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ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN
E¡ecto de la suramina sobre el patógeno humanoCandida albicans
: implicaciones en el desarrollo de hongos y virulencia
Lys Adriana Braga-Silva, André Luis Souza dos Santos, Maristela Barbosa Portela, Thaı̈s Souto-Padrón y
Rosangela Maria de Araújo Soares
Departamento de Microbiologia Geral, Instituto de Microbiologia Prof. Paulo de Góes (IMPPG), Centro de Ciências da Saúde (CCS), Universidade
Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Brasil
Correspondencia: Rosangela Maria de Araújo
Soares, Departamento de Microbiologia Geral,
Instituto de Microbiología Prof. Paulo de Góes
(IMPPG), Bloco I, Centro de Ciências da Saúde
(CCS), Universidade Federal do Rio de Janeiro
(UFRJ), Avenida Carlos Chagas Filho, 373, Cidade
Universitária, Río de Janeiro, RJ 21941-590, Brasil.
Tel .:155 21 2562 6711; fax:155 21 2560 8344;
correo electrónico: rasoares@micro.uf rj.br
Recibido el 26 de abril de 2007; revisado el 11 de julio de 2007;
aceptado el 16 de julio de 2007.
Publicado por primera vez en línea en octubre de 2007.
DOI: 10.1111 / j.1574-695X.2007.00321.x
Montaje: Alex van Belkum
Palabras clave
Candida albicans ; crecimiento; tubo germinativo;
adhesión; ultraestructura; suramina.
Introducción
La candidiasis se ha convertido en una de las enfermedades
oportunistas más alarmantes, con un gran aumento en el número de
pacientes inmunodeprimidos, envejecidos, que reciben
quimioterapia antibacteriana agresiva y prolongada contra el cáncer
o que se someten a procedimientos quirúrgicos invasivos y
trasplantes de órganos (Pfaller et al., 1998; Eggimannet al., 2003). Las
infecciones invasivas por cándida en estos pacientes se asocian con
tasas brutas de mortalidad del 40% al 50%, estadías prolongadas en
la unidad de cuidados intensivos e impacto económico debido a los
altos costos (Rentzet al.,1998; Olaecheaet al., 2004; Ostrosky-Zeichner
y Pappas, 2006). Indudablemente,Candida albicans se considera la
especie patógena más común y virulenta del género Candida (Pfaller
et al., 1998; Eggimannet al., 2003; Olaecheaet al., 2004; Ostrosky-
Zeichner y Pappas, 2006). La invasión deC. albicans depende de los
mecanismos inmunitarios del huésped que se deterioran; sin
embargo, hay intrínsecos
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Abstracto
Candida albicans es un patógeno oportunista de creciente importancia médica porque causa
infecciones superficiales, mucosas y sistémicas en individuos susceptibles. Aquí, el efecto de la
suramina, un derivado polisulfonado de naftilurea, sobreC. albicans Se evaluó el desarrollo y la
virulencia. En primer lugar, se demostró que la suramina (500metroM) detuvo su crecimiento,
mostrando una acción fungicida dependiente del número de células. El tratamiento con
suramina provocó cambios profundos en la ultraestructura de la levadura, como lo muestra la
microscopía electrónica de transmisión. Los cambios más importantes fueron el
agrandamiento de las vacuolas citoplásmicas de los hongos, la aparición de levaduras con un
citoplasma vacío que se asemeja a las células fantasma y una reducción del grosor de la pared
celular. La suramina también bloqueó la transformación de las células de levadura en el tubo
germinativo y la interacción entreC. albicans y células epiteliales. Para comprobar que la acción
de la suramina sobreC. albicans El crecimiento es una característica general en lugar de ser
específico de la cepa, se analizaron los efectos de la suramina en 14 cepas clínicas orales
aisladas de niños sanos y lactantes VIH positivos. Curiosamente, las cepas deC. albicans
aislados de pacientes con VIH fueron más resistentes a la suramina que las cepas aisladas de
pacientes sanos. En conjunto, los resultados producidos aquí muestran que la suramina
interfirió con procesos fúngicos esenciales, como el crecimiento, la diferenciación y la
interacción con las células huésped.
caracteristicas de C. albicans que promueven su capacidad para
causar enfermedades (Ostrosky-Zeichner & Pappas, 2006). Se han
sugerido varios atributos de virulencia, la mayoría de los cuales se
dividen en tres categorías: reconocimiento del hospedador por
adhesinas de la superficie de las células fúngicas, conversión
morfogenética del organismo de una forma de crecimiento unicelular
(levadura) a una forma filamentosa (hifas y pseudohifas) y la
secreción de biomoléculas invasoras putativas como proteasas y
fosfolipasas (revisado por Nagliket al., 2003).
Durante la última década, ha habido cambios en la
epidemiología de las infecciones por hongos, así como mejoras
dramáticas en el arsenal antimicótico. Sin embargo, existen
limitadas alternativas terapéuticas para combatirCandida
infecciones, principalmente derivados de azol y anfotericina B.
Además, la toxicidad y la aparición de resistencia a estos agentes
antifúngicos son problemas potenciales y destacan la necesidad
de estrategias de tratamiento alternativas (Pfaller et al., 1998;
Aperiset al., 2006).
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400 LA Braga-Silva et al.

