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Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068

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Revista Internacional de Farmacé utica: X

pharmaceutics-x

Un nuevo proceso de ingeniería de implantes só lidos poliméricos biodegradables

para la

administració n de fá rmacos de acció n ultralarga

Panita Maturavongsadit a,GayaneParavyan a,MartinaKovarova c, d,J.VíctorGarcía c, d,*,
S. Rahima Benhabbour a, b,*
a
Departamento Conjunto de Ingeniería Biomédica, Universidad Estatal de Carolina del Norte y Universidad de Carolina del Norte en Chapel Hill, Chapel Hill, NC, EE.UU.
b
División de Farmacoingeniería y Farmacéutica Molecular, UNC Eshelman School of Pharmacy, University of North Carolina at Chapel Hill, Chapel Hill, NC, USA
c
Centro Internacional para el Avance de la Ciencia Traslacional, Estados Unidos
d
División de Enfermedades Infecciosas, Centro de Investigación del SIDA, Facultad de Medicina, Universidad de Carolina del Norte en Chapel Hill, Chapel Hill, NC, EE.UU.

ARTÍCULOSENFOR
MACIÓ N ABSTRACTO

Palabras clave: Presentamos un implante só lido polimérico (PSI) biodegradable de acció n prolongada fabricado mediante un
Implantes nuevo proceso que combina la inversió n de fase y la compresió n in situ. Este robusto proceso permite la
só lidos In-situ fabricació n de implantes só lidos que pueden tener diferentes formas y tamañ os, acomodar altas cargas de
Inversió n de fase fármacos y proporcionar una liberació n sostenida del fá rmaco durante varios meses. En este caso se utilizó el
Compresió n inhibidor de la integrasa dolutegravir (DTG) para desarrollar PSI para la prevenció n del VIH. Los PSI se
Administració n de
fabricaron mediante un proceso de tres pasos: (a) inversió n de fase de la solució n polimérica cargada con DTG
fá rmacos de acció n
para formar un implante inicial in situ en una solució n acuosa, (b) micronizació n de los implantes só lidos secos
prolongada Á cido
poli(lá ctico-co-glicó lico) cargados con DTG, y (c) desarrollo de una solució n de polímero.
Prevenció n del VIH (c) compresió n de los implantes só lidos micronizados cargados con DTG para formar el PSI. Se logró una alta
carga de fármaco (hasta el 85% en peso) en los PSI. El DTG mostró una liberació n mínima en las primeras 24
horas (< 6%) y una ciné tica de liberació n sostenida durante 6 meses. La ciné tica de liberació n del DTG puede
ajustarse variando la concentració n de la carga del fá rmaco, el
relació n entre el polímero (ácido lá ctico-co-glicó lico), PLGA) y el disolvente (N-metil-2-pirrolidona, NMP) y el peso
molecular del polímero (PLGA) en la solució n precursora. Las propiedades físico-químicas del DTG se
◦C/75% de
mantuvieron tras su almacenamiento en condiciones de almacenamiento acelerado (40 humedad
relativa) durante 6 meses. La versatilidad de este
hace que sea una atractiva plataforma de administració n de fá rmacos para aplicaciones de prevenció n del VIH.

1. Introducción
Las tecnologías de administració n de fá rmacos de acció n prolongada
(AL) han atraído mucha atenció n en las ú ltimas dé cadas por su aplicació n
en diversas á reas de la medicina, como la anticoncepció n (Affandi et al.,
1987; Uhm et al., 2016; Mansour, 2010), la terapia anticancerígena
(Goldspiel y Kohler, 1991; Elstad y Fowers, 2009), el tratamiento
antipsicó tico (Kaplan et al., 2013; Dam- mermanet al.,2018), la
enfermedad ocular (MacoulyPavan-Langston, 1975; Haghjouetal.,2011;
Iyeretal.,2019) el tratamiento del dolor (Barnwal et al., 2017; Nickel et al.,
2012) y muchas otras enfermedades cró nicas (Pons-Faudoa et al., 2019;
Wang et al., 2020) debido a su capacidad para mejorar la adherencia del
paciente y los resultados del tratamiento. Las tecnologías de
administració n de fá rmacos por vía oral ofrecen ventajas respecto a la
administració n sisté mica tradicional, ya que proporcionan una liberació n
sostenida del fá rmaco durante semanas, meses o añ os y logran un efecto
terapé utico a concentraciones de fá rmaco má s bajas en comparació n con
las formas de dosificació n oral, lo que puede eliminar el riesgo de efectos
secundarios no deseados (DashyCudworthII,1998; Rajgoretal.,2011).
Muchos LA comerciales
tecnologías de administració n de fá rmacos está n en uso clínico, como los
implantes de levonorgestrel (Norplant®, Estring®, Jadelle®) y
etonogestrel (Implanon®, Nex- planon®) para la anticoncepció n
(Affandiet al, 1987; Uhm etal., 2016; Mansour,2010), inyectables de
naltrexona (Vivitrol®) e implantes de bupre- norfina (Probuphine®)
para el tratamiento del abuso de opioides (Barnwal et al., 2017; Kjome y
Moeller, 2011). Estas tecnologías de administració n de fá rmacos de LA
son ampliamente aceptadas y, a lo largo de los añ os, su uso ha aumentado
considerablemente en muchos países, incluidos los Estados Unidos
(BranumyJones,2015; Alderks, 2013). Sin embargo, sigue existiendo la
necesidad de tecnologías de administració n de fá rmacos de AL
específicamente adaptadas para lograr dosis terapé uticas ó ptimas
durante períodos prolongados de tiempo para mú ltiples aplicaciones
mé dicas, incluyendo el tratamiento y la prevenció n del VIH para los que
hay un nú mero limitado de tecnologías de AL disponibles actualmente
(Spreen et al., 2013; Spreenetal.,2014).
Varias tecnologías de AL está n en desarrollo preclínico y clínico
para el tratamiento y la prevenció n del VIH, como las multitudes
inyectables a base de nanopartículas (Baert et al.,2009;
Landovitzetal.,2016), las

* Autores correspondientes.
Direcciones de correo electrónico: victor_garcia@med.unc.edu (J.V. Garcia), benhabs@email.unc.edu (S.R. Benhabbour).

https://doi.org/10.1016/j.ijpx.2020.100068

Disponible en línea el 25 de diciembre de 2020

2590-1567/© 2020 El autor(es). Publicado por Elsevier B.V. Este es un artículo de acceso abierto bajo la licencia CC BY-NC-ND
(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
P. Maturavongsadit et al.
dispositivos nanofluídicos rellenables (Chua et al., 2018; Pons-Faudoa
et al., 2020), y sistemas de administració n tó pica como geles (Date et
al., 2012; Grammen et al., 2014; García-Lerma y Heneine, 2012),
películas vaginales (Guthrie et al., 2018; Bunge et al., 2016) y anillos
intravaginales (Devlin et al., 2013; Fetherston et al., 2013; Glaubius et
al., 2019). Se ha demostrado que estas tecnologías proporcionan una
administració n sostenida de fá rmacos durante varias semanas, y
algunas alcanzan duraciones de hasta 4 meses. Los implantes só lidos
polimé ricos son muy prometedores para el desarrollo de sistemas de
administració n de fá rmacos de AL debido a la capacidad de formular
altas cargas ú tiles de fá rmacos en un solo implante, lo que puede
permitir potencialmente du- raciones de liberació n sostenida que
duren má s de SEIS meses. En la actualidad, la mayoría de los implantes
só lidos polimé ricos disponibles se fabrican con polímeros no
biodegradables, como las siliconas, los poli(uretanos), los
poli(acrilatos) y el poli (etileno acetato de vinilo) (Mansour, 2010;
Barnwal et al., 2017; Shastri, 2003). Como tal, se requiere la extracció n
quirú rgica de estos implantes no biodegradables al final de la duració n
del tratamiento del implante. Hasta la fecha, los implantes só lidos
biodegradables utilizados clínicamente se limitan a aplicaciones oculares
y está n hechos con poli(á cido lá ctico-co-glicó lico) (PLGA), poli(á cido
lá ctico) (PLA) o hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) (Haller et al.,
2009; LeeyChee,2005). Los implantes só lidos biodegradables de LA
que se está n desarrollando para la prevenció n o el tratamiento del
VIH se encuentran en las primeras fases de desarrollo,
y se investigan algunos productos, como la tenofovir alafenamida
(TAF)-poliocaprolactona (PCL) de película fina (Schlesinger et al., 2016) y
los implantes de PLA y PCL liberadores de MK-8591 (Barrett et al., 2018).
Estos implantes só lidos se fabrican mediante extrusió n en caliente,
fundició n con disolvente o moldeo por compresió n, que requieren altas
temperaturas y fuerzas de cizallamiento para fabricar el implante só lido
(Schlesinger et al., 2016; Barrett et al.,2018; Zajcetal.,2005;
Dinunzioetal.,2010).
Recientemente, desarrollamos unas formulaciones inyectables de
implante de formació n in situ (ISFI) para la administració n de
dolutegravir (DTG) en LA (Kovarova et al., 2018; Benhabbour et al.,
2019). Estas formulaciones proporcionaron una entrega sostenida de
DTG durante hasta 9 meses y una eficacia in vivo contra los desafíos
vaginales del VIH de alta dosis en un modelo preclínico de rató n
humanizado (Kovarova et al., 2018; Benhabbour etal., 2019). En este
estudio, adaptando de los ISFIs recientemente desarrollados,
desarrollamos un proceso nuevo y ú nico para diseñ ar implantes só lidos
polimé ricos (PSIs) para mejorar aú n má s la capacidad de carga del
fá rmaco para lograr dosis clínicamente traducibles dentro de una sola
administració n. Informamos del uso de té cnicas de inversió n de fase y
compresió n para fabricar un PSI de PLGA que puede ofrecer una alta
carga de fá rmaco y una liberació n ultra-LA de DTG. La té cnica de
compresió n permite conseguir altas cargas de fá rmaco en un implante
só lido pequeñ o y compacto, ademá s de poder controlar el tamañ o, la
forma y las propiedades mecá nicas del PSI final. El proceso de
fabricació n de estos PSI
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Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068
consiste en un proceso escalonado de (a) inversió n de fase de una
formulació n ISFI cargada con DTG para formar un implante só lido inicial
in situ en un medio acuoso, (b) micronizació n de los implantes só lidos
secos cargados con DTG, y (c) compresió n del polvo só lido DTG-PLGA
micronizado (Fig.1). Utilizando este novedoso enfoque de fabricació n en
tres pasos, los PSI resultantes no contienen disolventes y está n formados
ú nicamente por el polímero (PLGA) y el fá rmaco (DTG) cargados en altas
concentraciones (hasta el 85% en peso) para permitir dosis traducibles
en un ú nico PSI compacto. No se necesitaron excipientes adicionales para
comprimir o estabilizar el implante só lido. La carga de fá rmaco y la
ciné tica de liberació n pueden modularse variando la composició n de la
formulació n (por ejemplo, polímero, disolvente), la carga de fá rmaco, el
tamañ o/forma del implante y la fuerza de compresió n aplicada. Este
nuevo proceso de fabricació n de implantes só lidos a base de PLGA
representa una plataforma prometedora para otros polímeros y fá rmacos
de liberació n sostenida.
2. Materiales y métodos
2.1. Materiales
El poli(DL-lactida-co-glicolida) 50:50 se adquirió de LACTEL
(Birmingham, AL; Cat. No. B6010-1P, MW 27 kDa). La N-metil-2-pir-
rolidona (NMP, < USP> ) se recibió de ASHLAND (Wilmington, DE,
Có digo de producto 851263, 100% NMP). El dolutegravir (DTG) se
adquirió de Selleckchem (Houston, TX; S2667-DTG, S7303-RPV).
Solutol-HS
15, solució n salina tamponada con fosfato (PBS 0,01 M, pH 7,4) y
acetonitrilo de grado HPLC se adquirieron en Sigma Aldrich (St. Louis,
MO).
2.2. Preparación de formulaciones ISFI
Las formulaciones de implantes de formació n in situ (ISFI) se
prepararon utilizando un procedimiento descrito previamente
(Benhabbouretal.,2019). Brevemente, se preparó una formulació n de
placebo añ adiendo PLGA (50:50, 27 kDa) a NMP en varias proporciones
de peso y permitiendo que el PLGA se disolviera en NMP mediante una
mezcla continua a temperatura ambiente. A continuació n, el dolutegravir
(DTG) se
◦C.
añ adido a la solució n placebo de PLGA/NMP y se dejó agitar a 37
durante la noche para disolver completamente el DTG y formar una
formulació n homogénea.
Para investigar el efecto de la relació n de peso PLGA/NMP en la
capacidad de carga porcentual del fá rmaco en los ISFIs, se prepararon
formulaciones placebo con proporciones 1:2, 1:4, 1:6, 1:8 y 1:10 en peso
de PLGA/NMP. Se añ adió DTG a cada solució n placebo a una
concentració n cercana a la saturació n en la formulació n (110, 170,
200, 220 y 250 mg/g de DTG, respectivamente). Para mejorar aú n
má s la solubilidad de la DTG en la formulació n, se añ adió
dimetilsulfó xido
P. Maturavongsadit et al. Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068
PLGA: (NMP/ PLGA micronizado en
Gelucire 44/14, 9:1 p/p)) sobre la una herramienta cilíndrica de 5
eficiencia de atrapamiento del mm de diá metro y prensada a
± fá rmaco y la ciné tica de liberació n 1,274 US.ton/cm2 para
del mismo, se formaron PSIs 10 s a temperatura ambiente. El
mediante inversió n de fase al comprimido final formado
inyectar una formulació n ISFI (25 contenía PLGA y DTG sin aditivos
μL, 20 3 mg) en PBS (2 mL) a 37
ni estabilizadores adicionales.
◦C
. Despué s de un
◦C
24 h de incubació n a 37 , se
recogieron las PSI y se secaron
utilizando un rotativo
evaporador y se probó la ciné tica
de liberació n del fá rmaco in vitro.

