Laboratorio de Microbiología

Informe de laboratorio N.6

INTEGRANTES:

Santiago Rache López

José Fernando Dueñas León

Presentado a:

Edelberto Silva Gómez

Universidad Nacional de Colombia

Nutrición y Dietética

Sede Bogotá

Agosto, 2021
DATOS

PORCENTAJE DE TRANSMITANCIA DE LAS SUSPENSIONES A TRABAJAR

DATOS DE RECUENTO PARA CÁMARA DE NEUBAUER.

RECUENTO EN CÁMARA DE NEUBAUER

DATOS DE RECUENTO PARA EXTENSIÓN EN SUPERFICIE (UFC: Unidades

Formadoras de Colonia)

DATOS DE RECUENTO PARA VERTIDO EN PLACA (UFC: Unidades Formadoras de

Colonia)

DATOS DE PESO SECO

DESARROLLO
 1. RECUENTO PARA CÁMARA DE NEUBAUER.

a. Suspensión No.1 - 13,2 %T:

A: 428 células / 0,1 mL

B: 419 células / 0,1 mL

C: 391 células / 0,1 mL

D: 404 células / 0,1 mL

Promedio = (A+B+C+D) / 4 = (428 + 419 + 391 + 404) / 4 = 410,5 células de la dilución 0,1
mL

Recuento final = (Promedio * 1/10-4)/0,1 mL = 4105*104 células/mL= 410,5*105 células/mL.

b. Suspensión No.2 – 27,4 %T:

A: 215 células / 01 mL

B: 227 células / 0,1 mL

C: 241 células / 0,1 mL

D: 236 células / 0,1 mL

Promedio = (A+B+C+D) / 4 = (215+227+241+236) / 4 = 229,8 células de la dilución 0,1 mL

Recuento final = (Promedio * 1/10-4)/0,1 mL = 2298*104 células/mL= 229,8*105 células/mL.

c. Suspensión No. 3 – 47,5 %T:

A: 183 células / 01 mL

B: 162 células / 0,1 mL

C: 177 células / 0,1 mL

D: 165 células / 0,1 mL

Promedio = (A+B+C+D) / 4 = (182+162+177+165) / 4 = 186,0 células de la dilución 0,1 mL

Recuento final = (Promedio * 1/10-4)/0,1 mL = 1860*104 células/mL= 186*105 células/mL

d. Suspensión No. 4 – 57,4 %T:

A: 109 células / 01 mL

B: 126 células / 0,1 mL

C: 119 células / 0,1 mL

D: 132 células / 0,1 mL

Promedio = (A+B+C+D) / 4 = (109+126+119+132) / 4 = 121,5 células de la dilución 0,1 mL

Recuento final = (Promedio * 1/10-4)/0,1 mL = 1215*104 células/mL= 121,5*105 células/mL

e. Suspensión No. 5 – 70,5 %T:

A: 81 células / 01 mL

B: 72 células / 0,1 mL

C: 66 células / 0,1 mL

D: 92 células / 0,1 mL

Promedio = (A+B+C+D) / 4 = (81+72+66+92) / 4 = 77,8 células de la dilución 0,1 mL

Recuento final = (Promedio * 1/10-4)/0,1 mL = 7780*104 células/mL= 778*105 células/mL

f. Suspensión No. 6 – 85,9 %T:

A: 41 células / 01 mL

B: 61 células / 0,1 mL

C: 44 células / 0,1 mL

D: 52 células / 0,1 mL

Promedio = (A+B+C+D) / 4 = (41+61+44+52) / 4 = 49,5 células de la dilución 0,1 mL

Recuento final = (Promedio * 1/10-4)/0,1 mL = 4950*104 células/mL= 495*105 células/mL

Gráfica de recuento:
 Recuento para cá mara de Neubauer
1
0.9
0.8
0.7

Absorbancia
0.6 f(x) = 0 x + 0.34
R² = 0.16
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0.00 100.00 200.00 300.00 400.00 500.00 600.00 700.00 800.00 900.00
Recuento

2. RECUENTO PARA EXTENSIÓN EN SUPERFICIE

a. Suspensión 1 :

Dilución 10-5: 41 UFC/0,1 mL y 52 UFC/0,1 mL.

PROMEDIO = (41 UFC / 0,1 mL + 52UFC / 0,1 mL) / 2 = (93 UFC / 0,1 mL) / 2 = 46,5 UFC
/ 0,1 mL

PROMEDIO = 465 UFC / Ml

RECUENTO FINAL = PROMEDIO * 1/10-5 = 465 * 105 UFC / mL

b. Suspensión 2:

Dilución 10-5: 18 UFC/0,1 mL y 53 UFC/0,1 mL.