Tabla 1. Características de los lactantes VIH positivos de los que Candida albicans se aislaron cepas

C. albicans sonw ARN plasmático viral CD41 Linfocito T Inmunológico

Paciente- (código) Edad / sexo carga (copias mL-1) recuentos (%) escenario Fármacos utilizados en terapia

1 PRI 11 / mujer 170 000 1 C3 Ritonavir, nelfinavir, epivir

2 WVC 10 / hombre 66 000 3 C3 Ritonavir, leucovirina, epivir, didanosina
3 HMS 3 / hombre 6200 43 B1 Zidovudina, didanosina
4 NAS 7 / mujer 200 20 C3 Ritonavir, nelfinavir, epivir
5 DCB 7 / hombre 310 32 C2 Zidovudina, didanosina, nelfinavir

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6 PBO 8 / mujer 210 26 A2 Estavudina, lamivudina, nelfinavir
7 HAO 9 / hombre 210 26 C3 Zidovudina, lamivudina, nelfinavir
8 NMN 3 / mujer 11 000 17 C3 Zidovudina, lamivudina, nelfinavir

-En el momento de la recogida de la muestra, ninguno de los sujetos presentaba signos clínicos de candidiasis oral clásica (Portela et al., 2004).w
Todos C. albicans Las cepas se aislaron de la placa subgingival utilizando puntos de papel estériles (Portela et al., 2004).