2.4. Preparación de PSIs

por una combinación de
inversión de fase y
compresión

Fig. 1. Ilustració n esquemá tica del proceso de fabricació n optimizado de los 2.4.1. Procedimiento general de
implantes só lidos polimé ricos (PSI) y de los pará metros que pueden utilizarse fabricación de las ISP
para modular la capacidad de carga del fá rmaco y la cinética de liberació n del
Para fabricar un pequeñ o PSI
mismo en los PSI.
compacto con altas cargas de
fá rmacos, se desarrolló un
(DMSO) y Gelucire 44/14 se solució n de ISFI (30 μL, 30 2,5
proceso de fabricació n de tres
utilizaron como co-solventes con mg) en una membrana de
pasos utilizando una combinació n
NMP en una proporció n de 9:1 microdiá lisis con un corte de peso
de inversió n de fase y compresió n
p/p NMP/DMSO y 9:1 p/p molecular (MWCO) de 10 kDa
(Fig.1). En primer lugar, los
NMP/Gelucire 44/14 (Fig. suplementaria 1A, C,
implantes só lidos cargados con
respectivamente. Las D). Las membranas de diá lisis se
incubaron posteriormente en PBS DTG se formaron in situ mediante
formulaciones que contienen co- ◦C
a 37 inversió n de fase tras la inyecció n
solventes se prepararon
durante 24 h, que se determinó de la solució n de la formulació n
mezclando la solució n de co-
como el tiempo ó ptimo para en PBS en una proporció n
solvente con PLGA en una
permitir la difusió n de NMP±y la optimizada de ISFI/PBS (25 μ L :2
proporció n de peso de 1:6
formació n de PSI só lidas estables mL). Despué s de
PLGA/solvente. Esta relació n de ◦C
dentro de las membranas de incubació n en PBS a 37 durante
peso se determinó para 24 h, se recogieron los implantes
diá lisis. Para formar una PSI
proporcionar la mayor carga de só lidos y
esfé rica, la solució n de ISFI (30 μL,
fá rmaco y al mismo tiempo Se secó utilizando un evaporador
29 0,5 mg) se inyectó
permitir la formació n de directamente en PBS y se incubó rotatorio durante 1 hora para
implantes só lidos tras la ◦C eliminar toda el agua residual. Los
durante 24 h a 37
inyecció n en un medio acuoso. implantes secos se micronizaron
(Fig. 1B suplementaria). A
continuació n, =se recogieron las
posteriormente utilizando un
2.3. Preparación de PSI por mortero y una maja para obtener
inversión de fase PSI y se secaron con un
un polvo fino de DTG y PLGA
evaporador rotatorio durante 1
como MEZCLA homogé nea. Para
Los implantes só lidos hora para eliminar toda el agua
garantizar la uniformidad y la
polimé ricos (PSI) preparados por residual antes de investigar la
≤ homogeneidad de la distribució n
inversió n de fase se formaron microestructura del implante y la
del DTG dentro del polvo
mediante la inyecció n directa de ciné tica de liberació n del fá rmaco.
micronizado de DTG-PLGA, se
una formulació n ISFI en PBS, o la Se determinó que los tiempos de
recogieron muestras (1-2 mg, n4
inyecció n de una formulació n ISFI secado superiores a 1 h no
de cuatro zonas diferentes de la
en una membrana de producían cambios en la masa de
MEZCLA só lida y se disolvieron en
microdiá lisis seguida de las PSI. Se utilizaron las PSI
acetonitrilo, y se cuantificó la
incubació esfé ricas para optimizar la carga
±n en PBS (Fig. concentració n del fá rmaco
suplementaria 1). Para investigar de fá rmaco en la PSI final e
mediante un aná lisis de HPLC. El
el efecto de la forma y el á rea de investigar los efectos de la
polvo DTG-PLGA micronizado se
superficie de las ISFI en la relació n PLGA/NMP (1:2, 1:4, 1:6,
consideró homogé neo cuando la
ciné tica de liberació n del 1:8 y 1:10 en peso de PLGA/NMP)
desviació n está ndar de la
fá rmaco, se prepararon tres en la formació n del implante, la
concentració n media en las 4
formas de ISFI, incluyendo un eficiencia de atrapamiento del
muestras analizadas fue del 5%.
cubo, un cuboide y una esfera, fá rmaco, la microestructura del
El polvo de DTG-PLGA
utilizando una formulació n ISFI implante y la ciné tica de
micronizado se comprimió
de PLGA:NMP 1:2 p/p y una liberació n del fá rmaco.
posteriormente utilizando una
concentració n constante de Para investigar el efecto del
má quina de comprimidos de un
fá rmaco (100 mg/g DTG). co-disolvente (1:6 p/p
solo punzó n (Carver Hand Press
Brevemente, para formar una PSI PLGA:NMP, 1:6 p/p PLGA:
modelo 3851). Brevemente, se
cú bica y cuboide, se inyectó la (NMP/DMSO, 9:1 p/p), y 1:6 p/p
cargaron 20 mg de polvo de DTG-

