Alergol Inmunol Clin 2003; 18 (Extraordinario Núm.

3):24-44

Moderadores: C. Colás MESA REDONDA: POLINOSIS II

Sanz, F. Florido López

La alergia a las Cupressaceae. Pasado y

R. C. Panzani futuro
Laboratorie de Recherches

L
Marseille. France. a alergia a las Cupressaceae era conocida en Europa desde hace mu-
chos años como una curiosidad. Por mi parte publiqué en 1962 mi pri-
mera comunicación sobre este tema. Pero en los años 1975-1976 obser-
vé en Provence un incremento repentino. Después muchas investigaciones
fueron publicadas en otros países de Europa y especialmente Italia, España y to-
do el Mediterráneo, demostrando la realidad de esta alergia invernal que ahora
no está todavía minor. Quisiera sotolinear los resultados adquiridos, es decir, lo
que conocemos y después lo que desconocemos para poder bosquejar un cuadro
de la situación en cuanto en lo que se refiere a la inmunoterapia específica.

EL PASADO: LO QUE CONOCEMOS

1. Incremento repentino de los casos de polinosis, aunque no ha sido ob-
servado un incremento significativo de los cuentos polínicos.
2. Importante reactividad cruzada entre los varias Cupressaceae (C. sem-
pervirens; C. arizonica) y las Juniperaceae (J. ashei; J. oxycedrus) y también
las Taxodiaceae (Cryptomeria japonica). Sin embargo C. sempervirens es el ár-
bol principal y desgraciadamente el más difícil para purificar.
3. Las dificultades para conseguir la purificación y la estandarización de
los extractos a fin de llevar a cabo una buena inmunoterapia específica a causa
del bajo contenido en proteínas y la alta cantidad de azúcares. Estos azúcares
pueden desempeñar un papel actuando como “epitopes”. En un trabajo reciente
con Ariano hemos demostrado que entre 1994 y 2000, la actividad alergénica
del polen conservado es la misma pero el contenido proteínico disminuyó a me-
dias, lo que parece indicar que los azúcares tienen una función importante en
esta actividad. Sin embargo, tenemos algunos alergenos purificados: Cup a 1,
Cup s 1, Jun o 4, Jun a 1, 2, 3, Jun v 1, Cry j 1, 2, Cha o 1, 2.

EL FUTURO: LO QUE DESCONOCEMOS

1. ¿Por qué hay pocos casos de monosensitización? ¿Es una entidad clíni-
ca diferente?
2. ¿Por qué este incremento repentino? Midoro Horiuti ha demostrado que
existe una expresión variable de uno de los alergenos de J. Ashei (Jun a 3) en
relación con la polución atmosférica. Hay una diferencia de hasta 1 a 5 en la
cantidad de Jun a 3 segundo los lugares y los años.
3. Tener una buena estandarización de los extractos para realizar una inmu-
noterapia específica eficaz. Por ahora utilizamos una mezcla de varios pólenes.
4. Sería muy interesante de estudiar la capacidad alergénica de todas las
Cupressaceae en el Mediterráneo y también en el hemisferio sur, Australia,
África del sur.

24
 Aerobiología y polinosis por Cupresáceas en España

A. Moral de Gregorio Aerobiología y polinosis por Cupresáceas

Sección de Alergología. en España
Hospital Virgen del Valle.
Toledo.

INTRODUCCIÓN

Las Cupresáceas o Cupressaceae son plantas muy antiguas, aparecidas en

el inicio de la vida en la Tierra (Paleozoico). Sin embargo ha sido en los últimos
años cuando se ha reconocido su alergenicidad, siendo subestimadas por la
coincidencia en invierno con infecciones víricas y procesos intrínsecos. Se en-
cuentran repartidas por todo el Mundo, aunque son distintas las del Hemisferio
Norte y las del Sur.
Se trata de árboles o arbustos, con hojas en forma de escama o aciculares,
en disposición opuesta o en verticilos de 3 ó 4, habitualmente perennes. Son de
gran altura y muy longevos. No tienen verdaderas flores y sus órganos reproduc-
tores pueden ser monoicos (en la misma planta los dos sexos) o dioicos (en dis-
tinta planta). La polinización es anemófila, eliminando gran cantidad de polen
desde la base hasta la copa. Las fructificaciones pueden ser leñosas (arizónica) o
carnosas (tejo y enebro).
Son plantas con semilla al descubierto, es decir pertenecen a las Gimnos-
permas, pero quizás sea mejor clasificarlas para conocer sus relaciones taxonó-
micas.
La Botánica se divide en dos reinos: hongos y plantas. Las plantas a su vez
en: algas procariotas, algas eucariotas y embriofitas. Las embriofitas tienen cua-
tro divisiones: Briofitas (musgos), Pteridofitas (helechos), Pinofitas (gimnosper-
mas) y Magnoliofitas (angioespermas)1.
Dentro de las Pinofitas hay clases actualmente desaparecidas (Cycadeidop-
sida, Progimnospermopsida y Pteridospermopsida) y otras que todavía persisten:
Cycadopsida (Cycas), Ginkgopsida (Ginkgo biloba), Pnetopsida (Ephedra) y Co-
niferopsida. En las Coniferopsida hay dos órdenes extintos: Cordaitales y Volt-
ziales, y dos muy importantes desde el punto de vista alergológico: Coniferales y
Taxales.
El orden Coniferales abarca 575 especies de 6 familias: Pinaceae, Cupre-
ssaceae, Cephalotaxaceae, Taxodiaceae, Araucariaceae y Podocarpaceae. El or-
den Taxales tiene sólo una familia, Taxaceae, y la especie más conocida es Taxus
baccata (Tejo).
La familia Pinaceae tiene 5 géneros principales: Abies (Abeto), Cedrus
(Cedro), Picea (Abeto de Navidad), Larix (Alerce) y Pinus (Pino). La morfología
del polen de las Pinaceae es completamente diferente del resto de las Conifera-
les, y además tienen una prevalencia insignificante entre las polinosis, menos del
5%2. Además no se ha demostrado reactividad cruzada entre las Pinaceae y el
resto de Coniferales.
El tejo es un árbol que puede vivir 1.000 años con fructificaciones carnosas
rojizas, que son la única parte no venenosa de este árbol.
La familia Cupressaceae cuenta con 150 especies, repartidas en 19 géneros,
siendo los más importantes: Tetraclinis (T. articulata) sabina de Cartagena,