La suramina (Germin, Naganol, Morany, Bayer 205) es un derivado
de naftaleno simétrico, polisulfonado e incoloro de la urea. En
general, se considera que la suramina es el fármaco de elección para
las primeras etapas de la tripanosomiasis africana humana. En
humanos, también se usa contra formas adultas del parásito filarial.
Onchocerca volvulus (revisado por Barrett & Barrett, 2000). Este
compuesto de larga data también ha recibido una atención renovada
para el tratamiento de la infección por VIH y el cáncer debido a su
acción inhibidora sobre varios sistemas enzimáticos (Voogdet al.,
1993; Barrett y Barrett, 2000). Debido a estos efectos, el grupo de
presión estadounidense contra el SIDA presionó con fuerza para que
se realizara un ensayo clínico de suramina contra el SIDA en la
década de 1980. El fármaco no tuvo ningún impacto en la progresión
del SIDA, aunque se observaron efectos menores en algunas
incidencias del cáncer asociado al SIDA, el sarcoma de Kaposi (Steinet
al., 1989). Luego, el fármaco se probó contra varias líneas celulares
transformadas neoplásicamente y se sometió a ensayos contra una
variedad de cánceres, donde ha sido de algún valor contra el cáncer
de próstata resistente al tratamiento hormonal (Kehindeet al.,1995).
Más recientemente, la suramina se encuentra en fase I de evaluación
como quimiosensibilizador de la doxorrubicina en perros con
cánceres naturales (Kosareket al., 2006). El objetivo del presente
estudio fue determinar si la suramina ejerce un efecto directo sobre
el crecimiento, diferenciación, ultraestructura y proceso adhesivo de
C. albicans.
Materiales y métodos
Microorganismos
La cepa de C. albicans utilizado a lo largo de este trabajo
(cepa PRI) se aisló del eritema gingival lineal, que es una
banda roja ardiente distintiva a lo largo del margen de la
encía y probablemente tiene una etiología candidiásica, de
un niño VIH positivo (Portela et al., 2004) asistió en el
Hospital Pediátrico, Instituto de Puericultura e Pediatria
Martagão Gesteira (IPPMG) y la Clínica Odontopediátrica en
la Faculdade de Odontologia, Universidade Federal do Rio de
Janeiro (UFRJ), Brasil. Este estudio fue aprobado por el Comité de
Ética del Núcleo de Estudos de Saúde Coletiva (NESC), UFRJ, y los
tutores dieron su consentimiento informado. Además, 14
aislados clínicos orales (siete cepas aisladas de lactantes con
diagnóstico positivo de infección por VIH y siete de niños
inmunocompetentes sanos) (Portelaet al., 2004) se utilizaron
para revelar que la acción de la suramina es una característica
general contra C. albicans especie, en lugar de ser específica de
la cepa. Antes de los experimentos, cadaC. albicansaislado se
cultivó en agar dextrosa Sabouraud y CHROMagar Candida
medio (CHROMagar, Francia) para asegurar viabilidad y pureza.
Además, los datos médicos de cada paciente VIH positivo se
obtuvieron de los registros hospitalarios y se resumen en la
Tabla 1.
Condiciones de cultivo y evaluación del crecimiento celular.
Candida albicans Las cepas de las placas de agar Sabouraud se
inocularon en matraces Erlenmeyer de 50 ml que contenían 10 ml de
medio de infusión cerebro-corazón (BHI) y se cultivaron a 37ºC. 1C
durante 48 h en un agitador de incubadora orbital (200 rpm) (Costa
et al., 2003). El crecimiento celular se estimó contando las levaduras
en una cámara Neubauer.
Efecto de la suramina sobre el crecimiento de hongos
Levaduras (1-108 células) se resuspendieron en 1 mL de medio líquido
BHI y 10 metroL alícuotas (equivalentes a 1-106 células) de esta
suspensión se colocaron en los pocillos de una placa de 96 pocillos y
luego se complementaron con diferentes concentraciones de
suramina (10, 25, 50, 100, 250 y 500 metroM) (Sigma). Se hizo un
control reemplazando la suramina con solución salina tamponada
con fosfato (PBS; NaCl 150 mM, tampón fosfato 20 mM, pH 7,2).
Alternativamente, diferentes densidades celulares (102–106
levaduras) también fueron tratadas con 500 metroM suramin. Estas
mezclas se incubaron durante 24 ha 371C sin agitación. Luego, las
células fueron recolectadas por

