Valor del análisis del cabello en toxicología post mortem Pascal Kintz

Resumen

En general, se acepta que las pruebas químicas de fluidos biológicos son el medio más objetivo
de diagnóstico del consumo de drogas. La presencia de un analito de fármaco en una muestra
biológica se puede utilizar para documentar la exposición. El estándar en las pruebas de
detección de drogas post mórtem es una detección general desconocida, seguida de la
confirmación de cromatografía de gases / espectrometría de masas realizada en una muestra
de sangre completa. En los últimos años, notables avances en técnicas analíticas sensibles han
permitido el análisis de drogas en muestras biológicas no convencionales tales como el cabello.
Las ventajas de esta muestra sobre medios extradicionales, como la orina y la sangre, son
obvias: la recolección es casi no invasiva, relativamente fácil de realizar y en las situaciones
forenses se pueden lograr bajo la estrecha supervisión de los funcionarios encargados de hacer
cumplir la ley para evitar la adulteración o la sustitución. Además, la ventana de la detección
de drogas se extiende de manera espectacular a semanas, meses o incluso años. El objetivo de
esta revisión es documentar el estado actual del análisis del cabello en toxicología post
mortem.

INTRODUCCION

En la década de 1960 y 1970, el análisis del cabello se utilizó para evaluar la exposición a
metales pesados tóxicos, como el arsénico, el plomo o el mercurio. Esto se logró utilizando
espectroscopía de absorción atómica que permitió la detección en el rango de nanogramos. En
ese momento, el examen del cabello en busca de sustancias orgánicas, especialmente
medicamentos, no era posible porque los métodos analíticos no eran lo suficientemente
sensibles. Sin embargo, el examen por medio de drogas marcadas con isótopos radiactivos
estableció que estas sustancias pueden pasar de la sangre al cabello y se depositan allí. Diez
años después de estas primeras investigaciones, fue posible demostrar la presencia de
diversos fármacos orgánicos en el cabello mediante radioinmunoanálisis (RIA). En 1979,
Baumgartner et al. [1] publicó el primer informe sobre la detección de morfina en el cabello de
los consumidores de heroína usando RIA. Descubrieron que las diferencias en la concentración
de morfina a lo largo del tallo del cabello se correlacionaban con el momento del consumo de
drogas. En la actualidad, la cromatografía de gases junto con la espectrometría de masas (GC /
MS) es el método de elección para el análisis del cabello y esta tecnología es rutinaria utilizado
para documentar la exposición repetitiva a drogas en la ciencia forense. La mayor ventaja
práctica de la prueba de cabello en comparación con la orina o análisis de sangre para
medicamentos es que tiene una ventana de vigilancia más grande (semanas a meses,
dependiendo de la longitud del tallo del cabello, contra 2-4 días para la mayoría de los
medicamentos). A efectos prácticos, las dos pruebas se complementan entre sí. El análisis de
orina y el análisis de sangre brindan información a corto plazo sobre el consumo de drogas de
un individuo, mientras que las historias a largo plazo son accesibles a través del análisis del
cabello. El cabello no crece continuamente, sino en ciclos, alternando períodos de crecimiento
y quietud. Se dice que un folículo que está produciendo activamente cabello está en la fase
anágena. El cabello (cabeza) se produce durante 4-8 años a una velocidad de
aproximadamente 0.22-0.52 mm por día o 0.6-1.4 cm por mes [2]. Después de este período, el
folículo.

Se sabe que los factores como la frecuencia cardíaca, las enfermedades, la deficiencia
nutricional y la edad influyen tanto en la tasa de crecimiento como en la duración del período
de inactividad. En el cuero cabelludo de un adulto, aproximadamente el 85% del cabello está
en la fase de crecimiento y el 15% restante se encuentra en estado de reposo. El vello púbico,
el pelo del brazo y el pelo axilar se han sugerido como una fuente alternativa para la detección
de drogas cuando no se dispone de pelo en el cuero cabelludo. Diversos estudios han
encontrado diferencias en las concentraciones entre el vello púbico o axilar y el pelo del cuero
cabelludo. Las diferencias significativas de las concentraciones de fármaco en estos estudios se
explicaron por una mejor circulación sanguínea, un mayor número de glándulas apocrinas, una
relación telógena / anágena totalmente diferente y una tasa de crecimiento del cabello
diferente (pelo axilar 0,40 y vello púbico 0,30 mm por día).

