en vivo 31: 1097-1101 (2017)

doi: 10.21873 / invivo.11175

Cuerpo lúteo Regresión inducida por prostaglandina F

en microminipigs durante el ciclo estral normal 2α
MICHIKO NOGUCHI 1,2, MASAYA HIRATA 2, HIROAKI KAWAGUCHI 3 y AKIHIDE TANIMOTO 4

1 Laboratorio de Teriogenología, Departamento de Medicina Veterinaria, Universidad de Azabu, Sagamihara, Japón;

2 Laboratorio de Medicina Interna de Animales Domésticos,

Facultad Conjunta de Medicina Veterinaria, Universidad de Kagoshima, Korimoto, Japón;

Departamentos de 3 Medicina de Higiene y Promoción de la Salud,
y 4 Patología, Facultad de Ciencias Médicas y Dentales de la Universidad de Kagoshima, Sakuragaoka, Japón

Resumen. Inducción de la regresión del cuerpo lúteo y
celo posterior con prostaglandina F 2α ( PGF 2α) en microminipigs.
Microminipigs con normal
ciclo estral fueron tratados con PGF 2α como 0,75 mg (grupo 0,75 PG, n =
3) o 1,5 mg (grupo 1,5 PG, n = 4) dinoprost
inyectados en la vulva a intervalos de 24 horas a los 10 días después del inicio
del estro (D0), D1 y D2. No se trataron tres microminipigs (grupo control). El
intervalo estral en el grupo de 1,5 PG se acortó significativamente en
comparación con los grupos de control y 0,75 PG. Los niveles de progesterona
en plasma comenzaron a disminuir y alcanzaron la línea base en el grupo de 1,5
PG significativamente más rápido que en el grupo de control. En
animales se ha demostrado en investigaciones sobre aterosclerosis (6-9),
farmacología cardiovascular (10-12), condiciones del sueño (13), actividad
coaguladora (2), toxicología (14, 15), secuenciación genómica (16) e ingeniería
del desarrollo ( 17). Debido a que se espera que los microminipigs sean un
modelo animal importante para la investigación futura en salud humana, se
necesita una producción eficaz y estable de microminipigs. A diferencia de los
modelos de ratón populares, el microminipig representa un modelo
experimental potencialmente más apropiado, ya que su metabolismo de
lipoproteínas (9, 18), así como su anatomía, fisiología y hábitos de alimentación
y sueño (13), son mucho más similares a los de los humanos.

conclusión, demostramos que múltiples PGF 2α Los tratamientos pueden
inducir la regresión del cuerpo lúteo y el estro.
sincronización en hembras de microminipigs.
En 2011, se desarrolló el cerdo en miniatura más pequeño del mundo, el
microminipig (1) y esta cepa tiene perfiles bioquímicos y hematológicos
generales (2-5) similares a los humanos. La utilidad de los microminipigs
como experimental
El desarrollo de la sincronización del estro en las hembras es necesario para
mejorar la eficiencia de la producción animal utilizando técnicas reproductivas
novedosas como la inseminación artificial y la transferencia de embriones. En la
industria porcina, los beneficios de las nuevas tecnologías reproductivas son bien
conocidos en la transferencia de células germinales (esperma y embrión) con bajo
riesgo de transmisión de enfermedades y bajos costos en comparación con la
transferencia de animales vivos (19). En particular, la transferencia de embriones es
esencial para la aplicación de otras biotecnologías reproductivas, incluida la
transgénesis y la clonación, no solo en cerdos domésticos (20) sino también en
cerdos en miniatura (17, 21).

Este artículo es de libre acceso en línea.

Es bien sabido que la prostaglandina F 2α ( PGF 2α) es un regulador

Correspondencia a: Hiroaki Kawaguchi, DVM, Ph.D., Departamento de Medicina de Higiene
eficaz de la el cuerpo lúteo CL) función en
y Promoción de la Salud, Escuela de Graduados de Ciencias Médicas y Dentales de la
animales domésticos (22). En cerdos domésticos, un solo tratamiento con PGF no 2α s
Universidad de Kagoshima, Universidad de Kagoshima, 8-35-1 Sakuragaoka, Kagoshima
890-8544, Japón. Tel: puede inducir luteólisis antes de los primeros 12 días.

