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Artículo

Evaluación estacional y antioxidante del aceite esencial

de eugenesia uniflora L., rico en curzereno, producido
térmicamente in situ
Jamile S. da Costa 1 , Adenilson S. Barroso dos, Rosa Helena V. MourlosO dos
, Joyce Kelly R. da Silva 3 , josEs Guilherme S. Maia 1.4 y Pablo Luis B. Figueiredo 5,*
1 Programa POs-graduadoloso en CiyFarmacéuticoyuticas, Universidad Federal de ParLos,
BelEsm 66075-900, Brasil; jamile.s.costa@hotmail.com (JSdC); gmaia@ufpa.br (JGSM) LaboratORío de
dos bioprospecciónlosoe Biología Experimental, Universidad Federal de Oeste do ParLos,

santoEsm 68035-110, Brasil; adenilson.barroso@yahoo.com.br (ASB);

mouraorhv@yahoo.com.br (RHVM)
3 Programa POs-graduadoloso en Biotecnología, Universidad Federal de ParLos, BelEsm 66075-900, Brasil;
joycekellys@ufpa.br
4 Programa POs-graduadolosel en el queallímica, Universidad Federal de Maranhlosustedlosel luallís 64080-040,
5 Departamento de Ciencias de BrasilyCiencias Naturales, Universidad Estatal de ParLos, BelEsm 66050-540, Brasil
* Correspondencia: pablo.figueiredo@uepa.br

Recibido: 5 de enero de 2020; Aceptado: 13 de febrero de 2020; Publicado: 19 de febrero de 2020

Abstracto: El aceite esencial de eugenesia uniflora Se le han atribuido actividades antidepresivas, antinociceptivas,
antileishmaniales, larvicidas, antioxidantes, antibacterianas y antifúngicas. Se sabe que el cultivo de esta planta
puede verse afectado por la estacionalidad, favoreciendo la alteración en la composición del aceite y sus actividades
biológicas. Este estudio tiene como objetivo realizar la evaluación anual del aceite tipo curzereno de
E. uniflora y determinar su actividad antioxidante. El rendimiento de aceite de la estación seca (1,4± 0,6%) no
difirió estadísticamente de la temporada de lluvias (1,8 ± 0,8%). El curzereno, un sesquiterpeno oxigenado,
fue el constituyente principal, y su porcentaje no mostró diferencias significativas entre los dos períodos:
seco (42,7%± 6,1) y lluvioso (40,8 ± 5,9%). Los análisis de componentes principales y de conglomerados
jerárquicos presentaron un alto nivel de similitud entre las muestras mensuales de los aceites. Asimismo, en
el estudio anual, el rendimiento y composición de los aceites no presentó una correlación significativa con las
variables climáticas. La actividad antioxidante de los aceites Prohibición de DPPH radical con un valor
promedio de 55.0± 6,6%. El alto contenido de curzereno en los aceites mensuales deE. uniflora sugiere su
potencial de uso como futura alternativa fitoterapéutica.

Palabras clave: myrtaceae; sesquiterpenos; composición volátil; curzerene; la variación estacional; DPPH;
2,2-difenil-1-picrilhidrazilo

1. Introducción

Eugenesia L.se incluye entre los otros 130 géneros de Myrtaceae y comprende aproximadamente
1000 especies distribuidas principalmente en América Central y del Sur y el continente africano [1,dos]. En los
dominios fitogeográficos de Brasil, 260 especies deEugenesia se describen en la Mata Atlántica, 89 en la Selva
Amazónica y 86 en el área del Cerrado Brasileño (Sabana) [3], es decir, los tres principales biomas del país.
Entre los taxones de Myrtaceae,Eugenesia destaca por la diversidad de sus actividades biológicas, por ejemplo,
fungicida [4], bactericida [5], antioxidante y anti-acetilcolinesterasa [6].
eugenesia uniflora L. es un árbol frutal que se encuentra de forma natural en toda América del Sur, con
uso de sus frutos [7,8]. Se le conoce popularmente como "Pitanga", denominación originaria de la lengua
indígena Tupi brasileña, que significa "fruto rojo oscuro", y también se le llama "Cereja Brasileira" o

Biomoléculas 2020, 10, 328; doi: 10.3390 / biom10020328 www.mdpi.com/journal/biomolecules