25
A. Moral de Gregorio
Platycladus (P. orientalis) árbol de la vida, Calocedrus (C.
decurrens) Cedro blanco de California, Chamaecyparis
(Ch. lawsoniana) Cedro de Oregón, Thuja (T. plicata) tu-
ya gigante, Juniperus spp. y Cupressus spp.
Hay 60 especies del género Juniperus, con frutos
carnosos y hojas aciculares, entre ellos: J. communis (ene-
bro común), J. oxycedrus (enebro de la miera), J. phoeni-
cea (sabina negra), J. thurifera (sabina blanca) y J. ashei
o sabinoides (cedro de montaña). Este último es muy im-
portante en cuanto a polinosis en Norteamérica3 y también
en los Balcanes.
La madera de Juniperus oxycedrus se utiliza en eba-
nistería y del Juniperus communis se extrae una conocida
bebida de origen inglés, la ginebra.
El género Cupressus tiene 20 especies, entre ellas:
C. sempervirens (ciprés común), C. arizonica (arizónica),
C. macrocarpa (ciprés de Monterrey), C. funebris (ciprés
llorón) y C. lusitanica (ciprés de Portugal). Utilizadas para
reforestación, protección contra el viento y como plantas
ornamentales. Debido a sus resinas aguantan bien el agua
y se utiliza para construir barcos.
Había otras familias dentro del orden Coniferales
además de las Cupressaceae, como las Araucariaceae, con
2 géneros: Araucaria y Agathis, que se encuentran sobre
todo en Australia y Nueva Zelanda. Su madera se utiliza
para mástiles de barcos por su rectitud.
Las Cephalotaxaceae con un solo género, Cephalo-
taxus (C. drupaceae).
Las Podocarpaceae con 7 géneros y originarias de
Oceanía, como Podocarpus neriifolius (podocarpo de ho-
jas de adelfa).
Por último las Taxodiaceae con 10 géneros, entre las
que se encuentran los árboles más viejos (2000-3000 años)
y más altos del mundo (hasta 100 metros), como: Sequoia-
dendrum giganteum (árbol del mamut), Sequoia sempervi-
rens (sequoia), Taxodium mucronatum (ciprés mejicano)
hay un ejemplar con 34 metros de diámetro en Oxaca
(Méjico) y de unos 2.000 años. A esta familia pertenece
también Cryptomeria japonica (cedro del Japón o Sugi),
que es la causa de un 90% de polinosis en Japón4.
MORFOLOGÍA DEL POLEN
Todas las especies del orden Taxales y Coniferales,
excepto las Pinaceae, tienen un mismo tipo de polen, dife-
renciándose sólo en el tamaño, por eso al identificar a es-
tos pólenes al microscopio se les denomina Cupressaceae-
26
Taxaceae, aunque olvidamos el resto de las familias de las
Coniferales.
Son pólenes de forma esferoidal, con un tamaño va-
riable entre 19 y 38 micras, sin aperturas y con una exina
delgada con gránulos finos y gruesos5, 6. La intina es muy
característica por su grosor (6 micras). En algunas ocasio-
nes se rompe la exina, saliendo el protoplasto que aparece
abrazado por la intina.
Los pólenes de Pinaceae son de gran tamaño entre
60 y 160 micras y trilobulados con dos vesículas aéreas,
semejando a una montera de torero5, 6. Son inaperturados.
Muy diferentes a las Cupressaceae.
AEROBIOLOGÍA
La cantidad de polen de Cupressaceae-Taxaceae re-
cogidas va a depender de muchos factores, como cantidad
de plantas, pluviometría, intensidad del viento, etc.
Los pólenes de Cupressaceae se recogen en el he-
misferio Norte durante los meses de octubre hasta abril,
pero principalmente en febrero y marzo.
En Europa Juniperus oxycedrus poliniza desde octu-
bre a diciembre, Thuja en diciembre y enero, Cupressus
arizonica desde noviembre hasta marzo solapándose con
Cupressus sempervirens que lo hace desde enero hasta
abril7.
En EEUU Juniperus ashei poliniza desde noviembre
hasta marzo8. Cryptomeria japonica poliniza en Japón des-
de febrero hasta abril9.
En los últimos 8 años los recuentos anuales de Cu-
pressaceae en varias ciudades españolas, aparecen en la fi-
gura 1 en granos/m3. 2, 10 El año 1995, fue uno de los más
secos de este siglo y en Barcelona se recogieron 6.313
granos/m3. Durante el año 1996, Toledo, Barcelona y Ma-
drid superaron los 5.000 granos/m3 (10.384, 8.586 y 5.464,
respectivamente). En el año 1997 las tres ciudades anterio-
res igualaron o superaron los 10.000 granos/m3. Toledo en
el año 1998 llegó a 17.241 granos/m3, mientras que Ma-
drid y Barcelona superaron los 5.000 granos/m3. En 1999
de nuevo Toledo, Madrid y Barcelona igualaron o supera-
ron los 10.000 granos/m3, muy por encima del resto de
ciudades. Sin embargo, en el año 2000, sólo Barcelona su-
peró los 10.000 granos/m3 de 15 ciudades españolas. En el
año 2001 superaron los 5.000 granos/m3 Toledo, Barcelona
y Madrid (7.991, 7.377 y 6.330, respectivamente). Por úl-
timo, en el año 2002 en Toledo se recogieron 11.537 gra-
nos/m3, mientras que superaron los 5.000 granos/m3 en

Barcelona, Madrid y Burgos (7.667, 9.417 y 5.272, res-
pectivamente).
Teniendo en cuenta los días de máxima recogida de
pólenes de Cupressaceae en 24 ciudades españolas (tabla
I), los días pico más elevados se produjeron en Toledo
2.660 granos/m3 (19 de diciembre de 1998), Ciudad Real
1.602 granos/m3 (13 de febrero de 2001), Ávila 1.256 gra-
nos/m3 (4 de febrero de 2000) Barcelona 1.077 granos/m3
(13 de febrero de 1997), y Madrid 1.005 granos/m3 (29 de
enero de 1999). En el resto de las ciudades los máximos
se produjeron en el mes de febrero, con cifras inferiores a
900 granos/m3.
El período de polinización de las Cupressaceae pue-
de ser artefactado por las lluvias del invierno, aunque los
mayores recuentos se produjeron los años de precipitacio-
nes más altas. En general la polinización en España se
produce de octubre hasta abril, aunque la mayoría de los
pólenes se recogen durante el primer trimestre del año en
todas las ciudades, excepto en Toledo que tiene cifras ele-
vadas en el cuarto trimestre, probablemente por el género
Juniperus (Figura 2).
La proporción de pólenes de Cupressaceae es muy
variable con respecto al total de pólenes, dependiendo de
la ciudades y de diferencias interanuales, oscilando entre
2,46% de Santander y 33% de Burgos.
CARACTERÍSTICAS DE LA POLINOSIS POR
CUPRESÁCEAS
Black describió en EEUU en 1929 el primer caso de
sensibilización a Juniperus ashei11 y en 1945 Ordman en
Sudáfrica el primer caso por Cupressus sempervirens12. El
primer caso por Cryptomeria japonica en Japón fue en
196413. Posteriormente se han descrito numerosos casos en
países europeos: Francia14, Italia15, España16-18, Israel19 y
también en Australia20.
Los pacientes alérgicos a Cupressaceae presentan ca-
racterísticas clínicas diferentes a otras polinosis, siendo
más frecuentes las monosensibilizaciones que con otros
pólenes (23-33%)3-21. Los monosensibilizados a Juniperus
ashei tienen niveles de IgE total significativamente más
bajos (84 UI/ml versus 360 UI/ml, p<0,001), requieren in-
tervalos de exposición a Cupressaceae mucho más prolon-
gados antes de desarrollar la polinosis (14,4 años versus
5,69 años, p<0,001), tienen menos historia familiar de en-
fermedades alérgicas (43% versus 88%, p<0,001), tienen
menos antecedentes de asma o eczema (11% versus 39%,
Aerobiología y polinosis por Cupresáceas en España
p<0,001) y desarrollan la enfermedad a una edad más tar-
día (39 años versus 13 años, p<0,001) cuando se compara-
ban con sensibilizados a Cupressaceae y otros pólenes3.
Además los sensibilizados sólo a Cupressaceae tie-
nen una incidencia de conjuntivitis y rinitis superior al
70%, mientras que los síntomas de asma aparecen en me-
nos del 20%3, 22. Caballero en Madrid encuentra asma en
80% de los sensibilizados a Cupressaceae, pero la mayo-
ría se trataba de pacientes sensibilizados a otros pólenes16.
Los niveles de IgE específica a Cupressaceae suele
detectarse en pequeñas cantidades3.
PREVALENCIA
La presencia de pruebas cutáneas positivas a pólenes
de Cupressaceae en un estudio realizado en España en
1997 presentaba resultados muy dispares entre la pobla-
ción española con polinosis, oscilando desde el 0% en Se-
villa hasta el 23% en Madrid.
En el año 2003 se ha realizado un estudio multicén-
trico, por parte del Comité de Aerobiología de la Sociedad
Española de Alergologia e Inmunología Clínica, en 13
ciudades españolas utilizando extractos alergénicos del la-
boratorio Inmunotek (Madrid) para valorar la prevalencia
en pruebas cutáneas por prick test a una batería de los 24
pólenes más relevantes en España. Dentro de las Cupresá-
ceas se incluyeron Cupressus arizonica, Cupressus sem-
pervires y Juniperus oxycedrus (Tabla II). En cada una de
las ciudades la prevalencia fue muy similar con los tres
pólenes de Cupresáceas, sin embargo sí existían notables
diferencias entre las diferentes ciudades. La mayor preva-
lencia con Cupressus arizonica se produjo en Madrid
(55,91%) y la menor en la Coruña (1,28%) y Bilbao
(2,27%). Otras ciudades con elevada prevalencia a Cu-
pressus arizonica y resultados muy similares fueron: Bur-
gos (19,18%), Toledo (20%), Zaragoza (21,62%) y Barce-
lona (21,88%). Las ciudades con prevalencia más elevada
de sensibilización a Cupresáceas coinciden también con
las que presentan mayores concentraciones de dichos póle-
nes en su atmósfera.
En otros países europeos la prevalencia a Cupressa-
ceae en polínicos es similar, así en Montpellier (Francia)
18,5%21, Roma (Italia) 35,1%23, Tel-Aviv (Israel) 32%24,
Tirana (Albania) 4,5%25. En países africanos del mediterrá-
neo como Túnez 11,1%26 y en Marruecos 13,4%27.
En Japón la prevalencia a Cryptomeria japonica es
un 90% de las polinosis4. Muranaka ha demostrado que
27
A. Moral de Gregorio