3
P. Maturavongsadit et al.
2.4.2. Efecto del PLGA MW
Para evaluar los efectos del
peso molecular (MW) del PLGA
en la ciné tica de liberació n del
fá rmaco, se fabricaron PSIs
utilizando diferentes MWs de
PLGA (11, 27 y 54 kDa). Se
preparó una formulació n
placebo con 1:6 p/p de PLGA/sol-
vent utilizando una solució n co-
solvente de 9:1 p/p de
NMP/DMSO. Se añ adió DTG a la
solució n placebo a una
concentració n cercana a la
saturació n de 250
◦C
mg/g y se dejó agitar a 37
durante la noche para disolver
completamente el fá rmaco.
Los implantes só lidos iniciales
cargados con el fá rmaco se
formaron, se secaron, se
micronizaron y el polvo
resultante se comprimió en PSI
de 5 mm de diá metro mediante
el procedimiento mencionado.
Los PSI resultantes se probaron
para evaluar el efecto del MW de
PLGA en la ciné tica de liberació n
in vitro del DTG.
2.4.3. Efecto de la carga de
fármacos
Para evaluar el efecto de la
carga de DTG en la ciné tica de
liberació n del fá rmaco, se
fabricaron PSI con cinco
concentraciones diferentes de
DTG. Se preparó una
formulació n de placebo con
PLGA/disolvente 1:6 en peso,
utilizando una solució n co-
solvente de NMP/DMSO 9:1 en
peso. Se añ adió DTG a la
solució n de pla- cebo a una
concentració n de 62,5, 125, 250,
300 y 600 mg/g
◦C
y se dejó agitar a 37 durante la
noche para disolver
completamente el fá rmaco. El
Los implantes só lidos iniciales
cargados con el fá rmaco se
formaron, secaron,
micronizaron y comprimieron
en PSI de 5 mm de diá metro
mediante el procedimiento
descrito anteriormente. Los PSI
resultantes con diferentes
porcentajes de carga de DTG
(22,5, 45, 55, 65 y 85% en peso)
se evaluaron para determinar el
efecto de la carga de DTG en un
PSI sobre la ciné tica de
liberació n in vitro.
%=× 100
2.4.4. Efecto de la fuerza de
compresión
Para evaluar el efecto de la
fuerza de compresió n utilizada
en el proceso de fabricació n
sobre las propiedades mecá nicas
y la microestructura de las PSI
resultantes y la ciné tica de
liberació n del fá rmaco, se
fabricaron las PSI utilizando tres
fuerzas de compresió n
diferentes. En primer lugar, se
preparó una formulació n de
placebo con 1:6 p/p de
PLGA/disolvente utilizando una
solució n de co-disolvente de 9:1
p/p de NMP/DMSO. Se añ adió
DTG a la solució n de placebo a
una concentració n cercana a la
saturació n.
tació n de 250 mg/g y se dejó
◦C
agitar a 37 durante toda la
noche para que se disolviera
completamente
el fá rmaco. Los implantes só lidos
iniciales cargados con el fá rmaco
se formaron por inversió n de
fase, se secaron y se
micronizaron mediante el
procedimiento mencionado. La
potencia DTG-PLGA homogé nea
micronizada (75 mg) se cargó en
una herramienta cilíndrica de 10
mm y comprimida a diferentes
fuerzas de compresió n de 0,5, 1
y 1,5 US.ton (equivalentes a
0,657,=
1,274 y 1,911
US.ton/cm2,
respectivamente) para producir
las PSI finales. Los PSI
resultantes de 10 mm de
diá metro se evaluaron para
comparar sus propiedades
mecá nicas, su microestructura y
la ciné tica de liberació n de DTG
in vitro.
2.4.5. Efecto del proceso de
incorporación del fármaco
El DTG se formuló en los PSI
utilizando un proceso de
precarga por el que se añ adió el
DTG en la formulació n de la
solució n placebo, como se ha
descrito anteriormente, o
utilizando un proceso de
postcarga por el que se añ adió el
DTG a un polvo de polímero
micronizado preformado. Se
investigó el efecto del proceso de
carga de DTG en la ciné tica de
liberació n del fá rmaco in vitro.
En el proceso de precarga, se
añ adió DTG a una solució n
placebo (1:6 p/p
PLGA/(NMP/DMSO, 9:1 p/p)) a
una concentració n cercana a la
saturació n de 250 mg/g, y se
fabricó un PSI de 5 mm de
diá metro (60% p/p DTG)
mediante el procedimiento
mencionado. En el proceso de
poscarga, se preparó primero un
polvo de PLGA micronizado
4
Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068
generando implantes só lidos
mediante inversió n de fase in
situ de un precursor de solució n
placebo 1:6 p/p de
PLGA/(NMP/DMSO, 9:1 p/p). Los
implantes só lidos fueron
posteriormente secados y de carga de fá rmaco dentro de
micronizados como se ha
descrito anteriormente. Se
añ adió DTG al polvo de PLGA
micronizado preformado para
conseguir la misma
concentració n de DTG (60% p/p)
obtenida en los PSI precargados,
y la MEZCLA SÓ LIDA DE fá rmaco y
polímero se utilizó para producir
100 mg de PLGA:NMP o
PLGA/(NMP:DMSO 9:1). La
solució n se mezcló a fondo
utilizando una combinació n de
mezcla en vó rtex y ciclos cortos
◦C
de calentamiento (~40 ) PSI por inversió n de fase. La
durante unos minutos (3-5 min), y
se agitó durante
◦C
otras 24 h a 37 para permitir
que el DTG se disuelva
completamente en el
formulació n. Posteriormente, las
muestras se centrifugaron
durante 30 minutos a 13.000 rpm
(Eppendorf Centrifuge 5417C,
EE.UU.) para eliminar el exceso de
fá rmaco no disuelto. Se
recogieron alícuotas de la muestra
(1 mg, n 4) del sobrenadante
saturado de fá rmaco y se
disolvieron en acetonitrilo (ACN)
para cuantificar la concentració n
de DTG mediante aná lisis de
HPLC.
Los aná lisis por HPLC en fase
inversa se realizaron con un
sistema Finnigan Surveyor HPLC
(Thermo Finnigan, San José ,
California, EE.UU.) equipado con
un detector de matriz de
fotodiodos (PDA) Plus, un
automuestreador y una bomba LC
Plus. La fase estacionaria utilizada
para el aná lisis fue una columna
Inertsil ODS-3 (4 μ m , 4,6 Å ~
150 mm, [GL Sciences, Tor-
rance, CA]) mantenido a 40 ◦C.
La separació n cromatográ fica fue
se consiguió mediante elució n en
gradiente utilizando una fase
mó vil compuesta por á cido
trifluoroacé tico al 0,1% en agua y
ACN (H2O/ACN 95:5 v/v). La
velocidad de flujo fue de 1,0
mL/min y el tiempo total de
ejecució n fue de 25 min para cada
inyecció n de 25 μL.
2.6. Eficacia de la captura de
drogas
un PSI de 5 mm de diá metro.
2.5. Capacidad de carga del
fármaco
Para optimizar el porcentaje
los ISFI, se determinaron las
concentraciones de saturació n
de DTG en formulaciones de
ISFI que contenían 1:2, 1:4, 1:6,
1:8 y 1:10 p/p de PLGA:NMP, así
como 1:6 p/p de PLGA: (9:1 de
NMP/co-solvente). Se añ adió
DTG (30 mg) a viales individuales
que contenían
La eficacia de la captura del
fá rmaco se determinó como el
má ximo fá rmaco atrapado en los
implantes só lidos formados en el
paso inicial de la fabricació n del
eficiencia de atrapamiento se
utilizó para evaluar los
pará metros de formulació n que
dan lugar a una carga de fá rmaco
optimizada en el PSI final. Se
prepararon formulaciones de DTG
ISFI con 1:2, 1:4, 1:6 1:8 y 1:10 p/p
de PLGA/NMP, así como 1:6 p/p
de PLGA/(NMP/co-disolvente,
9:1 p/p) y concentraciones
cercanas a la saturació n de DTG
(Cloaded) en cada formulació n
(110 mg/g, 170 mg/g, 200 mg/g,
220 mg/g, 260 mg/g, 250 mg/g
(co-disolvente, DMSO) y 230
mg/g (co-disolvente,
Gelucire44/14) respectivamente.
tivamente). Se inyectaron
alícuotas de muestra (20-25 μL)
de cada formulació n ISFI en 2 mL
◦C
de PBS y se incubaron a 37
durante 24 h para cuantificar
por ciento de atrapamiento de
DTG en los implantes só lidos. Se
recogieron alícuotas de muestra (1
mL) del medio de liberació n 24 h
despué s de la incubació n y se
cuantificó la concentració n de DTG
mediante un aná lisis de HPLC para
determinar el fá rmaco "libre"
liberado durante el paso de
inversió n de fase (Cfree) en el
proceso de formació n del implante
só lido. El porcentaje de
atrapamiento de DTG en los
implantes só lidos se calculó
mediante la siguiente ecuació n.
Todos los experimentos se
realizaron por cuadruplicado.
Cloaded - Cfree
DTG atrapado C
l
o
a
d
e
d
P. Maturavongsadit et al.
2.7. Imágenes de microscopía
electrónica de barrido (SEM)
Para investigar la distribució n
del fá rmaco y la microestructura
de las PSI de DTG preparadas por
inversió n de fase, se prepararon
PSI con diferentes ratios de
PLGA/NMP (1:2, 1:4, 1:6 y 1:8
p/p de PLGA/NMP) y variando
concentració n de DTG (100 y 110
mg/g, 170 mg/g, 200 mg/g y 220
mg/g respectivamente). Para
investigar la distribució n del
fá rmaco, la microestructura y el
estado físico de los fá rmacos
después del paso de
micronizació n, se prepararon
polvos DTG- PLGA
micronizados a partir de
soluciones ISFI 1:6 p/p
PLGA/(NMP/DMSO, 9:1) (250
mg/g de DTG) utilizando el
método descrito anteriormente.
Los ISFI de DTG resultantes y
los polvos de DTG-PLGA
micronizados se montaron en
un trozo de aluminio utilizando
cinta de carbono, y se
recubrieron por pulverizació n
cató dica con 5 nm de
aleació n de oro y paladio
(60:40) (Hummer X Sputter
Coater, Anatech USA,
Union City, CA). Las muestras
recubiertas se analizaron con
un microscopio electró nico de
barrido con una tensió n de
aceleració n de 5 kV, una
apertura de 30 μm y una
distancia de trabajo media de 15
mm (Zeiss Supra 25, Carl Zeiss
Microscopy, LLC, Thornwood,
NY). También se realizó un
aná lisis de imá genes SEM para
investigar el efecto de la fuerza
de compresió n en la
microestructura de las PSI. Las
PSIs generadas con diferentes
fuerzas de compresió n utilizando
una formulació n 1:6 p/p de
PLGA/(NMP/DMSO, 9:1) con los
métodos descritos anteriormente
se congelaron en nitró geno
líquido y se liofilizaron durante
24 horas antes del aná lisis de
imá genes SEM.
2.8. Análisis termogravimétrico
Para evaluar el estado físico
del DTG y el PLGA en las ISP, se
realizaron aná lisis de
calorimetría diferencial de
barrido (DSC) del fá rmaco puro
(DTG), de las ISP de placebo
optimizadas y de las ISP de DTG
optimizadas utilizando un
calorímetro diferencial de
barrido (TA Q200, EE.UU.). Antes
del aná lisis DSC, se determinó la
temperatura de descomposició n
(Td) del DTG utilizando un
analizador termogravimé trico
(TGA, TA Q500, USA).
Brevemente, se pesó el DTG puro
(10 mg), se selló en una bandeja
de aluminio y se colocó en un
analizador termo-
mogravimé trico.
analizador mogravimé trico. La
muestra de DTG se calentó de 0 a
◦C
600 en
una velocidad de rampa de 10
◦C/min
bajo gas nitró geno inerte
introducido a un caudal de 20
mL/min.
Para el aná lisis DSC, las
muestras (3-5 mg de DTG, 5-10
mg de DTG o placebo PSI) se
pesaron, se cerraron
hermé ticamente en una bandeja
de aluminio y se colocaron
posteriormente en un
calorímetro de barrido
diferencial. Para cada medició n,
las muestras se calentaron de 0 a
◦C
250 a una velocidad de 10
◦C/min.
bajo nitró geno (flujo de 20
mL/min). Los termogramas DSC
se utilizaron para determinar el
pico de la temperatura de
transició n vítrea (Tg) del PLGA,
el punto de fusió n (Tm) del DTG
y el estado físico del DTG en los
PSI (es decir, cristalino o
× de degradació n. Las muestras a
amorfo).
2.9. Propiedades mecánicas de los
PSI
Para evaluar las propiedades
mecá nicas de las PSI preparadas
con fuerzas de compresió n
variables, se realizó un ensayo de
flexió n en tres puntos en un
analizador de microdeformació n
RSAIII (TA Instruments, EE.UU.)
equipado con geometrías de
flexió n en tres puntos. Para cada
medició n, se colocó una pastilla
de PSI de 10 mm de diá metro en
la herramienta de flexió n de tres
puntos inferior, y la muestra se
5
Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068
sometió a prueba con una cé lula
de carga de 35 N a una velocidad
de deformació n de 0,05 mm/s
hasta que se observó una
fractura dentro de la pastilla.
2.10. Estudios de liberación in
vitro
Para investigar la capacidad
de ajustar la carga del fá rmaco, la
ciné tica de liberació n del
fá rmaco y lograr la liberació n del
fá rmaco de acció n ultra-larga (>
3 meses) utilizando PSIs, se
llevaron a cabo estudios de
liberació n in vitro con varios
DTG PSIs preparados sólo por inversión de