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"Cereza" [9]. La planta es utilizada por las comunidades tradicionales para tratar la diarrea, la tos y el
reumatismo, y tiene otras propiedades biológicas, como actividades hipotérmicas, antinociceptivas y
antimicrobianas [10,11]. Las frutas de Pitanga son ricas en calcio, magnesio, fósforo, potasio y vitamina
C [12], así como antocianinas, flavonoles y carotenoides [13]. Los frutos se consumen en su forma
natural, o en refrescos, jugos, helados, dulces, licores y jaleas, por su sabor dulce [14]. Las comunidades
tradicionales utilizan una infusión de hojas y cortezas como antihipertensivo y antipirético, así como
contra influenza, tos, enfermedades cardiovasculares, asma, sinusitis, cólicos, diarrea, disentería, fiebre
y reumatismo [10,11].
eugenesia uniflora es una de las especies más investigadas del Eugenesia género, incluso a través de estudios
botánicos, fitoquímicos y farmacológicos, debido a su amplia distribución geográfica [15]. En un artículo publicado
anteriormente, informamos que el aceite esencial de un rico en curzerenoE. uniflora El quimiotipo mostró un efecto
antiproliferativo y citotóxico significativo contra algunas cepas de cáncer [dieciséis]. El curzereno es un hidrocarburo
sesquiterpénico que se aisló originalmente decúrcuma larga L., una medicina tradicional china a base de hierbas, que
mostró actividad contra el cáncer en modelos in vitro e in vivo [17]. Además, el curzereno se informó en la literatura
como un constituyente producido por calentamiento durante la extracción del aceite esencial y durante todo el
análisis cromatográfico de gases, como resultado de la reordenación sigmatrópica del furanodieno, un compuesto
sesquiterpénico sensible al calor que está presente en elE. uniflora petróleo [18,19].
El objetivo del presente trabajo fue evaluar la variabilidad anual de la composición del aceite de
E. uniflora hojas, el quimiotipo rico en curzereno producido térmicamente in situ, como contribución a su posible uso
como agente anticanceroso. Para monitorear la variabilidad estacional de la planta, también se realizaron pruebas
sobre la actividad antioxidante del aceite producido, además de los efectos citotóxicos previamente observados.

2. Materiales y métodos

2.1. Material vegetal y datos climáticos

las hojas de E. uniflora fueron recolectados de un espécimen existente en la Isla Caratateua, BelEsm ciudad, parlos
estado, Brasil (coordenadas: 01◦15′04.1 "S / 48◦27′23,7 "de ancho). Para el estudio estacional, se tomaron muestras de las
hojas el día 5 de cada mes, a las 8 am, de octubre de 2017 a septiembre de 2018. La identificación de la planta se realizó
mediante comparación con un espécimen auténtico deeugenesia unifloray una muestra de planta (MG
228493) se incorporó al Herbario “Joloso Murça Pires ”del Museu Paraense InallíLio Goeldi, BelEsm
ciudad, Estado de ParLos, Brasil. A su vez, los parámetros climáticos (radiación, humedad relativa del aire
y precipitación pluvial) de la zona mencionada se obtuvieron mensualmente de la página web del
Instituto Nacional de Meteorología (INMET,http://www.inmet.gov.br/portal/), del Gobierno brasileño. Los
datos meteorológicos se registraron a través de la estación automática A-201, en el BelEsm ciudad, par
los estado, Brasil, que está equipado con un sistema Vaisala, modelo MAWS 301 (Vaisala Corporation,
Helsinki, Finlandia).

2.2. Extracción y composición de aceites esenciales

Las hojas secadas al aire se trituraron y se sometieron a hidrodestilación utilizando un aparato tipo Clevenger (3
h). Los aceites se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se utilizaron los pesos secos de las plantas para calcular
sus rendimientos. El contenido de humedad de las muestras de plantas se calculó usando un balance de humedad
infrarrojo para medir la pérdida de agua. El análisis del rendimiento de aceite se realizó por triplicado.
El aceite esencial se disolvió con n-hexano a una concentración de 1500 µg / ml (3: 500,
v/v), y se analizaron simultáneamente utilizando sistemas de cromatografía de gases-detector de ionización de
llama (GC-FID, Shimadzu Corporation, Tokio, Japón) y cromatografía de gases-espectrometría de masas (GC /
MS, Shimadzu Corporation, Tokio, Japón). El análisis de los aceites se realizó en un sistema GCMS-QP2010 Ultra
(Shimadzu Corporation, Tokio, Japón), equipado con un autoinyector AOC-20i y el software GCMS-Solution que
contiene las bibliotecas NIST y FFNSC 2 [20,21]. En Rxi-5ms (30m× 0,25 mm; 0,25µm espesor de película)
columna capilar de sílice (Restek Corporation, Bellefonte,
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PA, EE. UU.). Las condiciones de análisis fueron las siguientes. Temperatura del inyector: 250◦C; Programación de la
temperatura del horno: 60-240◦C (3 ◦C / min); Helio como gas portador, ajustado a una velocidad lineal de 36,5 cm / s
(1,0 ml / min); inyección en modo dividido para 1.0µL de solución de aceite esencial (6 µg de aceite esencial inyectado);
relación de división 1:20 (300 ng por columna para análisis); ionización por impacto electrónico a 70 eV; temperaturas
de la fuente de ionización y de la línea de transferencia de 200 y 250◦C, respectivamente. Los espectros de masas se
obtuvieron mediante escaneo automático cada 0,3 s, con fragmentos de masa en el rango de 35 a 400metro/z. El
índice de retención se calculó para todos los componentes volátiles utilizando una serie homóloga de n-alcanos C8-
C40 (Sigma-Aldrich, Milwaukee, WI, EE. UU.), Según la ecuación lineal de Van Den Dool y Kratz [22]. Los componentes
individuales se identificaron comparando sus índices de retención y espectros de masas (masa molecular y patrón de
fragmentación) con los existentes en las bibliotecas del sistema GCMS-Solution [20,21,23]. Los datos cuantitativos
sobre los componentes volátiles se obtuvieron utilizando una Serie GC 2010, operada en condiciones similares a las
del sistema GC-MS. Las cantidades relativas de componentes individuales se calcularon mediante la normalización del
área de pico utilizando un detector de ionización de llama (GC-FID) [dieciséis]. Los análisis GC-FID y GC-MS se
realizaron por duplicado.

