El rendimiento analítico y clínico del recientemente desarrollado inmunoensayo

para detectar la inmunoglobulina estimulante de la tiroides, el ensayo Immulite TSI

RESUMEN
La enfermedad de Graves (GD) es causada por autoanticuerpos contra el receptor de
tirotropina (TRAb), y entre los tres tipos de TRAbs, sólo el tipo de estimulación (TSI) se
sabe que está asociado con GD. En este evaluamos el rendimiento analítico de una
nueva IET quimioluminiscente totalmente automatizada inmunoanálisis, a saber, el
ensayo Immulite TSI, y comparó la eficacia diagnóstica del ensayo con el ensayo del
receptor de Elecsys Anti-TSH (TSHR). La precisión fue evaluada usando dos niveles de
control de calidad reactivos, y se evaluó la linealidad a través del rango de medición
analítica esperado (0,18-37,35 UI/L) en cinco niveles utilizando muestras clínicas. Una
evaluación comparativa entre los dos ensayos se realizó utilizando 187 muestras clínicas,
y la concordancia de los resultados cualitativos fue también evaluados. La repetibilidad y
la total imprecisión (% de coeficiente de variación) del ensayo Immulite TSI fueron 3,19%
y 3,46% a 0,93 UI/L, y 3,76% y 5,42% a 19,3 UI/L, respectivamente. La linealidad de este
El ensayo varió de 0.16 a 6.17 UI/L. Se observó un alto grado de correlación entre los
análisis cuantitativos de cada ensayo (coeficiente de correlación ¼ 0,819). El acuerdo
moderado entre los métodos fue observado con un acuerdo cualitativo global del 93,0%.
Entre los 13 casos con acuerdo cualitativo discordante resultados, el ensayo Immulite TSI
generó resultados más favorables consistentes con los diagnósticos clínicos de que el
ensayo Elecsys Anti-TSHR. El ensayo Immulite TSI mostró un rendimiento analítico fiable
y una buena correlación con el ensayo Elecsys Anti-TSHR y esperamos que este método
sea útil para que los médicos evalúen a los pacientes con hipertiroidismo.
Introducción
La enfermedad de Graves (GD) es una enfermedad tiroidea autoinmune y es un trastorno
sistémico que suele afectar a los ojos (Graves oftalmológica), la piel (dermopatía de
Graves), los huesos y corazón [1]. La patogénesis de GD está asociada con el anticuerpo
receptor de tirotropina (TRAb), que se une a un epítopo conformacional en el dominio
extracelular del receptor de tirotropina [2]. De acuerdo con estudios previos, El TRAb se
detecta en la mayoría de los pacientes con GD [3] y se considera un importante marcador
diagnóstico y pronóstico para GD
Los TRAbs se clasifican en tres tipos según sus características funcionales de la siguiente
manera: (1) TRAbs neutro, (2) bloqueando los TRAbs, y (3) estimulando los TRAbs [2,6].
Entre ellos, sólo estimulando TRAbs, es decir, estimulando la tiroides inmunoglobulina
(TSI), se sabe que es responsable de la inducción de una actividad de señalización
continua de la tiroides glándula; por lo tanto, la detección específica de TSI de otros tipos
de autoanticuerpos es importante para el diagnóstico preciso de la enfermedad de Gong.
Los métodos comunes para la detección de TRAb se basan en bioensayos o
inmunoensayos. El bioensayo mide un aumento de la producción de AMP cíclica en un
sistema celular; por lo tanto, este método podría medir específicamente las cantidades de
TSI. Aunque los bioensayos pueden distinguir tipos de autoanticuerpos basados en su
función, estos ensayos están restringidos a laboratorios limitados debido a las medidas
que requieren mucho tiempo y a larequisito de las de cultivo de tejidos [6-8]. En cambio,
inmunoensayos, que se basan en anticuerpos monoclonales para medir la unión de los
autoanticuerpos, son más ampliamente utilizado en los laboratorios clínicos debido a su
alta sensibilidad, pero han un inconveniente en el sentido de que no pueden diferenciar
los tipos de TRAb [9]. Entre los recientes inmunoensayos, un nuevo ensayo se introdujo
que puede medir directamente el TSI con un inmunoensayo no competitivo en formato de
sándwich [10]. Sin embargo, el rendimiento de este reactivo recientemente desarrollado
ha sido raramente evaluada, y la utilidad clínica para el diagnóstico La GD también ha
sido raramente estudiada hasta ahora.
Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar el rendimiento analítico del nuevo
inmunoensayo quimioluminiscente específico de la IET y evaluar la eficacia
diagnóstica de este nuevo ensayo, el ensayo Immulite TSI (Siemens Healthcare,
Llanberis, Reino Unido), comparado con el de TRAb en muestras de pacientes.
Materiales y métodos
Visión general del inmunoensayo TSI
El ensayo Immulite TSI es un inmunoensayo de dos ciclos totalmente automatizado que
utiliza un par de receptores de hormonas recombinantes estimulantes de la tiroides
humana que forman un nuevo formato de puente de anticuerpos para detectar
selectivamente el TSI. Este ensayo emplea un conjunto de receptores de captura y
señales. En el primer ciclo, 50 lL de suero o plasma de un paciente se incuban con una
fase sólida (perla de poliestireno) durante 30 min, dejando que un brazo del TSI del
paciente se una a la captura receptor. Luego, los lavados centrífugos eliminan la muestra
residual. En el segundo ciclo, el receptor de señal se añade al tubo e incubado durante 30
minutos, lo que lleva a la unión con el segundo brazo de TSI, formando un puente.
Después de lavar, un se añade un sustrato quimioluminiscente y se genera una señal
mediante una reacción con la fosfatasa alcalina secretora, que está unido al receptor de la
señal. Esta señal quimioluminiscente refleja la cantidad de analito y la cantidad de TSI. El
valor de corte sugerido por el fabricante es 0,55 UI/L.
Se evaluaron la repetibilidad y la imprecisión dentro del laboratorio de acuerdo con la guía
EP15-A3 del Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI) [11]. Se realizaron un total de
25 réplicas en 5 días usando dos niveles de reactivos de control de calidad [Controles de
ensayo de Immulite TSI (L2SIC1, L2SIC2); Siemens Healthcare, Llanberis, Reino Unido].
Linealidad y arrastre
La linealidad del ensayo Immulite TSI se evaluó a través de dos rangos diferentes (rango
A, 0,18-37,35 UI/L; rango B, 0,16-6,17 UI/L) en cinco niveles igualmente espaciados
utilizando una mezcla de una muestra clínica de bajo nivel y otra de alto nivel en cada
rango según el CLSI EP6-A [12]. Se probaron más de dos réplicas en cada nivel. La
linealidad estadística se estableció cuando ninguno de los términos no lineales en Los
modelos polinómicos de segundo y tercer orden fue estadísticamente significativo.
Para cualquier muestra que se determine que es estadísticamente no lineal, la cantidad
de no linealidad debe ser menor que el objetivo sugerido por el fabricante (15% o 0,5 UI/L,
el que sea mayor) para ser considerada nominalmente lineal. El remanente se evaluó
utilizando muestras clínicas con un valor alto (38,70 UI/L) y un valor bajo (0,18 UI/L). Tras
cuatro mediciones consecutivas de la muestra de alta concentración (H1, H2, H3 y H4) y
las de la muestra de baja concentración (L1, L2, L3 y L4), el porcentaje de arrastre se
calculó con la ecuación descrita anteriormente con algunas modificaciones como sigue
%Carryover ¼ L1 L3þL4 2 ð Þ H3þH2 ðL3þL4Þ 2 100
El rango aceptable para el % de transferencia se determinó como inferior al 1%.