CUPRESSACEAE-TAXACEAE 1995 CUPRESSACEAE-TAXACEAE 1996

3
Granos/m 3
de aire totales Granos/m de aire totales

20000 20000

15000 15000
10384
8586
10000
10000
6313 5464
3470 3706 4028
3088 5000 1791 1374 1984
5000 2319 2614 1987 1397 789
1419 1070 1181 474
843 802 676
0
0

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CUPRESSACEAE-TAXACEAE 1997 CUPRESSACEAE-TAXACEAE 1998

3 3
Granos/m de aire totales Granos/m de aire totales
20000 20000 17241
14790
15000 15000
9946 10228
10000 10000 6718
5685
4437 4484
3453 3820 3425
5000 2460 2078 2646 2383 2749 5000 2828
1821 1190 1765 2010 1270
756 306 348 877 268 94 373
72
0 0
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CUPRESSACEAE-TAXACEAE 1999 CUPRESSACEAE-TAXACEAE 2000
3 3
Granos/m de aire totales Granos/m de aire totales

20000 20000

13606 15000
15000
10222
9941 10096
10000 10000
5329 5766 5794 5379
5059
5000 2553 2354 2914
5000 2799 1947 1344
2354 2188 1857 825 968 526 256 1087
955
124 452 428 164
0
0
Bi elo

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CUPRESSACEAE-TAXACEAE 2001 C U P R E S S A C E A E -TA XA C E A E 2 0 0 2

3 3
Granos/m de aire totales Gra nos /m de a ire tota le s
20000 20000

15000 15000
11537
9417
10000 7377 7991 7667,1
6330 10000
4146 4611 5272 4528
3498 3203
5000 2690
1820 5000 2512 2109
897 671 819 227 927 1017 1229 794 1093
126 270 82 511 187 270 755
0 0
Av
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Fig. 1. Concentraciones totales anuales de pólenes de Cupressaceae expresadas como granos por m3 de aire desde 1995 a 2002 en varias ciu-
dades españolas (Comité de Aerobiología de la Sociedad Española de Alergología e Inmunología Clínica).

28
 Aerobiología y polinosis por Cupresáceas en España

los japoneses que viven en zonas cercanas a autopistas, La determinación de basófilos activados midiendo
tienen más posibilidades de sensibilizarse a Cryptomeria CD63 (91,2%) es más sensible que el ELISA (76%) para
japonica, probablemente en relación con partículas de los la determinación de IgE in vitro a Cupressaceae32.
motores diesel28. En la actualidad disponemos en España de los si-
guientes extractos de Cupressaceae para prick test sin es-
tandarizar: Cupressus sempervirens (Stallergens, ALK-
TEST IN VIVO E IN VITRO Abelló, CBF-Leti, Probelte), Cupressus arizonica
(Bial-Aristegui, IPI, DIATER), Juniperus spp. (Bial-Aris-
La obtención de extractos estandarizados para Cu- tegui, CBF-Leti), Thuja occidentalis (CBF-Leti, Inmuno-
pressaceae plantea problemas debido al escaso contenido tek), Taxus baccata (CBF-Leti, Inmunotek).
proteico (menos del 3%) y a una elevada cantidad de hi- Para prick test ya se encuentran estandarizados: Cu-
dratos de carbono (50-90%)29. Los pólenes utilizados de- pressus arizonica (ALK-Abelló, CBF-Leti, Inmunotek,
ben haberse recogido recientemente30. La dificultad para Probelte), Cupressus sempervirens (Inmunotek), Junipe-
encontrar sueros con IgE específica a títulos elevados di- rus oxycedrus (Inmunotek) y Juniperus ashei (Staller-
ficulta la realización de estudios de RAST de gens).
inhibición21. Se encuentran comercializados para la determinación
La sensibilidad de los métodos in vitro para detectar de IgE específica in vitro los siguientes árboles relaciona-
IgE específica es superior para Juniperus ashei o sabinoi- dos con las Cupressaceae: Cupressus arizonica (Pharma-
des y Cryptomeria japonica, con respecto a Cupressus ari- cia), Cupressus sempervirens (Pharmacia, Sanofi-Pasteur),
zonica y Cupressus sempervirens31. Cryptomeria japonica (Pharmacia), Juniperus sabinoides
(Pharmacia, Sanofi-Pasteur), Libocedrus decurrens (Phar-
macia), Juniperus oxycedrus (Sanofi-Pasteur) y Taxus bac-
Tabla I. Días pico de pólenes de Cupressaceae en varias
cata (Sanofi-Pasteur).
ciudades españolas durante 8 años consecutivos (1995-
2002) (Comité de Aerobiología de la Sociedad Española de
En 42 pacientes alérgicos a pólenes de Cupresáceas
Alergología e Inmunología Clínica) residentes en Toledo se realizaron prick test con extractos
comerciales de Juniperus ashei (Stallergens), Juniperus
Ciudad Pico (granos/m3) Día oxycedrus (Inmunotek), Cupressus sempervirens (Staller-
Toledo 2660 19 Diciembre 1998 gens, Inmunotek), Cupressus arizonica (Probelte, ALK-
Ciudad Real 1602 13 Febrero 2001 Abello, Inmunotek y CBF-Leti), Thuja occidentales (In-
Ávila 1256 4 Febrero 2000
munotek) y Taxus baccata (Inmunotek). El diámetro
Barcelona 1077 13 Febrero 1997
Madrid 1005 29 Enero 1999
medio de las pápulas del prick test del género Juniperus
Badajoz 890 9 Marzo 1999 (Juniperus ashei, 8,98 mm y Juniperus oxcedrus, 8,43
Burgos 778 22 Marzo 2002 mm) fue marcadamente superior a los del género Cupres-
Sevilla 756 26 Febrero 1997 sus (Cupressus arizonica, 7,04-6,71 mm y Cupressus sem-
Oviedo 742 18 Febrero 1999 pervirens 5,92-5,48 mm) y a los de Thuja occidentalis
La Coruña 602 3 Febrero 1997
(4,47 mm); mientras que para Taxus baccata (Taxaceae)
Salamanca 486 11 Enero 1997
Jaén 480 17 Febrero 2000
sólo aparecieron micropápulas.
Vitoria 473 12 Febrero 1997 En estos 42 pacientes con polinosis por Cupresáceas
Zaragoza 387 16 Febrero 1998 en el estudio in vivo de la IgE específica a diferentes Cu-
Elche 336 24 Febrero 1997 presáceas por CAP Pharmacia se obtuvieron los siguientes
Valencia 261 19 Febrero 1996 valores medios: Juniperus ashei (11,04 KU/l), Cupressus
Málaga 259 4 Abril 1995
sempervirens (3,61 KU/l), Cryptomeria japonica (2,95
San Sebastián 226 1 Febrero 2002
Bilbao 156 5 Mayo 1996
KU/l), Cupressus arizonica (2,69 KU/l) y Libocedrus de-
Valladolid 132 24 Marzo 1997 currens (0,47 KU/l).
Pamplona 119 8 Abril 1995 Estos resultados demuestran tanto in vivo como in
Pontevedra 105 24 Enero 1999 vitro la mayor actividad alérgenica de los extractos de Ju-
Santander 53 26 Febrero 2000 niperus ashei sobre los de Cupressus arizonica y Cupres-
Gijón 25 2 Febrero 2002
sus sempervirens.

29
A. Moral de Gregorio

TOLEDO 1995-2002 CIUDAD REAL 1996-2002

3 3
Granos/m Granos/m

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ZARAGOZA 1995-2002 BARCELONA 1995-2002
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Granos/m Granos/m

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MADRID 1995-2002 ELCHE 1996-2002

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Granos/m Granos/m

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BILBAO 1995-2002 BURGOS 1996-2002

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Fig. 2. Concentraciones medias diarias de pólenes de Cupressaceae entre 1995 y 2002 en varias ciudades españolas (Comité de Aerobiología
de la Sociedad Española de Alergología e Inmunología Clínica).