2.3. Ensayo antioxidante

La actividad antioxidante de los aceites de muestras estacionales se evaluó mediante el método de

captación de radicales DPPH [24,25]. El DPPH es un radical libre violeta oscuro estable con máxima
absorción a 517 nm (Shimadzu, UV 1800, Shimadzu Corporation, Tokio, Japón), que se reduce en
presencia de antioxidantes. Se preparó una solución madre de 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH; 0,5
mM) en etanol. La solución se diluyó hasta aproximadamente 60µM, midiendo una absorbancia inicial de
0,62 ± 0,02, a 517 nm y temperatura ambiente. La absorbancia se midió al inicio de la reacción, cada 5 min
durante los primeros 30 min, y luego a intervalos de 30 min hasta que se observaron valores de absorbancia
constantes (meseta de reacción, 2 h). Cada muestra de aceite esencial del estudio estacional (5.0µL, 10 mg / ml)
se mezcló con tampón Tris-HCl (100 mM, 900 µL, pH 7,4), etanol (40 µL) y solución de Tween 20 (0,5%, 50 µallí, w
/w) y luego se añadió a DPPH (0,5 mM, 1 ml) en etanol. Las curvas estándar se prepararon utilizando Trolox
(ácido 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcroman-2-carboxílico) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.), A
concentraciones 30, 60, 150, 200 y 250µg / ml. Los resultados se expresaron en miligramos de Trolox (mg TE /
g) equivalentes por gramo de muestra.

2.4. Análisis estadístico

La significancia estadística se evaluó mediante una prueba de Tukey (por < 0,05) y la correlación de Pearson
Se calcularon los coeficientes (R) para determinar la relación entre los parámetros analizados (radiación solar,
humedad relativa del aire y precipitación pluvial) en GraphPad Prism, versión 5.0. Se aplicó el análisis de
componentes principales (PCA) para verificar la interrelación en la composición de los aceites de las hojas
(Minitab versión 390 libre, Minitab Inc., State College, PA, EE. UU.). Se utilizó un análisis de agrupamiento
jerárquico (HCA), considerando la distancia euclidiana y el enlace completo, para verificar la similitud de las
muestras de aceite, con base en la distribución de los constituyentes seleccionados en el análisis de PCA.

3. Resultados y discusión

3.1. Rendimiento de aceite esencial frente a condiciones ambientales

Se monitorearon parámetros climáticos como radiación solar, precipitación y humedad relativa durante un
período de un año (octubre de 2017 a septiembre de 2018) para evaluar la influencia de la estacionalidad en el
rendimiento y la composición de E. uniflora aceite esencial. Los valores medios de la radiación solar oscilaron entre
573,4 KJ / mdos (Abril) a 1450,7 KJ / mdos (Diciembre), humedad relativa de 74,1% (noviembre) a 85,4%
(febrero) y precipitación media de 90,0 mm (julio) a 664,4 mm (febrero). Con base en los datos de
precipitación, la temporada de lluvias ocurrió de diciembre (360,8 mm) a abril (664,4 mm) y la temporada
seca de junio (236,6 mm) a noviembre (90,0 mm). Mayo (476,6 mm) fue un período de transición entre
estas dos estaciones (Figura1).
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Figura 1. Relación entre los parámetros climáticos y el rendimiento de aceite de eugenesia uniflora durante el estudio
estacional.