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Efecto de la suramina sobre el patógeno humano Candida albicans
centrifugación, lavado con PBS y reinoculado en medio
BHI sólido sin fármacos para medir las UFC.
Efecto de la suramina sobre la ultraestructura fúngica
Se incubaron células fúngicas (cepa PRI) en ausencia o presencia de
250 y 500 metroM suramina durante 24 ha 37 1Después de este
tiempo, las células de control y tratadas con suramina se lavaron dos
veces en PBS, pH 7,2, y se fijaron en glutaraldehído al 2,5%,
formaldehído al 4% en tampón cacodilato 0,1 M, pH 7,2, que contenía
CaCl 5 mM.2 y sacarosa al 3,7% durante 1 ha temperatura ambiente.
A continuación, las células se enjuagaron en PBS y se fijaron
posteriormente con tetróxido de osmio al 1% en tampón de
cacodilato 0,1 M que contenía ferrocianuro de potasio al 0,8% y CaCl
5 mM.2 durante 30 min a temperatura ambiente. Las células se
aclararon, se deshidrataron en acetona graduada y se incrustaron en
Polybed 812. Se tiñeron secciones ultrafinas obtenidas con un
ultramicrótomo Reichert Ultracut S con acetato de uranilo y citrato de
plomo y se examinaron en un microscopio electrónico de transmisión
Zeiss 900 que funcionaba a 80 kV. La evaluación morfométrica de la
pared celular se realizó utilizando imágenes con un aumento final de
-200 000. Se midieron 50 celdas de cada sistema con superficies
de corte casi ecuatoriales y los resultados se expresaron como
media DE.
Efecto de la suramina sobre la morfogénesis fúngica
La transformación de levadura a tubo germinal se realizó
incubando 1-106 levaduras (cepa PRI) en los siguientes
inductores de diferenciación: 1 ml de suero fetal bovino (FBS)
(Hazen & Cutler, 1979), 100 metrog mL-1 hemín (Casanova et al.,
1997) o 5 mM NORTE-acetilo-D-glucosamina (NAG) (Castilla et al.,
1998). Para cada condición, se hicieron dos sistemas distintos:
uno de ellos se complementó con 500metroM suramina y el otro
con PBS (control). Al final del período de incubación (3 h), se
utilizaron muestras para la evaluación microscópica de la
producción de tubos germinativos en un microscopio Zeiss
(Zeiss, Alemania). El porcentaje de germinación se estimó
contando 100 células en una cámara Neubauer.
Efecto de la suramina sobre la interacción entre hongos y células
epiteliales
Para este ensayo, se suspendieron células epiteliales de riñones de
mono (Ma-104) en medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) y
luego se colocaron en un cubreobjetos de vidrio en una placa de
cultivo de tejidos de 24 pocillos (1-105 células bien-1) y cultivado
durante la noche a 37 1C en un 5% de CO2 Atmósfera humidificada.
Control y tratados con suramina (500metroM durante 1 ha 37 1C)
C. albicans (Cepa PRI) se incubaron con las células huésped a una relación
de levadura: célula huésped de 10: 1 en DMEM durante 1 ha 37ºC. 1C.
Después de esto, las levaduras extracelulares se eliminaron mediante
lavados extensivos, las células se fijaron con Bouin, se tiñeron con Giemsa
deshidratado en acetona y xilol y se cubrieron los cubreobjetos.
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401
montado en Permount (Fisher Chemicals). En cada sistema, se
estimó el número de levaduras asociadas por 100 células
contando con un microscopio óptico.
análisis estadístico
Todos los experimentos se repitieron al menos tres veces y todos los
sistemas se realizaron por triplicado. Se muestran imágenes
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representativas de estos experimentos. Los datos fueron analizados
estadísticamente usando Student'st-prueba; PAG los valores de 0,05
o menos se consideraron estadísticamente significativos.
Resultados y discusión
La candidiasis es la infección fúngica oral más común diagnosticada
en humanos. La presencia deCandida en las cavidades bucales de los
pacientes con VIH / SIDA predice el desarrollo posterior de
candidiasis oral (Pfaller et al., 1998). De hecho, más del 90% de las
personas con VIH adquirirán al menos un episodio de candidiasis
orofaríngea durante la progresión al SIDA, mientras que la
candidiasis esofágica se considera una enfermedad definitoria del
SIDA (Haumanet al., 1993). Debido a la aparición de patógenos
resistentes a los antifúngicos convencionales y a la toxicidad de
algunos antimicóticos, se han realizado intensos esfuerzos para
desarrollar agentes antifúngicos más eficaces para uso clínico (Aperis
et al., 2006). Teniendo en cuenta todos estos hechos, el efecto de la
suramina enC. albicans desarrollo in vitro fue investigado.
Inicialmente, se probaron diferentes concentraciones de suramina en
el crecimiento celular deC. albicans Cepa PRI, un aislado clínico oral
resistente al fluconazol (LA Braga-Silva, resultados no publicados).
Los resultados mostraron una reducción significativa (PAGo 0.05) en
el crecimiento de levadura solo con suramina a 500 metroM cuando
106 Las células se trataron previamente durante 24 h con este
fármaco (Fig. 1a). Luego, diferentes densidades celulares (105–102
levaduras) fueron tratadas con 500 metroM suramin. El tratamiento
de 105 células con suramina a 500 metroM inhibió el comportamiento
de crecimiento de C. albicans por C. 50% en comparación con las
células no tratadas (Fig. 1b). Además, el crecimiento celular se vio
fuertemente afectado cuando 104–102 las levaduras se incubaron con
esta concentración de suramina (Fig. 1b), que muestra una acción
fungicida dependiente del número de células. Curiosamente, la
actividad candidacida de las células peritoneales de ratón, que se
midió como una actividad microbicida inespecífica de los fagocitos
después de la inyección intraperitoneal en ratones, mejoró
considerablemente cuando se utilizó suramina como adyuvante
(Hilgerset al., 1985).
La microscopía electrónica de transmisión también confirmó el hecho
de que la suramina afecta C. albicans viabilidad (Fig. 2). Las células no
tratadas presentaron una morfología celular normal con un citoplasma
denso típico y una pared celular distinta (Fig. 2a). Sin embargo, después de
24 h de tratamiento con suramina a 250metroM, se detectó la presencia
de vacuolas citoplasmáticas grandes e irregulares (fig. 2b yc), algunas de
ellas conteniendo pequeñas vesículas (fig. 2c). Alteraciones similares en
especie pero más intensas
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402 LA Braga-Silva et al.