fase o por una combinació n de
inversió n de fase y compresió n.
Para las PSI de DTG preparadas
só lo por inversió n de fase,
La ciné tica de liberació n de DTG
se evaluó incubando las PSI de
DTG en 200 mL de medio de
liberació n (0,01 M PBS con 2%
de Solutol HS, pH 7,4) en
◦C
condiciones de sumidero a 37
durante un má ximo de 6 meses.
Las condiciones de hundimiento
se definieron como
Concentració n de DTG igual o
inferior a 1/5 de su má xima
solubilidad (es decir
0,12 mg/mL de DTG) en
◦C
PBS/Solutol a 37 . Se
recogieron alícuotas de muestras
(1 mL) en varios puntos
temporales y se sustituyeron por
medio de liberació n fresco. El
medio de liberació n se eliminó
por completo y se sustituyó por
medio fresco cada semana para
mantener las condiciones de
hundimiento. La concentració n
de DTG en las muestras de
liberació n se cuantificó mediante
contenido de fá rmaco y la
presencia de cualquier producto
tiempo cero se utilizaron como
controles (es decir, una
concentració n de DTG del 100%).
2.12. Inhibición in vitro del VIH-1
Las cé lulas TZM-bl (Programa
de Investigació n y Reactivos de
Referencia del SIDA de los NIH,
nú mero de catá logo 8129, nú mero
de pasaje 2-6) se cultivaron en un
medio TZM-bl que contenía medio
Eagle modificado de Dulbecco
(Sigma) suplementado con 10%
de suero bovino fetal, 25 mM de
HEPES, 500 unidades/ml de
penicilina, 50 μg/m l de
aná lisis de HPLC. La liberació n
acumulada del fá rmaco se
normalizó con respecto a la
concentració n total del fá rmaco
en el implante determinada por el
aná lisis de HPLC. Todos los
experimentos se realizaron por
cuatriplicado. En el caso de los
PSI de DTG preparados mediante
la combinació n de inversió n de
fase y compresió n, la ciné tica de
liberació n de DTG se evaluó
incubando PSI de DTG de 5 mm o
10 mm de diá metro (20 mg 0,2
mg o 75 mg 0,5 mg
respectivamente) en 200 o 500
mL de medio de liberació n (0,01
M PBS pH 7,4 con 2% de Solutol
◦C
HS) a 37 durante un má ximo
de 6 meses en condiciones de
sumidero. Se recogieron alícuotas
de muestras (1 mL) y se
cuantificó la concentració n de
DTG mediante aná lisis de HPLC.
Todos los experimentos se
realizaron en
triplicados.
2.11. Estudios de estabilidad
acelerada
≤
Se seleccionaron las ISP con
DTG (65 % en peso de DTG) en
funció n de su ó ptima ciné tica de
liberació n de DTG para evaluar su
estabilidad a largo plazo en
condiciones de almacenamiento
acelerado. Las PSI de DTG se
almacenaron en un desecador
◦C/75% de
durante 6 meses a 40
humedad relativa (HR) en un
equipo Fisher Scientific Iso-
=
temp (Pittsburgh, PA). Se
±± las ISP (n 3) a varios
recogieron
intervalos de tiempo (0, 14 días,
1, 3 y 6 meses) y se analizaron
por HPLC para
estreptomicina y 2 mM de L-glutamina
(Cellgro) a 37
◦
C, 10% DE CO2. Para el
ensayo de inhibició n del VIH-1,
las células TZM-bl a una
densidad de 1
105
Se colocaron cé lulas por pocillo
en medio TZM-bl en placas de 96
pocillos. Tras 24 h de incubació n,
se eliminó el medio, se sustituyó
por 100 μl de diluciones 1:100 de
DTG y se incubó durante 30 min a
◦C
37 , 10% de CO2. Posteriormente,
las cé lulas se infectaron con VIH-
1JR-CSF añ adiendo 100 μl de
medio TZM-bl que contenía 40
μg/ml de DEAE-dextrano y 3 ×
103
TCIU de VIH-1JR-CSF por pocillo.
Tras 48 h de incubació n, se
cuantificó la actividad de
luciferasa de las cé lulas TZM-bl
P. Maturavongsadit et al.
infectadas con el VIH-1 utilizando
One-Glo lucif-
ensayo de luciferasa. Brevemente,
se eliminó el medio y se añ adió el
reactivo One-Glo de luciferasa
(Promega, Madison, WI)
complementado con 0,2% de
Triton X-100 para permitir la
medició n de la actividad de
luciferasa y para inactivar el
virus. La luciferasa se midió con
un espectró metro Spec- traMax
M3 (Molecular Devices,
Sunnyvale, CA) y los resultados se
normalizaron con respecto a la
actividad de luciferasa de las
cé lulas infectadas con el VIH en
ausencia de DTG y se expresaron
como porcentaje de disminució n
de la actividad de luciferasa. La
actividad de la luciferasa se midió
en 3 experimentos
independientes, y cada dilució n
se midió en cuatrillizos. Las
concentraciones efectivas del
fá rmaco necesarias para inhibir
la replicació n del virus en un 50%
(IC50) se calcularon ajustando los
datos a una curva sigmoidea
dosis-respuesta con una
pendiente variable utilizando
GraphPad Prism.
2.13. Preparación de las
existencias de VIH-1JR-CSF
para la infección
Las cé lulas 293 T se
◦C
cultivaron a 37 , 10% de CO2 en
medio Eagle modificado de
Dulbecco suplementado con
10% de suero bovino fetal, 25
mM de HEPES, 500
unidades/ml de penicilina, 50
μg/ml de estreptomicina y 2
mM de L- glutamina. La
morfología de las cé lulas se
comprobó regularmente al
microscopio. El stock viral del
VIH-1JR-CSF se generó
transfectando ADN proviral
(Keele et al., 2008; Koyanagi et
al., 1987; Ochsenbauer et al.,
2012; Permar et al., 2013;
Salazar-Gonzá lez et al., 2009)
en células T 293 (American
Tissue Culture Collection, nú mero
de catá logo CRL-3216, pasaje
< 10) utilizando Lipofectamine
2000 (Invitrogen). Las partículas
virales se
recogidas del medio de cultivo de
tejidos, previamente limpiadas
por centrifugació n (3000 RPM
◦C
durante 20 min a 4 ). Se
determinaron las unidades
infecciosas de cultivo tisular
(TCID)/ml del VIH mediante
titulació n en cé lulas TZM-bl. Las
cé lulas TZM-bl infectadas se
visualizaron con una solució n de
tinció n (4 μM de ferrocianuro de
potasio, 4 μ M d e ferricianuro de
potasio, 2 μ M d e cloruro de
magnesio, 0,4 mg/
ml X-gal) (Kovarovaetal.,2015;
Wahletal.,2012).
2.14. Análisis estadístico
± Los datos se representaron
como media y desviació n está ndar
(SD) y se analizaron con
GraphPad Prism (versió n 6.01)
mediante el análisis de una vía
de la varianza (ANOVA). Los
niveles de confianza se fijaron en
el 95% (p* < 0,05) y el 99% (p**
< 0,01).
3. Resultados
3.1. Caracterización de PSIs
preparados por inversión de
fase
3.1.1. Efecto de la forma y la
superficie del implante en la
cinética de liberación del
DTG
El á rea superficial de los
implantes só lidos puede influir en
la ciné tica de liberació n in vitro e
in vivo de los fá rmacos desde los
implantes (Goyanes et al., 2015).
El objetivo de este estudio es
investigar si el á rea superficial del
PSI influye en la ciné tica de
liberació n del DTG. Utilizamos el
PSI fabricado por inversió n de
fase de ISFI como prototipo para
entender este impacto. En este
caso, tres formas de implante
6
Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068
(cubo, cubo y esfera) se
prepararon para investigar el
efecto de
superficie del implante en la
ciné tica de liberació n del
fá rmaco. Las á reas superficiales
específicas (SSA, SA/V)
determinadas para los PSI
cuboides, cú bicos y esfé ricos
fueron de 3,99, 2,49 y 0,74
mm3/mg, respectivamente
(Fig.2A). Las PSI con mayor
Los SSA (cubo y cubo) mostraron
un mayor estallido despué s de
24 h (20% cubo y 18% cubo, p <
0,01) y una cinética de
liberació n má s rá pida de DTG
(p < 0,0001) en comparació n
con un estallido
significativamente menor (2%) y
una ciné tica de liberació n má s
lenta obtenida con los
implantes esféricos (Fig. 2B).
En puntos de tiempo
posteriores (> 49 días), las
propiedades de hinchamiento
de los PSI tuvieron un impacto
significativo en la ciné tica de
liberació n de DTG. Despué s de
~35 días de incubació n en PBS
◦C
a 37 , los implantes cuboides y
cú bicos tuvieron un aumento
significativo (20% d35-d63, p <
0,05) en el porcentaje de
liberació n de DTG debido al
hinchamiento (Fig. 2C). Los
implantes esfé ricos mostraron
un aumento significativo (75%
d49-d105, p < 0,0001) en
Porcentaje de liberació n de DTG
tras ~9 semanas de incubació n
◦C.
en PBS a 37
(Fig. 2B, C). Se realizaron aná lisis
de imá genes SEM de las PSI de
DTG despué s de la incubació n
durante 8, 12 y 16 semanas como
mé todo de corroboració n para
investigar el efecto ≥ de la
microestructura de las PSI en la
liberació n del fá rmaco de las PSI
con el tiempo. Las imá genes
mostraron una cantidad
reducida de DTG a lo largo del
tiempo en cada forma de PSI
(Fig.2D). A las 8 semanas, las PSI
con mayor SSA (cubo y cubo)
mostraron menos contenido de
DTG en comparació n con las PSI
esfé ricas. No se detectó DTG en
las PSI cuboides y cú bicas
despué s de 12 y 16 semanas, lo
que indica la finalizació n de la
liberació n del fá rmaco, lo que
concuerda con los datos de
liberació n determinados por el
aná lisis de HPLC (Fig.2B).
3.1.2. Efecto de la relación
de peso PLGA:NMP en la
carga y la cinética de
liberación del fármaco
Una alta carga de fá rmaco en
la formulació n inicial de ISFI,
combinada con un alto porcentaje
de atrapamiento del fá rmaco
durante el paso de inversió n de
fase, da como resultado una alta
carga de fá rmaco en la PSI final.
Los resultados mostraron que la
concentració n de DTG en las
formulaciones ISFI iniciales
aumentó con el incremento de la
proporció n de disolvente y fue
mayor en 1:10 p/p PLGA:NMP
(~280 mg/mL). La concentració n
má s baja de DTG (~124 mg/mL)
se obtuvo con la formulació n ISFI
1:2 p/p de PLGA:NMP (Fig.3A).
La formació n de implantes
só lidos iniciales mediante
inversió n de fase in situ es un
paso necesario e importante para
generar con éxito PSI con un alto
porcentaje de carga de fá rmaco.
Los implantes só lidos se
formaron con é xito en forma de
esferas con formulaciones ISFI
que contenían 1:2, 1:4, 1:6 y 1:8
p/p de PLGA:NMP despué s de la
incubació n en PBS durante 24 h a
◦C
37 . Con un mayor contenido de
disolvente (1:10 p/p PLGA/NMP)
los implantes esfé ricos só lidos no
pudieron
tras la inyecció n de la
formulació n ISFI en PBS y la
◦C
incubació n durante 24 h a 37
(Fig.3B).
Se determinó la eficacia del
atrapamiento del fá rmaco con
formulaciones ISFI que dieron
lugar a implantes só lidos
esfé ricos estables (1:2, 1:4, 1:6 y
1:8 con PLGA:NMP) para
determinar la concentració n
má xima de DTG que puede
formularse en un PSI. El
porcentaje de atrapamiento de
DTG en los implantes só lidos se
determinó cuantificando el DTG
liberado en el PBS durante el
paso de inversió n de fase. Para
las cuatro formulaciones de ISFI
probadas, el porcentaje de
atrapamiento de DTG fue del 90%
y aumentó con el aumento de la
cantidad de NMP en la
formulació n (Fig.3A).
La distribució n del fá rmaco y
la microestructura de los
implantes só lidos pueden influir
en la ciné tica de liberació n del
fá rmaco in vitro e in vivo
(Benhabbouretal., 2019; Fu y Kao,
2010). El aná lisis de imá genes
SEM de los PSI esfé ricos de DTG
mostró que el DTG exhibía una
P. Maturavongsadit et al. Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068
distribució n diferente en los PSI
generados a partir de
formulaciones ISFI que
contenían diferentes
proporciones de PLGA:NMP (Fig.
3C). Las formulaciones ISFI que
contenían la menor cantidad de
NMP (1:2 p/p PLGA/NMP)
dieron lugar a PSIs con DTG
distribuido uniformemente por
todo el implante de MATRIZ
polimé rica densa (Fig.3C). Por
otro lado, las formulaciones ISFI
que contenían cantidades má s
elevadas de NMP (1:4, 1:6 y 1:8
en peso de PLGA:NMP) dieron
lugar a PSI con DTG distribuidos
principalmente en el nú cleo del
implante, lo que puede
atribuirse a una inversió n de
fase má s rá pida con mayores
cantidades de NMP en la
formulació n (Fig.3C).
Para seguir investigando el
efecto de la distribució n del
fá rmaco en las ISP esfé ricas
y su microestructura en la
ciné tica de liberació n del
fá rmaco, se realizaron estudios
de liberació n in vitro durante
SEIS meses. Los resultados
mostrados en la Fig. 3
demuestran que las PSI esfé ricas
generadas a partir de
formulaciones ISFI que
contienen el

