe
dar 5.000)
Número de bandas que se 3
observan en el gel.
* si se representa un circulo de 5000 pares, entonces el par de bases número 5000 estará
en contacto con el par de bases número 1 (se representa en la dirección de las manecillas
del reloj). Recuerde que en la representación circular desde 500 a 1500 hay 1000 pares
de bases, desde 1500 hasta 4800 hay 3300 pb, y desde 4800 hasta 500 hay 700 pb).
2. Represente en un circulo, la información de la casilla número 5 del cuadro anterior (tamaño del
plásmido, sitios de corte, y tamaño de los fragmentos)

3- Llene el siguiente cuadro para un fragmento LINEAL de 5000 pares de bases.

Número de veces que posee la 1 (2000) 2 (1000 y 3 (500, 4 (100, 5 (500,
secuencia diana y posición de 3500) 1500, 4800) 500, 1000, 1500, 2800,
cortes ( ) 3000) 4800)
Número de fragmentos que se 2
producen
Tamaño de los fragmentos 2000, 3000
pb
Número de bandas que se 1
observan en el gel.
4. De acuerdo a la información suministrada para el siguiente patrón de restricción conteste las siguientes
preguntas:
 a. Tamaño del fragmento completo sin
restricción ( no digerido): _________
b. Número de bandas originadas por el alelo E3
que se observarán en el gel_______
c. Numero de bandas originadas por el alelo E2
que se observarán en el gel_______
d. Número de bandas originadas que se
observarán por el alelo E4______
e. Número de bandas que se observan si un
individuo es heterocigótico E2E3_____
f. Número de bandas que se observan
En individuos heterocigóticos E3E4

5. Empleando marcadores de peso molecular apropiados, represente los resultados para cada uno de los encisos
del punto anterior, de tal forma que en el carril 1 represente el marcador de peso, en el carril 2 las bandas del
enciso A, en el carril 3 las bandas del enciso B, y así sucesivamente. [
6. De acuerdo a la información mostrada para el punto número 4, cuál sería el patrón de bandas que se espera
para un grupo de diez personas consiguiente caracterización molecular de 10 individuos: (UTILICE LOS
MARCADORES DE PESO MOLECULAR APROPIADOS).

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Individuo
E1E1 E2E2 E1E3 E2E4 E3E4 E4E4 E3E2 E2E3 E2E2 E4E4 Genotipo
7. De acuerdo a la información del punto anterior, determine;
A. frecuencias alélicas
B- frecuencias genotípicas.
C, frecuencias fenotípicas (CONSULTE EN CUALQUIER FUENTE, CÓMO ES LA ASIGNACIÓN
FENOTPICA PARA ESTOS ALELOS DE LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER).
8. Esquematice los resultados en la electroforesis del punto 7.