2. Mecanismos de incorporación de drogas en el cabello

En general, se propone que las drogas pueden entrar en el cabello por dos procesos: la
adsorción del entorno externo y la incorporación en el tallo del cabello en crecimiento de la
sangre que irriga el folículo piloso. Los medicamentos pueden ingresar al cabello por
exposición a sustancias químicas en aerosoles, humo o secreciones del sudor y las glándulas
sebáceas. Se sabe que el sudor contiene drogas presentes en la sangre. Debido a que el cabello
es muy poroso y puede aumentar su peso hasta un 18% al absorber líquidos, los
medicamentos pueden transferirse fácilmente al cabello a través del sudor. Finalmente, los
químicos presentes en el aire (humo, vapores, etc.) pueden depositarse en el cabello (Fig. 1).
Las drogas parecen incorporarse al cabello por al menos tres mecanismos: desde la sangre
durante la formación del cabello, desde el sudor y el sebo, y desde el entorno externo. Este
modelo es más capaz que un modelo pasivo (transferencia de sangre a las células en
crecimiento del folículo piloso) para explicar varios hallazgos experimentales, como: [1] los
índices de fármaco y metabolito (s) en sangre son bastante diferentes de los encontrados en el
cabello ; y [2] las concentraciones de fármaco y metabolito (s) en el cabello difieren
notablemente en individuos que reciben la misma dosis. La evidencia de la transferencia de la
droga a través del sudor y el sebo se puede apoyar como las drogas y los metabolitos están
presentes en el sudor y el sebo en altas concentraciones y persisten en estas secreciones más
tiempo que lo hacen en la sangre [3, 4]. El mecanismo exacto por el cual los productos
químicos se unen al cabello no se conoce. Se ha sugerido que la difusión pasiva puede
aumentarse mediante la unión del fármaco a los componentes intracelulares de las células
ciliadas, como el pigmento capilar melanina. Por ejemplo, las concentraciones de codeína en el
cabello después de la administración oral dependen del contenido de melanina [5]. Sin
embargo, este probablemente no sea el único mecanismo ya que las drogas quedan atrapadas
en el pelo de los animales albinos, que carecen de melanina. Otro mecanismo propuesto es la
unión de fármacos con sulfhidrilo que contienen aminoácidos presentes en el cabello. Hay una
gran cantidad de aminoácidos, como la cistina en el cabello, que forman enlaces cruzados
entre las fibras S y las proteínas que se difunden en las células ciliadas. Varios estudios han
demostrado que después de la misma dosis, el cabello negro incorpora muchas más drogas
que el cabello rubio [6]. Esto ha dado lugar a discusiones sobre una posible variabilidad
genética de la inhalación de la drogodeposición y aún no se ha evaluado.

3. Colección de muestras
Los procedimientos de recolección para el análisis del cabello para medicamentos no han sido
estandarizados. En la mayoría de los estudios publicados, las muestras se obtienen de
ubicaciones aleatorias en el cuero cabelludo. El cabello se recoge mejor en el área de la parte
posterior de la cabeza, llamada vértice posterior. En comparación con otras áreas de la cabeza,
esta área tiene una menor variabilidad en la tasa de crecimiento del cabello, el número de
cabellos en la fase de crecimiento es más constante y el cabello está menos sujeto a las
influencias relacionadas con la edad y el sexo. Los mechones de cabello se cortan lo más cerca
posible del cuero cabelludo y se debe observar su ubicación en el cuero cabelludo. Una vez
recogidas, las muestras de cabello pueden almacenarse a temperatura ambiente en papel de
aluminio, un sobre o un tubo de plástico. El tamaño de la muestra tomada varía
considerablemente entre los laboratorios y depende del medicamento que se analizará y la
metodología de la prueba. Los tamaños de muestra informados en la literatura varían desde
un solo cabello hasta 200 mg, cortados lo más cerca posible del cuero cabelludo

4. Estabilidad de drogas en el cabello

La presencia de opiáceos se detectó en cinco tallos de pelo (alrededor de 7,5 cm de longitud)

del poeta victoriano John Keats 167 años después de su muerte [7]. Se cree que tomó láudano
(opio) para controlar el dolor de la tuberculosis. Los cueros cabelludos de ocho momias
chilenas y peruanas que datan de 2000 aC a 1500 dC también dieron positivo a la
benzoilecgonina [8]. Todos los estudios indican que la incorporación de medicamentos es muy
estable en el cabello y que la tecnología médica moderna puede ayudar a otras disciplinas.
Claramente, las sustancias orgánicas son capaces de sobrevivir en el cabello durante miles de
años en condiciones favorables (temperatura ambiente y atmósfera seca).