7
Fig. 2. Efecto de la superficie del implante en la cinética de liberació n del fármaco. A) Dimensiones del implante, peso y superficie específica para tres formas
diferentes (cubo, cubo y esfera). La superficie específica se cuantificó utilizando el peso y las dimensiones del PSI (mm2/mg, n = 4); B) Cinética de liberació n in vitro
◦C
de DTG a partir de PSI con diferentes formas incubadas a 37 durante 140 días. Todos los implantes (~30 g, n = 4) contenían ~10 wt% de DTG. El inserto del
grá fico representa la cinética de liberació n de DTG durante los 2
semanas; C) Imá genes de los PSI de DTG antes y despué s de completar los estudios de liberació n. Se observó un aumento de la superficie específica en todas las
formas de implante; D) Imá genes de SEM que representan imá genes de secció n transversal de los PSI de DTG con diversas formas después de la incubació n en PBS a
◦C
37 durante 8, 12 y 16 semanas. Los símbolos blancos * representan el DTG en los PSI de DTG.

La menor cantidad de NMP (1:2 p/p PLGA/NMP) dio lugar a la menor PLGA/NMP) dieron lugar a
carga de DTG (20 p/p DTG) y mostró la ciné tica de liberació n má s lenta
(~5% en la semana 4). Por otro lado, las PSI esfé ricas generadas a partir
de las for- mulaciones ISFI con el mayor contenido de NMP (1:8 p/p
en la carga má s alta de DTG/PLGA (65 % en peso de DTG) y mostró
la cinética de liberació n má s rá pida (100% en la cuarta semana, Fig.
3D). La tasa media de liberació n de DTG en los primeros 42 días se
calculó utilizando las pendientes de las ecuaciones lineales generadas a
partir de los puntos de datos de los primeros 42 días y
Fig. 3. Efecto de la relació n de peso PLGA:NMP en las formulaciones iniciales de ISFI (1:2, 1:4, 1:6, 1:8 y 1:10 p/p PLGA/NMP) sobre: A) Carga y porcentaje de
◦C
atrapamiento de DTG en las ISFI, y cinética de liberació n in vitro de DTG a 37 durante 180 días (n = 4). B) Estructuras de las PSI formadas por inyecció n directa de
◦C
soluciones de ISFI (n = 4) en PBS a 37 . C) Imá genes de SEM que representan secciones transversales de PSI de DTG generadas a partir de formulaciones iniciales de
ISFI que contienen diversas proporciones de PLGA/NMP (1:2, 1:4, 1:6 y 1:8 p/p de PLGA/NMP).
D) Cinética de liberació n in vitro de las ISP de DTG que contienen distintas proporciones de DTG:PLGA (20%, 40%, 55% y 65% p/p de DTG/PLGA preparadas a partir
de las ISP de PLGA/NMP de 1:2, 1:4, 1:6 y 1:8 p/p, respectivamente). El recuadro representa la ciné tica de liberació n en los primeros 7 días. Todas las barras de error
representan la desviació n está ndar para n = 4.
estimado en 0,80, 12,72, 55,34 y 309,76 μ g / d í a para los PSI pre
pared utilizando formulaciones con una proporció n de 1:2, 1:4, 1:6 y 1:8
p/p de PLGA:NMP respectivamente (Fig. 3A). La distribució n del fá rmaco
y los aná lisis de microestructura de las PSI de DTG despué s de la
incubació n durante 4, 8, 12 y 16 semanas se utilizaron como mé todo de
corroboració n para correlacionar el efecto de la distribució n de DTG
dentro de la PSI y el estado físico de DTG (cristalino frente a amorfo) con
su ciné tica de liberació n in vitro. Los resultados demostraron una
disminució n del contenido de DTG debido a la liberació n del implante y
una disminució n del contenido de polímero debido a la degradació n
durante 4-16 semanas para las PSI preparadas con formulaciones de
relació n 1:2, 1:4 y 1:6 w/ w PLGA:NMP. En comparació n, no hubo DTG en
los PSIs preparados con 1:8 p/p de PLGA/NMP despué s de 4 semanas de
incubació n (Fig. Suplementaria 2, 3), lo cual está de acuerdo con los datos
de liberació n determinados por el aná lisis de HPLC (Fig.3D). Sobre la
base de la liberació n sostenida
ciné tica (> 6 meses) y tasa de liberació n ~ 55 μg/día, se seleccionó la
proporció n 1:6 p/p de PLGA/ NMP como la formulació n ó ptima para
generar PSI con
altas cargas ú tiles de fá rmacos que pueden traducirse en concentraciones×
efectivas (4 PAIC90) conocidas como requisito de referencia para inhibir
la infecció n del VIH (Adams et al.,2013; Radzioetal.,2015;
Andrewsetal.,2014).
3.1.3. Efecto del co-disolvente en la carga y la cinética de liberación del
fármaco
La solubilidad del fá rmaco en una formulació n ISFI puede mejorarse
utilizando un co
sistema de disolventes. Sulfó xido de dimetilo (DMSO) y Gelucire
(44/14)
(Gel) se investigaron como co-solventes con NMP y mostraron un
aumento significativo de la solubilidad del DTG en comparació n con el
NMP solamente. Con DMSO como cosolvente (9:1 p/p NMP/DMSO) la
solubilidad del DTG aumentó significativamente
aumentó de ~231,89 mg/mL (1:6 p/p PLGA:NMP) a ~276,64 mg/ mL
(1:6 p/p PLGA/(NMP/DMSO 9:1 p/p), p < 0,0001). Con Gelucire (44/14)
(Gel), la solubilidad del DTG aumentó de ~231,89 mg/mL (1:6 p/p
PLGA:NMP) a ~259,59 mg/mL (1:6 p/p PLGA/(NMP/Gel 9:1 p/p), p
= Las PSI esfé ricas generadas con ISFI
0,0004) (Fig.4A).
Las formulaciones que contenían NMP solamente o un sistema de co-
≥
disolvente mostraron un alto porcentaje de atrapamiento de DTG ( 96%)
(Fig. 4A). Basá ndose en los datos de solubilidad, se seleccionó el DMSO
como co-disolvente para investigar la ciné tica de liberació n in vitro del
DTG a partir de las PSI con mayor contenido de DTG. Como se muestra en
la Fig.4B, las PSI esfé ricas generadas con formulaciones 1:6 p/p de
PLGA:NMP y 1:6 p/p de PLGA/ (NMP/DMSO 9:1) dieron como resultado
un 59,67% y un 64,14% de DTG respectivamente. Ambas PSI esfé ricas
mostraron una liberació n inicial mínima de DTG en las primeras 24 horas
(~5% de DTG). La liberació n media de DTG
en los primeros 42 días, calculada a partir de la pendiente lineal de orden
cero, fue de ~63 y 73 μg/día, sin diferencias significativas (p > 0,05)
p a r a las PSI de DTG preparadas a partir de las formulaciones 1:6
PLGA/NMP y 1:6 PLGA/(NMP: DMSO) respectivamente. En conjunto,
estos datos mostraron que el uso de DMSO como co-solvente mejoró
significativamente la carga de DTG en las PSIs
sin alterar la ciné tica de liberació n del fá rmaco in vitro.
Fig. 4. Efecto de los co-solventes en las formulaciones ISFI sobre la solubilidad del fá rmaco y la cinética de liberació n. A) Carga de DTG y porcentaje de atrapamiento
◦C
en los PSI; B) Cinética de liberació n in vitro de los PSI de DTG a 37 durante 140 días. Las PSI de DTG se prepararon con formulaciones de PLGA/NMP 1:6 p/p y
PLGA/(NMP/DMSO, 9:1) ISFIs 1:6 p/p. La DTG se cargó a una concentració n casi saturada en cada formulació n (~200 mg/g y 250 mg/g respectivamente). El
recuadro representa la cinética de liberació n en los primeros 7 días. Todas las barras de error
representan la desviació n está ndar para n = 4; C) Resumen de la ciné tica de liberació n, incluyendo la liberació n inicial en rá faga y la tasa de liberació n de orden cero
en los primeros 42 días para las ISP descritas en B.

