APL 1.3 Manual Bacteriología 2019 v1

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
BACTERIOLOGIA
2019
Tabla de contenido
I. INTRODUCCION ..................................................................................................................... 5
II. OBJETIVOS ............................................................................................................................. 5
III. ALCANCE ............................................................................................................................ 5
IV. RESPONSABILIDAD Y AUTORIDAD....................................................................................... 5
V. RECEPCIÓN DE MUESTRAS .................................................................................................. 5
VI. TIEMPOS DE RESPUESTA..................................................................................................... 6
1. MUESTRAS PRIORITARIAS: ..................................................................................................... 6
2. MUESTRAS EN GENERAL: ....................................................................................................... 6
VII. REGISTROS ......................................................................................................................... 8
VIII. PROCEDIMIENTOS .............................................................................................................. 9
1. ANTIBIOGRAMAS POR DIFUSIÓN KIRBY Y BAUER .............................................................................. 10
2. ANTIBIOGRAMA AUTOMATIZADO (CIM: CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA) ............................ 14
3. ANTIBIOGRAMA PARA LEVADURAS .................................................................................................. 15
4. EPSILOMETRIA ................................................................................................................................. 17
5. IDENTIFICACION BACTERIANA POR ESPECTROMETRÍA DE MASAS ...................................................... 19
6. IDENTIFICACION BACTERIANA POR PRUEBAS BIOQUÍMICAS Y CONVENCIONALES .............................. 20
6.4.1 BATERÍA BIOQUÍMICA:........................................................................................................................................ 21
6.4.2 PRUEBA DE LA SUSCEPTIBILIDAD A OPTOQUIN .................................................................................................. 23
7. PRUEBAS DE SCREENING PARA LA IDENTIFICACIÓN BACTERIANA ...................................................... 24

7.4.1 PRUEBA DE LA CATALASA ................................................................................................................................... 25
7.4.2 PRUEBA DE LA OXIDASA ..................................................................................................................................... 25
7.4.3 TEST DE LATEX PARA Staphylococcus ................................................................................................................. 25
8. ESTUDIO DE MECANISMOS DE RESISTENCIA ...................................................................................... 26

8.4.1 PRUEBA DE LA CEFINASA .................................................................................................................................... 27
8.4.2 PRUEBA DEL D-TEST ............................................................................................................................................ 28
8.4.3 ESTUDIO DE BETA LACTAMASAS DE ESPECTRO EXTENDIDO (BLEE) ................................................................... 28
8.4.4 ESTUDIO DE CARBAPENEMASAS ........................................................................................................................ 29
9.- TINCIÓN GRAM ............................................................................................................................... 30

10. TINCIÓN VB .................................................................................................................................... 32
11. PROCEDIMIENTO GENERAL DE SIEMBRA ......................................................................................... 34
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MANUAL PROCEDIMIENTOS BACTERIOLOGIA
Calidad y Seguridad del Paciente Hospital Regional Rancagua
12. ASPIRADO ENDOTRAQUEAL CUANTITATIVO (AETC) ......................................................................... 37
13. ANAEROBIOS.................................................................................................................................. 40
14. BRONQUIAL Y DE EXPECTORACIÓN ................................................................................................. 43
15. CATETER TÉCNICA SEMICUANTITATIVA DE MAKI ............................................................................. 46
16. COPROCULTIVO .............................................................................................................................. 49
17. FLUJO VAGINAL .............................................................................................................................. 52
18. GONOCOCO (cultivo) ..................................................................................................................... 55
19. HEMOCULTIVOS ............................................................................................................................. 58
20. HONGOS (cultivo) ........................................................................................................................... 62
21. LAVADO BRONCOALVEOLAR (LBA) ................................................................................................. 65
22. LEUCOCITOS FECALES ..................................................................................................................... 68
23. LÍQUIDO CEFALORRAQUIDEO ......................................................................................................... 70
24. LÍQUIDOS ESTÉRILES ...................................................................................................................... 74
25. SECRECIONES ................................................................................................................................ 77
26. TINTA CHINA ................................................................................................................................. 80
27. UROCULTIVOS ............................................................................................................................... 83
28. PORTACIÓN DE ENTEROCOCO VANCOMICINA RESISTENTE (VRE) ..................................................... 88
29. PORTACIÓN DE STREPTOCOCCUS GRUPO B (SGB) EN EMBARAZADAS ............................................. 90
30. PORTACIÓN DE ENTEROBACTERIAS CIPROFLOXACINO RESISTENTE (PROTOCOLO DR. BONOMO) ..... 92
31. ANTÍGENO STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE ................................................................................... 95
32. ANTÍGENO DE LEGIONELLA ............................................................................................................ 96
33. CLAMIDIA ...................................................................................................................................... 97
34. CLOSTRIDIUM DIFFICILE ................................................................................................................. 98
35. HANTA VIRUS .............................................................................................................................. 100
36. LEPTOSPIRA................................................................................................................................. 101
37. MICOPLASMA-UREAPLASMA ....................................................................................................... 102
38. ROTAVIRUS-ADENOVIRUS............................................................................................................ 103
IX. CONTROL DE CALIDAD .....................................................................................................104