Comparación
En total, 187 sueros de pacientes del servicio de endocrinología de un hospital
universitario que fueron sometidos a un TRAb con una sospecha de enfermedad de la
tiroides a partir de junio 2016 a abril de 2017 fueron analizadas. Los valores obtenidos por
el ensayo de Immulite TSI se comparó con los obtenidos por el ensayo del receptor de
Elecsys Anti-TSH (Anti-TSHR) (Roche,
Diagnostics, Mannheim, Alemania) con un Cobas 8000 e602 (Roche Diagnostics,
Mannheim, Alemania) según el CLSI EP9-A3 [15]. Los resultados cualitativos de dos
métodos determinados por el corte clínico de cada ensayo y el acuerdo porcentual
general se calcularon según el CLSI EP12-A2 [16]. Para los discordantes casos, los
registros médicos, incluyendo las condiciones demográficas, los hallazgos de laboratorio y
los resultados del ultrasonido de la tiroides, fueron revisados. Los diagnósticos clínicos de
los pacientes se determinaron de acuerdo con las directrices de diagnóstico de la La
Asociación Americana de Endocrinólogos Clínicos y Asociación Coreana de Tiroides y se
utilizaron para determinar cuál de los dos resultados fue favorable. La necesidad de
consentimiento informado de los participantes para la utilización de los residuos muestras
y la revisión de los registros médicos fue renunciado por la junta de revisión institucional.
Análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron utilizando Analyse-it (versión 5.11, Analyse-it
Software, Leeds, Reino Unido) y el software MedCalc (versión 18.2.1, MedCalc Software,
Mariakerke, Bélgica). Se calculó el coeficiente de variación (CV) y se comparó la
repetibilidad y la imprecisión dentro del laboratorio del ensayo con el CV propuesto por el
fabricante para la evaluación de la precisión. La linealidad fue evaluada por la ecuación de
regresión y el % de no linealidad. Para la comparación, los resultados del ensayo TRAb y
el ensayo Immulite TSI se evaluaron mediante la regresión de Passing Bablock. Además,
los valores kappa (j) se calcularon con los resultados cualitativos de ambos ensayos y se
interpretaron de la siguiente manera: j < 0,40 como justo, 0,40 a 0,60 como moderado,
0,60 a 0,80 como sustancial, y >0,80 como acuerdo casi perfecto [17]. Todos los
resultados de los análisis estadísticos se consideraron significativos cuando los valores de
p fueron <.05.
Linealidad y arrastre
En la evaluación de la linealidad, una curva de regresión de mejor ajuste de los valores
medidos por el ensayo Immulite TSI a través del rango A (0,18-37,35 UI/L) era parabólico
y mostraba una falta de linealidad en el extremo inferior de la gama, que excedía un
relativo no linealidad del 15% y una diferencia absoluta de 2,01 IU/L de acuerdo con la
recomendación del fabricante. La gama que exhibe no linealidad fue evaluada
adicionalmente para el Rango B (0,16-6,17 IU/L), y la curva de regresión mejor ajustada
era lineal (Figura 2). En el análisis de arrastre, los valores de cuatro Las mediciones de
las muestras de bajo y alto nivel fueron 0,2 ± 0,02 y 37,9 ± 1,11 IU/L (media ± desviación
estándar). De acuerdo con la ecuación descrita anteriormente, el porcentaje de remanente
fue del 0,02%, que fue inferior al 1%.
Comparación
De las 187 muestras clínicas probadas en este estudio, 26 muestras que exhibían valores
por encima del rango de medición analítica del ensayo Immulite TSI o del ensayo Elecsys
AntiTSHR fueron excluidas de la comparación cuantitativa evaluada por un análisis de
regresión Passing-Bablok (Figura 3). Se observó un alto grado de correlación entre los
resultados de dos ensayos con una pendiente de 0,937 y una intercepción de -1,19 IU/L
(los coeficientes de correlación de Pearson (r)¼0.819, p< .05).
