SIEMBRA, AISLAMIENTO Y

TRASPLANTE

Semestre 2021 - II
 SIEMBRA,
AISLAMIENTO y
TRANSPLANTE

Procedimiento en el cual se
pone en contacto al
microorganismo con el medio
de cultivo para que pueda
desarrollarse y multiplicarse
IN VITRO en condiciones
optimas
METODO DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO
ESTRIADO O AGOTAMIENTO EN SUPERFICIE
 AISLAMIENTO POR
DISEMINACIÓN

METODO DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

AISLAMIENTO
POR DILUSIÓN
COLONIAS
 Práctica
MEDIOS DE CULTIVO

MSc. Erika Sofía Pérez Vélez

 OBJETIVOS

• Conocer los fundamentos, tipos e

importancia de los medios de cultivo.
• Aplicar los procedimientos de
preparación de medios de cultivo.
 MEDIOS DE CULTIVO

CULTIVO

Crecimiento de poblaciones microbianas en ambientes

artificiales bajo condiciones de laboratorio.

MEDIO DE CULTIVO
Conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el
desarrollo de los microorganismos
 ¿Para que sirven?

Cultivo de microorganismos IN VITRO

Aislar especies bacterianas para su

identificación y estudios complementarios

Consideran

Necesidades nutritivas
(elementales, energéticas, factores de
crecimiento)
Necesidades fisicoquímicas
(temperatura, hidratación, pH, O2)
 MEDIOS DE CULTIVO - CLASIFICACIÓN

POR SU NATURALEZA

Empíricos o naturales Sintéticos

Mixtos
 MEDIOS DE CULTIVO - CLASIFICACIÓN

POR SU ESTADO FÍSICO

Líquidos

Sólidos

Semisólido
 POR SU COMPOSICIÓN

• Nutritivos
• Enriquecimiento
MEDIOS DE CULTIVO
• Selectivos
CLASIFICACIÓN • Diferenciación
• Transporte
 PROCEDIMIENTO

PREPARACIÓN
DE MEDIOS DE CULTIVO

 Video
 Simulación
 Identificación de tipos de medio de
cultivo
 CUESTIONARIO

• ¿Qué es un medio de cultivo? ¿Para qué sirve? ¿Qué componentes

debe contener?
• ¿Qué es el agar y para qué sirve?
• Además del medio de cultivo, ¿qué más es necesario aportar a un
microorganismo para lograr su desarrollo en condiciones de
laboratorio?
TÉCNICAS DE RECUENTO
BACTERIANO

Semestre 2021 - II
 RECUENTO
BACTERIANO

Procedimiento en el cual se
determina cuantitativamente
la carga bacteriana en la
muestra a estudiar.
Se determina el número de
microorganismos en una
muestra en relación al número
de colonias que forman UFC
(Unidades formadoras de
colonia)
Se reporta como:
UFC*/unidad de volumen o
peso
 Determinación de Nro
de UFC

Método de vertido en
placa Método de extensión
*anaerobios en placa
facultativos y *aerobias obligatorias
microaerófilos
Conteo de células
viables

 Siembra de volúmenes
conocidos
 35-37°C por 24 a 48 horas
Asa calibrada

 Volúmenes conocidos
 Uso de factor de dilución de asa
empleada
 Usado en cultivos de orina
 Determina UFC/g o mL de
muestra
Técnicas de recuento

 Cajas Petri con 30 a 300 colonias

 Estadísticamente representativo
 Aquellas placas con mas de 300
colonias se reportan como
“incontables”
 Se cuenta el total de la placa o se
escoge cuadrantes de alta,
mediana y baja carga
 Se realiza la sumatoria de 3
cuadrantes y se halla el
promedio.
 Se multiplica por 65
Nro colonias = (CA+CM+CB/3)*65
CA= 32
CM=19
CB=10
Suma total =61  prom
61/3= 20.33
Factor
20.33*65 =1322
Obtención resultados
UFC/ml o UFC/g
UFC/ml o UFC/g = Nro colonias por placa* factor dilución /ml de muestras sembrada

Nro colonias: 55
Dilución 10^-3
Volumen de siembra=0.2
https://www.youtube.com/watch?v=oOVcbloehn8
 Técnica
Número más probable (NMP)

Semestre 2021-II
 Uso de diluciones
Suspension madre 1:10 TW

1 ml 1 ml 1 ml
• Objetivo: obtener inóculos
de al menos una célula que
presente crecimiento en el
medio de cultivo
• Evaluación presuntiva
(fermentación de la lactosa)
10-1 10-2 10-3
• Evaluación confirmativa,
(fermentación de lactosa y B.G.B.L
producción de gas).

Incubación a 31ºC durante 24-48h.

 ¿Cuántas
diluciones hacer?

• Dependiente del grado de contaminación.

• Se debe preparar el número suficiente de
diluciones de forma que en la última dilución
no se obtenga crecimiento de
microorganismos, después de la inoculación
y la incubación correspondiente.
 Tema 6

+ + + + - - - - -

Caldo lactosado biliado verde brillante

(Brilliant Green Bile Lactose: B.G.B.L)
Peptona 10 g
Lactosa 10 g
Bilis de buey 20 g Lectura: En las tablas del N.M.P. (tres series de tres
Verde brillante0,0133 g tubos). Son positivos los tubos que presentan gas en
Agua destilada 1.000 ml la campana Durham
Disolver. Ajustar el pH a 7,4. Distribuir en tubos de
ensayo con campana Durham a razón de 10 ml.
Esterilizar en autoclave a 121 ºC 20 minutos.
Tema 6
• Técnica NMP

• Lectura tabla NMP

https://www.youtube.com/watch?v=V3IvYaXpbBY