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TERCERA UNIDAD:

Alfa- y Beta- Proteobacteria. Actinobacteria, Spirochetes y


Chlamydia.
Brock Biology of Microorganisms, 15th Edition 2019

Phylums principales del Dominio Bacteria

Dr. Marco A. Rivera J. 10/24/2020 2


Árbol filogenético de algunos géneros
claves de Proteobacterias

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ALPHA-PROTEOBACTERIAS:

• La 2da más grande de las Clases en Proteobacteria.


• Cerca de 1000 especies descritas
• La mayoría de las especies son aerobios obligados o
facultativos; muchos oligotróficos.
• 10 ordenes, la mayoría de especies pertenecen a
los 6 de la figura.

Parásitos intracelulares obligados o mutualistas de


animales. Las especies de este orden no pueden cultivarse
en ausencia de células hospederas. Especies relacionadas
a artrópodos e insectos.

Brock Biology of Microorganisms, 15th Edition 2019


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(a)

Rickettsias growing within host cells. (a) Rickettsia rickettsii in tissue culture. Cells
are about 0.3 μm in diameter. (b) Electron micrograph of cells of Rickettsiella popilliae
within a blood cell of its host, the beetle Melolontha melolontha..
The bacteria grow inside a vacuole within the host cell.

(b)

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Brock Biology of Microorganisms, 15th Edition 2019
Phylum Proteobacteria
Alfa…
Familia Bartonellaceae
Familia Brucellaceae
α
Bacilos Gram Negativos Familia Rhizobiaceae

Familia Rickettsiaceae
Familia Anaplasmataceae
Rickettsiaceae

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Electron lucent zone of Rickettsia

Electron photomicrograph of an intracytosolic rickettsia


in the process of binary fission. Rickettsiae possess a
characteristic gram-negative morphology, with an
electron-lucent “halo” or slime layer (arrowheads)
adjacent to the cell wall (small arrow) and a cytoplasmic
membrane (large arrow) separated from the cell wall by
the periplasmic space.

Dr. Marco A. Rivera J. J. Clin. Microbiol. January 2004vol. 42 no. 1 90-98 10/24/2020 8
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E. Rosenberg et al. (eds.), The Prokaryotes – Alphaproteobacteria and Betaproteobacteria, Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2014
Género Rickettsia…
Rickettsia prowazeki. Bacilos cortos, cocobacilos pequeños, Gram negativos.
Tamaños: 0.3–0.5 x 0.8–2 μm
Rickettsia typhi Ni flagelos ni endosporas.
Rickettsia rickettsii. Movilidad basada en actina (actin tail) en el grupo FM (SFG).
Rickettsia parkeri Intracelulares obligados, se multiplican solo dentro de células, a
nivel del citoplasma. Excepciones?
La mayoría en hospederos artrópodos, que son reservorios y
vectores: piojos, pulgas, garrapatas y ácaros.
Metabólicamente especializados. No utilizan glucosa, obtienen
energía de glutamato/glutamina por oxidación.
Solo cultivables en línea celular (Vero) o huevos embrionados.
Infectan predominantemente células endoteliales de mamíferos.

Endosimbiontes intracelulares
En el ciclo natural hay hospederos invertebrados y vertebrados.
Transmisión transovárica en el vector es fundamental para su
mantenimiento en la naturaleza.
Las muestras pueden preservarse solo a temperaturas <-50°C.
25 especies reconocidas.
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Género Rickettsia…
Algunas características genómicas:
Genomas pequeños con bajo %GC (28.9%
- 33%)
SFG: 1.25 a 2.3 Mb; TG:1.11 Mb.
817 – 2479 genes codificantes.
Presentan muchos pseudogenes,
funcionales y afuncionales. ¿Evolución
reductiva?
Presentan alto % de ADN no codificante
(16%-31%).
Al menos 20 plásmidos descritos en 11 sp.
El genoma de R. prowazekii tiene genes
homologos al operon VirB de Agrobacterium
tumefaciens.

Ticks and Tick-borne Diseases 10 (2019) 462–469


Dr. Marco A. Rivera J. Universitas Scientiarum, 2012, Vol. 17 N° 1: 82-99 10/24/2020 13
Garrapatas de la
familia Ixodidae
(género
Amblyomma)
involucradas en la
transmisión de
rickettsias en
Latinoamérica.

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La motilidad temprana está controlada por la proteína RickA, que activa el complejo Arp2/3 que regula el
citoesqueleto de actina (nucleación y polimerización de la actina).
Más adelante en la infección, otra proteína, Sca2, toma el control al imitar la acción de las forminas del hospedero,
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otra clase de proteínas asociadas con el extremo de crecimiento rápido de los filamentos de actina.
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NATURE VOL 396 | 12 NOVEMBER 1998 |www.nature.com

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Las rickettsias, inoculadas por el vector, infectan de
forma directa células endoteliales, donde sobreviven,
proliferan e invaden células adyacentes, produciendo
lesión endotelial que altera la permeabilidad capilar y
vasculitis. Esto es la causa de manifestaciones clínicas
graves como edema, hipovolemia e hipotensión, y de
las manifestaciones típicas como exantema,
neumonitis y afectación del SNC.