El clima amazónico brasileño se caracteriza solo por una estación seca y lluviosa. Debido al clima cálido y
húmedo permanente, la Amazonía presenta heterogeneidad espacial y estacional de precipitaciones. La ciudad de Bel
Esm, el sitio de recolección de E. uniflora, ubicada en la región amazónica del norte de Brasil, presenta un mayor
índice de precipitaciones de diciembre a abril (época de lluvias) y uno menor de junio a noviembre (período seco). Sin
embargo, de un año a otro, estas dos estaciones pueden cambiar, dependiendo de los fenómenos atmosféricos que
afecten a las regiones tropicales [26].
En el estudio anual, el rendimiento de aceite de E. uniflora osciló entre 0,8% (agosto) y 3,1% (marzo), con un
promedio de 1,7 ± 0,6% para el período de estudio (ver Tabla 1). Estadísticamente (prueba de Tukey), no hubo
diferencia significativa en los rendimientos de aceite en el seco (1.4± 0,6%) y lluvioso (1,8 ± 0,8%) temporadas.
Además, una correlación significativa (por > 0.05) entre el contenido de aceite esencial y los parámetros climáticos, es
decir, precipitación (R = 0.31), radiación solar (R = −0.17) y humedad relativa (R = 0.32). Por lo tanto, los resultados
indican que la variación en los rendimientos de aceite deE. uniflora, muestreado en la Isla Caratateua, Ciudad de BelEs
m, Estado de ParLos, Brasil, no se correlacionan con las condiciones climáticas y el período estacional.
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Tabla 1. Composición de aceite del estudio estacional de eugenesia uniflora.

Rendimientos de aceite (%) 1,6 1.3 3.1 1,9 2.0 1.0 2.2 0,8 1,6 1.2 1,9 1.2
Componentes del aceite (%) * Rhode IslandC Rhode IslandL enero febrero marcha abril Mayo junio julio agosto septiembre octubre noviembre diciembre
Hexan-3-one 785 782 los 0,1 0,1
Hexan-2-one 788 786 B 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Hexan-3-ol 792 795 B 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Hexan-2-ol 795 802 los 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,2
Hexen-2Y-Alabama 847 846 los 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,3 0,1 0,1 0,1 0,1 0,2 0,1
Hexen-3Z-Hola 849 850 los 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Mirceno 991 988 los 0,1 0,5 0,3 0,2 0.4 1.1 0,1 0,3 0,2 0,5 1,6 0,2
β-felandreno 1028 1025 los 0,1 0,1 0,3 0,7
limoneno 1028 1024 los 0,3 0,2 0,2 0,5 0,1 0,2 0,2 0,1
(Z) -β-ocimeno 1036 1032 los 0,1 0,5 0.4 0,1 0,1 0,6 0,1 0.4 0,1 0,6 2.0 0,2
(Y) -β-ocimeno 1046 1044 los 0,2 1.1 1.0 0,2 0,2 1.0 0,1 1.1 0,2 1,5 4.3 0,6
linalol 1099 1095 los 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Hexen-3Z-il butanoato 1185 1184 los 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
δ-elemeno 1336 1335 los 0,5 0.4 0,9 0.4 0,3 0,1 0,7 0,6 0,6 1.2 1,6 0,7
Isoledeno 1374 1374 los 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
α-copaeno 1376 1374 los 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
β-Elemene 1385 1389 los 2.8 3.3 4.2 3,5 3.3 1.8 5.8 2.6 4.4 5,0 4.4 3.8
α-Gurjunene 1411 1409 los 0,1 0,1 0,1 0,1 0,2 0,1 0,1 0,2 0,1
Y-Cariofileno 1420 1417 los 0,1 0,1 0,2 0,1 0,1 0,3 0,1 0,2 0,3 0,3 0,3
β-copaeno 1428 1430 los 0,1 0,1 0,1
γ-Elemene 1434 1434 los 2.1 1.4 2,7 1.3 1.2 0,8 2.8 1,7 2.3 3,7 2.9 2.6
Aromadendreno 1440 1439 los 0.4 0,2 0.4 0,3 0,2 0,6 0.4 0.4 0.4 0,3
Seline-5,11-dieno 1444 1445 B 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Cadina-3,5-dieno 1451 1452 B 0,1 0,1
cis-Muurola-3,5-dieno 1452 1448 los 0,1 0,1 0,1
α-Humuleno 1454 1452 los 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
allo-Aromadendreno 1460 1458 los 0,5 0,2 0,3
9-epi-Y-Cariofileno 1462 1464 los 0,5 0.4 0,7 0,5 1.0 0,8 0,7 0,8 0,5
Selina-4,11-dieno 1476 1476 B 0.4 0,2 0.4 0,2 0,5 0,2 0.4 0.4 0,5 0,3
Germacrene D 1482 1478 los 0,8 2.5 0,6 0.4 0,5 0,9 1,5 2,7 2.8 1,7
γ-muuroleno 1481 1478 los 1.4 1.0
β-Selinene 1487 1481 los 0,8 0,5 0,6 0,6 0,6 0,6 0.4 0,5 0,6 0,7 0,8
δ-Selinene 1492 1492 los 0,2 0,1 0,3 0,1 0,2 0,1 0,1 0,3 0.4 0,2
viridifloreno 1496 1496 los 2.4 0,8 2,7 1.4 0,8 0,2 2.8 0,8 3.2 1.4 4.1 1,9
Curzerene 1503 1499 los 35,8 48,7 43,6 34,4 45,0 49,1 41,1 53,1 41,0 44,0 36,2 41,4
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Tabla 1. Cont.

