COLECCIÓN, EVALUACIÓN Y CRIOPRECERVACION DEL SEMEN

COLECCIÓN DEL SEMEN

Vagina artificial
Para realizar la colecta en vagina artificial, previamente se debe hacer la higienización del toro en
un brete, utilizando agua destilada y papel toalla, el manipulador se colocará guantes de látex y
procederá a hacer un lavado prolijo y recortar los pelos del prepucio para evitar la contaminación,
luego se secará con papel toalla.
La preparación de la vagina artificial se realizará en lugar aséptico, donde todos los materiales
estarán esterilizados en una estufa a una temperatura de 35 a 37°C, 24 horas antes de la colección.
A continuación se armará la vagina comenzando por introducir la funda recta de látex dentro del
cuerpo rígido, luego se doblará los extremos de la funda y se sujetara con ligas, la funda cónica se
colocará y se sujetará en el extremo opuesto al sifón o válvula y en el extremo agudo de la funda
cónica se colocará el tubo colector graduado, también asegurándolo y cubriéndolo con un cobertor,
posteriormente se procede a colocar el embudo de vidrio en la entrada de agua tibia y se colocara
agua caliente de tal forma que ocupe 1/3 de la vagina artificial, además se insuflará aire para darle
una presión adecuada. Por lo tanto, la temperatura de la vagina artificial deberá estar entre 42 a
45°C, con una presión adecuada y lubricar la entrada con el diluyente preparado.
Evaluación macroscópica del semen
Volumen: Si se usó la vagina artificial, se mide directamente en la graduación en ml del tubo de
centrífuga o recipiente colector. Durante la eyaculación, el contenido del epidídimo y el plasma
seminal pasan por la uretra y a través de movimientos persitálticos para ser liberados, para
determinar el volumen de eyaculado, el gr y el ml son equivalentes.

Evaluación microscópica

La motilidad es uno de los parámetros más importantes del análisis seminal. Hasta hace pocos
años el estudio de la motilidad espermática se hacía exclusivamente mediante métodos
semicuantitativos.
Motilidad individual La motilidad individual subjetiva de los espermatozoides y la motilidad
progresiva hacia adelante son también determinados bajo un microscopio de contraste de fase con
un aumento de 100 o 200X.
Analisis objetivo mediante CASA (Computer Assisted Sperm Analysis) El CASA realiza una
serie de parámetros de motilidad de los espermatozoides (Figura 6), incluyendo la motilidad total
(%); motilidad progresiva (%); velocidad media (VAP - μm/s); velocidad lineal (VSL - μm/s);
velocidad curvilínea (VCL, μm/s); amplitud del desplazamiento lateral de la cabeza (ALH, μm);
frecuencia del desplazamiento de la cabeza o frecuencia transversal de los batidos (BCF, Hz);
coeficiente medio (STR, %), que indica la linealidad de la trayectoria media y se define como
(VSL/VAP) x 100; coeficiente lineal (LIN, %), que es la relación del desplazamiento recto en la
suma de desplazamientos elementales durante el tiempo de medición y se define como (VSL/VCL)
x 100; y el coeficiente de bamboleo (VAP/VCLx100, WOB -%)
hemocitómetro La concentración de esperma es el número de espermatozoides por unidad de
volumen de eyaculado expresado en milímetros (mm3) o centímetros cúbicos (cm3 = mL)
Espectofótometro La espectrofotometría, técnica usada en nuestro laboratorio, es un método
indirecto, que mide la luz monocromática absorbida por las partículas en suspensión o los
espermatozoides. Esta densidad óptica de la muestra es comparada frente a una curva estándar
patrón previamente validada, y permite, así, conocer el número de espermatozoides.
Fragmentación de ADN Dicho test se basa en diferenciar ADN fragmentados y no fragmentados
tras someter a los espermatozoides a un proceso de desnaturalización de proteínas utilizando una
solución acida de tal forma que las células espermáticas con un ADN sin ningún tipo de daño o
rotura son resistentes a dicho proceso. Se utiliza un colorante fluorescente para su evaluación a
microscopio de tal forma que aquellos espermatozoides con un gran halo alrededor de la cabeza,
indica que tiene un ADN fragmentado.

MÉTODOS DE CRIO PRESERVACIÓN

criopreservacion. -El almacenamiento a largo plazo del semen se logra mediante la

criopreservación, que facilita la difusión del material genético deseable a la mayor parte del mundo.
Las dosis de semen pueden ser puestas en cuarentena hasta que se demuestre que el macho está
libre de la enfermedad en ese momento de la recolección de semen. La criopreservación mantiene la
vida fértil de espermatozoides prácticamente de forma indefinida, aunque una gran proporción de
los espermatozoides individuales no logran sobrevivir al considerable estrés de congelando y
descongelando. Para sobrevivir a la congelación, se utiliza un diluyente que contiene no sólo
sustancias que protegen contra el choque del frío, sino que también crioprotectores como el glicerol
que los protegen de las consecuencias perjudiciales de la formación de cristales de hielo. La
tecnología de criopreservación la podemos resumir en varias etapas: dilución seminal; enfriamiento
de la suspensión espermática; adición del agente crioprotector y envasado; congelación;
almacenamiento en envase criogénico; descongelación y aplicación de las dosis seminales. Cada
una de estas fases debe producir el menor daño posible sobre las estructuras y el metabolismo del
espermatozoide.

Enfriamiento y choque de frio. -choque del frío da como resultado el daño de las membranas
celulares, causando fugas de potasio intracelular, enzimas, lípidos, colesterol, lipoproteínas, y el
trifosfato de adenosina (ATP). La disminución de la temperatura hace que los fosfolípidos de la
membrana cambien de un fluido a una fase de gel, así, los espermatozoides con choque de frío son
más permeables, especialmente al calcio.