En la comparación cualitativa, el 90,4% (169/187) de los casos mostraron resultados
positivos en el ensayo de la Inmulite TSI, y El 94,1% (n ¼ 176) mostró resultados
positivos en el ensayo Elecsys AntiTSHR (Tabla 1). Los resultados del ensayo Immulite
TSI mostraron un acuerdo moderado con los del ensayo AntiTSHR de Elecsys (j ¼ 0.52),
y el acuerdo general entre los dos ensayos fue del 93,0% (Tabla 1, n ¼ 174; 8 por
negativo y 166 para los resultados positivos). Entre las 176 muestras que fueron
identificados como positivos por el Elecsys Anti-TSHR 166 dieron positivo en el ensayo
Immulite TSI (10 resultados discordantes). Además, 8 de las 11 muestras resultaron tan
negativas por el ensayo Elecsys Anti-TSHR fueron
también negativo por el ensayo Immulite TSI (3 resultados discordantes). Se investigaron
los registros médicos de 13 pacientes que mostraban una discrepancia entre los dos
ensayos para determinar el diagnóstico clínico. Entre tres muestras con valores positivos
de TSI y valores negativos de Anti-TSHR, se recogieron dos muestras (Paciente 79 y
Paciente 173) de los pacientes con GD durante la medicación con metimazol, lo que
favorece los resultados del ensayo TSI. El caso restante (Paciente 54) no fue concluyente
debido a la falta de disponibilidad de pruebas de laboratorio y clínicas
información. Entre las 10 muestras con valores negativos de TSI y valores positivos de
Anti-TSHR, se recogieron tres muestras (Paciente 39, Paciente 50 y Paciente 192) de
pacientes diagnosticados con nódulos tiroideos benignos que presentaban niveles
normales de T4 libre, y tres muestras (Paciente 10, Paciente 41 y Paciente 185) de
pacientes con tiroiditis de Hashimoto.
Dos muestras (Paciente 167 y Paciente 188) se recogieron de pacientes con tirotoxicosis
transitoria de la gestación (GTT) y las dos muestras restantes se recogieron de pacientes
con GD (Paciente 101 y Paciente 192). En total, 10 de los 13 casos favorecieron los
resultados obtenidos por el ensayo de Inmulite TSI, y dos casos favorecieron los
obtenidos por Anti-TSHR según los diagnósticos clínicos
Discusión
El GD es la causa más común de hipertiroidismo, y el El riesgo de padecer enfermedades
de transmisión sexual a lo largo de la vida es de aproximadamente el 3% para las mujeres
y 0,5% para los hombres [18]. El diagnóstico de GD se basa generalmente en
características clínicas del hipertiroidismo, incluyendo palpitaciones y la intolerancia al
calor con características específicas de GD, como orbitopatía y acropacía tiroidea [19].
Considerando la patogénesis de la GD, las pruebas para la detección del TRAb podrían
ser un instrumento útil y debe considerarse que está incluido en los criterios de
diagnóstico junto con la tiroxina (T4), la triyodotironina (T3) y la TSH. Sin embargo, las
pruebas para el TRAb en el diagnóstico inicial son todavía controvertidas, probablemente
debido al costo
efectividad y la baja sensibilidad clínica de los antiguos inmunoensayos [9,19]. Desde
principios del decenio de 2000 se han introducido inmunoensayos de tercera generación
para medir el TRAb, que han demostrado una mejora de la sensibilidad y la especificidad
clínicas hasta el 97,4% y el 99,2%, respectivamente [20]. En algunos estudios se ha
informado de que el TRAb podría aplicarse a los campos clínicos como instrumento de
detección para el diagnóstico de la enfermedad de Glaucoma (GD) [9,20-22]; sin
embargo, la medición del TRAb se sigue recomendando únicamente para evaluar la
respuesta al tratamiento de los pacientes con GD, no para su diagnóstico inicial
En este estudio, evaluamos el rendimiento analítico de un nuevo inmunoensayo para la
detección específica de TSI, a saber, el ensayo Immulite TSI. La precisión, el arrastre y
la linealidad de este ensayo se evaluaron de acuerdo con las directrices del CLSI, y los
resultados obtenidos por el ensayo Immulite TSI se compararon con los obtenidos por el
ensayo Elecsys Anti-TSHR.
El ensayo de Immulite TSI mostró un buen rendimiento con un % de precisión del 5,42%,
que es menos que el estudio anterior [22]. La tasa de arrastre de este ensayo fue también
fiable, exhibiendo menos del 1%. En la evaluación de la linealidad, la linealidad del rango
de medición analítica sugerido por el fabricante (0,10-40 UI/L) no fue validado, y se
observó que una curva cuadrática era el mejor ajuste con un alto % de no linealidad en el
extremo inferior del rango de validación. Se ha informado de una observación similar en
un estudio anterior, que mostró una respuesta no lineal como La concentración de
analitos se incrementó [24]. Debido a la importancia de la naturaleza semicuantitativa de
este ensayo, una mayor validación de la linealidad con el rango cercano al límite (0,55
UI/L), y se validó la linealidad cubriendo el rango de 0,16-6,17 UI/L.