39. CEPAS ATCC (AMERICAN TYPE CULTURE COLLECTION) ................................................................... 104
40. CONTROL DE CALIDAD ................................................................................................................. 106
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X. INDICADOR DE CALIDAD: ....................................................................................................120
XI. 42. DERIVACIÓN DE CEPAS Y MUESTRAS ........................................................................122
XII. CONTROL DE CAMBIOS ....................................................................................................125
XIII. ANEXOS ..........................................................................................................................126
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Código: SGC-MBAC-ALP1.3
Fecha: 07/01/2019
MANUAL PROCEDIMIENTOS Vigencia: 07/01/2024
BACTERIOLOGIA
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I. INTRODUCCION
El laboratorio de bacteriología del Hospital Regional de Rancagua, cumple un rol
fundamental en el diagnóstico, terapia y recuperación del paciente, abarcando inclusive el
área epidemiológica a nivel interno y nacional, por medio del I.S.P. Lo anterior hace de
esta sección, un área con especiales características y que necesariamente implica tener
consideraciones específicas, que difieren del resto del laboratorio.
Los resultados confiables y en el menor tiempo posible, son una necesidad creciente en
todos los servicios, en especial con el actual panorama donde se hace cada vez más
dificultoso una correcta elección antibiótica, debido a la resistencia que adquieren los
microorganismos, y además en el manejo de las infecciones intrahospitalarias.
II. OBJETIVOS
General:
- Describir y estandarizar los diferentes procedimientos utilizados rutinariamente en el
laboratorio de bacteriología.
Específicos:
- Servir de apoyo y capacitación al personal de laboratorio, en especial a nuevos
funcionarios.
- Establecer protocolos de trabajos seguros, eficaces y eficientes.
- Asegurar la calidad de los diferentes exámenes realizados en la sección de
bacteriología.
- Verificar el cumplimiento de los requisitos de calidad especificados, detectar y eliminar
los errores para asegurar los métodos y procedimientos del área bacteriológica.
III. ALCANCE
Profesionales y Técnicos Paramédicos de la sección de bacteriología, personal de cuarto
turno y del laboratorio clínico del Hospital Regional Libertador Bernardo O`Higgins.
IV. RESPONSABILIDAD Y AUTORIDAD

El responsable de la elaboración y actualización de las técnicas, protocolos,
cumplimientos y capacitaciones desarrolladas para las técnicas descritas en el manual
será el Profesional a cargo de la sección.
V. RECEPCIÓN DE MUESTRAS
Todas las muestras deben ser recibidas en los horarios y en las condiciones establecidas
por el “Manual de Toma de Muestras Microbiología”.
Si la muestra no cumple con los requisitos solicitados en este manual, debe ser
rechazada y avisada por citófono al servicio respectivo. Además, debe quedar registrada
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en el cuaderno “Registro de rechazos” el cual se encuentra en el mesón donde está

ubicado el citófono de la sección de bacteriología.
VI. TIEMPOS DE RESPUESTA
1. MUESTRAS PRIORITARIAS:
Debido a la importancia clínica y epidemiológica se debe realizar el procesamiento e

informe inmediato (independiente del horario) de las muestras de LCR llegadas al
laboratorio clínico:
o Tinción de Gram en LCR: se debe leer la tinción e informarla en el sistema
Informático de bacteriología antes de 2 horas de ingresada la muestra al
laboratorio.
Los resultados de tinción de Gram de LCR positivos en los cuales se
visualicen bacterias se informarán en el sistema informático de
bacteriología en forma inmediata y, además, por vía telefónica al servicio
respectivo. Se comunicará que el resultado se encuentra disponible en el
sistema informático para ser visualizado y quedará registro en planilla
Excel disponible en PC de bacteriología al lado izquierdo del citófono. En
dicho registro quedará anotado el nombre del profesional que recibió el
informe, fecha, hora, y profesional que emitió el informe.
Los LCR con cultivo positivo: Máximo 5 días
2. MUESTRAS EN GENERAL:
- Hemocultivos: Máximo 7 días