PROMEDIO = (18 UFC / 0,1 mL + 53 UFC / 0,1 mL) / 2 = (71 UFCX / 0,1 mL) / 2 = 35,5
UFC / 0,1 mL

PROMEDIO = 355 UFC / mL

RECUENTO FINAL = PROMEDIO * 1/10-5 = 355 * 105 UFC / mL

c. Suspensión 3:

Dilución 10-5: 19 UFC/0,1 mL y 16 UFC/0,1 mL.

PROMEDIO = (19 UFC / 0,1 mL + 16 UFC / 0,1 mL) / 2 = (35 UFC / 0,1 mL) / 2 = 17,5
UFC / 0,1 mL

PROMEDIO = 175 UFC / mL

RECUENTO FINAL = PROMEDIO * 1/10-5 = 175 * 105 UFC / mL

d. Suspensión 4:

Dilución 10-4: 69 UFC/0,1 mL y 76 UFC/0,1 mL.

PROMEDIO = (69 UFC / 0,1 mL + 76 UFC / 0,1 mL) / 2 = (145 UFC / 0,1 mL) / 2 = 72,5
UFC / 0,1 mL

PROMEDIO = 725 UFC / mL

RECUENTO FINAL = PROMEDIO * 1/10-4 = 725 * 104 UFC / mL = 72,5 * 105

e. Suspensión 5:

Dilución 10-4: 39 UFC/0,1 mL y 41 UFC/0,1 mL.

PROMEDIO = (36 UFC / 0,1 mL + 41 UFC / 0,1 mL) / 2 = (77 UFCX / 0,1 mL) / 2 = 38,5
UFC / 0,1 mL

PROMEDIO = 375 UFC / ,¿mL

RECUENTO FINAL = PROMEDIO * 1/10-4 = 465 * 104 UFC / mL = 46,5 * 105 UFC / mL

f. Suspensión 6:

Dilución 10-4: 25 UFC/0,1 mL y 31 UFC/0,1 mL.

PROMEDIO = (25 UFC / 0,1 mL + 31 UFC / 0,1 mL) / 2 = (56 UFC / 0,1 mL) / 2 = 28 UFC /
0,1 mL

PROMEDIO = 280 UFC / mL

RECUENTO FINAL = PROMEDIO * 1/10-4 = 280 * 104 UFC / mL = 28 * 105 UFC /mL

Gráfica de recuento:

Recuento para extensió n en superficie

1
0.8
Absorbancia

0.6 f(x) = − 0 x + 0.78

R² = 0.92
0.4
0.2
0
0.00 100.00 200.00 300.00 400.00 500.00
Recuento (x10^5 UFC /mL)
 3. RECUENTO PARA VERTIDO EN PLACA

a. Suspensión 1

Dilución 10-6: 48 UFC/ 1 ml y 51 UFC/1 ml

PROMEDIO = (48 UFC/ ml + 51 UFC/ml)/2 = (99 UFC/ml)/2 = 49.5 UFC/ml

RECUENTO FINAL = PROMEDIO X 1/10-6 = 49.5 X 106 UFC/ml. = 495 X 105 UFC/ml.

b. Suspensión 2

Dilución 10-6: 23 UFC/ 1 ml y 26 UFC/1 ml

PROMEDIO = (23 UFC/ ml + 26 UFC/ml)/2 = 24.5 UFC/ml

RECUENTO FINAL = PROMEDIO X 1/10-6 = 24.5 X 106 UFC/ml. = 245 X 105 UFC/ml.

c. Suspensión 3

Dilución 10-5: 127 UFC/ 1 ml y 116 UFC/1 ml

PROMEDIO = (127 UFC/ ml + 116 UFC/ml)/2 = 121.5 UFC/ml

RECUENTO FINAL = PROMEDIO X 1/10-5 = 121.5 X 105 UFC/ml.

d. Suspensión 4

Dilución 10-5: 110 UFC/ 1 ml y 94 UFC/1 ml

PROMEDIO = (110 UFC/ ml + 94 UFC/ml)/2 = 102 UFC/ml

RECUENTO FINAL = PROMEDIO X 1/10-5 = 102 X 105 UFC/ml.

e. Suspensión 5

Dilución 10-5: 41 UFC/ 1 ml y 54 UFC/1 ml

PROMEDIO = (41 UFC/ ml + 54 UFC/ml)/2 = 47.5 UFC/ml

RECUENTO FINAL = PROMEDIO X 1/10-5 = 47.5 X 105 UFC/ml.

f. Suspensión 6

Dilución 10-4: 226 UFC/ 1 ml y 193 UFC/1 ml

PROMEDIO = (226 UFC/ ml + 193 UFC/ml)/2 = 209.5 UFC/ml

RECUENTO FINAL = PROMEDIO X 1/10-4 = 20.95 X 105 UFC/ml.