(a)
100

80
% Crecimiento

60

40

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20

0
0 10 25 50 100 250 500
Suramin, [µMETRO]

(B) 70

60

50

40
% Crecimiento

30

20

10

0
106 105 104 103 102
Células tratadas con suramina

Figura 1. Efecto de la suramina sobre Candida albicans tasa de crecimiento. (a) Después
del crecimiento en medio BHI durante 48 ha 371C, las levaduras se recolectaron por
centrifugación, se lavaron en PBS y luego se incubaron (106 células) con diferentes
concentraciones de suramina (0-500 metroMETRO). Estas muestras se incubaron
durante 24 ha 371C, recolectada, lavada en PBS e inoculada en medio sólido fresco sin
fármacos para medir las UFC. El crecimiento de las células de control se tomó como
100%. (b) Alternativamente, diferentes densidades celulares (106–102) se incubaron en
ausencia o presencia de suramina a 500 metroM en las mismas condiciones descritas
anteriormente. Los valores representan la desviación estándar media de tres
experimentos independientes realizados por triplicado. El asterisco en A denota
aquellas muestras tratadas con suramina que tienen una tasa de crecimiento
significativamente diferente a la del control.(PAGo0,05; Estudiantest-prueba).
Figura 2. Efecto de la suramina sobre Candida albicans ultraestructura. Después del
crecimiento en medio BHI durante 48 ha 371C, las levaduras se recolectaron por
centrifugación, se lavaron en PBS y se 106 Las células se incubaron durante 24 horas a
37ºC. 1C en ausencia (a) o en presencia de 250 (b, c) y 500 metroM suramina (d – f). Las
se observaron cuando las levaduras fueron tratadas con 500 metroM flechas en (b), (c) y (d) muestran la vacuola citoplasmática agrandada. Las puntas de
suramina (figura 2d). En algunas células, el agrandamiento de las flecha en (c) indican pequeñas vesículas dentro de la vacuola. En (e) (asterisco) se puede

vacuolas intracelulares fue tan intenso que ocuparon casi toda el observar una gran vacuola que ocupaba casi toda el área del citoplasma. Las flechas