30
 Aerobiología y polinosis por Cupresáceas en España

IDENTIFICACIÓN DE ALERGENOS tatoliasas (rCup a 141, rCry j 142, rCha o 143 y rJun a 138), Po-
ligalacturonasas (rCry j 244 y rCha o 245), Proteínas relacio-
El primer alergeno que se identificó en las Cupressa- nadas con la patogénesis de las plantas (rJun a 346 y rCup a
ceae tenía 40 kD y fue reconocido como el alergeno mayor 3) de 23 kD y proteínas de unión al calcio (rJun o 2)32.
del polen de Juniperus sabinoides o cedro de montaña33. La pectina de la pared celular son substratos de las
También se ha identificado un alergeno de Cupressus sem- pectatoliasas, que facilitan el crecimiento del tubo polínico
pervirens de 43 kD, denominado Cup s131. Posteriormente durante la polinización, por degradar el pistilo de las flo-
Di Felice y colaboradores describieron un alergeno de 43 res femeninas47.
kD, Cup a 1 como el alergeno mayor de Cupressus arizo- En estudios in vitro Juniperus ashei es 20 veces más
nica22. La mayoría de los alergenos tienen residuos glucosí- potente que Cupressus sempervirens y 11 veces más que
dicos como se ha demostrado por unión a lectinas. Cupressus arizonica, por presentar mayor contenido del
Barletta y colaboradores han detectado alergenos de alergeno de 42 kD48.
43, 36 y 70 kD en Cupressus arizonica, y en Cupressus
sempervirens varios alergenos entre 97 y 14 kD34.
En Juniperus oxycedrus se han detectado dos alerge- INFLUENCIA DE LA POLUCIÓN AMBIENTAL
nos, uno de 43 kD (Jun o 1) y otro de 17 kD (Jun o 2)7, 35. SOBRE LA POLINOSIS POR CUPRESÁCEAS
Jun o 2 tiene estructura similar a las calmodulinas y inter-
viene en la fijación de calcio. Cortegano y cols. encuentran que 63% de los alérgi-
En la Cryptomeria japonica se ha detectado un aler- cos a Cupressus arizonica lo son a Cup a 3, mientras que
geno de 40-45 kD, que se le denominó proteína básica de a Cup a 1 lo son un 72%, por lo que Cup a 3 sería el se-
Sugi (en japonés cedro del Japón) o Cry j 136 y otro de 37 gundo alergeno principal de Cupressus arizonica, después
kD o Cry j 237. de Cup a 1. Cup a 3 es un hómologo de los miembros de
Por técnicas de biología molecular se han purificado, la familia de las proteínas relacionadas con la patogénesis
identificado y clonado los alergenos de Juniperus ashei: de las plantas (PR-5) y podría contribuir al aumento de la
Jun a 1 (43kD)38, Jun a 2 (37kD)39 y Jun a 3 (30 kD)40. alergenicidad del polen de Cupressus arizonica49. La ex-
Las moléculas de alergenos recombinantes obtenidas presión de Cup a 3 es dependiente de de los niveles de
en pólenes de Cupressaceae y Taxodiaceae se han clasifica- polución en el área donde el polen es recogido. Esto tiene
do en 4 grupos en relación con su actividad biológica: Pec- una incidencia directa sobre la alergenicidad del polen, co-
mo se ha demostrado por test cutáneos y RAST de inhibi-
ción (Allergy, pendiente de publicación).
Tabla II. Prevalencia de sensibilización a Cupressaceae en el Hay varios factores que podrían explicar el aumento
año 2002-2003 en varias ciudades españolas (Comité de de la incidencia de polinosis por Cupresáceas, así el au-
Aerobiología de la Sociedad Española de Alergología e mento de la exposición a especies de Cupresáceas debido
Inmunología Clínica) al aumento de su utilización en parques y jardines, pero
también por el potencial efecto adyuvante del incremento
Ciudad Cupressus Cupressus Juniperus
(nº pacientes) arizonica Sempervirens oxycedrus
de polución en el aire.
Badajoz (191) 4,19 1,57 0,52
En un estudio realizado en Toledo con 75 pacientes
Barcelona (32) 21,88 18,75 18,75 diagnosticados de polinosis por cupresáceas, valoramos la
Bilbao (44) 2,27 - - diferente alergenicidad del polen de Cupressus arizonica
Burgos (146) 19,18 11,64 15,07 recogido durante el mes de febrero de 2002, en dos zonas
Ciudad Real (175) 11,43 5,14 12 diferentes de Toledo. Una de ellas era una zona industrial
La Coruña (78) 1,28 1,28 1,28
en las proximidades de una autovía con elevado tráfico y
Logroño (38) 13,16 10,53 10,53
Madrid (93) 55,91 40,86 49,46
la otra una zona residencial ajardinada con escasa polu-
Santander (56) 3,57 3,57 1,79 ción. El promedio de edad de los pacientes fue 32,05 ±
Sevilla (99) 4,04 2,02 5,05 9,18 años y con predominio del género femenino, 59% de
Toledo (135) 20 15,56 22,22 mujeres versus 41% de varones, además de determinar la
Vitoria (67) 5,97 4,48 4,48 IgE total media de 182,4 ± 168,9 KU/l y no se apreció eo-
Zaragoza (148) 21,62 12,84 16,89
sinofilia periférica (246,24 ± 116,85 eosinófilos/mm3).

31
A. Moral de Gregorio
Los dos extractos de Cupressus arizonica empleados
se prepararon según la técnica descrita previamente22. Los
resultados obtenidos muestran que las pruebas cutáneas en
prick (mm de diámetro de la pápula) en los 75 pacientes
con los extractos de autovía en zona industrial y el de zo-
na residencial, eran estadísticamente diferentes. La media
de los valores por prick con extracto procedente de auto-
vía en zona industrial polucionada fue de 8,13 ± 1,02 mm,
mientras que el diámetro de la pápula en la zona residen-
cial no polucionada fue de 6,67 ± 0,78 mm, encontrándose
una diferencia significativa de p<0,0005.
En el immunoblotting de ambos extractos de Cupre-
ssus arizonica (autovía en zona industrial y zona residen-
cial) el antisuero de conejo anti Cup a 3, sólo reconocía
Cup a 3 en el extracto de polen recogido en autovía y no
en el de la zona residencial sin polución.
Después de incubar un pool de sueros de alérgicos a
Cupressus arizonica con discos de nitrocelulosa sensibiliza-
dos a Cupressus arizonica, se inhibieron con los extractos
de Cupressus arizonica a diferentes concentraciones recogi-
dos en autovía en zona industrial y en zona residencial ajar-
dinada no polucionada. En concordancia con los resultados
de las pruebas cutáneas, el RAST de inhibición demostraba
una actividad alergénica 5 veces superior en el extracto de
autovía en zona polucionada que en el de zona residencial.
Las proteínas relacionadas con la patogénesis de las
plantas, son producidas en respuesta a situaciones de estrés
como infecciones por virus, hongos, bacterias, ozono, polu-
ción, sequía, heladas. Así, árboles de la misma especie en
diferentes localizaciones expresan niveles variables de pro-
teínas relacionadas con la patogénesis, como Cup a 3.
REACTIVIDAD CRUZADA
Se ha demostrado reactividad cruzada de Cupressus
sempervirens con varios extractos de Cupressaceae y otras
especies de familias relacionadas, por medio de ELISA de
inhibición e inhibición de inmunoelectrotransferencia de
SDS-PAGE. Las especies en las que se encontró reactivi-
dad cruzada con Cupressus sempervirens han sido: Cu-
pressus arizonica (Cupressaceae)22, Juniperus oxycedrus
(Cupressaceae)34, Callitris glaucophyla (Cupressaceae) pi-
no ciprés blanco o de Murray50, Podocarpus gracilior (Po-
docarpaceae)51 y Cryptomeria japonica (Taxodiaceae)52.
Se ha demostrado recientemente que el alergeno ma-
yor de Cupressus arizonica (Cup a 1) pierde capacidad de
unión a la IgE, después de eliminar residuos glicosilados
32
con periodato. Estos residuos glicosilados tienen una es-
tructura similar a la bromelina de la piña y a la fosfolipasa
de Apis mellifera, pudiendo tratarse de β 1-2 xilosa, α 1-3
fucosa y α 1-6 fucosa, que explicaría la reactividad cruza-
da con especies no relacionadas53.
Barletta demuestra que la reactividad cruzada entre
Cupressus sempervirens y Cupressus arizonica radica en
los epitopos glúcidos y proteicos al utilizar anticuerpos
monoclonales sensibles a periodato54.
Yashueda encuentra reactividad cruzada entre Cryp-
tomeria japonica y Chamaecyparis obtusa o ciprés del Ja-
pón (Cupressaceae)36.
Con un anticuerpo monoclonal frente a Cryptomeria
japonica, se ha demostrado reactividad cruzada con Juni-
perus ashei, demostrando la reactividad cruzada entre Cu-
pressaceae y Taxodiaceae38.
Las bandas 40 y 74 kd se encuentran en todas las
Cupressaceae (42 kD en Cupressus sempervirens y 43 kD
en Cupressus arizonica) y Taxodiaceae (43-46 de Crypto-
meria japonica), pero la banda de 36 kD no se encuentra
en todas las Cupressaceae, pero probablemente coincide
con la de 37 kD de Cryptomeria japonica, Cry j 2.
La reactividad cruzada entre diferentes familias de
plantas podría deberse a la conservación de la actividad
pectatoliasa. Las pectatoliasas hidrolizan también estructu-
ras de mamíferos, como el glucocalix, que se encuentra en
la superficie luminal de las células epiteliales. Esto favore-
cería la penetración de otras proteínas del polen, estimu-
lando la alergenicidad.
Cup a 1 tiene un elevado grado de identidad con Jun
a 1(91%), Cha o 1(81%), Cry j 1(75%), pero también con
otras pectatoliasas (46-51%): Arabidopsis thaliana, Zinnia
elegans, Fragaria amanassa, Medicago sativa.
En un estudio de Ariano con 93 pacientes sensibili-
zados a Cupresáceas, 90,1% estaban sensibilizados a
Cryptomeria japonica, 88,8% a Cupressus arizonica,
87,6% a Juniperus oxycedrus, 76,5% a Cupressus semper-
virens, 76,5% a Chamaecyparis obtusa, 65,4% a Thuja
orientalis y 61,7% a Taxus baccata55.
Por tanto existe reactividad cruzada entre las diferen-
tes especies de los géneros Cupressus y Juniperus, y tam-
bien entre los dos géneros. Esta reactividad se extiende a
familias relacionadas: Podocarpaceae y Taxodiaceae.
No parece existir reactividad cruzada de las Cupre-
ssaceae con Taxus baccata, al pertenecer este al orden Ta-
xales y no al Coniferales. Tampoco existe reactividad cru-
zada con la familia Pinaceae (Pinus, Abies, Cedrus, Larix
y Picea), aunque todas pertenecen al orden Coniferales.