Rendimientos de aceite (%) 1,6 1.3 3.1 1,9 2.0 1.0 2.2 0,8 1,6 1.2 1,9 1.2
Componentes del aceite (%) * Rhode IslandC Rhode IslandL enero febrero marcha abril Mayo junio julio agosto septiembre octubre noviembre diciembre
α-muuroleno 1502 1500 los 0,1 0,2 0,1 0,1 0,1 0,2
Germacrene A 1504 1508 los 0,1 0,2
α-Bulneseno 1511 1509 los 0,2 0,2 0,2 0,9 0,1
γ-Cadineno 1516 1513 los 0,1 0,1 0,1 0,1 0,3 0,1 0,1
7-epi-α-Selinene 1519 1520 los 0,1 0,1 0,1
δ-Cadinene 1525 1522 los 0,5 0,2 0,5 0,2 0,2 0,1 0,1 0,1 0,1 0,5 0,5 0,5
γ-cupreno 1536 1532 los 0,1 0,1
Seline-4 (15), 7 (11) -dieno 1538 1540 B 0,3 0,3 0,1
Selina-3,7 (11) -dieno 1542 1546 B 0,1 0,2 0,2
Germacrene B 1559 1559 los 4.8 3.9 6.6 3,5 3,5 2.8 0,1 5.9 7.5 5,0 6.0
Malayo 1566 1566 los 0,7
Spathulenol 1578 1577 los 1,7 4.2 0,8 5.4 7.0 6,9 1.2 3.3 1,6 1,7 0,5 3.4
globulina 1583 1590 los 2,7 4.1 3.6 1,5 7.4 2.1 5.1
viridiflorol 1592 1592 los 2,7 1,5 1,9 2.4 2.0 1.0 4,7 0,8 6.2 1.3 1.8 1,9
Cubeban-11-ol 1594 1595 los 1.1 0,5 0,7 0,6 0,5 0,7 0,6
Rosifoliol 1603 1600 los 1.1 0,5 0,6 0,5 0,6 0,2 0,5 0,6 0,6
trans-β-Elemenone 1604 1602 los 1,9 0,8 0,9 1.3 1.0 1,7 0.4 0,8 0,9 1.1
Junenol 1618 1618 los 0,1 0,2
γ-Eudesmol 1632 1630 los 0,1 0,2 0,2
8-isobutiriloxi-isoborneol 1638 1632 los 0.4
epi-α-Murrolol 1641 1640 los 0,6 0,8 0,9
α-Muurolol 1646 1644 los 0,1 0,3 0,3
α-Cadinol 1655 1652 los 3.1 1.8 1.1 2.2 0,2
Attractylone 1657 1657 los 1.1 1.4 0,9 1.3 1.2 1.3 0,1 0,5 0,7 0,8 0,8
Intermedeol 1666 1665 los 0,1 0,2
germacrón 1696 1693 los 7.5 4.2 4.8 5,6 5.2 10,5 0,2 4.2 3.8 5.4
Hidrocarburos monoterpenos 0,5 2.4 1.8 0,7 0,9 3.2 0.4 2.0 0,7 2.9 8,6 1.1
Monoterpenos oxigenados 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Hidrocarburos sesquiterpenos 17,4 13,0 23,5 13,2 11,3 6.4 17.1 9.0 20,8 27,1 25,8 20,4
Sesquiterpenos oxigenados 52,9 64,5 53,5 78,8 68,7 70,9 55,7 60,0 54,4 55,8 49,6 56,8
Otros 0,5 0,6 0.4 0,5 0,5 0,7 0.4 0,2 0,2 0,3 0.4 0,1
Total 71,3 80,6 79,2 73,2 81,4 81,6 73,7 71,2 76,2 86,2 84,5 78,4
Rhode IslandC = Índice de retención calculado (columna Rxi-5ms); Rhode IslandL = Índice de retención de literatura; los = Adams; 2007 [22]; B = Mondello, 2011 [20]; Componentes principales en negrita; * Las cantidades de constituyentes se calcularon
mediante la normalización del área de pico utilizando un detector de ionización de llama (GC-FID).
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3.2. Composición del aceite y condiciones ambientales

Los constituyentes de los aceites fueron identificados y cuantificados por GC-MS y GC-FID,
respectivamente. Se identificaron 61 compuestos, que representan un promedio del 78,1% de la composición
del total de aceites (Cuadro1). Predominaron los sesquiterpenos oxigenados (49,6–78,8%), seguidos de los
hidrocarburos sesquiterpenos (6,4–27,1%) y los hidrocarburos monoterpenos (0,5–8,6%).
Curzerene, un sesquiterpeno oxigenado de tipo germacrane, fue el componente principal de este Y.
uniflora aceite durante el período de estudio. El porcentaje de curzereno varió del 34,4% (abril) al 53,1%
(agosto). El cromatograma iónico delE. uniflora aceite y el espectro de masas de curzereno que muestra el pico
base (108 metro/z) la fragmentación se muestra en las figuras dos y 3 y el espectro de masas y el índice de
retención del compuesto principal se muestran en la Tabla S1 (ver Materiales suplementarios).

