Mecanismos de desarrollo 101 (2001) 233 ± 236

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Patrón de expresión genética

HoxA y HoxB Los genes agrupados subdividen el tracto digestivo en

dominios morfológicos durante el desarrollo del pollito

Jun-ichi Sakiyama, Yuji Yokouchi, Atsushi Kuroiwa *

División de Ciencias Biológicas, Escuela de Graduados en Ciencias, Universidad de Nagoya, Furo-cho, Chikusa-ku, Nagoya, 464-8602 Japón

Recibido el 25 de octubre de 2000; recibido en forma revisada el 1º de diciembre de 2000; aceptado el 1 de diciembre de 2000

Resumen

El tracto digestivo presenta una morfología y una citodiferenciación específicas de la región a lo largo del eje anteroposterior. Analizamos los
patrones de expresión espacial deHox genes pertenecientes al HoxA y HoxB grupo (Hoxa-4, a-9, Hoxb-5, b-9) en el tracto digestivo del pollito en
desarrollo. Los dominios de expresión de estosHox genes correlacionados con la subdivisión morfológica del tracto digestivo a lo largo del eje
anteroposterior. q 2001 Elsevier Science Ireland Ltd. Todos los derechos reservados.

Palabras llave: Hox; Tracto digestivo; Embrión de pollo; Hibridación in situ de montaje completo

1. Resultados En embrión de 3 días, Hoxa-5 se expresó en el quinto y

Al comienzo del desarrollo del tracto digestivo del embrión
de pollo, el extremo extremo del intestino anterior y posterior
forman una estructura tubular y entre el portal intestinal
anterior (AIP) y el portal intestinal posterior (PIP) hay un surco
intestinal que mira hacia la yema de huevo. En el embrión de 3
días, solo el intestino anterior y el posterior forman una
estructura tubular y el intestino medio se abre a la yema. El
cierre del surco intestinal procede de la AIP y PIP hacia el
centro y la formación de la estructura tubulosa se completa en
el cuarto día de incubación dejando el tallo de la yema
conectado a la yema de huevo en el intestino medio. En esta
etapa, el tracto digestivo comienza a exhibir una subdivisión
morfológica a lo largo del eje anteroposterior. Analizamos
Hox expresión génica durante este período crucial de
morfogénesis intestinal.
1.1. Expresión del gen HoxA (Hoxa-4, a-7)
En general, la expresión de región específica de Hoxa-4, A-9
se observó en el mesodermo visceral y tenía límites de
expresión posterior comunes en la unión ciego / recto.
En embrión de 3 días, Hoxa-4 se expresó en el arco
visceral 4 ± 6, estómago, intestino medio y ciego
prospectivo (Fig. 1A). En embrión de 4 días,Hoxa-4 se
expresó en 4 ± 6º arco visceral, estómago (proventrículo y
molleja), duodeno, yeyuno, íleon y ciego (fig. 1B, C).
* Autor correspondiente. Tel .:181-52-789-2994; fax:181-52-789-2995.
Dirección de correo electrónico: i45240a@nucc.cc.nagoya-u.ac.jp (A. Kuroiwa).
sexto arco visceral, estómago, intestino medio e intestino
posterior anterior (Fig. 1D). En embrión de 4 días,Hoxa-5 se
expresó en el arco visceral, proventrículo, parte posterior
del duodeno, yeyuno, íleon y ciego (fig. 1E, F). Hoxa-5 no se
expresó en el esófago y en el área de la molleja (estómago
posterior) al duodeno anterior (Fig. 1E).
En el embrión de 3 días, el límite anterior del Hoxa-6
El dominio de expresión se localizó ligeramente posterior a la unión
del conducto hepático (Fig. 1G, borde del intestino anterior /
intestino medio). El límite posterior deHoxa-6 fue el borde ciego /
recto prospectivo (fig. 1G). En embrión de 4 días,Hoxa-6
se expresó en yeyuno, íleon y ciego. En el yeyuno, la
intensidad delHoxa-6 la expresión se desvaneció hacia la
dirección anterior (Fig. 1H).
En el embrión de 3 días, el límite anterior de Hoxa-7 la
expresión se localizó ligeramente anterior a la arteria vitelina
(Fig. 1I). En embrión de 4 días,Hoxa-7 se expresó en el yeyuno
posterior, íleon y ciego (fig. 1J). En este punto,Hoxa-7
también se expresó en las ramas endodérmicas bilaterales de ciego
(Fig. 1K, puntas de flecha).
En resumen, la expresión de Hoxa-4, A-10 mostró un patrón
anidado con más 30 genes localizados en el grupo que
muestran el límite más anterior y los límites posteriores
comunes en el borde ciego / recto (Fig. 3, izquierda).
1.2. Expresión de genes HoxB (Hoxb-5, b-9)
En general, Hoxb-5, b-9 se expresó en el mesodermo
visceral. Hoxb-9, sin embargo, mostró una expresión única, con
señal en el endodermo del intestino posterior. Además,Hoxb-