Gráfica de recuento
 Gráfica 3. Recuento por vertido en placa.

4. RECUENTO POR PESO SECO

a. Suspensión 1

Peso Biomasa = (Peso membrana + biomasa) - (Peso membrana)

Peso Biomasa = 0.1390 g - 0.0815 g

Peso biomasa = 0.0575 g/100 ml de suspensión = 575 mg/l de suspensión

b. Suspensión 2

Peso Biomasa = (Peso membrana + biomasa) - (Peso membrana)

Peso Biomasa = 0.1215 g - 0.0824 g

Peso biomasa = 0.0391 g/100 ml de suspensión = 391 mg/l de suspensión

c. Suspensión 3

Peso Biomasa = (Peso membrana + biomasa) - (Peso membrana)

Peso Biomasa = 0.1049 g - 0.0812 g

Peso biomasa = 0.0237 g/100 ml de suspensión = 237 mg/l de suspensión

d. Suspensión 4

Peso Biomasa = (Peso membrana + biomasa) - (Peso membrana)

Peso Biomasa = 0.0993 g - 0.0817 g

 Peso biomasa = 0.0176 g/100 ml de suspensión = 176 mg/l de suspensión

e. Suspensión 5

Peso Biomasa = (Peso membrana + biomasa) - (Peso membrana)

Peso Biomasa = 0.0941 g - 0.0821 g

Peso biomasa = 0.0120 g/100 ml de suspensión = 120 mg/l de suspensión

f. Suspensión 6

Peso Biomasa = (Peso membrana + biomasa) - (Peso membrana)

Peso Biomasa = 0.0874 g - 0.0809 g

Peso biomasa = 0.0065 g/100 ml de suspensión = 65 mg/l de suspensión

g. Gráfica de recuento

Gráfica 4. Recuento por peso seco.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

RECUENTO POR VERTIDO EN PLACA

El método de recuento por vertido en placa ha dado una correlación más baja en
comparación al método por peso seco, con un R^2 = 0,9778, esto era de esperarse, ya
que la alta manipulación de la muestra, adicional a las varias diluciones que se deben
hacer, permite que haya aún más errores de reproducibilidad. Además que resulta en un
gasto alto de tiempo, debido a las múltiples plaqueos y repeticiones que se deben hacer.
Se mantiene, de acuerdo a la teoría, la relación directa entre la absorbancia y el recuento
celular. Para este caso, al igual que en el método de extensión de superficie, se usan los
datos enteros que se obtienen en algunas diluciones, los resultados incontables, <15 o
>300 no se usaron para el cálculo del recuento ni la construcción de la gráfica.
RECUENTO POR PESO SECO

El método de recuento por peso seco ha dado una gran correlación entre las 6 muestras
(Con un R^2 = 0.9989), esto se esperaba ya que además de usar un gran volumen para
realizar el proceso (100 ml) la manipulación que se tiene de la muestra es muy baja, por lo
que aumenta su reproducibilidad. Esto no significa que no tenga desventajas, ya que
debido a sus altos volúmenes y las altas temperaturas que se usan para secar la muestra,
muchos componentes volátiles de las células se pueden perder por degradación, no se
asegura la exclusión microorganismos muertos, materia orgánica ni polímeros
extracelulares. Además de que la muestra podría recuperar parte de su humedad según
sean las condiciones del ambiente y el tiempo de exposición. Finalmente, por medio de la
gráfica, observamos como se cumple la relación directamente proporcional entre la
absorbancia y el recuento celular, tal como se puede comprobar en la teoría.

CONCLUSIONES

- Cada uno de los métodos aquí utilizados para la medición de biomasa tiene
características específicas que se deben tener en cuenta a la hora de escoger el
idóneo para nuestro cultivo. Factores como la incertidumbre, reproducibilidad,
costo, tamaños de muestra, entre otros, son claves a la hora de caracterizar cada
uno de los métodos. Es por esto que se hace necesario conocer a detalle cada uno
de estos, desde su ejecución en el laboratorio, hasta los cálculos posteriores que
nos permitan obtener el resultado más fiable que sea posible.

BIBLIOGRAFÍA

- Sánchez, I. et al,. (2012). Determinación de biomasa. Universidad Nacional de

Trujillo. Ciencias Agropecuarias.
- Bastidas, O. (2015). Neubauer chamber cell counting. Technical Note.