área del citoplasma (Fig. 2e). La suramina se ha descrito como un
potente inhibidor de las enzimas lisosomales y un inductor de
enfermedades de almacenamiento lisosómico caracterizadas por la
presencia de vacuolas agrandadas en diferentes tipos de células
(Constantopouloset al., 1983). Debido a que la vacuola de levadura es
un compartimento ácido que contiene una variedad de enzimas
hidrolíticas, los efectos observados apoyan la hipótesis de que la
grandes en (f) muestran células de levadura fantasma típicas. Además, el efecto de la
suramina sobre la pared celular deC. albicans se muestra (g – i). Las imágenes
representativas demuestran el espesor de la pared celular de las levaduras sin tratar (g)
y tratadas con 250metroM suramina (h) y 500 metroM suramina (i) que se determinó en
al menos 50 células de levadura de cada sistema en secciones casi ecuatoriales. Barras
de escala: (a – e) 0.5metrometro; (f – i) 1.0metrometro.
Además, las levaduras deformadas que presentan una baja electrodensidad

suramina interfiere con el metabolismo del hongo y, en citoplásmica, que se asemejan a las células fantasma, también se detectaron a la

consecuencia, con el crecimiento y diferenciación de las levaduras. mayor concentración de suramina (Fig. 2f). Además, el

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Efecto de la suramina sobre el patógeno humano Candida albicans 403

(a) control
100
suramina

PAG= 0,004
PAG= 0.021
80 PAG= 0.013

% Tubo germinativo
60

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40

20

0
FBS hemin ROCÍN

3,5
celdas de control
(B) (C)
células tratadas con suramina
3,0 control
PAG < 0,001

2.5
Índice de asociación

2.0

1,5
suramina

1.0

0,5

0.0

Fig. 3. (a) Efecto de la suramina sobre la formación del tubo germinal en Candida albicans. La germinación de células de levadura se realizó en ausencia (control) o en presencia de 500
metroM suramina durante 3 ha 37 1C. Ambos sistemas se complementaron individualmente con distintos inductores de diferenciación: FBS, hemina y NAG como se describe en
"Material y métodos". Para evaluar los efectos de la suramina en el proceso de germinación, se contó el número de células que presentaban formación de tubo germinativo en una
cámara de Neubauer. (b, c) Efecto de la suramina sobre la interacción entreC. albicans y células epiteliales (Ma-104). Las levaduras se cultivaron en medio BHI durante 48 ha 371C,
recolectada por centrifugación e incubada (106 levaduras) en ausencia (control) o en presencia de 500 metroM suramina durante 1 h (b). El proceso de interacción se realizó como se
describe en 'Materiales y métodos'. En (c) se muestran imágenes representativas de la interacción. Las flechas en (c) muestran elC. albicans adherido a las células epiteliales. En este
conjunto de experimentos, la viabilidad de las células de levadura no se vio afectada por el tratamiento con suramina usado en este conjunto de experimentos, según se juzgó por
tinción con PI (datos no mostrados). Los valores representan la desviación estándar media de tres experimentos independientes realizados por triplicado. Barras de escala: 50metro
metro.

Los análisis morfométricos de las levaduras después del tratamiento con
suramina mostraron una reducción significativa del grosor de la pared
celular (Fig. 2g – i). Las celdas de control exhiben una pared de celda
electrondense uniforme con un grosor de 225,7 ± 16,0 nm. Después de la
incubación durante 24 h en presencia de 250 y 500metroM suramina, el
espesor de la pared celular se redujo a aproximadamente 187,2 12,5 y
155,4 14,0 nm, respectivamente. Como ocurre con los hongos en general,
la pared celular deC. albicans es una estructura multicapa compleja y
dinámica ubicada en el exterior de la membrana plasmática. Se encarga de
mantener la forma que caracteriza a cada forma de crecimiento (levaduras
e hifas) del hongo. La célula
La pared también juega un papel nutricional y actúa como una
barrera de permeabilidad que protege al protoplasto contra lesiones
físicas y osmóticas. La mayoría de las funciones biológicas
relacionadas con la patogenicidad y la virulencia residen en la pared
celular del hongo porque es la parte más externa de la célula. Es
responsable de la adherencia del patógeno y establece una diafonía
con el anfitrión. Además, la pared celular deC. albicans es una fuente
importante de antígenos. De hecho, varios antígenos
inmunodominantes en la candidiasis se han caracterizado como
componentes de la pared celular (revisado por Ruiz-Herreraet al.,
2006). En consecuencia, los compuestos que desorganizan y / o