+ 81 992755291, Fax: +81 992658434, correo electrónico: k3038952@kadai.jp y Akihide
Tanimoto, MD, Ph.D., Departamento de Patología, Facultad de Ciencias Médicas y
Dentales de la Universidad de Kagoshima, Universidad de Kagoshima, 8-35 -1,
Sakuragaoka, Kagoshima 890-8544, Japón. Tel: +81 992755263, Fax: +81 992646348,
correo electrónico: akit09@m3.kufm.kagoshima-u.ac.jp
del ciclo estral, por lo tanto, múltiples PGF 2α es necesario el tratamiento para inducir la
regresión de CL funcional antes de los 12 días de la
ciclo estral (23-25). Esta sincronización estral usando
múltiples PGF 2α El tratamiento es un método eficaz para la preparación de
receptores para la inseminación artificial (26) y
transferencia de embriones (27, 28) en cerdos domésticos. Sin embargo, los tratamientos

Palabras clave: Cerdo miniatura, sincronización del estro, prostaglandina F2α. múltiples para la inducción de la luteólisis y la exposición del celo en cerdos domésticos

cíclicos son un tema importante en animales

1097
 en vivo 31: 1097-1101 (2017)
Tabla I. Efecto de la prostaglandina F 2α ( PG) tratamiento sobre regresión de cuerpos lúteos y duración del estro.
No de animales tratados
No de animales con luteólisis * Intervalo de
D0 a luteólisis (días)
No. de animales que presentan estro después del tratamiento
Duración del ciclo estral (días)
Duración del estro (días)
* La luteólisis se definió como un nivel de progesterona plasmática de <1 ng / ml. D0: 10 días después del inicio del estro. Los valores con diferentes letras en superíndice en la misma fila difieren
significativamente entre sí ( p < 0,05). Los datos se presentan como medias ± SEM.
bienestar. Recientemente se demostró que la dosis eficaz para inducir la
regresión de CL y el parto posterior en cerdas domésticas gestantes a
través de la inyección intra-vulvar de
PGF 2α es el 25-50% de lo que se inyecta por vía intramuscular (29, 30).
PGF 2α se secreta en las legumbres del endometrio en muchas especies
animales, incluidos bovinos, cerdos y caballos (22). los
paso de PGF 2α del útero al CL implica una estrecha aposición de vasos
uterinos eferentes (venosos y linfáticos)
con vasos arteriales ováricos. Debido a que las prostaglandinas se metabolizan
rápidamente principalmente en los pulmones, pero también en otros órganos como el
hígado y el riñón, la inyección intra-vulvar de PGF2α es más eficaz para aumentar la
concentración local.
concentración de PGF 2α en el tracto reproductivo femenino sin efectos de
primer paso en el pulmón que intramuscular
tratamiento. Estos informes (29, 30) sugieren que puede ser posible
para controlar la función lútea mediante la reducción de PGF 2α dosis y tiempos de
tratamiento no solo en cerdos domésticos sino también
minicerdos experimentales, como los microminipigs, ya que ambos tienen perfiles
hormonales similares durante los ciclos estrales normales (31). En el presente
estudio, examinamos el efecto de múltiples
PGF 2α tratamiento en la vulva en la vida lútea y posterior exposición del
estro asociada con hormonas
cambios en las hembras de microminipigs.
Materiales y métodos
Animales y detección de estro. Se compraron once primerizas microminipig maduras de Fuji
Micra Inc. (Shizuoka, Japón) y se mantuvieron en la Universidad de Kagoshima en una
habitación exclusiva con clima controlado con una temperatura de 18-25 ° C y una humedad
del 30-65%, con una temperatura de 12 a 25 ° C. h ciclo de luz / oscuridad en las
instalaciones del criador. Se mantuvieron en jaulas individuales con agua disponible. ad