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Fig. 1. Expresión de la HoxA genes. Expresiones deHoxa-4 (A ± C), Hoxa-5 (D ± F), Hoxa-6 (G, H) y Hoxa-7 (I ± K) se visualizaron mediante hibridación in situ de montaje completo.
(A, D, G) Vista lateral izquierda del tracto digestivo en el día 3 de incubación (St. St 20). Vista lateral izquierda (B, E, H, J) y dorsal del tracto digestivo en el día 4 de incubación (St. St
24). (K) Vista frontal del ciego en el día 4 de incubación. Abreviaturas: ce, caeca; du, duodeno; es, esófago; fg, intestino anterior; gz, molleja; hg, intestino grueso; il, íleon; je,
yeyuno; li, hígado; lu, pulmón; mg, intestino medio; ph, faringe; pv, proventrículo; re, recto; st, estómago; va, arteria vitelina; ys, tallo de yema; el asterisco indica una señal no
específica.

Fig. 3. Resumen de los dominios de expresión de HoxA yHoxB genes agrupados en el mesodermo visceral del tracto digestivo de los pollos en el día 4 de incubación. (Izquierda),HoxA
genesHoxa-4, a-13). Los patrones de expresión de Hoxa-9, A-13 se describieron previamente (Yokouchi et al., 1995). (Derecha),HoxB genesHoxb-5, b-9).
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Fig. 2. Expresión de la HoxB genes. Expresiones deHoxb-5 (A, B), Hoxb-6 (C ± E), Hoxb-7 (F ± H), Hoxb-8 (I ± K) y Hoxb-9 (L ± P) se visualizaron mediante hibridación in
situ en total. (A, C, F, I, L) Vista lateral izquierda del tracto digestivo en el día 3 de incubación (St. St 20). Vista lateral izquierda (B, D, G, J) y frontal (M) del tracto
digestivo en el día 4 de incubación (St. 24). Vista dorsal (E) y lateral izquierda (H, K) del estómago en el día 4 de incubación.Hoxb-7 se expresó en la parte dorsal del
proventrículo (H, flecha amarilla), no en la parte ventral (H, flecha verde). El contorno del pulmón está representado por la línea punteada roja (H, K). Vista frontal del
ciego en el día 4 (St. 24, N), 5 (St. 27, O) y el día 6 (St. 29, P) de incubación.