3.2. Caracterización de PSIs fabricados por inversión de fase y de DTG resultante en el polvo micronizado de DTG-PLGA formado por
compresión directa inversió n de fase fue de ~650 mg/g determinada por análisis de HPLC
(Fig. 5C suplementaria). Utilizando este polvo micronizado de DTG-
3.2.1. Propiedades físicas de los DTG PSI PLGA, el PSI de tamañ o de rató n final (5 mm de diá metro exterior/0,87
Para lograr una dosis traslacional de DTG≥( 600 mg (Murray et al., mm de grosor, 20 mg) utilizado para los estudios de liberació n in vitro y
2018; Clementetal.,2020)) en una formulació n ISFI inyectable 1:6 p/p: fabricado por compresió n directa contenía 12,4 mg (~65% en peso) de
(NMP/DMSO, 9:1 p/p), se requeriría un total de ~2,2 mL como DTG. Es importante destacar que, utilizando un proceso de compresió n
administració n subcutá nea o intramuscular. La formació n de PSI por directa, se pueden producir PSIs
inversió n de fase de una formulació n ISFI da lugar a implantes só lidos con un amplio rango de carga de fá rmaco (7-85 wt% DTG) ajustando el
sin disolventes (Fig. 5A-1); sin embargo, se necesitaría un implante de fá rmaco
gran tamañ o (por ejemplo, 10 mm de diá metro exterior/50 mm de en la formulació n inicial del ISFI (Fig. 5D).
longitud) para poder alojar 600 mg de DTG (Fig. 5A suplementaria).
Utilizando un mé todo de compresió n directa combinado con inversió n de
fase (Fig. 5A), se puede formular una dosis traslacional de 600 mg de
DTG en un implante PSI pequeñ o y compacto (por ejemplo, 10 mm de
diá metro exterior/9 mm de grosor (Fig. 5B suplementaria) o 4 mm de
diá metro exterior/56 mm de longitud, similar al × tamañ o del implante
Nexplanon® para 1000 mg de PSI). Esta dosis puede aumentarse aú n
má s utilizando implantes de mayor tamañ o (por ejemplo, 40 mm 4
mm en forma de varilla) similares a los productos comercializados
existentes (por ejemplo, Nexplanon®) (Schlesinger et al., 2016;
Barrett et al., 2018). Partiendo de 250 mg/g de DTG en una
formulació n ISFI de 1:6 p/p de PLGA:(NMP/DMSO), la concen- tració n
 Se llevaron a cabo aná lisis DSC del DTG puro, de los PSI placebo y de físico en el precursor de polvo micronizado utilizado para generar PSI por
los PSI DTG (600 mg/g de DTG) para determinar el estado físico y la el mé todo de compresió n. Como se muestra en la Fig.5C, el DTG se
temperatura de fusió n del DTG en los PSI en comparació n con su forma mezclaba mayoritariamente con el PLGA (#) en el polvo micronizado DTG-
pura. El aná lisis TGA fue PLGA con presencia de un pequeñ o porcentaje de
antes del aná lisis DSC para determinar la temperatura de DTG en estado cristalino (*) similares a los del DTG puro (Fig.5C).
◦C
descomposició n del DTG, que era de ~325 (Fig. 6 suplementaria).
Como se muestra en la Fig. 5B, el DTG puro tenía un pico endoté rmico 3.2.2. Propiedades mecánicas y microestructura de la PSI
◦C que Las propiedades mecá nicas que permiten la manipulació n y el uso
agudo a 189 correspondía a la temperatura de fusió n del DTG. El
adecuados de los implantes só lidos son esenciales para garantizar el buen
pico de fusió n del DTG cuando se formuló en el PSI fue sustancialmente
funcionamiento del dispositivo. Se prepararon PSI de placebo utilizando
menor en intensidad debido a la conversió n parcial del DTG a un estado
tres fuerzas de compresió n diferentes (0,5, 1,0 y 1,5 US.ton, 10 mm de
amorfo cuando se formuló en el PSI
diá metro), y se midió el mó dulo de Young y la resistencia a la fractura de
en comparació n con el DTG puro totalmente cristalino. Ademá s, la
temperatura de fusió n del DTG en el PSI era similar a la del DTG puro los PSI resultantes. La resistencia a la fractura mide la carga má xima
◦C (tensió n) que puede soportar un implante só lido antes de fracturarse. Los
(~182 )
resultados mostraron que la resistencia a la fractura de los PSI era
indicando que el DTG se mantuvo estable cuando se formuló en un PSI
inversamente proporcional a la fuerza de compresió n aplicada en el
(Fig.5B). Se llevaron a cabo aná lisis de imá genes SEM como mé todo de
proceso de fabricació n.
corroboració n para analizar la microestructura del fá rmaco y el estado

Fig. 5. Preparació n y caracterizació n de las PSIs DTG. A) Proceso de fabricació n de PSIs por inversió n de fase y compresió n directa utilizando una prensa de tabletas
de sobremesa: (1) Preparació n de la formulació n ISFI y del depó sito só lido por inversió n de fase; (2) Eliminació n del disolvente residual y micronizació n de los
depó sitos só lidos secos; (3) Compresió n del polvo DTG-PLGA micronizado para formar las PSIs DTG. B) Termogramas DSC de DTG puro, PSIs de placebo y PSIs de
DTG. C) Imágenes SEM del polvo DTG-PLGA micronizado y del DTG puro. Los símbolos blancos * y # representan el DTG y el PLGA respectivamente en el polvo DTG-
PLGA micronizado.
P. Maturavongsadit et al.
La mayor resistencia a la fractura (60 MN/m2) se registró en los PSI fabri-
cado con la menor fuerza de compresió n (0,5 US.ton), en comparació n
con 55 MN/m2 (p < 0,01) y 45 MN/m2 ( < 0,01) para los PSI
p
fabricados con 1 US.ton y 1,5 US .ton respectivamente (Fig. 6A).
El mó dulo de Young mide la resistencia de un implante só lido a la
deformació n elá stica bajo una carga específica y su capacidad para
recuperar su forma original una vez eliminada la fuerza de tensió n. Los
resultados mostraron que los PSI
fabricados con una fuerza de compresió n má s alta (1,5 US.t o n ) eran má s
rígidos y tenían un mó dulo de Young má s alto (50 MPa) en comparació n
con 42 MPa (p < 0,01) y 38 MPa (p < 0,01) para los PSI fabricados con
fuerzas de compresió n má s bajas (1 US.t o n y 0,5 US.t o n
respectivamente) (Fig. 6B). Analizando el
10
Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068
La microestructura de las PSI mediante imá genes de SEM demostró que
el uso de fuerzas de compresió n má s elevadas dio lugar a unas PSI má s
densas y compactas (Fig.6C). Estos datos concuerdan con el mayor
mó dulo de Young (50 MPa) obtenido con las PSI má s compactas y, por
tanto, má s rígidas, fabricadas con la mayor fuerza de compresió n (1,5
US.ton). Estos datos tambié n demuestran que las PSI fabricadas con
diferentes fuerzas de compresió n presentan propiedades mecá nicas
similares a las de los implantes só lidos utilizados clínicamente (Kerin et
al.,1998; Stewartetal.,2020).
Fig. 6. Pruebas mecá nicas de PSI y microestructura de las PSI. Se evaluaron las
propiedades mecá nicas de las pastillas de PSI placebo (10 mm de diá metro)
fabricadas con varias fuerzas de compresió n (0,5, 1 y 1,5 US.ton). (A)
Resistencia a la fractura de las PSI de placebo medida mediante un ensayo de
flexió n en tres puntos con una célula de carga de 35 N y a una velocidad de
desplazamiento de 0,05 mm/s hasta la fractura. (B) Mó dulo de Young de los PSI
calculado a partir de las pendientes de tensió n/deformació n del ensayo de
flexió n en tres puntos. Aná lisis estadístico:
P. Maturavongsadit et al. Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068
ANOVA con pruebas de comparaciones mú ltiples de Tukey, **p < 0,01. C)
Imágenes de SEM que representan imágenes de secció n transversal de los PSI de
placebo fabricados con diferentes compresiones.
de las fuerzas de seguridad.

10
P. Maturavongsadit et al. Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068

3.3. Efectos de los parámetros de la formulación de la PSI en la cinética de
liberación in vitro
3.3.1. Efecto del peso molecular del PLGA
El peso molecular (MW) del PLGA puede utilizarse para afinar la
liberació n del fá rmaco
La ciné tica de los sistemas de administració n basados en PLGA
(JalilyNixon,1990; Ogawa et al., 1988; Jain et al., 2000). En general, para
los implantes só lidos a base de PLGA, la liberació n del fá rmaco en la fase
inicial, dentro de los primeros 30 días, se rige principalmente por un
mecanismo de difusió n y no está influida por la

Fig. 7. Efecto del peso molecular del PLGA, de la carga de DTG y de la carga
previa o posterior sobre la cinética de liberació n in vitro del DTG. A) Cinética de
liberació n de DTG a partir de PSIs fabricados con diferentes pesos moleculares
de PLGA (MW 11 kDa, 27 kDa, 54 kDa). La carga de DTG se mantuvo constante
en ~570 mg/g en todas las PSI. Las barras de error representan la desviació n
está ndar de n = 3 muestras. Aná lisis estadístico: ANOVA con pruebas de
comparaciones mú ltiples de Tukey, *p < 0,05. B) Cinética de liberació n de DTG
de las PSI fabricadas con diversas cargas de DTG
(225, 450, 550, 650 y 850 mg/g). Las barras de error representan la desviació n

