Objetivos

 Aplicar pruebas cualitativas generales y específicas que permitan reconocer grupos

químicos de los aminoácidos y proteínas.

 Someter soluciones de proteínas a desnaturalización con agentes físicos y químicos.

 Prueba Cualitativas Proteinas

Un aminoácido es una molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-
COOH).1 Los aminoácidos más frecuentes y de mayor interés son aquellos que forman parte de
las proteínas. Dos aminoácidos se combinan en una reacción de condensación entre el grupo
amino de uno y el carboxilo del otro, liberándose una molécula de agua y formando un enlace
amida que se denomina enlace peptídico; estos dos "residuos" de aminoácido forman un dipéptido.
Si se une un tercer aminoácido se forma un tripéptido y así, sucesivamente, hasta formar un
polipéptido. Esta reacción tiene lugar de manera natural dentro de las células, en los ribosomas.

Todos los aminoácidos componentes de las proteínas son L-alfa-aminoácidos. Esto significa que el
grupo amino está unido al carbono contiguo al grupo carboxilo (carbono alfa) o, dicho de otro
modo, que tanto el carboxilo como el amino están unidos al mismo carbono; además, a este
carbono alfa se unen un hidrógeno y una cadena (habitualmente denominada cadena lateral o
radical R) de estructura variable, que determina la identidad y las propiedades de cada uno de los
diferentes aminoácidos. Existen cientos de radicales por lo que se conocen cientos de aminoácidos
diferentes, pero sólo 22 (los dos últimos fueron descubiertos en los años 1986 -selenocisteína- y
2002 -pirrolisina-)2 forman parte de las proteínas y tienen codones específicos en el código
genético.

La unión de varios aminoácidos da lugar a cadenas llamadas péptidos o polipéptidos, que se

denominan proteínas cuando la cadena polipeptídica supera una cierta longitud (entre 50 y 100
residuos aminoácidos, dependiendo de los autores) o la masa molecular total supera las 5000 uma
y, especialmente, cuando tienen una estructura tridimensional estable definida.

Las funciones de las proteínas son específicas de cada tipo de proteína y permiten que las células
defender de agentes externos, mantener su integridad, controlar y regular funciones, reparar
daños... Todos los tipos de proteínas realizan su función de la misma forma: Por unión selectiva a
moléculas.
 Materiales Y reactivos

Materiales
 4 vasos químicos de 100 mL
 10 tubos de ensayo
 1 probeta de 10 mL
 1 probeta de 50 mL
 1 probeta de 250 mL
 1 vaso químico de 1000mL
 Plancha calentadora
 3 vasos químicos de 75 cc
 1 vidrio reloj
 1 espátula
 Mortero
 Pistillo
 1 pinza
 Goteros
 2 vasos químicos de 250mL
 2 vasos químicos de 600mL
 Placa cromatografía capa fina