Figura 2. Cromatograma iónico del E. uniflora petróleo.

Figura 3. Espectro de masas de curzereno y su fragmentación base-pico (108 metro/z).

El contenido medio de curzereno durante el período seco (42,7% ± 6,1) y lluvioso (40,8 ± 5,9%) temporadas
no presentan una diferencia estadísticamente significativa (prueba de Tukey, por > 0,05). Además, las variables
climáticas humedad relativa (R = −0.07), radiación solar (R = −0.19) y precipitación (R = −0.03) no mostraron
correlación significativa con el contenido de curzereno (por > 0,05).
También se identificaron otros componentes en cantidades significativas en el E. uniflora aceite (ver figura 4),
tales como los sesquiterpenos oxigenados germacrone (0,2 a 10,5%), globulol (1,5 a 7,4%), espatulenol
(0,5 a 7,0%) y viridiflorol (0,8 a 6,2%), y los hidrocarburos sesquiterpénicos germacreno B (0,1 a 7,5%) y β-
elemeno (1,8 a 5,8%).
Según el análisis del coeficiente de correlación de Pearson (R), no hubo correlación estadísticamente
significativa.por > 0.05) entre los principales constituyentes de los aceites y los parámetros climáticos (ver Tabla dos).
Los resultados sugieren que la variación en el rendimiento y composición de los aceites no está relacionada con
factores climáticos.
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Figura 4. Otros compuestos sesquiterpénicos identificados en los aceites de eugenesia uniflora: (1) curzerene, (
dos) β-elemeno, (3) germacreno B, (4) germacrona, (5) espatulenol, (6) globulol, (7) viridiflorol.

Tabla 2. Capacidad antioxidante de los aceites mensuales de eugenesia uniflora.

Capacidad antioxidante
Meses
Equivalente de Trolox (mg TE/gramo) Inhibición (%) *

enero 436,3 ± 2.3 64,2 ± 0,3 B

febrero 378,2 ± 6.2 55,7 ± 0,9 C
marcha 393,2 ± 4.8 57,9 ± 0,7 C
abril 371,1 ± 7.1 57,3 ± 0.4 CD
Mayo 373,6 ± 13,1 55,0 ± 1,9 c, d y
junio 339,4 ± 1,6 51,1 ± 3.1 los
julio 400,3 ± 3.4 59,6 ± 1.2 c, d, f
agosto 186,9 ± 7.7 42,6 ± 0,3 H
septiembre 286,6 ± 4.0 57,9 ± 0.4 c, d, e, f, g
octubre 322,3 ± 3.4 47,4 ± 0,5 los
noviembre 326,5 ± 10,3 48,1 ± 1,5 los
diciembre 435,0 ± 0,6 64,0 ± 0,1 B
* Los valores se expresan como medias ± desviaciones estándar (n = 3). Los valores con las mismas letras en la columna no difieren
estadísticamente en la prueba de Tukey (por > 0,05).

La aplicación de un análisis de agrupamiento jerárquico (HCA) proporcionó el dendrograma presentado en la Figura 5,

lo que muestra que la composición de los aceites analizados presentó una similitud del 46,58%. Se representaron
gráficamente el HCA y el PCA, mostrando los componentes de los aceites valores superiores al 3%.
En el análisis de componentes principales (PCA), los componentes principales (PC1 y PC2) representaron
63,4% de la variabilidad total de los datos, de los cuales PC1 explicó el 39,0% y mostró
correlaciones positivas con las variables globulol (R = 0,04), viridiflorol (R = 0,28), β-elemeno (R =
0,42), viridifloreno (R = 0,44) , γ-elemeno (R = 0,41), germacreno B (R = 0,18), (Y) -β-ocimeno (R =
0,13) y α-cadinol (R = 0,02). El componente PC2 explicó el 24,4% de la variabilidad y mostró una
correlación positiva con los compuestos espatulenol (R = 0,08), curzereno (R = 0,11), globulol (R =
0,57), viridiflorol (R = 0,39) y β-elemeno. (R = 0,11). El PCA mostró que no hubo separación entre las
muestras de aceite de los períodos seco y lluvioso (Figura6).
Biomoléculas 2020, 10 9 de 13

Figura 5. Análisis de agrupamiento jerárquico (HCA) del eugenesia uniflora Aceites, basados en sus
componentes principales.