5. Análisis del cabello

Se ha descrito una gran cantidad de procedimientos en los últimos años. Algunos de ellos se
resumen en revisiones [9-11]. El análisis del cabello implica al menos cinco pasos:

? descontaminación del cabello;

? preparación del cabello: pulverización, segmentación en piezas cortas;

? incubación: en metanol, ácido, hidróxido sódico, tampón;

? extracción: líquido-líquido, fase sólida, microextracción en fase sólida;

? análisis: cribado de inmunoensayo y / o cromatografía (gas, líquido) acoplado a

espectrometría de masas.

Las concentraciones de corte propuestas y las concentraciones esperadas en el cabello para las
drogas de abuso se presentan en la Tabla 1. Los contaminantes del cabello serían un problema
si fueran drogas de abuso o sus metabolitos o si interfirieran con el análisis e interpretación de
los resultados de la prueba. Es poco probable que alguien aplique intencionalmente o
accidentalmente algo a su cabello que contenga una droga de abuso. El problema más
importante que enfrenta el análisis del cabello es evitar los falsos positivos técnicos y
probatorios. Los falsos positivos técnicos son causados por errores en la recolección,
procesamiento y análisis de las muestras, mientras que los falsos positivos probatorios son
causados por la exposición pasiva al medicamento. Se han descrito enfoques para prevenir los
falsos positivos probatorios debidos a la contaminación externa de las muestras de cabello
[12]. La mayoría, pero no todos, los laboratorios usan un paso de lavado; sin embargo, no hay
consenso o uniformidad en los procedimientos de lavado. Entre los agentes utilizados en el
lavado se incluyen detergentes tales como champú, soluciones de lavado quirúrgico,
tensioactivos tales como dodecilsulfato de sodio al 0,1%, tampón de fosfato o disolventes
orgánicos tales como acetona, éter dietílico, metanol, etanol, diclorometano, hexano o
pentano de diversos volúmenes para varios tiempos de contacto. En general, se usa una sola
etapa de lavado; aunque a veces se realiza un segundo lavado idéntico. Si se encuentra
contaminación externa al analizar la solución de lavado, la cinética de lavado del lavado
repetido puede demostrar que la contaminación se elimina rápidamente. Según Baumgartner
y Hill [12], la concentración de fármaco en el cabello después del lavado debe exceder la
concentración en el último lavado por lo menos 10 veces. También se ha propuesto que el
cabello se lave tres veces con fosfato antes del análisis para eliminar cualquier posible
contaminación externa y que la concentración total de cualquier fármaco presente en los tres
lavados con fosfato sea mayor de 3,9 veces la concentración en el último lavado. La detección
de metabolitos del fármaco en el cabello, cuya presencia no podría explicarse por hidrólisis o
exposición ambiental, establecería inequívocamente que se había producido exposición
interna al fármaco [13].