libitum y fueron alimentados con una dieta comercial para cerdos domésticos (Kodakara 73;
Marubeni Nissin Feed Co., Tokio, Japón) en cantidades de 1.8-2.2% del peso corporal una
vez al día. La detección del estro se realizó dos veces al día utilizando un microminipig
macho maduro. Se observó al menos un ciclo estral de duración normal (18-22 días) (31) en
cada microminipig antes del inicio de cada experimento. Las edades y pesos (media ± SEM)
de los animales del estudio en el momento del tratamiento fueron
15,8 ± 0,8 meses y 14,5 ± 0,3 kg, respectivamente. Todos los protocolos fueron
1098
Control 0,75 PG 1,5 PG
3 3 4
3 3 4
6,7 ± 0,3 a 7,2 ± 0,3 a 3,7 ± 0,3 B
3 2 4
20,5 ± 0,3 a 19 y 21 17,5 ± 0,4 B
2,8 ± 0,7 2.5 y 3.0 3,1 ± 0,4
aprobado por el Comité de Ética de Cuidado y Experimentación Animal de la
Universidad de Kagoshima (VM13037) y la investigación se realizó de acuerdo con
las Directrices Institucionales para Experimentos con Animales y de conformidad
con la Ley Japonesa de Protección y Control de Animales (Ley No. 105 y
Notificación No. .6).
Diseño del estudio. Investigamos el efecto de múltiples intra-vulvares
administraciones de PGF 2α en exposición de estro y esteroides ováricos
Perfiles en microminipigs. Se les dio PGF 2α ( 5 mg de dinoprost / ml, Panaceran Hi;
Meiji Seika Falma Co., Ltd., Kyobashi,
Tokio, Japón) como inyección subcutánea de 0,75 mg (grupo de 0,75 PG, n = 3) o 1,5 mg
(grupo de 1,5 PG, n = 4) de dinoprostina en la vulva con una aguja de 22-G a un intervalo de
24 horas a los 10 días el inicio del estro
(D0), D1 y D2. La dosis efectiva de PGF 2α para la regresión de CL se derivó de
investigaciones previas (32). Tres animales no
tratado con PGF 2α ( grupo de control). A cada animal se le colocó un catéter de
poliuretano recubierto de heparina (CBAS-C70; Solomon
Scientific, Plymouth Meeting, PA, EE. UU.) En la vena yugular al menos 7 días desde el
inicio del estro. Se recolectaron muestras de sangre diariamente comenzando en D -2 y
continuando hasta 7 días después del inicio del celo subsiguiente. Además, se
recolectaron muestras de sangre a intervalos de 12 h desde el D0 hasta el final del celo
posterior. La detección del estro en todas las hembras de microcerdos se realizó cada 12
h desde el D3 hasta el final del estro posterior. El plasma se recuperó después de la
centrifugación de las muestras de sangre y se almacenó a -30 ° C hasta el análisis.
Ensayo hormonal. Se utilizó un fluoroinmunoensayo de resolución temporal para medir la
progesterona plasmática y el estradiol-17β con kits DELFIA de estradiol y progesterona
(PerkinElmer Japan, Yokohama, Japón) como se informó anteriormente (33). Los CV
intraensayo e interensayo fueron 8,1% y 8,1% para estradiol-17β y 10,0% y 9,1% para
progesterona, respectivamente.
Análisis estadístico. Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el procedimiento de
modelo lineal general en SAS versión 9.4 (SAS Institute Inc. Cary, NC., EE. UU.). Los datos
pertenecientes a los perfiles hormonales se sometieron a análisis de varianza de medidas
repetidas (ANOVA) (34). Cuando se detectó un efecto significativo con ANOVA, la
significancia de la diferencia entre las medias se determinó mediante la prueba de Tukey.
Las diferencias en los intervalos desde D0 hasta el día de la concentración de
progesterona> 1 ng / ml entre los grupos también se probaron para determinar su
significación utilizando la prueba de Tukey. Porque fuimos
 Noguchi et al: Sincronización estro en microminipigs