1
P. Maturavongsadit et al. Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068
está ndar de n = 3 muestras. La "X" del grá fico representa el punto de tiempo en superiores a 30 días, la carga de
el que los PSI (DTG-225 fá rmaco en las PSI tuvo un efecto mé todo de carga, la ciné tica de
y DTG-450) se hincharon significativamente y cambiaron de tamañ o. Aná lisis
significativo en la ciné tica de liberació n fue má s rá pida (18,85
estadístico: ANOVA con pruebas de comparaciones mú ltiples de Tukey, **p < μ g / d í a de DTG desde el d30-
liberació n.
0,01. C) Cinética de liberació n de DTG a partir de PSIs fabricados con d130, p < 0,05 (Cohen etal.,
diferentes fuerzas de compresió n (0,5, 1,0, 1,5 US.ton). La concentració n de 2013)) y tuvo mayor
DTG se mantuvo constante en 650 mg/g. Las barras de error representan la 3.3.3. Efecto de la fuerza de variabilidad, lo que podría
desviació n está ndar. compresión atribuirse a una menor
viació n de n = 3 muestras. D) Cinética de liberació n del DTG a partir de los PSI Se investigó el efecto de la homogeneidad en la distribució n
fabricados por el método de precarga y el método de postcarga. La fuerza de compresió n en el del fá rmaco.
concentració n de DTG se mantuvo constante en 650 mg/g. Las barras de error
representan la desviació n estándar de n = 3 muestras. E) Resumen de la cinética proceso de fabricació n de la PSI de los PSI mediante el mé todo de
de liberació n, incluyendo la liberació n inicial y la tasa de liberació n de orden cero sobre la ciné tica de liberació n del postcarga.
de las PSIs descritas en A-D. DTG. Se prepararon PSIs de DTG
con diferentes fuerzas de 3.4. Estudios de estabilidad
peso molecular (MW) del PLGA. el aumento de la carga de compresió n (0,5, 1,0 y 1,5 US.ton, acelerada
El efecto del peso molecular del fá rmaco en las PSI en los 10-mm de diá metro) con una
PLGA es má s significativo una vez primeros 30 días (Fig. 7B, E). Las concentració n constante de DTG La estabilidad del DTG en las
que se inicia la degradació n del PSI que contenían una mayor (650 mg/g). Los resultados no PSI de DTG se determinó en
PLGA por hidró lisis de é steres. proporció n de peso de DTG/ mostraron ningú n efecto condiciones de almacenamiento
Un mayor peso molecular del PLGA mostraron una mayor ◦C
significativo de la fuerza de de estabilidad acelerada (40 y
PLGA suele dar lugar a una distribució n de DTG en todo el compresió n utilizada en el 75% RH) durante 6 meses. El
degradació n má s lenta de la implante, lo que dio lugar a una proceso de fabricació n sobre la DTG permaneció químicamente
columna vertebral del polímero ciné tica de liberació n má s liberació n de DTG de las distintas estable en los PSI durante 6
(Jain,2000; Zhouetal.,1998). rá pida. Los PSIs con la mayor PSI (Fig.7C, E). Todos los PSIs meses sin cambios
Nuestros resultados no carga de DTG (850 mg/g, 85 wt alcanzaron una liberació n de en la concentració n de la carga y
mostraron diferencias % DTG) alcanzaron una ~35% en el día 112 y tuvieron la no presencia de picos de
significativas en la ciné tica de liberació n del 40% en el día 35 una tasa de liberació n de DTG degradació n, tal como se
liberació n de DTG para los PSIs (162,75 μg/día DTG) en similar (~75 μg/día de DTG) determinó mediante el aná lisis de
hechos con diferentes MWs de comparació n con el 34% dentro de la ciné tica de liberació n HPLC (Fig. 8A, C). Tambié n se
PLGA (11, 27 y 54 kDa) durante (102,31 μg/día DTG), de orden cero. Estos resultados controlaron los PSI de DTG para
120 días (Fig. 7A, E). Este El 30% (77,72 μ g / d í a d e demuestran que las propiedades ver si había cambios en su
resultado puede atribuirse a los D T G ), el 23% (22,44 μ g / d í a de mecá nicas de las PSIs cargadas de aspecto, color o tamañ o. No
comprimidos de PSI densamente DTG) y el 6% (6,81 μ g /
fá rmaco pueden ser optimizadas hubo cambios en el aspecto físico
empaquetados en combinació n día de DTG) para 650 (65 wt%
por la fuerza de compresió n apariencia o tamañ o se observó
DTG), 550 (55 wt% DTG), 450 (45 despué s de 0, 14, 30, 90 o 180
con la naturaleza hidrofó bica del aplicada independientemente de
wt% DTG) días de almacenamiento a 40
DTG, que puede limitar la y 225 mg/g (22,5 wt% DTG) PSIs la ciné tica de liberació n del
◦C/75%
difusió n del agua y ralentizar la fá rmaco. RH condiciones de
respectivamente (p < 0,01). El
hidró lisis del é ster del PLGA. El almacenamiento (Fig.8B).
efecto de la carga de fá rmaco
efecto del MW del PLGA sobre las propiedades de 3.3.4. Efecto del proceso de
se convirtió en significativa (p < hinchamiento de las PSI y la incorporación del fármaco 3.5. Actividad del DTG en los PSI
0,05) tras 13 3 días de ciné tica de liberació n del fá rmaco La fabricació n de PSIs
in cubaci ó n en PBS a 37 fue significativo despué s de ~35 cargados de fá rmacos puede Se evaluó el efecto de la
◦C
◦ C. En el día 217 (ú ltimo días de incubació n a 37 . Este realizarse incorporando fá rmacos fabricació n de la PSI en la
punto temporal analizado), la efecto se observó en la formulació n inicial de ISFI actividad de la DTG en la DTG-PSI
liberació n de DTG alcanzó el con los PSI que tenían los dos (denominada precarga) o almacenada durante 6 meses a 40
78% en contenidos má s bajos de DTG ◦C/75%RH
añ adiendo fá rmacos a un polvo de . La DTG se eluyó de la
Las PSIs hechas con el MW de (22,5 % en peso y 45 % en peso polímero micronizado PSI en PBS. La actividad
PLGA má s bajo (11 kDa) DTG), lo que resultó en un (denominada postcarga). inhibidora del VIH de la DTG se
comparado con el 66% y el 51% aumento significativo de la tasa de determinó como la mitad má xima
Intentamos investigar el efecto de
con los MW de PLGA de 27 kDa y liberació n de DTG en el día 49
(6,81 μg/día a 39,47 μg/día, p < la etapa de incorporació n del concentració n inhibitoria (IC50)
54 kDa respectivamente (Fig.7A, fá rmaco en la ciné tica de utilizando cé lulas indicadoras
0,01) para el PSI de 225 mg/g
E). liberació n in vitro de los PSI. Los TZM-bl. La IC50 de la DTG eluida
(22,5% en peso) de DTG y en el
día 63 (22,44 μg/día a 72,79 resultados demostraron que en del implante (0,6 ng/ml) no fue
3.3.2. Efecto de la carga de μg/día, p < 0,01) para el PSI de las ISP en las que se añ adió DTG significativamente diferente de la
fármacos 450 mg/g (45% en peso) de DTG mediante el mé todo de precarga, actividad de la DTG en la solució n
Para investigar el efecto de la (Fig. 7B). Curiosamente, las ISP el DTG mostró una ciné tica de recié n preparada (Fig.9) y es
carga de fá rmaco en la ciné tica de que contenían mayores liberació n má s lenta y sostenida consistente con la IC50 de la DTG
liberació n, se prepararon PSI de concentraciones de DTG (> 50 % durante 130 días (16,09 μg/día de reportada en las cé lulas TZM-bl
DTG con diversas en peso) no mostraron este DTG desde d30-d130) (Fig.7D, E). (Anstett et al., 2015;
concentraciones de DTG (225, mismo efecto y mantuvieron una En las ISP en las que se añ adió Liangetal.,2015).
450, 550, 650 y 850 mg/g) ciné tica de liberació n sostenida DTG utilizando el mé todo de
variando la concentració n de durante 1 2 0 días (Fig. 7 B , E).
poscarga 4. Debate
DTG en las formulaciones Estos resultados demuestran que
iniciales de PLGA/(NMP:DMSO) la ciné tica y la duració n de la
El desarrollo de implantes
de 1:6 p/p. Los resultados liberació n del fá rmaco pueden
basados en polímeros
mostraron que todas las ISFIs ajustarse y controlarse variando
biodegradables que puedan
exhibieron una liberació n la carga del fá rmaco dentro de las
proporcionar una administració n
mínima de DTG en las primeras PSI (Fig.7E). Estos resultados
sostenida de fá rmacos durante
24 h (~3%). La ciné tica de tambié n demuestran que para
varios meses despué s de una
liberació n de DTG aumentó con duraciones de liberació n

2
P. Maturavongsadit et al. Revista Internacional de Farmacéutica: X 3 (2021) 100068
ú nica administració n es un á rea de hasta el 85% en peso de DTG
de gran demanda e importancia en los PSI. La compresió n directa
en una serie de aplicaciones permite la fabricació n de plantas
mé dicas. El PLGA es uno de los só lidas altamente compactas con
polímeros má s utilizados en el un alto porcentaje de carga de
desarrollo de formulaciones y fá rmaco (hasta el 85% en peso
sistemas de administració n de de DTG) en la PSI final (Fig.
fá rmacos, incluidos los Suplementaria 5D). Como
implantes só lidos (Jain, 2000; resultado, los PSI de DTG pueden
Widmer etal., 1998a; Makadia y fabricarse para acomodar una
Siegel, 2011; Lee y Pokorski, dosis traslacional de 600 mg
2018). Hasta ahora, los (Murray al.,2018; Clement et
implantes só lidos de PLGA se al.,2020) en un ú nico implante en
han fabricado mediante forma de varilla con una
extrusió n en caliente, (Widmer dimensió n de 4 mm de diá metro
et al., 1998b; Wang et al., 2010) exterior/56 mm de longitud,
fundició n con disolvente similar a los productos
(Siegeletal.,2002) o moldeo por comercializados existentes (por
compresió n (Rabinetal.,2008; ejemplo, Nexplanon®), que
Siegeletal.,2006). Estos mé todos pueden acomodar una dosis de
tienen varias limitaciones, como DTG de 1000 mg/implante
la necesidad de un calor elevado, (Schlesingeretal.,2016;
una presió n alta o el uso de Barrettetal.,2018).
grandes volú menes de El estado físico del DTG evaluado
disolventes orgá nicos, que por DSC y SEM mostró que el DTG
limitan el tipo de fá rmacos que era semicristalino y estable
pueden formularse o la cuando se formulaba en PSI y se
distribuía
escalabilidad del proceso. En
este artículo, presentamos por
primera vez un proceso de
fabricació n de implantes só lidos
de PLGA que no requiere calor ni
presió n elevados ni grandes
volú menes de disolventes
orgá nicos. Este proceso combina
una inversió n de fase y un
proceso de micronizació n para
formar un polvo cargado de
fá rmaco sin disolventes, que
luego se utiliza para formar un
implante só lido mediante la
compresió n de comprimidos. El
implante final puede diseñ arse
con diferentes formas o tamañ os
para adaptarse a la ciné tica de
liberació n del fá rmaco requerida
y mejorar el cumplimiento del
paciente. En este proceso, la
carga de fá rmacos puede
realizarse de dos maneras:
incorporando un fá rmaco en la
formulació n inicial de ISFI antes
de la etapa de inversió n de fase
o
incorporando un fá rmaco en un
polvo de PLGA micronizado
preformado tras la
fase de inversió n de fase.
Nuestros resultados mostraron
que la carga de DTG en la
formulació n inicial de ISFI antes
de la inversió n de fase dio lugar
a PSIs que mostraron una
liberació n de DTG má s
controlada y sostenida. Este ≥
proceso de carga de fá rmaco
tambié n permitió una alta
capacidad de carga de fá rmaco

3
 ◦C y 75% de HR
Fig. 8. Estudios de estabilidad acelerada de las PSI de DTG. A) Concentració n de DTG en las PSI antes (día 0) y después del almacenamiento a 40 durante
◦C y 75%
14, 30, 90 y 180 días. B) Aspecto físico de las ISP con DTG antes (día 0) y después de su almacenamiento a 40 de HR durante 14, 30, 90 y 180 días. C)
◦C
Cromatogramas de HPLC del DTG extraído de las ISP antes (día 0) y después del almacenamiento a 40 y 75% de HR durante 14, 30, 90 y 180 días.