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inhibir la estructura de la pared celular podrían ser fármacos potenciales
capaces de bloquear algunos fenómenos biológicos relevantes, como la
diferenciación y adhesión de hongos.
La fascinante habilidad de C. albicans El sufrir cambios dramáticos
en la morfología celular ha provocado la especulación de que esta
plasticidad contribuye a la virulencia del microorganismo. Las hifas
son capaces de ejercer una fuerza mecánica, lo que facilita la
penetración de las superficies epiteliales y también pueden dañar las
de tripanosomas (Trinquier et al., 1995), serina proteasas
(Cadene et al., 1997), proteína tirosina fosfatasas (Zhanget al.,
1998) y Mg21ATPasas (Meyer-Fernandes, 2002). También se han
descrito cambios morfológicos relacionados con la acción de la
suramina en varios componentes del citoesqueleto (Ohmoriet
al., 2001).
Para demostrar que la acción de la suramina sobre
C. albicans El desarrollo es una característica general en lugar de

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células endoteliales, ayudando al escape de
C. albicans desde el torrente sanguíneo del huésped hacia tejidos
más profundos. La morfogénesis hifal es, por tanto, una parte
integral de la estrategia general de virulencia deC. albicans (
Kumamoto y Vinces, 2005). En este contexto, se estudió el efecto de
la suramina en la levadura a la transformación del tubo germinativo,
desencadenada en células hambrientas de carbono a 37ºC.1C por
tres inductores distintos: FBS, hemina y NAG. Como era de esperar,
más del 70% de las células formaron tubos germinales bien definidos
cuando se incubaron individualmente con cada inductor de
diferenciación (Fig. 3a). Por el contrario, una inhibición significativa (
PAGo 0.05) en la emergencia del tubo germinal se detectó cuando
suramina a 500 metroSe añadió M a los sistemas de diferenciación
por inducción (Fig. 3a). Para verificar si la suramina promovía el
bloqueo de la diferenciación a través de la pérdida de la integridad
celular, se evaluó la viabilidad de la levadura. El resultado mostró que
más del 98% de las células tratadas con suramina eran viables
cuando se evaluaron mediante el método de exclusión de yoduro de
propidio (PI). De manera similar, los efectos de la suramina en el
proceso de diferenciación en varios sistemas celulares han sido
ampliamente documentados, incluido el osteoclasto (Regmiet al.,
2005) y retina neural (Cirilloet al., 2001).
La adherencia de las levaduras a las células y tejidos del huésped
ser específico de la cepa, el efecto de la suramina se analizó en
14 cepas clínicas orales distintas de C. albicans aislado de niños
sanosn = 7) y lactantes VIH positivos (n = 7) (figura 4). En este
conjunto de experimentos, las células de levadura cultivadas en
medio BHI durante 48 h se incubaron con suramina a 500ºC.
metroM durante 24 hy luego esparcir en un medio sólido para
medir el número de UFC. Sorprendentemente, las cepas deC.
albicans aislados de pacientes con VIH fueron más resistentes a
la suramina en comparación con las cepas aisladas de individuos
sanos (Fig. 4, recuadro). Existe evidencia a favor de un vínculo
entre el uso profiláctico de agentes antifúngicos y la selección de
antimicóticos resistentes.C. albicans levaduras distintas de la
disminución de la susceptibilidad a estos agentes. ParaC.
albicans, El desarrollo de resistencia secundaria al tratamiento
con fluconazol se ha observado comúnmente en pacientes
infectados por el VIH que recibieron tratamiento prolongado con
fluconazol para la candidiasis orofaríngea (He et al., 1994).
Teniendo en cuenta estas consideraciones, todos los pacientes
infectados por el VIH, de quienesC. albicans Las cepas fueron
aisladas y estudiadas aquí, recibieron terapia anti-VIH (Tabla 1),
VIH - 100
VIH + 80
100