incapaz de detectar exposición de estro o aumento del nivel de estradiol-17β en un

microminipig en el grupo 0,75 PG después del tratamiento, las diferencias en la duración
del estro, la duración del estro y el intervalo desde D0 hasta el día de las concentraciones
máximas de estradiol-17β se compararon entre los control y grupos de 1,5 PG y se probó
la significación utilizando el Student's t- prueba. Diferencias con un pag- valores inferiores a
0,05 se consideraron estadísticamente significativos.

Resultados

El intervalo desde D0 hasta el día de la luteólisis en el grupo de 1,5 PG fue más

corto ( p < 0,05) que en los grupos control y 0,75 PG (Tabla I). Aunque no hubo
diferencia en la duración del estro después del tratamiento entre los grupos de
control y 1,5 PG, la duración del estro después del tratamiento en el grupo de
1,5 PG fue significativamente más corta en comparación con el grupo control p < 0,05).

Los perfiles de hormonas esteroides ováricas en los microminipigs después del

tratamiento se muestran en la Figura 1. Las concentraciones de progesterona
periférica comenzaron a disminuir ( p < 0,05) el día 6 en el grupo de control y el día
2,5 en el grupo de 1,5 PG en comparación con las concentraciones en D0. Las
concentraciones de progesterona entre D2 y D6.5 en el grupo de 1.5 PG fueron
significativamente más bajas que las del grupo de control durante el mismo período
( p < 0,05). Hubo una diferencia significativa en los niveles de progesterona en los
días 10, 10,5, 12, 15, 16 y 17 entre los grupos de control y 1,5 PG ( p < 0,05). Las
concentraciones de estradiol-17β fueron significativamente mayores ( p < 0.05) en
D9.5 en el grupo de control y D5.5 en el grupo de 1.5 PG que entre D − 2 y

0, respectivamente. Los niveles máximos de estradiol-17β alcanzados

30,7 ± 1,0 pg / ml (día 11,3 ± 0,9) en el grupo de control y
38,8 ± 2,8 pg / ml (día 7,3 ± 0,1) en el grupo de 1,5 PG. Las concentraciones de
estradiol-17β desde el día 3 hasta el 7,5 y desde el día 10 hasta el 10,5 en el grupo
Figura 1. Concentraciones plasmáticas de progesterona (a) y estradiol-17β (b) en el
de 1,5 PG fueron mayores y menores ( p < 0,05), respectivamente, que los del grupo grupo de control (n = 3) y el grupo tratado con 1,5 mg
de control. prostaglandina F 2α ( PG) (n = 4) grupos. Cada flecha indica un día de tratamiento en el grupo de 1,5
PG. Los valores son medias ± SEM.

Discusión

Demostramos claramente que la triple administración de 1,5 mg

PGF 2α en la vulva durante la fase lútea funcional puede acortar el
intervalo entre estro en microminipigs. Cuando
las cerdas recibieron 12,5 mg de PGF 2α 12 veces (25) o 15
mg de PGF 2α seis veces por vía intramuscular (35, 36) durante la fase
lútea del ciclo estral, intervalos inter-estro en el
Los grupos de tratamiento (13,3-15,7 días) se acortaron significativamente en
comparación con los grupos de control (19,8-21,2 días). Nuestros resultados
están de acuerdo con estos intervalos entre estro (25, 35, 36), lo que demuestra
(peso corporal medio de 176 kg) (36). Por el contrario, la eficacia de acortar la
duración del estro en cerdos domésticos (peso corporal medio de 167-199 kg) con
un tratamiento de 60 o 30 mg de dinoprost total (6 × 5 o tratamientos de 10 mg de
dinoprost) durante el mismo período fue del 70% (36 ). De informes anteriores en
cerdos domésticos, al menos 75 mg de dinoprost (aproximadamente
0,6 mg / kg / período experimental) durante el período experimental puede ser

que la duración del estro en microminipigs cíclicos puede controlarse necesario para inducir la luteólisis durante la fase lútea temprana del ciclo estral con

efectivamente con menos inyecciones que las necesarias en cerdos domésticos. alta eficiencia. Las concentraciones plasmáticas de progesterona, un índice general
de la condición de CL (37), en microminipigs tratados con 1,5 mg de dinoprost