Cocaetileno y nor-cocaína parece cumplir con estos criterios, ya que estos metabolitos solo se
forman cuando la cocaína se metaboliza. Debido a que estos metabolitos no se encuentran en
las muestras de cocaína ilícita, no estarían presentes en el cabello como resultado de la
contaminación ambiental, por lo que su presencia en el cabello podría considerarse un
marcador de exposición a la cocaína. Este procedimiento puede extenderse a otras drogas. Sin
embargo, todavía hay una gran controversia sobre el riesgo potencial de contaminación
externa, particularmente para el crack, el cannabis y la heroína cuando se fuma, ya que varios
autores han demostrado que no es posible eliminar por completo las drogas [14,15]. En
conclusión, aunque se recomienda encarecidamente incluir un paso de descontaminación, no
hay consenso sobre qué procedimiento funciona mejor y cada laboratorio debe validar su
propia técnica. Un tema importante de preocupación para el análisis de fármacos en el cabello
es el cambio en la concentración del fármaco inducido por el tratamiento cosmético del
cabello. El cabello está continuamente sujeto a factores naturales, como la luz solar, el clima,
el agua, la contaminación, etc., que afectan y dañan la cutícula, pero los tratamientos
cosméticos para el cabello mejoran ese daño. Se ha prestado especial atención a los efectos
del champú repetido, permanente, relajante y teñido del cabello. Se descubrió que el champú
repetido no tiene una acción significativa sobre el contenido de drogas del cabello [12].
Después de los tratamientos cosméticos, las concentraciones de drogas disminuyen
drásticamente en un 50-80% de su concentración original. Los productos utilizados para
tratamientos cosméticos, como decoloración, ondulación permanente, teñido o relajación,
contienen bases fuertes. Causarán daño al cabello y afectarán el contenido del fármaco (por
pérdida) o afectarán directamente la estabilidad del fármaco [16].

6. Aplicaciones

Al proporcionar información sobre la exposición a las drogas a lo largo del tiempo, el análisis
del cabello puede ser útil para verificar los historiales autoinformados de consumo de drogas
en cualquier situación en la que se desee un historial del consumo de drogas pasado y no
reciente. Además, el análisis del cabello puede ser especialmente útil cuando un historial de
consumo de drogas es difícil o imposible de obtener. Numerosas aplicaciones forenses han
sido descritas en la literatura donde el análisis del cabello fue utilizado para documentar el
caso: diferenciación entre un traficante de drogas y un consumidor de drogas,
envenenamiento crónico, crimen bajo la influencia de drogas, sedación y abuso infantil,
muerte sospechosa, custodia de los hijos, abuso de las drogas en la cárcel, la identificación del
cuerpo, la encuesta a drogadictos, la presentación de sustancias químicas, la obtención de un
permiso de conducir y el control del dopaje [17-19]. Se han publicado más de 450 artículos
sobre el análisis del cabello que informan aplicaciones en toxicología forense, toxicología
clínica, medicina del trabajo y control del dopaje. La principal ventaja práctica del cabello para
probar drogas, en comparación con la orina o la sangre, es su ventana de detección más
grande, que es de semanas a meses, dependiendo de la longitud del cabello analizado, en
comparación con unos pocos días para la orina. En la práctica, las ventanas de detección que
ofrecen las pruebas de orina y cabello son

complementario: el análisis de orina proporciona información a corto plazo sobre el consumo

de drogas de un individuo, mientras que los historiales a largo plazo son accesibles a través del
análisis del cabello. Aunque existe un acuerdo razonable de que los resultados cualitativos del
análisis capilar son válidos, la interpretación de los resultados aún se debate debido a
cuestiones no resueltas, como las influencias de la contaminación externa o el tratamiento
cosmético, y las posibles diferencias genéticas. Se requiere más investigación antes de que
todas las preguntas científicas asociadas con la prueba de drogas para el cabello se cumplan.
Todavía hay una falta de consenso entre los investigadores activos sobre cómo interpretar el
análisis de drogas en el cabello. Entre las preguntas sin respuesta, cinco son de importancia
crítica: (1) ¿Cuál es la cantidad mínima de droga detectable en el cabello después de la
administración? (2) ¿Cuál es la relación entre la cantidad de droga usada y la concentración de
la droga o sus metabolitos en el cabello? (3) ¿Cuál es la in fl uencia del color del cabello? (4)
¿Cuál es la influencia de las diferencias genéticas en las pruebas de cabello? (5) ¿Cuál es la in fl
uencia de los tratamientos cosméticos? Varias respuestas fueron abordadas recientemente
por Wennig [20] y Kintz et al. [21] sobre estos temas específicos.

6.1. Caso 1: caso de asesinato

Un hombre de 39 años fue encontrado muerto en su casa. El análisis de sangre demostró

intoxicación por aldicarb fatal, con una concentración en sangre de 4,81 mg / l. Como la
víctima presentó durante los meses previos varias convulsiones, el juez solicitó un análisis del
cabello que fue positivo a 90 pg / mg que demuestra claramente la exposición repetitiva. La
esposa de la víctima, que fue acusada de asesinato, no impugnó este resultado.