Reactivos

Reactivo Masa Molar Densidad Punto de Punto de Solubilidad

Fusión Ebullición
Ninhindrina 178.15 g/mol. 0,862g/cm3 250 °C 250-258 °C. en agua
20 g/l
a 20 °C
Acetato de 325,29 g/mol 3,25 g/cm³ 280 °C 100°C en agua, g/100 ml a 20°C
plomo
Hidróxido de 39,997 g/mol 2,13 g/cm³ 318 °C 1.388 °C en agua 111g/100 mL (20
sodio °C) / 13.89 g/100 mL
(alcohol etílico a 20 °C)
Ácido 36,46094 g/mol 1,19 g/cm³ -26 °C 48 °C en agua 20 ºC
 clorhídrico Soluble en alcohol, ét
er, acetona, ácido acético y
cloroformo.
Acido pícrico 229,1 g/mol 1,76 g/cm³ 122 °C 300 °C Muy poco soluble en agua
fría, sin embargo es más
soluble en agua hirviendo y
ligeramente soluble en
etanol y benceno.
Tirosina 181,19 g/mol 1,46 g/cm³ 342 –344ºC 297-298 °C Soluble en agua y
ligeramente soluble en
alcohol. También
conocemos su insolubilidad
en éter.
Triptofano 204,225 g/mol 1.34 g/cm3 228 °C -273,15 °C en agua
1,136 g/100 g de agua
Fenilalanina 165,19 g/mol 1,29 g/cm³ 283 °C -273,15 °C Agua: Soluble;
Etanol: Ligeramente
soluble;
Cloroformo:
Ligeramente soluble;
É ter: Ligeramente soluble
Leucina 131,17 g/mol 1,29 g/cm³ 293 °C indeterminado En agua 23 g/l
Biuret 103.08 g/mol 1.333g/cm3 188-192℃ 100°C. en agua 2 g/100 mL (25℃)
Hipoclorito 74,44 g/mol 1,11 g/cm³ 18 °C 101 °C en agua 29.3 g/100mL
de sodio
Alfa- naftol 144,17 g/mol 1,1 g/cm³ 96°C. 288 °C Insoluble en agua.
Ácido nítrico 63,01 g/mol 1,51 g/cm³ -42 °C 83 °C Completamente miscible
en agua.
Ácido 98,079 g/mol 1,84 g/cm³ 10 °C 337 °C Soluble en agua, pero
sulfúrico reacciona violentamente al
mezclarse con ella,
generando calor. Con otros
solventes no hay mezcla:
no hay reacción.
Ácido acético 60,05 g/mol 1,05 g/cm³ 17 °C 118 °C en agua:
g/100 ml a 20°C
Butanol 74,121 g/mol 0,81 g/cm3 -89 °C 117,7 °C Soluble en una proporción
de 79 g por litro.
Carbonato de 105,9888 g/mol 2,54 g/cm³ 851 °C 1.600 °C en agua 30.7 g por
sodio cada 100 g de agua (25 °C)
 Anexos

Prueba de la Ninhindrina La Ninhindrina reacciona específicamente con el grupo

de a-amino de los aminoácidos, ya sean libres o bien unidos mediante enlaces
peptídicos.

La Ninhindrina a pH entre 4 y 8 es un oxidante muy fuerte y siempre reacciona con

los grupos de a-amino libreando amonio, el cual se condensa con la Ninhindrina
reducida y con otra molécula de Ninhindrina formando un compuesto coloreado
que varía de azul a violeta púrpura.

Prueba de desnaturalización Una proteína desnaturalizada cuenta únicamente

con su estructura primaria. Por este motivo, en muchos casos, la desnaturalización
es reversible ya que es la estructura primaria la que contiene la información
necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de estructuración.

Prueba de metales pesados Los cationes de metales pesados y los aniones de

elevado peso molecular son muy usados en la separación de proteínas y en la
preparación de filtrados libres de proteínas. A pH neutro por lo general las
proteínas tienen carga neta negativa y se combinan fácilmente con iones de
metales pesados que, al neutralizar la carga producen la precipitación. A pH por
debajo del punto isoeléctrico en cambio, se combinan con aniones porque
presentan carga neta positiva. Soluciones concentradas de sales, de sulfato de
amonio,

Prueba Xantoproteica Es debida a la formación de un compuesto aromático

nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteinas con
aminoácidos portadores de grupos bencénicos, especialmente en presencia de
tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira a un color
anaranjado oscuro.

Prueba de Biuret aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y

otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de
composición desconocida .Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato
cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El
reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa
cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no
participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que
tenga lugar.

Prueba de Millón El reactivo de Millón se prepara disolviendo una parte de

mercurio (Hg) en una parte de ácido nítrico (HNO3). De esta forma, la presencia de
cantidades relativamente altas de mercurio conduce a la formación de Nitrato de
mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en un medio fuertemente ácido reacciona con el
grupo -OH de la tirosina produciendo una coloración roja característica.

Al finalizar la reacción, durante la cual se desprende gran cantidad de óxidos de

nitrógeno, el reactivo se puede diluir con dos veces su volumen en agua y deberá
ser decantada algunas horas después la solución clara sobrenadante.