o La excepción la constituyen aquellos hemocultivos en los cuales se
extiende el tiempo de incubación a 10-15 días, como es el caso de las
muestras con diagnóstico de EBSA o aquellas muestras con búsqueda de
algunas bacterias de crecimiento fastidioso y a petición del médico.
- Secreciones y líquidos: Máximo 7 días.
o En relación a los tiempos de respuesta de los cultivos positivos, la mayoría

de éstos pueden ser informados dentro de las 48–72 hrs, pero existe retraso
en los informes de ciertas muestras polimicrobianas en las cuales se debe
realizar aislamientos, y/o bacterias fastidiosas de desarrollo lento y de difícil
identificación.
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o La excepción la constituyen muestras de huesos o prótesis las cuales deben

incubarse hasta 15 días, o cualquier otra muestra en la cual sea solicitado
por el médico o infectólogos la prolongación de su incubación.
** Las muestras de secreciones incluyen: heridas, líquidos, ulceras, exudados, etc.
- Urocultivos: Máximo 7 días
- Estudio completo de flujo vaginal negativo: Máximo 5 días.
 En muestras de “Víctima de Violencia Sexual” el profesional de turno (ya

sea de rutina o turno de urgencia) debe informar a la brevedad (antes de 3 horas)
el resultado del directo al fresco de la muestra.
- Cultivos de hongos:
o Muestras respiratorias: 30 días.

o Muestras vaginales y uretrales: Máximo 7 días.
o Muestras para estudio de dermatofitos: Máximo 40 días.
o Otras muestras (líquidos de cavidad estéril u otros): Máximo 20 días.
- Coprocultivo: Máximo 5 días.
- Rotavirus y adenovirus en deposición: Menos de 24 horas.
- Leucocitos fecales: Menos de 24 horas.
- Antígeno de Strep.pneumoniae y Legionella en orina: Menos de 24 horas.
- Test rápido de Clamidia: Menos de 24 horas.

 En muestras de “Víctima de Violencia Sexual” el profesional de turno (ya
sea de rutina o turno de urgencia) debe informar a la brevedad (antes de 3 horas)
el resultado del test rápido de Clamidia
- Test Ureaplasma y Mycoplasama: Máximo 72 horas.
- Test Clostridium difficile: Maximo 5 horas.
- Días hábiles: de 16:00 – 7:30 horas el test será realizado por

Laboratorio de Urgencia. Posterior a las 7:30 horas, la muestra debe
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conservarse refrigerada hasta hacer entrega a la sección de

bacteriología.
- Días sábado, domingo y festivos: el test será realizado por

Laboratorio de Urgencia.
- Test rápido de Hanta virus:
o Días hábiles: de 16:00 – 7:30 horas el test será realizado por

Laboratorio de Urgencia, el cual se encargará de su envío al I.S.P.
Posterior a las 7:30 horas, la muestra debe conservarse refrigerada
hasta hacer entrega a la sección de bacteriología, la cual realizará el
test y se encargará del envío de la muestra al I.S.P.
o Días sábado, domingo y festivos: el test y su envío al I.S.P. será
realizado por Laboratorio de Urgencia.
VII. REGISTROS
Todas las lecturas de microscopía, registros de técnicas y cultivos se realizarán en los

cuadernos de registro interno respectivos (cuadernos de hemocultivos, secreciones,
urocultivos, flujos vaginales, coprocultivos, técnicas rápidas etc.) para luego ser revisadas,
transcritos (como es el caso de las tinciones de Gram y directos al fresco) e informadas al
sistema informático de bacteriología y automáticamente al LIS central del laboratorio
clínico.
La técnica de GDH, toxina A+B de Clostridium difficile y Test rápido de Hanta virus
constituyen la excepción, ya que se informa directamente al LIS central del laboratorio
clínico.
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VIII. PROCEDIMIENTOS
TÉCNICAS
GENERALES
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1. ANTIBIOGRAMAS POR DIFUSIÓN KIRBY Y BAUER
1.1 FUNDAMENTO
El objetivo del antibiograma es medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se