El tratamiento intramuscular de un total de 90 mg de dinoprost (6 tratamientos intra-vulva inyectable de D0 a D2 alcanzaron el nivel basal 3,7 días desde el primer

de 15 mg de dinoprost) entre 8 y 10 días desde el último día del ciclo estral indujo día de tratamiento, lo que es similar a los informes anteriores (25, 35, 36). En nuestra

luteólisis dentro de los 3 días posteriores a la primera inyección en todos los cerdos investigación, la dosis total de tratamiento (4.5

domésticos cíclicos.

1099
 en vivo 31: 1097-1101 (2017)
mg de dinoprost) por período experimental (aproximadamente 0,3 mg / kg /
período experimental) en microminipigs tratados con
administración intra-vulvar de PGF 2α indujo la disminución de los niveles de
progesterona en el grupo de 1,5 PG pero no en el de 0,75
Grupo PG. En cerdos domésticos, se ha demostrado que la dosis eficaz para la
regresión de la función de CL mediante el uso de
PGF 2α La inyección se puede reducir al 25-50% de la dosis intramuscular efectiva
(29, 30). Nuestros resultados e informes anteriores
sugieren
similar enque la reacción yde
microminipigs CL después
cerdos del tratamiento
domésticos. 2α con PGF exógena es
Los niveles de progesterona comenzaron a disminuir el último día de tratamiento
en el grupo de 1,5 PG. Este hallazgo es el mismo que en informes anteriores que
utilizan cerdos domésticos con múltiples
PGF 2α inyección (35, 36). Aunque las concentraciones de progesterona en cerdos
domésticos disminuyeron gradualmente después de
múltiples PGF 2α tratamiento, los niveles de progesterona aumentaron de nuevo después del
tratamiento cuando el CL mantuvo su función dentro de
24 h después de la PGF final 2α tratamiento (36). Por tanto, llegamos a la conclusión de
que es difícil inducir la luteólisis con menos de tres 1,5
mg inyecciones de dinoprost en microminipigs.
Debido a que el estradiol-17β se secreta a partir de grandes folículos
maduros en cerdos domésticos (37) y microminipigs (31), el perfil de
estradiol-17β en plasma refleja el desarrollo de folículos maduros en los
ovarios. El pico de concentraciones de estradiol-17β en el grupo de 1,5 PG
se definió en D7 o D7,5 en contraste con el grupo de control (que varió de
D10
a D13) en este estudio. Esto significa que el protocolo de tratamiento con PGF en
microminipigs afecta no solo a la regresión de CL 2 norte
pero también sincronización del desarrollo folicular y posterior exhibición
del estro.
En conclusión, indicamos un nuevo protocolo para la inducción de la
regresión CL y la sincronización del estro en hembras
microminipigs usando múltiples PGF 2α tratos. Desarrollo de tecnología de
reproducción asistida como la sincronización
del estro y la ovulación sirven para mejorar las tecnologías reproductivas y la
eficiencia productiva en los animales. Los nuevos protocolos de sincronización del
estro de nuestra investigación ayudarán a mejorar la eficiencia de la producción de
microminipig.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado en parte por JSPS KAKENHI Grant Números 26870455 y
16H05176
Conflictos de interés
Los autores informan que no existen conflictos de intereses con respecto a este estudio.
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Recibido el 19 de agosto de 2017
Revisado el 17 de septiembre de 2017
Aceptado el 19 de septiembre de 2017
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