Hubo un alto grado de correlación (r ¼ 0,819) entre los valores cuantitativos de TRAb y
TSI de dos ensayos con una pendiente de 0,937. La pendiente fue ligeramente inferior a
1, lo que parece razonable teniendo en cuenta el principio de estos dos ensayos, es decir,
el ensayo Elecsys Anti-TSHR para todos los tipos de TRAb, y el ensayo Immulite TSI para
el único tipo de anticuerpo estimulante.
Al comparar los resultados cualitativos entre los dos ensayos, la concordancia fue
excelente, con una tasa de concordancia general del 93,0% con sólo 13 resultados
discordantes. Tozzoli y otros informaron de la posibilidad de resultados falsos positivos de
TRAb por los inmunoensayos existentes en pacientes con tiroiditis de Hashimoto [10]
Alrededor del 20% de los pacientes con tiroiditis de Hashimoto son positivos para el
bloqueo de TRAbs y los inmunoensayos de segunda y tercera generación, incluido el
ensayo Elecsys Anti-TSHR, podrían mostrar resultados positivos debido a su incapacidad
para diferenciar las TSI de los otros dos tipos de TRAbs. Tres pacientes con tiroiditis de
Hashimoto en nuestro estudio (Paciente 10, Paciente 41, y Paciente 185) fueron
negativos por el Inmulite Ensayo de TSI. Los resultados muestran que el ensayo TSI de
Immulite es más específico que el método de prueba existente, es decir, Elecsys La
prueba anti-TSCR, al distinguir GD de Hashimoto la tiroiditis, como se ha informado en
estudios anteriores

Se recogieron dos muestras (Paciente 167 y Paciente 188) de una mujer embarazada
para el diagnóstico diferencial entre la tirotoxicosis transitoria gestacional (GTT) y la GD.
Ambos mostraron elevados niveles de T4 libre junto con una disminución de los niveles de
TSH, pero no se observó la oftalmopatía típica, y los hallazgos anormales de laboratorio
se normalizaron sin medicación después del parto, lo que favoreció el diagnóstico de GTT
La elevación de TRAb en estos dos pacientes podría deberse a la existencia de TRAbs
neutralizantes o bloqueantes; por lo tanto, el ensayo Immulite TSI puede ser más útil para
diagnosticar el hipertiroidismo en el embarazo que el ensayo Anti-TSHR. Las dos
muestras se recogieron de pacientes con GD (Paciente 101 y Paciente 192) lo que
favoreció los resultados del Ensayo Elecsys Anti-TSHR. Sin embargo, el valor de TSI del
Paciente 101 y del Paciente 192 fue 0,509 y 0,546 UI/L, que estaban justo por debajo del
diagnóstico valor de corte (0,55 UI/L). En general, de acuerdo con la clínica diagnóstico, el
ensayo Immulite TSI exhibe una mayor sensibilidad que el ensayo Elecsys Anti-TSHR
Una de las limitaciones de este estudio es que las muestras se recogieron de pacientes
con sospecha de enfermedad de la tiroides; y la mayoría de las muestras mostraron
resultados positivos en ambos ensayos, y el número de muestras que mostraron
resultados negativos tanto para el ensayo Immulite TSI como para el ensayo Elecsys Anti-
TSHR fue relativamente pequeño, lo que hizo difícil confirmar la concordancia negativa
entre ambos ensayos. El pequeño número de casos discrepantes fue otra limitación en
este estudio. Más información en se requieren investigaciones para explorar la utilidad de
la Ensayo de Inmulitis TSI en una gran población.
Conclusión
En conclusión, el ensayo Immulite TSI mostró un rendimiento analítico fiable y una buena
correlación con el ensayo Elecsys Anti-TSHR. Al utilizar este nuevo método
semicuantitativo para la detección específica del tipo estimulante de TRAb, esperamos
que este método sea útil para que los clínicos evalúen a los pacientes con hipertiroidismo.