INMUNOTERAPIA CON CUPRESÁCEAS
Existen pocos datos sobre la eficacia de inmunotera-
pia con pólenes de Cupresáceas, debido a la escasa calidad
de los extractos utilizados hasta hace pocos años56.
Uno de los primeros estudios con inmunoterapia
frente a Cupressaceae fue el de Miller con Juniperus as-
hei a doble ciego57. Parker demostró elevación de IgG1 e
IgG4 específica con extracto hiposensibilizante de Junipe-
rus ashei, además de una disminución significativa de la
respuesta cutánea tardía y de la puntuación de síntomas58.
Posteriormente Ariano utiliza una mezcla de extrac-
tos conteniendo Cupressus sempervirens y Cryptomeria
japonica59. El grupo tratado presentaba resultados signifi-
cativamente mejores en cuanto a la puntuación de sínto-
mas, consumo de medicamentos, pruebas cutáneas, deter-
minación de IgE específica in vitro y test de provocación
nasal, que el grupo con placebo. No se observaron efectos
adversos. En la actualidad han incorporado a la mezcla Ju-
niperus oxycedrus con buenos resultados.
Más recientemente Ariano demostró una mejoría sig-
nificativa de los síntomas de alergia y una disminución de
la puntuación de consumo de fármacos y de la reactividad
nasal específica a alergeno; tras un año de tratamiento con
inmunoterapia sublingual con extracto de polen de Cu-
pressus arizonica60.
SOLUCIONES A LAS POLINOSIS POR
CUPRESÁCEAS
Las Cupressaceae se utilizan como árboles ornamen-
tales en parques y jardines, para evitar la erosión del suelo
y para proteger otros cultivos del viento. También se han
utilizado en reforestaciones sobre todo Cupressus arizoni-
ca.
El aumento de la prevalencia de las alergias respira-
torias producidas por Cupressaceae se ha intentado expli-
car de diferentes modos. Panzani sugería que el silicato
alumínico de la polución actuaría como adyuvante14, mien-
tras que otros estudios implican a las partículas de los mo-
tores diesel28. Sin embargo, para otros se debería al au-
mento de los niveles de pólenes por el aumento de la
plantación de Cupressaceae21, o por modificación de las
glucoproteínas del polen por estrés, o simplemente la me-
jor calidad de los test diagnósticos. Lo más probable es
que se deba a una sumación de los factores anteriores.
En estudios experimentales se ha comprobado que
Aerobiología y polinosis por Cupresáceas en España
Cupressus sempervirens y Cupressus arizonica son capa-
ces de producir pólenes a los cinco años de estar planta-
dos, mientras que otras Cupressaceae como: Cupressus
drupeziana, Cupressus atlántica, Cupressus torulosa y Cu-
pressocyparis leylandii lo hacen a los 10 años y con me-
nor cantidad de pólenes61. Sería más aconsejable plantar
estas últimas especies, aunque son más caras y estaría jus-
tificado la selección de clones de especies que produzcan
menos pólenes.
Un hongo llamado Seiridiun cardinale parasita las
Cupressaceae, produciendo el chancro cortical, que au-
menta la producción de polen en árboles parasitados. Ac-
tualmente se está trabajando para conseguir plantas resis-
tentes a este hongo y que a la vez produzcan poca
cantidad de polen y durante un corto periodo de tiempo62.
Otra opción sería conseguir clones por ingeniería ge-
nética que produzcan esterilización de las especies mascu-
linas, seguido por propagación vegetativa.
En futuras plantaciones de bosques y jardines se de-
bería contar con un grupo de profesionales, en el que ten-
drían que estar incluidos los alergólogos, para aconsejar
las plantas que no se deberían utilizar, como sería el caso
de las Cupressaceae. Con esto se evitarían errores como
los ocurridos en Bari, Senas o en Japón, donde se planta-
ron millones de Cupressaceae. Las ventajas económicas
obtenidas con estas plantaciones han sido netamente supe-
radas por el sufrimiento de miles de personas y sus gastos
médicos. Los bosques no sólo deben ser una fuente de
madera o un lugar de recreo.
El impacto ambiental de las Cupressaceae es notorio
y se ha convertido en unos de los aeroalergenos más im-
portante en los últimos años, por lo que sería deseable la
existencia de legislación al respecto. Los pólenes alergéni-
cos de plantas salvajes (gramíneas, ambrosía, parietaria,
etc), no pueden ser controlados, pero sí los de especies
plantadas como las Cupressaceae.
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C. Lahoz, I. Cortegano, Alergenos de las Cupresáceas

E. Civantos, E. López,
B. Cárdaba, E. Llanes,
S. Gallardo, B. Sastre, INTRODUCCIÓN
P. Palomino,
A. del Moral*,V. del La Familia de las Cupresáceas se encuentra ampliamente extendida por di-
Pozo versos lugares de la geografía de Europa (climas del tipo mediterráneo), América e
incluso África, Asia y Australia. La temporada de su polinización hace que esta fa-
Servicio de Inmunología. milia sea considerada como la responsable de los llamados catarros invernales de
Fundación Jiménez Díaz.
origen alérgico (conjuntivitis y asma). Las Cupresáceas son utilizadas como barre-
Madrid. *Unidad de Alergia.
Hospital Virgen del Valle. ras para el ruido y el viento en autovías y en parques y jardines con motivos orna-
Toledo. mentales, lo que hace que la frecuencia de la sensibilización sea cada vez mayor
debido al incremento de la carga antigénica. La riqueza en esencias y resinas per-
mite la utilización de algunas de estas plantas como medicinales, con fines indus-
triales o para la fabricación de licores1, 2.
Según datos del Comité de Aerobiología de la Sociedad Española de Alergia e
Inmunología Clínica es en Toledo donde existe la mayor concentración de pólenes
de Cupresáceas y donde su polinización está más extendida en el tiempo, seguida de
Madrid y Barcelona. La polinización se realiza a través del aire, siendo los pólenes
de forma esferoidal sin aperturas y con un gran contenido en hidratos de carbono, por
lo que es particularmente difícil la extracción de las proteínas de polen para su análi-
sis o utilización en diagnóstico y tratamiento.