sospecha es la responsable de una infección a uno o varios antibióticos. En efecto, la
sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un
tratamiento antibiótico. El antibiograma sirve, en primer lugar, para orientar las decisiones
terapéuticas individuales.
El segundo objetivo del antibiograma es seguir la evolución de las resistencias
bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiológico, es como puede adaptarse la
antibioterapia empírica, revisarse regularmente los espectros clínicos de los antibióticos y
adoptarse ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de
prevención en los hospitales.
1.2 INDICACIONES
A todos los cultivos con desarrollo bacteriano patógeno y en los cuales exista un método
estandarizado para el estudio e interpretación del antibiograma según la CLSI (Clinical
and Laboratory Standards Institute).
1.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
Materiales:
-Tubos con solución estéril de suero fisiológico o caldo soya.
-Etalón 0.5 Mc Farland.
-Tórulas estériles
-Lector de turbidez
-Pinzas
Reactivos:
-Sensidiscos con antibióticos.
-Placas para antibiogramas (Mueller Hinton, Mueller Hinton con sangre de cordero, HTM)
Equipos:
-Gabinete de bioseguridad
-Congelador -20°C
-Vortex
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1.4 PROCEDIMIENTO
- Previamente a la realización del antibiograma, los sensidiscos deben ser sacados a

temperatura ambiente 1 hora antes de ser usados.
Estos sensidiscos son almacenados en congelador a -20°C en envases herméticos
con desecador y sellados con papel film cada uno en su tapa.
- Del mismo modo, las placas a utilizar deben estar a temperatura ambiente.
- La placa con medio de cultivo a utilizar para realizar el antibiograma es diferente
dependiendo de la bacteria, por lo tanto, lo primero es definir qué medio se va a
utilizar según cada caso (Por ejemplo: Mueller Hinton sangre, HTM, etc). Ver Tabla
Nº1 “Antibiograma por difusión” en donde se detalla el medio de cultivo adecuado
para cada bacteria.
- Marcar la placa a utilizar con un lápiz marcador con el número correspondiente a la
muestra.
- Con un asa o tórula estéril y en gabinete de bioseguridad, se toman dos o tres
colonias de la cepa en estudio y se realiza una suspensión al 0.5 Mc Farland en un
tubo con suero fisiológico o caldo nutritivo. La medición de la turbidez puede ser
realizada a través de un turbidímetro o comparando directamente (visualmente) la
suspensión preparada con el control 0.5 McFarland bajo luz transmitida.
En caso de contar con un lector de turbidez realizar la lectura correspondiente,
previo chequeo con un control estandarizado de turbidez.
En caso de contar con un nefelómetro (el cual no mide turbidez), inocular un caldo
nutritivo que se use para los antibiogramas automatizados (correspondiente al
nefelómetro) y ajustar el inóculo en el rango de lectura de 0.15 – 0.17, el cual
corresponde a 0.5 McFarland.
- Una vez obtenida la lectura correcta, introducir una tórula estéril dentro del tubo con
la suspensión al 0.5 Mc Farland, rotar la tórula varias veces dentro del líquido, para
que se impregne y botar el excedente de líquido presionando la tórula contra las
paredes del tubo.
- Pasar la tórula por el agar Mueller Hinton en 3 direcciones, de manera que todo el
agar quede cubierto con la suspensión.
- Esperar unos 5 minutos para que la suspensión difunda en el agar.
- Tomar los sensidiscos correspondientes al panel (*) de la bacteria en estudio y
colocarlos en el agar con una pinza, idealmente dentro de los 15 minutos post
sembrado y no más de 8 sensidiscos por placa.
- Incubar la placa 24 horas en estufa a 35 ºC. En atmósfera normal o CO2 según el
caso. Ver detalles de la incubación en Tabla Nº1 “Antibiogramas por difusión”
- Terminada la incubación, se procede a realizar la lectura e interpretación de los
antibióticos midiendo el diámetro de los halos con una regla en cada sensidisco y
compararlos con la tabla actualizada (**) según la CLSI correspondiente a la
bacteria estudiada.
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(*) Cada bacteria posee un panel específico de antibióticos, el cual es confeccionado en

base a los paneles sugeridos por la CLSI y en conjunto con los infectólogos y los
profesionales de bacteriología, tomando en consideración los criterios epidemiológicos
locales y el arsenal farmacéutico con el cual se cuenta, por lo cual son susceptibles de
modificación.
Estos paneles se encuentran en el fichero en la sala de lectura de placas y también en el
gabinete de bioseguridad, de tal modo de que quede visible en el momento de ir
posicionando los sensidiscos.
(**) La tabla de lectura de halos se encuentra en el fichero en la sala de lectura de placas

y se debe revisar y actualizar anualmente en base a las actualizaciones que realiza la
CLSI cada año.
1.5 REFERENCIAS
- M100 CLSI Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing
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TABLA N°1: ANTIBIOGRAMAS POR DIFUSION KIRBY BAUER
Bacteria Agar Suspensión Turbidez Temperatura Atmósfera Tiempo