Figura 6. Análisis de componentes principales (PCA) del eugenesia uniflora Aceites, basados en sus
constituyentes primarios.

Se sabe que además de los factores ambientales, las diferencias en el rendimiento y composición de los aceites
se pueden atribuir a factores genéticos y geográficos, depredadores invasores (herbivoría y patógenos), así como
suelos (factores edáficos) [27]. En el estudio de especímenes deEugenia Lutescens y E. langsdorffiI
del Medio Oeste brasileño, las diferencias observadas en el rendimiento y la composición del aceite se atribuyeron a
la variación genética y factores ambientales, considerados responsables de la producción y variabilidad de los
metabolitos identificados en estas dos plantas [28]. las hojas deeugenesia neonitida y E. rotundifolia fueron
recolectados en Río de Janeiro, Brasil cada trimestre. Los compuestos primarios de laE. neonitid los aceites fueron
biciclogermacreno, germacreno y β-cariofileno. EnE. rotundifolia aceite, los componentes principales fueron α-pineno,
β-pineno y β-cariofileno. La estacionalidad no interfirió significativamente en los aceites de ninguna de las especies, a
pesar de las variaciones cualitativas y cuantitativas observadas [29].
En estudios previos, rendimientos de 0.5% y 1.8% para E. uniflora Se notificaron hidrocarburos en dos muestras
recolectadas en el norte y sur de Brasil, respectivamente [30,31]. Un estudio estacional del aceite de un espécimen de
E. uniflora del Medio Oeste brasileño indicó que su rendimiento de aceite en el período lluvioso (0.3 ± 0.3%) fue
similar a la del período seco (0.2 ± 0,2%). Por otro lado, también indicó la existencia de dos
Biomoléculas 2020, 10, 328 10 de 13

grupos de constituyentes: el grupo I de muestras recolectadas en la estación seca, registrado por la

presencia de espathulenol y óxido de cariofileno; y el grupo II compuesto por muestras recolectadas en
época de lluvias, con predominio del epóxido de seline-1,3,7 (11) trien-8-ona. Este trabajo presentó
resultados diferentes debido a la influencia de la estacionalidad en la composición y porcentaje de los
constituyentes del aceite [32]. agregareugenesia uniflora Aceites de la región amazónica que fueron
atribuidos a factores ambientales en los sitios de recolección, lo que llevó a la identificación de cuatro
tipos químicos diferentes: (1) selin-1,3,7 (11) -trien-8- one y selin-1 , Epóxido de 3,7 (11) -trien-8-ona; (2)
selin-1,3,7 (11) -trien-8-ona, selin-1,3,7 (11) -trien-8-ona epóxido y óxido de cariofileno; (3) curzereno; y (4)
germacreno B, curzereno y β-cariofileno [dieciséis].
En el presente trabajo con E. uniflora petróleo, la estacionalidad no influyó en el contenido de curzereno
durante los dos períodos estacionales (seco y lluvioso) de la Amazonía brasileña, como se mencionó (ver Figura 5).
Curzerene se informó en la literatura como un producto de transformación de furanedieno, que, como uno de los
constituyentes volátiles deE. uniflora hojas, se somete a un reordenamiento térmico sigmatrópico (3.3
Reordenamiento de Cope) tras la destilación del aceite o el análisis cromatográfico de gases convencional [18,19]. En
un trabajo anterior, el furanodieno se aisló mediante cromatografía en columna de sílice de aceite de hoja joven de un
E. uniflora espécimen recolectado en Río de Janeiro, Brasil. Sin embargo, no se detectó después del análisis de
cromatografía de gases convencional (GC-FID) después de calentar en el puerto del inyector, lo que significa que su
conversión a curzereno se completó durante la ejecución cromatográfica [33]. Además, del aceite de unE. uniflora
espécimen de Nigeria, África, furanodiene y curzereno fueron identificados en proporciones casi iguales [34]. El
furanedieno no fue identificado por13C-NMR en el aceite del presente E. uniflora
muestra. Por otro lado, utilizando cromatografía en columna, eluida con n-hexano, fue posible aislar
curzereno en alta pureza, lo que significa que durante el proceso de destilación del aceite, hubo una
transformación completa del furanedieno en curzereno.