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Las rickettsias se unen a la célula a través de moléculas como la Ku70 (proteína kinasa dependiente
de DNA), usando como ligandos sus proteínas OmpA, OmpB, péptido B, Adr1 o Adr2. La interacción
induciría un re-arreglo en el citoesqueleto celular que permite la infección bacteriana por medio de un
fagosoma, posteriormente la bacteria se multiplica y lisa rápidamente la membrana fagosomal para
escapar al citoplasma, donde sobrevive debido a la liberación de factores de secreción (T4SS), los
cuales desencadenan en la célula infectada, la síntesis y secreción de nutrientes.

Dr. Marco A. Rivera J.


Advances in rickettsia pathogenicity. Balraj et al. 2009 10/24/2020 18
Dr. Marco A. Rivera J. Seminars in Diagnostic Pathology 36 (2019) 146–151 10/24/2020 19
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Seminars in Diagnostic Pathology 36 (2019) 146–151

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Visualización de rickettsias mediante microscopia de fluorescencia.
La prueba de IFI directa emplea un anticuerpo
policlonal conjugado a fluoresceína, que reacciona con
R. rickettsii, R. conorii y R. akari, y que ha sido útil
para muestras con lesiones congeladas, fijadas en
formalina o embebidas en parafina.

La IFI indirecta es la prueba patrón, contiene todas las


proteínas antigénicas sensibles al calor y los LPSs
comunes al grupo antigénico.

Rev Chilena Infectol 2014; 31 (1): 54-65

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Rev Chilena Infectol 2014; 31 (1): 54-65
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Journal of Microbiological Methods 119 (2015) 87–97
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El gen de la citrato sintetasa (gltA) de la bacteria, ha sido el principal blanco para la amplificación de todas
las especies patógenas de Rickettsia. El gen htrA (lipoproteína 17kDa, 434 pb).
Los genes OmpA y OmpB, que también se amplifican para ser secuenciados, han sido más utilizados en
trabajos de identificación de especie.
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Anaplasmataceae

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Las bacterias penetran al interior celular por
fagocitosis. En el interior es posible q inhiban
la fusión fagosoma-lisosoma y retrasen la
apoptosis celular, facilitando su división.

Una característica en diferentes especies de


Ehrlichia y Anaplasma es que se aglomeran en
el citoplasma, formando inclusiones que se
ven al microscopio óptico, las mórulas. Estas
mórulas se forman a los pocos días, y pueden
verse en sangre periférica, pero también en
médula ósea, sinusoides hepáticos y/o
esplénicos, e incluso en las células del LCR.

Enferm Infecc Microbiol Clin 2005;23(6):375-80

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Género Ehrlichia…
De cocobacilos pequeños a elipsoidales, Gram negativos.
E. canis Diámetro: 0.5 μm, pero su tamaño varía considerablemente,
E. chaffeensis hay pleomorfismo.
Intracelulares obligados, se multiplican dentro de células.
E. ewingii
No móviles.
E. muris Hospederos artrópodos y vectores: garrapatas.
E. ruminantium Una característica que las diferencia de las rickettsias es que se
replican en vacuolas derivadas de la membrana celular de las
células que infectan, principalmente leucocitos PMN y plaquetas.
Se observan en las células que infectan, en una especie de
agregados citoplasmáticos denominados “mórulas”, mediante las
tinciones de Wright y Giemsa.
Crecimiento en líneas celulares, por ejemplo, células
promielocíticas HL-60.

Ciclo natural: hospederos invertebrados y vertebrados.


Pueden provocar citopenias, e infecciones oportunistas.
5 especies reconocidas.
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Ehrlichia develops highly adaptative strategies inside
host cell.
(1) The DC enter and attach to mammalian cells by using
EtpE that binds to GPI-anchored protein DNase X.
(2) The bacteria replicate in an ECV (Ehrlichia-containing
vacuole) that resembles early endosomes and secrete
T1SS effector proteins (including TRP32, TRP47,
TRP120, and Ank200) to escape host innate immune
responses.
(3) Then, the DC differentiate into RC. At this stage, the
bacteria fuse with TfR endosome to acquire iron from
the host cell and disrupt cell-signaling pathways like
JAK/STAT to prevent innate immune response.
(4) At the same time, Ehrlichia escapes the lysosomal
pathway and secretes ECH_0825, a T4SS effector, to
inhibit apoptosis and ROS production.
(5) RC divide via binary fission to form microcolonies
(morulae).
(6) Ehrlichia exploits host SUMOylation pathways to
mediate TRP120-host interactions to promote
intracellular survival.
(7) The DC are released by exocytosis or rupture of host
cells.
(8) Ehrlichia spreads to neighboring cells through the host
cell filopodium.

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Microbes and Infection 18 (2016) 172-179
Vasculitis dérmica difusa. Hemorragias petequiales a equimóticas difusas en todo el cuerpo.

Dr. Marco A. Rivera J. Tintel et a. REDVET 2016, 17(9). 10/24/2020 34


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Dr. Marco A. Rivera J. 10/24/2020 36
Dr. Marco A. Rivera J. 10/24/2020 37
Dr. Marco A. Rivera J. 10/24/2020 38
Dr. Marco A. Rivera J. 10/24/2020 39
Journal of Clinical Microbiology 2014, 52(11): 4102–4104

Dr. Marco A. Rivera J. 10/24/2020 40


+ -
Dr. Marco A. Rivera J. 10/24/2020 41
Dr. Marco A. Rivera J. Journal of Microbiological Methods 119 (2015) 87–97 10/24/2020 42
Dr. Marco A. Rivera J. Journal of Microbiological Methods 119 (2015) 87–97 10/24/2020 43
Dr. Marco A. Rivera J. 10/24/2020 44

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