6.2. Caso 2: tolerancia a los opiáceos

Una cuestión clave cuando se interpreta una concentración de metadona en la sangre post
mortem es demostrar el consumo crónico o no. Sin un análisis capilar, no se puede interpretar
una concentración sanguínea periférica de metadona de 800 ng / ml. Si el sujeto es un metano
que tiene un usuario, esta concentración puede, en el mejor de los casos, ser considerada
como ligeramente tóxica. Si el sujeto es ingenuo, puede considerarse potencialmente fatal.
Solo el cabello se eliminaría en la discriminación de un usuario ingenuo / con metadona
crónica.

6.3. Caso 3: crimen sexual facilitado por drogas

Un niño de 14 años fue encontrado muerto en la casa de un delincuente sexual de menores

conocido. En la autopsia, no se observaron cambios morfológicos particulares, a excepción de
la congestión pulmonar y visceral. No hubo evidencia de violencia y el patólogo no encontró
marcas de aguja. Los análisis toxicológicos, como se logró mediante LC-MS, demostraron la
exposición reciente y repetitiva a buprenorfina en combinación con nordiazepam. Las
concentraciones de buprenorfina fueron de 1.1 ng / ml y 23 pg / mg en sangre y cabello,
respectivamente. La muerte del niño fue atribuida a la asfixia de la fiasia, en una situación de
abuso sexual repetitivo y facilitado, debido a la combinación de buprenorfina y
benzodiazepinas, incluso a concentraciones terapéuticas. El perpetrador no cuestionó el uso
de buprenorfina como droga sedante.

6.4. Caso 4: identi fi cación del cuerpo

El cuerpo de X se encontró en un bosque. No se dejó material orgánico, excepto pelo, hueso y

tejidos dañados y cariados. La identificación en esta etapa era imposible. El análisis del cabello
reveló la presencia simultánea de clorpromazina (3,2 ng / mg), fl uoxetina (1,3 ng / mg),
carbamazepina (12,6 ng / mg) y lorazepam (124 pg / mg). Estas drogas correspondían al
tratamiento de un paciente psiquiátrico que desapareció de un hospital vecino desde las 14
semanas. La identificación final se obtuvo mediante análisis de ADN. En este caso, el cabello
aparece como una herramienta excelente para identificar un subtipo de población (por
ejemplo, psicótico). Esto también se puede hacer atacando las drogas de abuso (adicto), la
nicotina (fumador) o la testosterona (masculina).

6.5. Caso 5: abuso de drogas

La mayoría de los datos que tratan sobre el análisis del cabello se han centrado en la detección
de drogas de abuso. Esto es probablemente debido a la frecuencia de los casos. Sin embargo,
las pruebas de cabello pueden ser útiles para documentar el abuso crónico de productos
farmacéuticos o agentes dopantes. El cadáver de un culturista de 36 años fue encontrado en
su cama. La autopsia reveló hipertrofia cardíaca (peso del corazón 510 g) y edema cerebral. Los
análisis toxicológicos fueron negativos en sangre, mientras que la relación testosterona a
epitestosterona en la orina fue de 57: 1 (normal <6: 1), muy indicativa de la administración
exógena de testosterona. La histología confirmó el agrandamiento de las fibras musculares
ventriculares asociadas con necrosis focal diseminada, consistente con el abuso de drogas
anabólicas. La exposición crónica a anabólicos se confirmó mediante análisis de cabello, como
nandrolona (6 pg / mg), methenolona (12 pg / mg), estanozolol (32 pg / mg), testosterona

acetato (9 pg / mg) y enantato de testosterona (15 pg / mg) se identificaron simultáneamente

mediante espectrometría de masas en tándem.