Fig. 9. Actividad de DTG en PSI. La capacidad de la

DTG para inhibir el VIH se determinó en células
indicadoras TZM-bl con un gen reportero de
luciferasa. Los resultados se normalizaron con
respecto a la actividad de luciferasa de las cé lulas
infectadas con el VIH en ausencia de DTG. La
actividad inhibitoria de la DTG se expresó como
porcentaje de disminució n de la actividad de la
luciferasa. (A) Actividad inhibitoria de la DTG eluida
(rojo) y pura (azul), los datos se ajustaron a una dosis
sigmoidea-
curva de respuesta, cada dilució n medida en
cuadruplicados. Se muestra la media ± E.S.M. (B)
IC50, se muestra la media ± error está ndar de la
media (S.E.M).

homogé neamente dentro del implante só lido preparado por inversió n de forma de la misma. Las ISP con mayor á rea superficial dan lugar a una
fase, micronizació n y compresió n (Fig. 5). Sin embargo, la distribució n cinética de liberació n má s rá pida porque permiten una difusió n má s
del DTG en los PSIs preparados por inversió n de fase de la formulació n rá pida del fá rmaco y una mayor penetració n del agua (Fig. 2). Ademá s,
ISFI fue variable y controlada ú nicamente por la tasa de inversió n de fase la cinética de liberació n de fá rmacos a partir de una PSI puede
(Fig. 3). Concretamente, con un mayor contenido de disolvente NMP ajustarse en funció n de la proporció n inicial de PLGA:NMP en la
(menor PLGA:NMP), la tasa de inversió n de fase fue má s rá pida y dejó la formulació n precursora de la ISFI. Una mayor proporció n de
mayoría de los fá rmacos en el nú cleo del implante só lido (Fig.3C). Los PLGA:NMP dio lugar a un mayor porcentaje de PLGA en la MATRIZ DE LA
estudios de estabilidad acelerada mostraron que el DTG conservaba sus PSI, lo que condujo a una ciné tica de liberació n má s lenta (Fig. 3). En
propiedades físicas y químicas en el PSI otras palabras, una mayor proporció n de PLGA:NMP dio lugar a
◦C/75%RH
durante 6 meses cuando se almacena a 40 , sin que se produzcan
cambios en el fá rmaco
o degradació n con el tiempo. Ademá s, la actividad del DTG basada en su
capacidad de inhibir la infecció n por el VIH de las cé lulas TZM-bl se
◦C/75%RH
mantuvo tras el almacenamiento de las ISP de DTG a 40 durante
6 meses, lo que demuestra la
estabilidad a largo plazo del DTG en los PSI.
Los estudios de liberació n in vitro de DTG a partir de PSI demostraron
la capacidad de afinar la ciné tica de liberació n de DTG variando la forma
de la PSI, la proporció n inicial de PLGA:NMP en la formulació n de la
ISFI, el peso molecular (MW) del PLGA o cambiando la carga de
fá rmaco en la PSI (Schliecker et al., 2003; Frank et al., 2005; Grizzi et
al., 1995; Lu et al., 2000). La superficie de una PSI depende de la
menor porcentaje de DTG en la PSI final, lo que llevó a una ciné tica de
liberació n má s lenta. Aunque el uso de co-disolvente en la formulació n
inicial de ISFI puede mejorar la carga del fá rmaco (3 wt% en PSI), este
aumento del 3% de la carga de DTG no fue suficiente para alterar la
ciné tica de liberació n de DTG. Ademá s, el PLGA de mayor peso
molecular dio lugar a una ciné tica de liberació n de DTG má s lenta
despué s del día
~130, y una mayor carga de fá rmaco dio lugar a una ciné tica de
liberació n má s rá pida de DTG dentro de la primera fase (d1-35) de
liberació n (Fig. 7). Ademá s, todos los PSI dieron lugar a una
liberació n sostenida de DTG durante 6 meses o má s y a mini
mum burst en las primeras 24 h (< 6%). Las concentraciones de DTG
liberadas in vitro
de varias ISP estaban por encima del 4 PAIC90 de DTG (4 64 ng/mL),
que es una concentració n de referencia conocida para que los
medicamentos antirretrovirales logren la eficacia en la prevenció n del
VIH (Fig.7) (Adams et al.,2013; Radzio et al., 2015; Andrews et al., 2014).
En general, la liberació n de DTG a partir de los PSI siguió un perfil de
en comparació n con otras tecnologías de implantes só lidos de LA
actualmente en desarrollo, como los implantes de EVA no biodegradables
(Barrett et al., 2018), y los dispositivos nanofluídicos para la prevenció n
del VIH (Chuaetal.,2018; Pons-Faudoa etal.,2020). Sin embargo, cabe
señ alar que el comportamiento de hinchamiento observado al evaluar
estos PSI in vitro y que contribuyó principalmente a la naturaleza bifá sica
de los perfiles de liberació n, es probablemente un artefacto de la
incubació n de los PSI en un gran volumen (200 mL) de medio de
liberació n para mantener las condiciones de hundimiento durante los
estudios de liberació n in vitro. Es probable que este comportamiento de
hinchamiento se reduzca significativamente in vivo debido a los
volú menes mucho má s pequeñ os de fluidos en un espacio subcutá neo en
comparació n con el gran volumen utilizado en los estudios de liberació n
in vitro.
La modificació n de las propiedades mecá nicas de las PSI no influyó en
la ciné tica de liberació n del DTG. Las PSIs fabricadas con diferentes
fuerzas de compresió n (0,5, 1,0 o 1,5 US.ton) y cargadas con una
concentració n constante de DTG (650 mg/g) mostraron una ciné tica de
liberació n similar (Fig.7C). Todas las PSIs
exhibieron una alta resistencia a la fractura en el rango de 45-60
MN/m2, que es
comparable a la resistencia a la fractura del cartílago (Kerinetal.,1998), lo
que indica que las PSI tienen las propiedades adecuadas para mantener
su integridad estructural in vivo. En conjunto, estos datos demuestran la
flexibilidad de las PSI para conseguir una ciné tica de liberació n sostenida
del fá rmaco y unas concentraciones de é ste que pueden trasladarse a los
seres humanos.
5. Conclusiones
Los PSI se fabricaron con é xito mediante un novedoso proceso que
combina la inversió n de fase del polímero y la compresió n. Este proceso
generó PSIs con una alta carga de fá rmaco (hasta el 85% en peso) y
proporcionó una liberació n de fá rmaco de acció n ultra-larga durante 6
meses o má s in vitro. La ciné tica de liberació n del fá rmaco puede
ajustarse mediante varios mé todos, como la superficie del dispositivo (es
decir, la forma/el tamañ o), las composiciones de la formulació n (el MW o
el tipo de polímero) y la concentració n de la carga de fá rmaco. La
optimizació n de las propiedades mecá nicas de la PSI puede realizarse
independientemente de la ciné tica de liberació n del fá rmaco. Las PSI
cargadas de fá rmaco fueron estables en condiciones de almacenamiento
de estabilidad acelerada durante SEIS meses, y el dolutegravir (DTG)
conservó sus propiedades físicas y químicas, así como su potencia (IC50)
para inhibir la infecció n por el VIH. Hasta donde sabemos, é ste es el
primer informe sobre un implante só lido basado en PLGA que puede
fabricarse mediante un proceso de inversió n de fase y compresió n. Este
proceso no requiere calor ni presió n elevados, ni el uso de grandes
volú menes de disolventes orgá nicos, y puede ser fá cilmente escalable
para producir implantes só lidos con alta carga de fá rmacos y diversas
liberació n bifá sico con una liberació n inicial má s rá pida de orden cero
dentro de los primeros 30-35 días impulsada principalmente por un
mecanismo de difusió n del fá rmaco. En la segunda fase, en la que la
liberació n del fá rmaco es principalmente resultado de
La degradació n del PLGA a granel se inició a través de la hidró lisis del
◦C
é ster después de ~30-35 días de incubació n a 37 , el DTG mostró
una tasa de liberació n má s lenta (Fig.7). Las PSIs con carga de DTG <
50 wt% tuvieron una tercera fase con tasas de liberación
significativamente má s altas debido al hinchamiento de las PSIs
después de tiempos de incubació n prolongados (> 45 días) en PBS a
Fig
37 ◦C ( . 7B). El hinchamiento de las PSI facilita la difusió n del agua
en el implante y da lugar a la degradació n del PLGA a travé s de los
é steres.
××
hidró lisis que conduce a una ciné tica de liberació n de DTG má s rá pida. La
incapacidad de proporcionar una ciné tica de liberació n absoluta de orden
cero in vitro podría suponer una limitació n para esta tecnología, si se
observara una tendencia similar in vivo,
formas o tamañ os. Esta tecnología tambié n puede utilizarse con otros
polímeros (por ejemplo, el poli(á cido lá ctico), PLA) y una amplia gama de
fá rmacos, incluidos los que son sensibles al calor o la presió n elevados y
no pueden formularse por extrusió n o moldeo por compresió n, para
ampliar su aplicació n a una amplia gama de indicaciones. En los estudios
en curso se investigan las formulaciones de mú ltiples fá rmacos en un solo
PSI y los estudios de seguridad y farmacociné tica in vivo.
Contribuciones de los autores
El manuscrito se redactó con la contribució n de todos los autores.
Todos los autores han dado su aprobació n a la versió n final del
manuscrito.
Declaració n de los autores
Concepció n y diseñ o de los experimentos: SRB, PM, MK y JVG.
Realizació n de los experimentos: PM, GP y MK. Aná lisis de los datos:
SRB, PM, GP, MK y JVG.
Contribució n de reactivos/materiales/herramientas de aná lisis:
SRB, MK y JVG. Escribió el artículo: SRB, PM, MK y JVG.
Declaración de intereses competitivos
SRB, PM, MK y JVG son inventores en una solicitud de patente
relacionada con este trabajo presentada por la Oficina de
Comercializació n de Tecnología de la Universidad de Carolina del
Norte (UNC OTC) (solicitud internacional PCT PCT/US20/16061,
presentada el 31 de enero de 2020 y solicitud de patente provisional
de Estados Unidos n.º 62/800087 presentada el 6 de febrero de 2019).
Los autores declaran no tener ningú n interé s financiero en
competencia.
 Los autores declaran que no tienen intereses financieros en
competencia ni relaciones personales que pudieran haber influido en el
trabajo presentado en este artículo.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Instituto Nacional de Alergias y
Enfermedades Infecciosas (nú meros de subvenció n R01AI131430
para MK y RB, R01AI073146, R01AI096138 y R01 140799 para JVG).
Este trabajo fue
tambié n apoyado por el CFAR de la UNC (P30 AI050410). El contenido
es responsabilidad exclusiva de los autores y no representa
necesariamente la opinió n oficial del Instituto Nacional de Alergias y
Enfermedades Infecciosas.
Apéndice A. Datos complementarios
Los datos complementarios de este artículo pueden encontrarse en
línea en https://doi. org/10.1016/j.ijpx.2020.100068.
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