35
C. Lahoz, et al

Dentro de la familia de las Cupresáceas el género antígeno mayor lo hemos expresado en E. coli como una
Cupressus es el más abundante distinguiéndose en nuestro proteína de fusión9. La Tabla I muestra las homologías
entorno las especies arizonica (CA), sempervirens (CS) y entre Cup a 1 y otros antígenos relacionados.
lusitanica (Fig. 1).
Otros miembros importantes de esta misma familia
Tabla I. Porcentajes de homología entre las secuencias de
desde el punto de vista alergénico son los correspondien- aminoácidos de los alergenos Cup a 1 y otras Cupresáceas
tes al género Juniperus siendo las especies más importan- recombinantes
tes el ashei que es el cedro de montaña y el oxicedrus. En
Japón existe el género Chamaecyparis cuya especie más Cry j 1 75
conocida es la obtusa. Por último, en la familia de las Ta- Cha o 1 81
xodiáceas se distingue la Cryptomeria japonica. Jun a 1 91
Dado que la polinización de alguna de estas varieda- Jun v 1 n.d.
des se solapa parcialmente en el tiempo y debido a que Cup a 1 -
existe una gran reactividad cruzada entre ellas, la presen-
cia de síntomas es continua durante varios meses, con apa-
rición de picos fuera de la estación. La prevalencia de
pruebas cutáneas positivas para CA y CS es muy variable
dentro de áreas que tienen condiciones climáticas simila-
res y contajes muy parecidos de ambos pólenes. La causa
de ello puede ser a la baja calidad de los extractos por la
difícil extracción, lo que hace que varíe el contenido pro-
teico de los mismos3-5.
El cedro de montaña o Juniperus ashei (JA) tiene una
alta reactividad cruzada con CA y CS, esta variedad no
presenta tantas dificultades en la obtención de los extractos Fig. 1. Cupressus arizonica.
alergénicos por lo que ha sido utilizada en muchas ocasio-
nes como estándar para otras variedades de Cupresáceas y En un estudio realizado en nuestro laboratorio por
para comparar unas con otras. La reactividad cruzada no Ascensión Mínguez en colaboración con el Servicio de
sólo es debida a identidades en determinantes proteicos, si- Alergia de la Clínica Puerta de Hierro, se encontró por
no que los carbohidratos tienen un importante papel dado inmunodetección que el 100% de los pacientes positivos
el alto contenido que tienen los respectivos pólenes6. para CA (55% de alérgicos a Cupresáceas), reconocen
En el esquema siguiente se puede observar un resu- Cup a 1. Los datos están resumidos en la Tabla II.
men de la taxonomía de la familia las Cupresáceas. Otras
familias que también pertenecen a las Coniferales son las Tabla II.
Taxodiáceas (Criptomeria) las pináceas (pino y cedro) que
también pueden ser alergénicas7. Pacientes CLÍNICA Prick Test IgE Esp IDT
143 RC ASMA CA Otros(+) CA Otros(+) CA Otros(+)
CUPRESÁCEAS 48% 52% 100% 68% 88% 66% 55% 45%
RC: Rinocinjuntivitis; CA: Cupressus arizonica
(+) otras especies de cupresáceas: Cupressus sempervirens y Juniperus oxicedrus
IDT: inmunodetección
CHAMAECYPARIS JUNIPERUS

En la figura 2 se observa el extracto crudo de CA y

CALITRIS CUPRESSUS THUJA
El antígeno descrito por Di Felice et al.8 como más
reactivo en CA ha sido clonado en nuestro laboratorio y
hoy se conoce su secuencia y actividad (Cup a 1). Este
rCup a 1 o alergeno mayor recombinante que debido a que
está expresado en E. coli, aparece con un peso molecular
algo menor que en la forma nativa del extracto crudo
(43kDa), debido a que la forma recombinante así expresa-
da carece de carbohidrato (37kDa).

36
 Alergenos de las Cupresáceas

Cup a 1 nativo

rCup a 1

Inmunodetección

SDS-PAGE

Fig. 2.

Recientemente ha sido clonado el antígeno mayor de

Cupressus sempervirens Cup s 1, que como era predecible
tiene una alta homología con Cup a 1.
La expresión de un antígeno de las mismas caracte-
43kDa rísticas que Cup a 1 ha sido descrito por I. Ansótegui y G.
Gastemiza7 en el polen del pino. En la Fig.3 (cedida por
G. Gastemiza) se observa por inmunodetección con sueros
de enfermos alérgicos a polen de pino, que existe una pro-
teína de 43kDa. La proteína que corresponde a su homólo-
Fig. 3. go Cup a 1, está indicada con una flecha en la figura.

gat aat ccc atc gac agc tgc tgg aga gga gat tcg aac tgg gat caa aac aga atg aag ctc gca gac tgt gtt
1 D N P I D S C W R G D S N W D Q N R M K L A D C V
gtg gga ttt gga agc tcg acc atg gga ggc aaa gga gga gaa att tac acc gtc aca agc tca gaa gat aat cct
26 V G F G S S T M G G K G G E I Y T V T S S E D N P
gtg aat cct aca cca gga act ttg cgc tat gga gca aca aga gaa aaa gca ctt tgg ata att ttc tct cag aat
51 V N P T P G T L R Y G A T R E K A L W I I F S Q N
atg aat ata aag ctc cag atg cct ttg tat gtt gct gga tat aag act att gac ggc agg gga gca gtt gtt cat
76 M N I K L Q M P L Y V A G Y K T I D G R G A V V H
ctt ggc aat ggc ggt ccc tgt ctg ttt atg agg aaa gcg agc cat gtt att ctc cat ggt ttg cat ata cac ggt
101 L G N G G P C L F M R K A S H V I L H G L H I H G
tgt aat acg agt gtt ttg ggg gat gtt ttg gta agt gag tcc att ggt gtg gag cct gtt cat gct cag gat ggg
126 C N T S V L G D V L V S E S I G V E P V H A Q D G
gac gcc att act atg cgg aat gtt aca aat gct tgg att gat cat aat tct ctc tcc gat tgt tct gat ggt ctt
151 D A I T M R N Y T N A W I D H N S L S D C S D G L
atc gat gtt aca ctt ggt tcc act gga att act atc tcc aac aat cac ttc ttc aac cat cat aaa gtg atg ttg
176 I D V T L G S T G I T I S N N H F F N H H K V M L
tta gga cat gat gat aca tat gat gat gac aaa tct atg aaa gtg aca gtg gcc ttc aat caa ttt gga ccc aat
201 L G H D D T Y D D D K S M K V T V A F N Q F G P N
gct ggg caa aga atg cca agg gca cga tat gga ctt gta cat gtt gca aac aat aat tat gat caa tgg aat ata
226 A G Q R M P R A R Y G L V H V A N N N Y D Q W N I
tat gct att ggt ggg agt tca aat cca acc att cta agt gaa ggg aat agt ttc act gct cca aat gag agc tac
251 Y A I G G S S N P T I L S E G N S F T A P N E S Y
aaa aag gaa gta aca aag cgt ata ggg tgt gaa aca aca tca gct tgt gcg aac tgg gtg tgg aga tcc aca cga
276 K K E V T K R I G C E T T S A C S N W V W R S T R
gat gct ttt act aat gga gct tat ttt gta tca tcg ggg aaa gct gaa gac acc aat ata tac aat agt aat gaa
301 D A F T N G A Y F V S S G K A E D T N I Y N S N E
gct ttc aaa gtt gag aat ggg aat gca gct cct caa tta aca caa aat gct gga gtt gta gca taa
326 A F K V E N G N A A P Q L T Q N A G V V A *

Sitios activo pectato-liasa

Epitopo T
Glicosilación

Fig. 4. Secuencia de nucleótidos y secuencia de aminoácidos deducida de Cup a 1.

37
C. Lahoz, et al

% RAST Inhibición
Dom.taumatina Dom. kinasa I
Fig. 5. n 100
h
80 C.arizonica Autovia
i Juniperus oxicedrus
b 60
i
40
c
i 20
ó
n 0
0.01 0.1 1 10 100
[proteína] µg/mL

Fig. 8.
GST (32kDa)

Cup a 3 (21 kDa)
Fig. 6.
Pyrus pyrifolia mRNA for
thaumatin-like protein
precursor
89%
Atriplex nummularia
osmotin-like protein (A9)
89%
sión varía de unos años a otros en el extracto completo,
dependiendo de las condiciones climáticas.
En nuestro laboratorio se ha estudiado si en Cupres-
sus arizonica puede existir ese antígeno relacionado con la
patogénesis. Para ello, utilizando los cebadores descritos
para Jun a 3 hemos clonado la proteína Cup a 3, que efec-
tivamente y como sospechábamos se expresa en condicio-
nes de estrés de la planta11.
Existen 14 familias de PR. Dentro de la familia PR-5
se encuentran alergenos con un dominio homólogo a la
taumatina y otro dominio con actividad kinasa (Fig. 5)12.
La proteína clonada la hemos descrito como Cup a 3
y ha sido registrada en el Banco de Genes como