6.6. Caso 6: patrón de abuso de drogas

El análisis multiseccional implica tomar una longitud de cabello y cortarlo en secciones para
medir el uso de drogas durante periodos de tiempo más cortos. El cabello debe cortarse lo más
cerca posible del cuero cabelludo. También se requiere un cuidado especial para garantizar
que el cabello del individuo en el cordón retiene la posición que originalmente tenía uno al
lado del otro. Cuanto más lejos de la raíz del cabello, más cautelosa debe ser la interpretación
de los hallazgos cuantitativos de las secciones individuales del cabello. Se ha afirmado que esta
técnica se puede aplicar para proporcionar un calendario retrospectivo del consumo de drogas
de una persona. El análisis segmentario del cabello se puede utilizar para verificar tanto la
historia previa del fármaco como la abstinencia recente. En caso de abstinencia, las
concentraciones de fármaco más bajas se encuentran en los segmentos más cercanos a la raíz,
lo que confirma la disminución del consumo de drogas o la abstinencia reciente. El cambio de
heroína a otro medicamento (codeína, etilmorfina, dihidrocodeína) se puede establecer con
precisión. Dada la variación de las tasas de crecimiento del cabello y la larga vida media de
determinados fármacos (cannabinoides) que pueden mantenerse en el organismo durante un
mes tras otro, los resultados de un análisis multisectorial no deben utilizarse para determinar
un período preciso de abuso de drogas ni para comparar el consumo de drogas en individuos.
Como ejemplo, el patrón de exposición al fármaco de un adicto a la heroína bajo la sustitución
de buprenorfina se da en la figura 2. Altas concentraciones de buprenorfina se asocian con una
disminución del abuso de heroína.

6.7. Caso 7: herramienta de exclusión

Una prueba de cabello negativa puede ser de suma importancia para documentar un caso
forense Y (hombre de 41 años), estrelló su auto contra un árbol a las 8 a.m. durante un día
laborable, lo que ocasionó la muerte inmediata. Los análisis toxicológicos revelaron 7-amino fl
unitrazepam (59 ng / ml) en su sangre. De acuerdo con los registros médicos, la víctima no fue
tratada con Rohypnol y no era drogadicto. El juez a cargo del caso solicitó una prueba de
cabello, que fue negativa para el fl unidadrazepam y su metabolito (Fig. 3), demostrando
claramente que no había exposición previa (límite de cuantificación por GC / MS / MS de 1 pg /
mg). Por último, su compañero (celoso) admitió que había fallecido con el fin de inducir un
impedimento fatal. Fue acusado de envenenamiento fatal.
6.8. Caso 8: prueba de administración
Un niño de 11 años fue secuestrado por el nuevo compañero de su madre (un drogadicto) y
frecuentemente maltratado que resultó un día en un trauma craneal. El niño fue llevado a
hospital, donde murió 9 días después. Al momento de la admisión, su orina era positiva para el
cannabis (21 ng / ml de THC-COOH), el juez nos pidió que discrimináramos la exposición activa
de la contaminación pasiva. En este caso, se solicitó la identificación única de THC-COOH en
lugar de THC o cannabinol y canna bidiol (que están presentes en el humo de cannabis y que,
por lo tanto, pueden depositarse pasivamente sobre el tallo del cabello). Debido a la muy baja
tasa de incorporación de este compuesto ácido, GC / MS / MS era obligatorio. Esta tecnología
nos permitió cuantificar el THC-COOH en el cabello del niño a 0.8 pg / mg (Fig. 4), prueba
absoluta de la administración repetitiva de cannabis.

7. Conclusiones

Parece que el valor del análisis del cabello para la identificación de los consumidores de drogas
está ganando reconocimiento constantemente. El análisis del cabello puede ser útil como
complemento de las pruebas convencionales de toxicología. Las muestras se pueden obtener
más fácilmente con menos vergüenza, y el cabello puede proporcionar una historia más
precisa del consumo de drogas. Aunque todavía hay controversias sobre cómo interpretar los
resultados, particularmente en lo que respecta a la contaminación externa, los tratamientos
cosméticos, las consideraciones genéticas y la incorporación de fármacos, el análisis puro en el
análisis del cabello ha llegado a una especie de meseta, resolviendo casi todos los problemas
analíticos. Aunque GC / MS es el método de elección en la práctica, GC / MS / MS o LC / MS /
MS se usan hoy en día en varios laboratorios, incluso para casos rutinarios, particularmente
para compuestos de baja dosis, como THC-COOH, fentanilo, fl unidadrazepam o buprenorfina.
La garantía de calidad es un problema importante de las pruebas de drogas en el cabello.
Desde 1990, el Instituto Nacional de Estándares y Tecnología (Gaithersburg, MD, Estados
Unidos) ha desarrollado comparaciones interlaboratorios, recientemente seguidas por la
Society of Hair Testing (Estrasburgo, Francia).