Tema 18: Cromatografía

Historia: del griego chroma= color/grapho= escribir  escritura del color

 1850: Fredhich Ferdinand Punge  decribió formaciones de la tinta sobre

papel.
 1906: Muchail Tswett  separó una mezcla y le dio el nombre
 1931: Kuhn  Realizó los primeros análisis cromatográficos.
 1944: Consden, Gordon y Martin  Separaron aminoácidos.
 1947: Comisión de la energía atómica de EEUU  Cromatografía de
intercambio iónico.
 1956: Egon Stahl  Cromatografía de capa fina
 1960: HPLC y cromatografía de gases.

Definiciones:

Cromatografía según IUPAC: Es un método físico de separación, en el que los

componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una fase estacionaria y
una fase móvil en una dirección definida.

.Fase estacionaria: puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido

(geles). Ejerce efecto de retención sobre los componentes de la mezcla móvil.

Fase móvil: es la que se desplaza a través del sistema, puede ser líquida o gas.
Estado de la materia que fluyan. Desplazamiento o elución.

Muestra: mezcla de moléculas o componentes que se desean separar.

Eluyente: fase móvil (que atraviesa la fase estacionaria).

Eluato: compuestos separados.

Procedimiento:
1. Depositar la mezcla sobre la fase estacionaria.
2. Pasar la fase móvil atravesando el sistema (fase estacionaria).
3. Desplazamiento de los componentes de la mezcla.
4. Retención y desplazamiento a lo largo del sistema cromátográfico.
5. Separación de la mezcla.
6. Obtención de los componentes por separado.
 La cromatografía se puede realizar por: columna (con la fase estacionaria interna)
y por capa fina o plana.

Tipos de métodos cromatográficos:

Según la naturaleza de las fases:

Fase estacionaria (sólida o líquida)
Fase móvil (líquido o gas)

Según la interacción entre los componentes de la mezcla, la fase móvil y la fase

estacionaria:
De adsorción: cromatografía sólido / líquido.
De partición: reparto o líquido / líquido.
De intercambio iónico: por afinidad de carcas iónicas.
De exclusión molecular: PM de la mezcla  tamaño de partícula.

Según el tipo de soporte empleado en la fase estacionaria:

Plana: Eluyente
Columna: Eluyente

Según la naturaleza de las fases:

Cromatografía sólido – líquido: se fundamenta en la adsorción de los componentes
de una mezcla sobre un sólido, a través de fuerzas electrostáticas y puentes de H.
Cromatografía líquido – líquido: se fundamenta en la distribución de los
componentes de una mezcla entre dos fases misibles. Fase estacionaria Silice gel.
FE líquido silanol (-Si -OH)  Siloxeno.
Cromatografía líquido gas / Sólido- Gas (Cromatografía de gas): se fundamenta en
el inyectado de la muestra volatilizada la cual eluye por efecto del flujo de un gas
inerte (FM). Se produce el efecto de partición (FE líquida) o adsorción (FE sólida)
dependiendo de la fase estacionaria.

Fases estacionarias:
Polares:
Ácidas: Sílica gel
Básicas: Alumina, Magnesita.

No polares: Carbón activado

Silica hidrofóbica

Fases móviles: ciclohexano, cloroformo, acetato de etilo, etc.

No polares: fase normal
Polares: fase reversa.

Tipos de métodos cromátográfico: según el soporte empleado. (FE):

Cromatografía plana: papel y capa fina.
Cromatografía de capa fina:
1) Siembra: Se coloca la muestra y patrón en el área inferior de la placa (fase
móvil) y se delimita con una línea de grafito.
2) Fase móvil: se coloca en la cubeta la fase estacionaria y se cierra ya que el
solvente se volatiliza.

Nota: las placas deben secarse en la estufa previa al análisis. Adsorción de

humedad en el gel de sílica. A ¾ partes de la placa hacer una línea.
Hasta allí debe llegar la fase móvil.

Visualización de las zonas migratorias (capa fina) para sustancias no

coloreadas:
Métodos físicos: Adsorbente + Indicador Fluorescente.  Placas
Método químico: cuando no sirvió el método físico, por mayor longitud de ondas.
Se usan reactivos reveladores: Yodo, H2SO4 y KMO4.

Factor de retardo (RF): Dilución que existe entre la distancia recorrida por un
compuesto dado y por el disolvente. (FM) desde el origen de cromatograma.

 Polaridad del compuesto,  Retención en el adsorbente, RF.

RF= distancia entre origen y porción del compuesto

distancia entre origen frente al disolvente

Se recomienda elegir un disolvente.

Aplicaciones:
Identificación del compuesto
Análisis de fracciones recogidas en cromatografía de columna.
Determinación de compuesto de una mezcla.
Determinación del solvente apropiado.

Cromatografía de columna: clásica o absorbente, para HPLC. Elución por

gravedad
Requisitos de la fase móvil y estacionaria:
Las dos fases deberán ser inmisibles
Permitir la separación de los componentes de la mezcla de FM deberán ser
compatibles.
Requisitos del soporte:
Químicamente inerte:
Capacidad para sostener una determinada cantidad de fase estacionaria.
Debe ser insoluble y poroso.

Cromatografía de columna abierta:

Análisis de las fracciones
Recoger cada fracción
Analizar (CTL / GC / HPLC)
Juntas de la misma porción.

Cromatografía de intercambio iónico: Intercambio reversible entre FE, FM

Resinas de intercambio de cationes (+)
Resinas de intercambio de aniones ( - )
Los iones FM comparten cargas con los iones de la mezcla.

Cromatografía por exclusión molecular: tamaño de las partículas, a  tamaño de

partícula. Se quedan retenidos en los poros y son más afines al diluente y tardan
mas en salir ( ya que interactúan con el gel)

Cromatografía en columna: HPLC

Fase Móvil: Isocromática  Fase móvil única
Por gradiente : se escoge los diferentes % durante la corrida.