90% Vitis vinifera Thaumatin- AJ294411. Su peso molecular teórico es de 21 kDa y su

like protein VVTL1 mRNA
punto isoeléctrico pH 4.82. Al contrario de la Cup a 1 no
93%
Vitis vinifera Thaumatin- tiene sitios de glicosilación, pero sí tiene diez sitios poten-
95% like protein gene
ciales de fosforilación (Ser, Thr, Tyr).
95% Juniperus virginiana En la Fig. 6 se puede observar el resultado (PAGE-
pollen allergen 3-2-
96% allergen SDS), obtenido con la transformación de bacterias E.coli
Juniperus virginiana
pollen allergen 3-1 mNA
con pGEX-5X-1-Cup a 3 y la expresión como proteína de
fusión "GST-Cup a 3". El corte de la proteína de fusión da
Fig. 7. Porcentajes de homología con varias proteínas relacionadas con la lugar a la proteína recombinante Cup a 3 de 21kDa11.
patogénesis en las que no todas tienen actividad alergénica reconocida. Esta proteína es en un 96% homóloga con Jun a 3
como era de esperar al ser clonada utilizando los cebado-
res de Jun a 3.
La secuencia de nucleótidos y de aminoácidos de Lo más interesante es que hemos demostrado que la
Cup a 1 se muestra en la Fig. 4. Se indican además los si- Cup a 3 se expresa en condiciones de alta polución atmos-
tios de actividad pectato liasa, los posibles epítopos T y férica y lo que es más peculiar es que el polen obtenido en
los sitios de glicosilación. esas condiciones es más alergénico que el obtenido en ca-
Se ha descrito un interesante dato relacionado con sos de condiciones ideales carentes de polución.
las Cupresáceas que corresponde a Jun a 310 que es un El efecto de la polución sobre la actividad alergénica
alergeno que se encuadra dentro del grupo de las proteínas es variado y va desde un efecto propiamente adyuvante
relacionadas con la patogénesis (PR) y de hecho, su expre- aumentando la alergenicidad de los antígenos, al aumento

38
 Alergia a pólenes de Quenopodiáceas

de su expresión y a la irritación mucosa producida por la
propia polución que altera la permeabilidad de las muco-
sas y condiciona la respuesta inmunológica13-15.
La Fig. 8 muestra el RAST inhibición, cedido por
M. Lombardero, (ALK-Abelló), que se realizó utilizando
extracto de polen recogido en una "Autovía" (poluciona-
do), en un jardín "Hospital" (círculos abiertos) y un ex-
tracto comercial de Juniperus oxicedrus. Claramente, el
extracto "polucionado" tiene más actividad que el resto y
es precisamente este el que contiene Cup a 3.
Como conclusión, debemos deducir la importancia
del conocimiento de la composición de los extractos utili-
zados en el diagnóstico y tratamiento, pues no sólo deben
estar adecuadamente estandarizados, sino que su composi-
ción en determinados componentes antigénicos es funda-
mental y depende entre otros factores muy directamente de
las condiciones ambientales de los cultivares. Todo ello in-
fluye en la actividad final del extracto y es precisamente el
clonaje molecular de los diversos antígenos contenidos en
el extracto, la clave para un mayor conocimiento de los
mismos.
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J. Pola Pola Alergia a pólenes de Quenopodiáceas

Servicio de Alergia. Policlínica
Sagasta. Zaragoza. INTRODUCCIÓN

Los pólenes procedentes de la familia de las Quenopodiáceas han venido

considerándose tradicionalmente como causantes de alergia respiratoria. En
1933, Lamsom y Watry describieron los primeros casos de alergia a dichos pó-
lenes en Arizona1.
En la actualidad, y en lo referente a la península ibérica, podemos decir
que se consideran como una de las principales fuentes de sensibilización a póle-
nes en numerosas ciudades de nuestro país, existiendo además una correlación

39
J. Pola Pola

Tabla I. Clasificación botánica de las Quenopodiáceas-

Amarantáceas

Familia Subfamilia Género

Chenopodioidae Chenopodium album
Atriplex
Kochia
Beta
Chenopodiaceae Bassia
Salicornia
Salsoloideae Salsola Kali
Salsola Vermiculata
Halogeton
Amaranthaceae Amarantus retroflexus
Archyranthes
Alternanthera

entre los recuentos totales y la prevalencia de tests cutáne-

os positivos2.
Las Quenopodiáceas son plantas fundamentalmente
anemófilas con un amplio periodo de polinización que va
desde abril a octubre con algunas variaciones regionales
dependientes de las condiciones climáticas.
Fig. 2. Chenopodium album-Detalle de su flor.

CLASIFICACIÓN BOTÁNICA

La familia de las Quenopodiáceas-Amarantáceas per-

tenece al orden de las Centrospermas, que posee más de
8000 especies (Tabla I).
Se caracterizan por tener flores pequeñas, un ovario
unilocular con un rudimento seminal en su base y fruto
nuciforme.
Se considera que esta familia, con alrededor de
2.500 especies, tiene 2 subfamilias: Chenopodiodeas y

Fig. 1. Chenopodium album. Fig. 3. Salsola kali.

40
 Alergia a pólenes de Quenopodiáceas

60
Polinización de las Chenopodiáceas I
50 Toledo
40
30
20
10
0

60
50 Elche
40
30
20
10
0

60
50 Madrid
40
30
20
10
0

60
50 Ciudad Real
40

Fig. 4. Salsola kali-Detalle de la flor. 30

20
10
0
Gr/ m3 Marzo Abril Mayo Junio Julio Agos. Sept. Oct. Nov .

Salsoloideas. Dentro de estas, las especies más relevantes
desde el punto de vista alergológico son el Chenopodium
album (Figs. 1 y 2) y Salsola kali (Figs. 3 y 4). Hay otras
plantas pertenecientes a esta familia sin apenas importan-
cia alergológica pero sí económica como son la Beta (re-
molacha azucarera), remolacha roja, espinacas y acelgas.
AEROBIOLOGÍA
Como la mayoría de las plantas con flores poco
atractivas, las Quenopodiáceas son anemófilas (poliniza-
das mayoritariamente a traves del viento). La morfología
del polen de las Quenopodiáceas (indistinguible a la visión
óptica de las Amarantáceas) es muy característica. Es un
polen pantoporado (40-60 poros), es decir toda su superfi-
cie (microgranulada) está cubierta de poros dando una
imagen típica de "pelota de golf" (Fig. 5). Mide entre 15-
30 micras, aunque el de algunas especies como la Beta
puede llegar a medir menos de 10 micras.
El periodo de polinización es muy amplio aunque los
Fig. 6. Polinización de las Quenopodiáceas en varias ciudades
(medias de 10 días). Periodo 1995-2002.
En algunas ciudades como Elche pueden llegar a re-
presentar hasta el 18% de los pólenes recogidos, aunque la
media se sitúa en torno al 4-5%3-13.
Los días pico se suelen ver durante la segunda quin-
cena de agosto y la primera de septiembre con una media
en los últimos años de 48 granos m3 (máximo 180 gra-
mos/m3 recogidos en Elche el 7-9-96).
Así pues, si los comparamos con los pólenes de ár-
boles y gramíneas, las Quenopodiáceas tienen una presen-
cia aerobiológica bastante reducida.
En las figuras 6 y 7 podemos ver los recuentos obte-
nidos en las estaciones más importantes de la Red de Ae-
robiología de la SEAIC durante los últimos años.
Polinización de las Chenopodiáceas II
6
5
0
0 Sevilla
4 0

picos se obtienen en los meses de agosto y septiembre. 3

2
0
0
1 0
0

6 0
5 0 M‡laga
4 0
3 0
2 0
1 0
0

6 0

5 0 Zaragoza
4 0
3 0
2 0
1 0
0

6 0
5 0 Bilbao
4 0
3 0
2 0
1 0

Gr/ m3 Marzo Abril Mayo Junio Julio Agos. Sept. Oct. Nov .

Fig. 7. Polinización de las Quenopodiáceas en varias ciudades

Fig. 5. Polen de Quenopodiáceas al microscopio óptico y electrónico. (medias de 10 días). Periodo 1995-2002.

41
J. Pola Pola

Un aspecto a destacar de estas plantas y sobre todo Tabla II. Test cutáneos y recuentos de quenopodiáceas media
de la Salsola kali es su gran resistencia a la sequía. De he- 1995-2002. Estudio multicéntrico 2002
cho en España hay 2 zonas donde esta planta es predomi-
% Pólenes PCP* Total granos
nante: Valle del Ebro y el área de confluencia entre Alme-
Elche 18,7% 54% 3.235
ria, Albacete y Murcia. Estas son áreas semidesérticas con Toledo 5,8% 49% 1.783
una pluviosidad de alrededor de 300 litros anuales. Zaragoza 5,4% 42% 1.411
Debido a esta gran resistencia, las diferencias objeti- Ciudad Real 5,8% 43% 884
vadas en los contajes de pólenes en un año lluvioso res- Sevilla 2,9% 21% 598
Madrid 1,8% 35% 470
pecto a otro seco no superan el 30%.
Barcelona 1,2% 12% 589
En Kuwait, país desértico con un índice de pluviosi-
Badajoz 1% 34% 209
dad menor de 150 litros al año y una temperatura media Media 5,32% 36,25% 1.117
durante el verano de 42ºC , el polen de Quenopodiáceas es Correlación significativa entre los recuentos totales y la prevalencia de PCP (Spearman rs:
uno de los aeroalergenos más relevantes14. 0,81, P<0,05). *PCP: Prueba Cutánea Positiva.