McFarland incubación (Horas)
Aerobios Mueller NaCl 0.85% o
Hinton Caldo 0.5 35°C Ambiental 18-24
nutritivo
Haemophilus HTM NaCl 0.85% o 5% CO2
influenzae Caldo 0.5 35°C Microaerofilia 18-24
nutritivo
Streptococcus Mueller NaCl 0.85% o 5% CO2
pneumoniae – Hinton Caldo 0.5 35°C Microaerofilia 18-24
viridans con nutritivo
sangre
cordero
5%
Epsilometría Mueller NaCl 0.85% o
Enterobacterias Hinton Caldo 0.5 35°C Ambiental 18-24
nutritivo
Epsilometría Mueller NaCl 0.85% o 5% CO2
Streptococcus Hinton Caldo 0.5 35°C Microaerofilia 18-24
con nutritivo
sangre
cordero
5%
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2. ANTIBIOGRAMA AUTOMATIZADO (CIM: CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA)
2.1 FUNDAMENTO
Ver “Manual del usuario del sistema de microbiología automatizado” BD Phoenix M50 en
capítulo 1.
Este manual se encuentra en mueble de bacteriología llamado “Manuales y documentos”.
2.2 INDICACIONES
A todos los cultivos con desarrollo bacteriano patógeno y en los cuales exista un método
estandarizado para el estudio e interpretación del antibiograma según la CLSI (Clinical
and Laboratory Standards Institute).
Materiales:
-puntas desechables estériles
-tórulas estériles
-micropipeta
Reactivos:
- Ver “Manual del usuario del sistema de microbiología automatizado” BD Phoenix M50,
capitulo 4.
Equipos:
-Phoenix M50
-Nefelómetro
2.4 PRODECIMIENTO
- Ver “Manual del usuario del sistema de microbiología automatizado” BD Phoenix

M50.
- Para uso y calibración del Nefelómetro dirigirse al inserto correspondiente que se

encuentra en archivador “Insertos” que está en el mueble llamado “manuales y
documentos”.
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3. ANTIBIOGRAMA PARA LEVADURAS
3.1 FUNDAMENTO
La prueba de sensibilidad Sensititre es una prueba de microdilución colorimétrica que

ofrece resultados cualitativos y cuantitativo de Concentración Inhibitoria Mínima (CIM).
Cada placa contiene diversos agentes antifúngicos en las diluciones correspondientes y
un indicador colorimétrico.
3.2 INDICACIONES
Realización de pruebas de sensibilidad a levaduras no exigentes como especies de

Candida, Cryptococcus y otras especies de levadura de rápido crecimiento.
Materiales:
-Pipeta multicanal 100 ul y puntas desechables
-Pipeta de 20 ul
-Placas de sensibilidad Yeast One
-Láminas adhesivas
-Agua desmineralizada Sensititre
-Caldo inóculo Yeast One
-Etalón McFarland 0.5
-Recipiente de inóculo estéril
Equipos:
-Vortex
-Estufa de cultivo 35°C
-Refrigerador 4-8°C
3.4 PROCEDIMIENTO
- Antes de usar, dejar que el caldo de inóculo Yeast One adquiera la temperatura
ambiente.
- Seleccione varias colonias aisladas de un cultivo puro de 24 horas de levaduras y
emulsifique en el tubo con agua desmineralizada estéril Sensititre. Mezcle en Vortex
por 15 segundos y asegúrese de que la suspensión sea uniforme.
- Ajuste visualmente a un Etalón McFarland 0.5.
- Transfiera 20 ul de la suspensión a el tubo con Caldo de inóculo Yeast One (con 11

ml) y homogeneizar el inóculo.
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Observación: Estos pasos se deben completar en 15 minutos.