5, b-9 mostró un patrón muy característico, con expresión estómago (Fig. 2A). En este punto,Hoxb-5 no se observó expresión
en el pulmón (Sakiyama et al., 2000). en el intestino medio ni en el intestino grueso. En embrión de 4
En embrión de 3 días, Hoxb-5 se expresó en la anterior días,Hoxb5 se expresó en todo el proventrículo y la parte dorsal
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de la molleja que comenzó a engrosarse (Fig. 2B). Además,
Hoxb-5 se observó expresión en yeyuno, íleon y ciego.
En embrión de 3 días, Hoxb-6 se expresó en el estómago
(Fig. 2C). En el estómago, el dominio de expresión se restringió
más dorsalmente a medida que avanzaba posteriormente.
Hoxb6 también se expresó en el intestino medio y el ciego
prospectivo. En el embrión de 4 días, el límite anterior deHoxb-6
la expresión fue el borde esófago / estómago (Fig. 2D, E).
Hoxb-6 se expresó en todo el proventrículo. Hoxb-6
también se expresó en la molleja dorsal-posterior (Fig. 2E).
En el intestinoHoxb-6 se expresó en yeyuno, íleon y ciego
(fig. 2D).
En embrión de 3 días, Hoxb-7 se expresó en la parte
dorsal del estómago y en el intestino medio anterior
(anterior a la arteria vitelina) (Fig. 2F). En embrión de 4 días,
Hoxb-7 se expresó en la mitad dorsal del proventrículo y la
línea media dorsal de la molleja (Fig. 2G, H). En el yeyuno,
expresión débil deHoxb-7 se observó (Fig. 2G).
En embrión de 3 días, Hoxb-8 se expresó en el mesodermo
visceral del intestino medio anterior (anterior a la arteria
vitelina) (Fig. 2I). En este punto,Hoxb-8 no se observó expresión
en el estómago. En embrión de 4 días,Hoxb-8 se expresó
débilmente en el yeyuno (Fig. 2J). Además,
Hoxb-8 se expresó en el proventrículo (Fig. 2K).
En embrión de 3 días, Hoxb-9 se expresó en el intestino medio
posterior (posterior a la vena vitelina) y el intestino posterior (Fig. 2L).
Hoxb-9 también se expresó en el endodermo del intestino posterior
(datos no mostrados). En embriones de 4 días, alto nivel de expresión de
Hoxb-9 en el mesodermo visceral permaneció solo en yemas
cecales (Fig. 2M, N, flechas rojas). En otra parte,Hoxb-9 expresión
disminuyó notablemente. Después del quinto día,Hoxb-9
la expresión se restringió al endodermo del intestino posterior.
Expresión de alto nivel deHoxb-9 Se observó en las ramas
endodérmicas bilaterales de ciego (Fig. 2O, P).
En resumen, HoxB Los genes mostraron dos dominios de
expresión discretos en el tracto digestivo de los pollos. En la
molleja, la expresión deHoxb-5, b-8 exhibió un patrón anidado
0
con los 5 genes más localizados en el grupo mostrando un
dominio más restringido dorsalmente. Hoxb-7 la expresión en
el proventrículo se restringió a la mitad dorsal. En el intestino,
el dominio de expresión delHoxB los genes de racimo estaban
claramente correlacionados con la subdivisión morfológica;
duodeno, yeyuno, íleon, ciego y recto (Fig. 3, derecha).
2. Material y métodos
2.1. Sondas
Las sondas para Hoxa-4, a-5, a-9, b-5, y Hoxb-7 se
prepararon a partir del clon de ADNc de pollo (Kuroiwa, A.,
datos no publicados). Las sondas paraHoxa-6, a-7, b-6, b-8 y
Hoxb9 se prepararon a partir de clones genómicos de pollo
(A. Kuroiwa, datos no publicados). Las sondas de ARN se
marcaron con digoxigenina según el protocolo del
fabricante (Boehringer).
2.2. Hibridación in situ de montaje completo
La hibridación in situ de montaje completo se realizó como
describen Yokouchi et al. (Yokouchi y col., 1996). Para la
identificación de la capa de tejido de expresión, se analizaron
microscópicamente las secciones de vibrátomo de la muestra de
montaje completo (no se muestran los resultados).
Referencias
Sakiyama, J., Yokouchi, Y., Kuroiwa, A., 2000. Expresión coordinada de
Hoxb genes y moléculas de señalización durante el desarrollo del tracto
respiratorio de los pollos. Dev. Biol. 227, 12 ± 27.
Yokouchi, Y., Sakiyama, J., Kuroiwa, A., 1995. Expresión coordinada de
Genes de la subfamilia Abd-B del grupo HoxA en el tracto digestivo en
desarrollo del embrión de pollo. Dev. Biol. 169, 76 ± 89.
Yokouchi, Y., Sakiyama, J., Kameda, T., Iba, H., Suzuki, A., Ueno, N.,
Kuroiwa, A., 1996. BMP-2 / -4 median la muerte celular programada en yemas de
extremidades de pollo. Desarrollo 122, 3725 ± 3734.