Dres. Carnés y Fdez-Caldas18 aislaron el alergeno predomi-

COMPONENTES ALERGÉNICOS nante de Salsola Kali: Sal k 1 (inscrito con ese nombre en
el banco de alergenos), proteína de 43 kDa con al menos 6
La experiencia clínica y la positividad que objetiva-
isoformas sin aparente homología con otras proteínas des-
mos en las pruebas cutáneas nos hacen pensar en la exis-
critas.
tencia de una reactividad cruzada importante entre, al me-
En relación al polen de Chenopodium, el grupo de la
nos, las 2 especies más relevantes: Chenopodium album y
Dra. Rodríguez del departamento de Bioquímica y Biolo-
Salsola kali.
gía Molecular de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Entre pacientes monosensibilizados a polen de Que-
Universidad Complutense, aisló en 200118 el Che a 1 (antí-
nopodiáceas se objetivó una concordancia entre ambas es-
geno relevante de Chenopodium album), glicoproteína de
pecies del 96,4% en test cutáneos y del 75% en RAST15.
18,8 kDa y 143 residuos aminoácidos, cuya secuencia
Otros estudios nos confirman dicha reactividad cru-
muestra una identidad del 27-45% con Ole e 1. A pesar de
zada en test cutáneos que oscila entre del 70-90%, que se
ello encuentran escasa reactividad cruzada in vitro entre
hace extensiva a las Amarantáceas5, 12, 13, 16.
los mismos, probablemente debido a diferencias significa-
La Dra. De La Hoz.15, tras la separación de los com-
tivas en la secuencia polipeptídica.
ponentes proteicos de un extracto de Salsola kali identifi-
có 28 bandas diferentes de polipéptidos con un peso mole-
cular entre 13 y 106 kDa. A pesar de que el patrón de
ASPECTOS CLÍNICOS
reconocimiento para IgE es muy heterogéneo, un 64% de
los pacientes fijaron IgE específica frente a una banda de
Los pólenes de Quenopodiáceas, y a pesar de las re-
54 kDa y un 44% frente a otra de 36,6 Kd.
lativamente pequeñas cantidades recogidas en los estudios
Lombardero16, encuentra bandas que fijan IgE específi-
aerobiológicos, son la primera causa de sensibilización a
ca entre 14 Kd y 35 kDa. No obstante los patrones de las di-
polen en ciudades como Elche, la tercera en Zaragoza, To-
ferentes Quenopodiáceas son diferentes, sugiriendo que los
determinantes alergénicos comunes están presentes en ban-
das proteicas con diferente peso molecular o punto isoeléc- Tabla III. Perfil clínico de los pacientes sensibilizados a
trico. Quenopodiáceas
En 1981, Shafiee y cols17 aislaron en el polen de Sal-
Quenopodiáceas Gramíneas
sola Kali 2 glicoproteínas (RT1y RT2) de 39 kDa y 42
Sexo V 42% H 58% V 54% H 46%
kDa, respectivamente. Cada uno de los mismos posee una Edad media 29 años 24 años
única cadena polipeptídica, concluyendo después de múlti- Monosensibilizados 2% 24%
ples estudios inmunológicos que ambas proteínas tienen la Rinitis 98% 99%
misma masa y potencia alergénica, en definitiva, que am- Asma 19% 25%

bas son inmunológicamente idénticas. Posteriormente los Nº total de pacientes: Quenopodiáceas 1212. Gramíneas 3996.

42

ledo, Jaén, Bilbao y Ciudad Real y la cuarta en Badajoz,
Burgos, y Sevilla según el último estudio multicéntrico
llevado a cabo en 2002-2003 por el Comité de Aerobiolo-
gía de la SEAIC (pendiente de ser publicado).
Si nos fijamos en que tan sólo aportan alrededor del
5% del total de pólenes recogidos y que la media de los
"picos" es de alrededor de 50 granos/m3 podemos suponer
que son pólenes bastante "agresivos".
Los resultados preliminares del estudio de umbrales
de reactividad que estamos llevando a cabo dentro del Co-
mité de Aerobiología nos hacen sospechar que los pacien-
tes alérgicos a polen de Quenopodiáceas se reactivan a
partir de 10-15 granos/m3.
En la mayoría de las regiones, la época de poliniza-
ción de dichas plantas no coincide con la de ninguna otra,
pudiendo distinguirse perfectamente la sintomatología atri-
buible a dichos pólenes.
En la Tabla II se muestran los resultados del estudio
multicéntrico, llevado a cabo por el comité de aerobiolo-
gía, en relación al porcentaje de pacientes polínicos sensi-
bilizados a Quenopodiáceas y su correlación con la canti-
dad de pólenes obtenidos en cada una de las ciudades.
El perfil clínico de nuestros pacientes sensibilizados
frente a Quenopodiáceas (Policlínica Sagasta-Zaragoza)
difiere ligeramente de los alérgicos a pólenes de Gramí-
neas como muestra la Tabla III.
INMUNOTERAPIA
El primer trabajo realizado sobre inmunoterapia con
pólenes de Quenopodiáceas se lo debemos a la Dra. Belen
De La Hoz.
Utilizó inmunoterapia en un grupo de 25 pacientes
monosensibilizados (15 pacientes grupo activo y 10 pa-
cientes grupo control) con un extracto estandarizado bioló-
gicamente (dosis máxima 3 HEP) de Salsola kali.
Fundamentalmente concluye que la inmunoterapia
con Salsola Kali:
• Tiene eficacia clínica en el tratamiento de la rino-
conjuntivitis.
• Disminuye la sensibilización cutánea, conjuntival y
nasal frente a dichos pólenes, con diferencias estadística-
mente significativas frente al grupo placebo.
• Tiene un efecto protector del incremento postesta-
cional de la HBI.
• Produce cambios cualitativos en la respuesta de an-
ticuerpos específicos IgE e IgG.
Alergia a pólenes de Quenopodiáceas
• Disminuye de forma significativa la sensibilidad
cutánea frente al polen de Chenopodium album.
Posteriormente en 2000-2001 se realizó un nuevo es-
tudio con 44 pacientes en HCU de Zaragoza20 con un ex-
tracto de polen de Salsola kali (Alergoide despigmentado,
polimerizado y absorbido en hidróxido de aluminio), com-
parado con placebo, en pacientes monosensibilizados du-
rante 1 año. En dicho trabajo también se demuestra una
reducción significativa de los síntomas de rinoconjuntivitis
y asma respecto a placebo, una reducción significativa de
días con síntomas intensos, un aumento de los días libres
de síntomas y una mejoría en los cuestionarios de calidad
de vida en rinoconjuntivitis.
CONCLUSIONES
• La polinización máxima de las Quenopodiáceas
se extiende por toda la primavera y verano. El pico se
sitúa durante la segunda quincena de agosto y la primera
de septiembre con una media de alrededor de 50 gra-
nos/m3.
• Las Quenopodiáceas son plantas muy resistentes a
la sequía y pueden aportar a la atmósfera cantidades relati-
vamente importantes de pólenes en los años secos.
• Los pólenes de Quenopodiaceas son bastante "agre-
sivos" ya que con tan sólo un 5% de presencia atmosférica
generan sensibilización en el 30-40% de los polínicos con
un umbral de reactividad en torno a 10-15 granos/m3.
• Se objetiva una correlación significativa entre los
recuentos de Quenopodiáceas y la prevalencia de pruebas
cutáneas positivas.
• Los pacientes con alergia a Quenopodiáceas suelen
ser polisensibilizados, y en comparación con los alérgicos
a gramíneas, predomina el sexo femenino, la edad media
es más alta y tienen un porcentaje menor de asma.
• Existe una muy importante reactividad cruzada (in
vivo e in vitro) entre los pólenes de las Quenopodiáceas-
Amarantáceas. Los alergenos más importantes son Sal k 1
para Salsola kali de 43 kDa y Che a 1 para Chenopodium
album de 18,8 kDa.
• En los estudios existentes controlados con placebo
y realizados en pacientes monosensibilizados, la inmuno-
terapia con un extracto de Salsola kali se mostró eficaz en
la mayoría de los parámetros estudiados.
• A la vista de todo esto, podemos concluir que los
pólenes de Quenopodiáceas constituyen una fuente alergé-
nica muy a tener en cuenta en la península ibérica.
43
J. Pola Pola

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