- Transfiera completamente el contenido del tubo con caldo Yeast One al recipiente
de inóculo estéril.
- Con la pipeta multicanal en 100 ul inocular la totalidad de la placa de sensibilidad,
antes de 15 minutos.
- Cubrir la placa con la lámina adhesiva evitando la formación de arrugas.
- Incubar la placa como mínimo durante 24-25 horas a 35°C.
Las especies de Cryptococcus deben ser incubados durante 72 horas.
- Para la lectura de las placas, interpretación y limitaciones ver el “Insertos” que está
en el mueble llamado “manuales y documentos”.
3.5 REFERENCIAS
- Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of

Yeasts.M27 Clinical and Laboratory Standard Institute, 940 West Valley Road,
Suite 1400, Wayne, PA 19087.
- Espinel-Ingroff, A.; Pfaller, M.; Messer, S.A., Knapp, C.C., Killian, S., Norris, H.A.,
Ghannoun M.A. (1999). Multicentre comparison of the Sensititre Yeast One
Colorimetric Antifungal Plate whit the national Committee for Clinical Laboratory
Standard M27-A Reference Method for Testing Clinical Isolates of Common and
Emerging Candida spp., and others Yeast and Yeast-like Organisms.
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4. EPSILOMETRIA
4.1 FUNDAMENTO
Es un método que combina los principios de la difusión en disco y la dilución en agar en el

estudio de la susceptibilidad in vitro, pero que a diferencia de la difusión entrega un
resultado cuantitativo.
Se compone de una tira sólida de un material inerte, con un gradiente exponencial
continuo del antimicrobiano problema en la cara inferior, y una escala de lectura en su
cara superior.
4.2 INDICACIONES
• CIM a penicilina y cefotaxima en Streptococcus pneumoniae recuperados de

procesos invasores.
• CIM a penicilina y cefotaxima en Streptococcus pneumoniae con lectura menor a 19
mm en disco de oxacilina
• CIM a penicilina en Streptococcus grupo viridans aislados de sitios estériles.
• Evaluación de glicopéptidos (Enterococcus spp, SAMR y Staphylococcus
epidermidis multiresistentes recuperados de procesos invasores)
• Cepas multiresistentes con lectura borderline en antimicrobianos de elección.
Materiales:
-Tubos con solución estéril de suero fisiológico o caldo soya.
-Etalón 0.5 Mc Farland.
-Lector de turbidez
-Pinzas
Reactivos:
-Tiras de antibióticos por epsilometría
-Placas para antibiogramas (Mueller Hinton, Mueller Hinton con sangre de cordero)
Equipos:
-gabinete de bioseguridad
-Congelador -20°C
-Vortex
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4.4 PROCEDIMIENTO
- Realizar el mismo procedimiento que se utiliza para un antibiograma por difusión.

- Una vez inoculada la placa, disponer la(s) tira(s) con una pinza sobre el agar con la
bacteria en estudio.
- Incubar 18-24 horas a 35°C en estufa de cultivo
Interpretación de los resultados:
Luego del período de incubación requerido, es posible observar una elipse de inhibición
cuyo borde intersecta longitudinalmente la tira en una posición donde una concentración
específica del antimicrobiano causa la inhibición del crecimiento bacteriano.
Este valor, llamado “concentración inhibitoria”, es una medición directa de la
susceptibilidad del microorganismo al fármaco estudiado.
Las interpretaciones de las concentraciones inhibitorias se encuentran en fichero de la
sala de lectura.
4.5 REFERENCIAS
- National Commitee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for

antimicrobial susceptibility testing. XII Informational Supplement M100-S12.
Wayne, Pennsylvania, NCCLS, 2002.
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5. IDENTIFICACION BACTERIANA POR ESPECTROMETRÍA DE MASAS
5.1 FUNDAMENTO
Ver “IVD MALDI Biotyper 2.2 Manual del usuario” capítulo 2.

Este manual se encuentra en mueble de bacteriología llamado “Manuales y documentos”.
5.2 INDICACIONES
Cultivos con desarrollo bacteriano de importancia clínica.
Materiales
-Placas MALDI
-Mondadientes
-Micropipeta
-Puntas de pipeta estériles 0.1-10 ul
Reactivos
-Ver “IVD MALDI Biotyper 2.2 Manual del usuario” capítulo 3.
Equipos
-Espectrómetro de masas
5.4 PROCEDIMIENTO
Ver “IVD MALDI Biotyper 2.2 Manual del usuario”
5.5 REFERENCIAS
- Ver “IVD MALDI Biotyper 2.2 Manual del usuario”
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6. IDENTIFICACION BACTERIANA POR PRUEBAS BIOQUÍMICAS Y