3.3. Capacidad antioxidante

Se han descrito diferentes métodos para determinar la capacidad antioxidante de los aceites esenciales y sus
constituyentes; cada uno depende de un generador específico de radicales libres y reacciones por diferentes
mecanismos [35]. Para este trabajo, se seleccionó el método de barrido de DPPH radical.
los E. uniflora Los aceites, resultantes de doce meses de recolección de muestras de plantas, mostraron
una capacidad depuradora de DPPH radical con un promedio de 55.0 ± 6,6%, como se muestra en la Tabla dos.
La cinética de reacción se consideró lenta, con un promedio de 120 min. El mayor porcentaje de inhibición del
radical DPPH se observó para las muestras de aceite resultantes de la recolección en diciembre (64,0%) y enero
(64,2%). La capacidad antioxidante total se expresó en valores equivalentes al Trolox estándar. Las muestras
de aceite de diciembre (435,0± 0,6 mg TE / g) y enero (436,3 ± 2,3 mg TE / g) mostraron una actividad
antioxidante sólo dos veces más baja que Trolox y, por tanto, con valores significativos.
los aceites de E. uniflora, que se extrajeron en junio, octubre y noviembre, inhibieron el DPPH
radical de una manera estadísticamente similar (por > 0.05), presentando un nivel de similitud del 46.58% (ver
Figura 5). Asimismo, los aceites obtenidos en diciembre y enero fueron estadísticamente similares, como lo
justifica la composición convergente observada en la parcela HCA, con una similitud de 73,81%. La similitud de
los aceites de diciembre y enero se confirmó en la parcela PCA, donde hay una superposición de ambos puntos
(ver Figura6). Los aceites extraídos en febrero y marzo también mostraron una inhibición similar del radical
DPPH, exhibiendo 64.05% de similitud en sus composiciones, como se observa en la parcela HCA. En abril y
mayo, abril y julio y abril y septiembre, los aceites correspondientes inhibieron el radical DPPH, presentando
niveles de similitud de 68,2%, 48,0% y 48,0%, respectivamente. Por otro lado, el aceite obtenido en agosto no
inhibió de manera similar el radical DPPH, presentando la inhibición más baja (42,6%, 186,9 mg ET / g).
Además, la actividad antioxidante mostró una correlación moderada y negativa con el curzereno (R =
- 0,52) y los contenidos de hidrocarburos monoterpénicos (−0,56), así como una correlación débil o insignificante con
las variables climáticas (R <0,5).
Se informó previamente una actividad antioxidante significativa de curzereno y germacrone contra el
radical DPPH para algunos Cúrcuma aceites, utilizando el método de bioautografía [36]. El antioxidante
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La actividad de los aceites esenciales no debe considerarse únicamente en relación con sus constituyentes primarios.
La acción sinérgica de otros componentes menores contribuye a un aumento de la actividad antioxidante [37]. Por
ejemplo, en dos quimiotipos deE. uniflora aceites, este efecto se observó en los primeros informes [dieciséis]. Uno de
ellos muestra selin-1,3,7 (11) -trien-8-ona, selin-1,3,7 (11) -trien-8-ona epóxido y cariofileno se oxidan como
componentes importantes del aceite. El otro quimiotipo presentó un alto contenido de curzereno en el aceite. Las
tasas de inhibición del radical DPPH en aceites fueron 45,1% y 42,8% para dos quimiotipos, respectivamente [dieciséis
]. otro aceite deE. uniflora, compuesto principalmente por germacreno B y selin-1,3,7 (11) -trien-8-ona epóxido,
presentó una importante actividad antioxidante DPPH (IC50 833,3 ± 20,7 µg / mL), basado en el ensayo de barrido de
DPPH [36]. La capacidad antioxidante de los aceites de diferentes especies deEugenesia se ha informado, por
ejemplo, E. flavescens aceite, con un valor de 122,6 ± 6,8 mg de TE / ml, E. patrisii aceite, con un valor de 111,2
± 12,4 mg TE / ml) y E. egensis aceite, con un valor de 216,5 ± 11,6 mg TE / ml) valor [24].

4. Conclusiones

Los resultados mostraron que las variables climáticas no influyeron en el rendimiento promedio y el
contenido de curzereno de E. uniflora aceite esencial. Los factores ambientales también tuvieron poca
influencia en la composición del aceite y su potencial antioxidante. El alto contenido de curzereno en esteE.
uniflora muestra sugiere su potencial como fuente renovable de este compuesto biológicamente activo, en
particular como agente antioxidante y antitumoral. El estudio de este ejemplar contribuye al conocimiento de
E. uniflora, que ya es ampliamente utilizado por su potencial medicinal. Considerando que hubo una variación
cualitativa en la composición del aceite esencial, con la transformación del furanodieno en curzereno por
reordenamiento térmico, esta situación debe ser considerada en la estandarización del aceite, dado su uso
como posible producto herbal.

Materiales complementarios: Los siguientes están disponibles en línea en http://www.mdpi.com/2218-273X/10/2/328/s1, Tabla S1:
Espectros de masas e índice de retención del principal compuesto identificado en los aceites esenciales de eugenesia uniflora.

Contribuciones de autor: Análisis formal, JSdC, ASB, RHVM; PLBF, JKRdS y JGSM Redacción, corrección y
edición, PLBF y JGSM

Fondos: Esta investigación recibió financiación externa.

Expresiones de gratitud: Los autores agradecen al CNPq y Capes, Instituciones de apoyo científico y beca del
Gobierno brasileño.
Conflictos de interés: Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.

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