Guía de Uso ITC

Observaciones Generales
 El IR se compromete a agradecer a: “Proyecto Fondequip EQM140174”
 Para utilizar el equipo el IR se compromete a informar con precisión la composición y toxicidad
de las soluciones a utilizar.
 El CBIB no es responsable del diseño experimental o análisis de resultados.
 El CBIB puede recomendar las condiciones de uso si es requerido, sin embargo, los resultados son
exclusiva responsabilidad del IR.
 Los resultados del equipo (Calor liberado por inyección) serán entregados al IR en formato digital
del programa NanoAnalize de TA Instrument (disponible gratuitamente en www.tainstrument.com),
donde se pueden realizar los análisis correspondientes de manera fácil y amigable al usuario.
 Se recomienda la entrega de las soluciones Stock por parte de IR. El CBIB facilita sus
instalaciones para la preparación de soluciones de baja complejidad, sin embargo, no es responsable
de la correcta preparación de las de las mismas y no es responsable de cualquier tipo de error o
contaminación durante su preparación
 Los equipos estarán disponibles para el uso del IR previa obtención de una curva de calibración que
garantice su uso. La no obtención de esta curva puede retrasar el inicio de los experimentos.
Bases generales para la obtención de un termograma de Titulación Incremental
Las condiciones de este procedimiento experimental buscan optimizar el balance entre el calor de reacción
generado entre cada inyección y el número de puntos necesarios para calcular con precisión los parámetros
Kd, ∆H y la estequiometria de la reacción “n” .

Como determinar las concentraciones a utilizar

Celda: Las concentraciones para ITC dependen de la relación entre ligando y la macromolécula en estudio,
son características de cada sistema y deben ajustarse de acuerdo con la magnitud de calor de reacción y la
constante de unión esperada.
Una guía para las concentraciones inicial en la celda es el valor “c”, el cual depende del numero
estequiométrico de ligando que se une a la macromolécula (n), la concentración Molar de la macromolécula
en la celda (Mcelda) y la constante de disociación Kd según la ecuación

Termograma
Una ITC Típico
primera aproximación Influencia
es un valor c de 50 para nuestro delpero
equipo, valorsu
c en la forma
valor de la
óptimo seisoterma de unión,
encuentra entre
5<c< 500. Kd,dH y n similares

En términos generales, para una relación 1:1 ligando-macromolécula la concentración de esta última en la
celda debe encontrarse entre 5*Kd a 500*Kd. En caso de solo conocer el valor de IC50, una buena
aproximación se logra al reemplazar el valor de Kd por 10*IC50 como primera aproximación.
Jeringa: Para valores de c cercanos a 5 (c=5) se recomienda una concentración de ligando en la jeringa 20
veces mayor que la concentración de la macromolécula (20x Mcell). Para valores 5<c<50 se recomienda una
razón de concentración 10:1 (Jeringa: Celda) y 8:1 para valores de c>50.
En caso de no conocer Kd : Si se desconoce el valor de Kdo esta no puede ser estimada, la concentración de
ligando se recomienda utilizar una razón 10:1 (Jeringa: Celda) con una concentración de la macromolécula
entre 10-50 uM).

Parámetros del equipo y características de las muestras