CONVENCIONALES
6.1 FUNDAMENTO
Las técnicas comúnmente reconocidas para la identificación de microorganismos se

basan principalmente en métodos bioquímicos. Un reactivo determinado es administrado
a los microorganismos siendo éste metabolizado sólo por ciertos microorganismos.
Reacciones específicas, que sólo pueden ser llevadas a cabo por estos microorganismos,
producen por ejemplo un cambio característico de color del reactivo, el cual es comparado
con valores de referencia que llevan a la decisión de la identificación.
6.2 INDICACIONES
Materiales:
-Asa bacteriológica
-Esterilizador de asa
-Gradillas
-Jarra con vela
Reactivos:
-Agar TSI
-Agar LIA
Agar MIO
-Agar Urea de Christensen
-Agar Citrato de Simmons
-Reactivo de Kovacs
-Discos de Optoquin
-Agar Mueller Hinton con sangre de cordero 5%
Equipos:
- Estufa de cultivo microbiológico a 35º C
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6.4 PROCEDIMIENTO
6.4.1 BATERÍA BIOQUÍMICA:
Procedimiento:
- Sacar del refrigerador y llevar a temperatura ambiente los siguientes tubos: agar
MIO, TSI, LIA, Urea de Christensen, Citrato de Simmons.
- Identificar la batería con el número correspondiente y en el gabinete de bioseguridad
inocular los tubos en el siguiente orden:
1°. - sacar la mitad de una colonia con el asa e inocular en profundidad el
medio MIO.
2.- sin esterilizar el asa y con el mismo inóculo anterior, inocular el medio TSI
con una pinchada en profundidad y luego una estría en superficie.
3.- sin esterilizar el asa y con el mismo inóculo anterior, inocular el medio LIA
con dos pinchadas en profundidad y luego una estría en superficie.
4.- sin esterilizar el asa, volver a la colonia en estudio y sacar más inóculo.
Sembrar ahora el agar Urea de Christensen con estría en superficie.
5.-seguir con el mismo inóculo y sembrar el agar Citrato de Simmons con
estría en superficie.
- Incubar los tubos 18-24 horas a 35°C en estufa de cultivo.
• Medio MIO
➢ Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de
siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.
➢ Ornitina decarboxilasa:
Resultado positivo: color púrpura.
Resultado negativo: color amarillo.
➢ Indol:
Agregar dos gotas de reactivo de Kovacs y observar
Resultado positivo: formación de anillo fucsia o rosado en la superficie del medio.
Resultado negativo: el reactivo queda con su color original amarillo.
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BACTERIOLOGIA
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• Medio TSI
➢ Superficie alcalina / profundidad ácida (pico rojo / fondo amarillo):la bacteria
solamente fermenta la glucosa. Se anota como “K/A”.
➢ Superficie ácida / profundidad ácida (pico amarillo / fondo amarillo): la bacteria
fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa. Se anota como “A/A”.
➢ Superficie alcalina / profundidad alcalina (pico rojo / fondo rojo): la bacteria es no
fermentador de azúcares. Se anota como “K/K”.
➢ La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que la bacteria
produce gas. Se anota con una cruz (+) después de la anotación de la lectura de
los azúcares.
➢ El ennegrecimiento del medio indica que la bacteria produce ácido sulfhídrico. Se
anota con una cruz (+) después de anotar al gas.
• Medio LIA
➢ Descarboxilación de la lisina:
Resultado positivo: superficie alcalina / profundidad alcalina (pico violeta / fondo
violeta). Se anota como “K/K”.
Resultado negativo: Superficie alcalina / profundidad ácida (pico violeta / fondo
amarillo). Se anota como “K/A”.
➢ Deaminación de la lisina:
Resultado positivo: superficie rojiza / profundidad ácida (pico rojizo / fondo
amarillo). Se anota como “R/A”.
➢ Producción de ácido sulfhídrico:
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo, especialmente en ele
limite entre la superficie y profundidad.
Resultado negativo: el medio permanece sin cambio de color.
• Medio Urea de Christensen

Resultado positivo: la bacteria hidroliza la urea, el medio es de color rosado-rojizo.
Resultado negativo: la bacteria no hidroliza la urea, el medio permanece de color
amarillo.
• Medio Citrato de Simmons

Resultado positivo: crecimiento bacteriano de color azul
Resultado negativo: ausencia de crecimiento y permanencia del color verde del
medio.
Para la interpretación de la batería se debe usar las “Tablas TLM” del Instituto de
Salud Pública la cual se encuentra en cajonera llamada “tablas y manuales” de la
sala de lectura.
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BACTERIOLOGIA
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6.4.2 PRUEBA DE LA SUSCEPTIBILIDAD A OPTOQUIN
Tiene por objeto diferenciar las cepas de Streptococcus pneumoniae de las de