% Crecimiento
representa otro factor de virulencia importante durante la 60
candidiasis (Ruiz-Herrera et al., 2006). Las interacciones adhesivas se 40
80 20
consideran el paso inicial y crítico que conduce al establecimiento de
% Crecimiento

0
una infección. Para demostrar esto,C. albicans se incubó con
60
suramina a 500 metroM durante 1 h antes de la interacción con las
células epiteliales, con el fin de detectar el efecto de la suramina en el
40
proceso de interacción celular. Las levaduras mantuvieron su
viabilidad después del tratamiento durante 1 h con esta 20
concentración de suramina según el método de exclusión de PI (en el
que más del 99% de las levaduras eran viables) y mediante la 0
medición de CFU (datos no mostrados). Los resultados mostraron
H O

B O
RA G
N O
N S

PBB

77 GS
D S

7
MSC
VMS
HC

A F
M

M
C

G
A

-V
A
M
V
W

que la suramina pudo disminuir (PAGo 0,001) el índice de asociación

entre levaduras y células epiteliales por Candida albicans son
C. 50% (Fig. 3b, c). Figura 4. Efecto de la suramina sobre el crecimiento de diferentes cepas clínicas
El amplio espectro de acciones de la suramina se ha atribuido orales deCandida albicans aislado de VIH positivo (VIH1) y niños sanos (VIH).

a la presencia de seis cargas negativas a pH fisiológico en la
molécula. La suramina puede afectar diferentes proteínas y
enzimas de distintas formas. Los efectos más evidentes descritos
fueron la inhibición de las actividades enzimáticas, por ejemplo:
la transcriptasa inversa de los retrovirus (De Clerq, 1979), la
proteína quinasa C (Gschwendtet al., 1998), ADN polimerasa
(Voogd et al., 1993), enzimas glucolíticas
Después del crecimiento en medio BHI durante 48 ha 371C, las levaduras se
recolectaron por centrifugación, se lavaron en PBS y se 106 Luego, las células se
incubaron con 500 metroM suramin. Estos sistemas se incubaron durante 24 h a
37ºC.1C y luego se recogieron, se lavaron en PBS y se inocularon en un medio
sólido reciente sin fármacos para medir las UFC. Las células de control se
tomaron como 100%. Cada barra representa las medias SD de tres experimentos
independientes realizados por triplicado. El recuadro muestra el SE medio de la
media de cada grupo (%PAGo0,05; Estudiantest-prueba).

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por Blackwell Publishing Ltd. Todos los derechos reservados
Efecto de la suramina sobre el patógeno humano Candida albicans
lo que podría justificar la selección de los más resistentes C.
albicans cepas que presentaron una mayor resistencia a la
acción de la suramina (Fig. 4). Corroborando esta hipótesis, en
sujetos infectados por el VIH con candidiasis oral o vaginal,C.
albicansLas cepas se seleccionan con atributos de virulencia y
patogenicidad elevados (revisado por Naglik et al., 2003).
En conclusión, los resultados del presente estudio sugieren que la
suramina, cuando se usa en las condiciones descritas anteriormente,
alteró el comportamiento de crecimiento de C. albicans, provocando
alteraciones irreversibles a nivel ultraestructural, bloqueando los
mecanismos de adherencia entre hongos y células epiteliales y también
deteniendo la transformación de la levadura a tubo germinal.
Expresiones de gratitud
El presente estudio fue apoyado por becas del Conselho
Nacional de Desenvolvimento Cientı́fico e Tecnológico (CNPq),
Financiadora de Estudos e Projetos (FINEP), Fundação de
Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ),
Fundação Universitária José Bonifácio (FUJB) y Programa de
Apoio a Núcleos de Excelência (PRONEX). Los autores agradecen
a la Dra. Marta H. Branquinha por la útil revisión crítica en inglés,
así como por las valiosas sugerencias sobre el manuscrito. Los
autores también agradecen a Venı́cio F. Veiga por su ayuda con
la microscopía.
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