Streptococcus viridans. El clorhidrato de etilhidrocupreína (Optoquin) inhibe en forma
selectiva el crecimiento de Streptococcus pneumoniae a muy bajas concentraciones
(5ug/ml o menos). La prueba tiene una susceptibilidad de más del 95%.
Procedimiento:
- Con un asa en argolla previamente esterilizada y enfriada, seleccionar 3 ó 4
colonias bien aisladas del microorganismo a probar y estriarlas en varias
direcciones en mitad de placa de un agar Mueller Hinton con sangre de cordero
5%.
- Colocar un disco de optoquin en el centro del área estriada e incubar a 35°C
durante 18-24 horas en jarra con vela.

Halo de inhibición de 14 mm o mayor constituye una identificación presuntiva de
Streptococcus pneumoniae (usando discos de 6 mm).
6.5 REFERENCIAS
- Murray, Baron, Jorgensen, Landry y Pfaller. Manual of Clinical Microbiology,
9° edición.
- T.M.Mg.Cs. Erwuin Landskron V.T.M.Mg.Pedro Cortés A. Manual de
Microbiología Clínica y Diagnóstico Microbiológico,2012,edición N° 4.
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BACTERIOLOGIA
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7. PRUEBAS DE SCREENING PARA LA IDENTIFICACIÓN BACTERIANA
7.1 FUNDAMENTO
Las pruebas de screening nos permiten diferenciar distintas familias y/o especies de
bacterias, las cuales nos orientan en un primer paso hacia la identificación bacteriana. Las
pruebas que se realizan actualmente en el laboratorio son tres:
1.- Catalasa: es una enzima del citocromo que descompone el peróxido de hidrógeno
(H2O2) en agua y oxígeno. Se usa para diferenciar miembros de la familia
Staphylococcaceae de miembros de la familia Streptococcaceae
2.-Oxidasa (citocromooxidasa):es una enzima que tiene la capacidad de oxidar el sustrato

tetrametil-para fenildiamina dihidroclórico, formando un producto final de color púrpura
oscuro, el indofenol. Se utiliza en bacilos Gram negativos principalmente.
3.-Test de látex para Staphylococcus: Se usa para la diferenciación de Staphylococcus

aureus, el cual posee el factor Clumping y/o proteína A, a diferencia de otras especies de
Staphylococcus que no lo poseen.
7.2 INDICACIONES
Materiales:
-tubos estériles tipo Khan
-bastones de plástico
Reactivos:
-Peróxido de hidrógeno (H2O2) 10 volúmenes
-Discos o tiras de oxidasa
-Kit de látex para Staphylococcus
Equipos:
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7.4 PROCEDIMIENTO
7.4.1 PRUEBA DE LA CATALASA
Procedimiento:
- En un tubo tipo Khan estéril o similar agregar 3-4 gotas de peróxido de hidrógeno.
- Con un bastoncito plástico o pipeta Pasteur de vidrio extraer del agar colonias de
la cepa en estudio e introducirlo dentro del tubo y observar formación de burbujas.

Resultado positivo: aparición rápida y sostenida de burbujas o efervescencia.
Resultado negativo: no hay formación de burbujas.
7.4.2 PRUEBA DE LA OXIDASA
Procedimiento:
- Dirigirse al inserto correspondiente que se encuentra en archivador “Insertos” que
está en el mueble llamado “manuales y documentos”.

7.4.3 TEST DE LATEX PARA Staphylococcus
Procedimiento:

7.5 REFERENCIAS

9° edición.
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8. ESTUDIO DE MECANISMOS DE RESISTENCIA
8.1 FUNDAMENTO
La resistencia bacteriana a los antibióticos constituye un problema mundial de salud

pública, ya que afecta de manera dramática el tratamiento ambulatorio y hospitalario de
las infecciones producidas por estos microorganismos.
El Laboratorio de microbiología tiene la responsabilidad de proporcionar al clínico los
resultados de susceptibilidad confiables y oportunos, lo cual le permitirá optimizar la
terapia antimicrobiana y así poder tomar las medidas requeridas para la contención de la
resistencia.
Las pruebas que se realizan para detectar mecanismos de resistencia actualmente en el
laboratorio son:
1.-Cefinasa: Su objetivo es detectar la presencia en una determinada cepa bacteriana de

b-lactamasas que inactivan el anillo b-lactámico de los antibióticos
2.-Prueba del D-test: Su objetivo es detectar resistencia inducible a clindamicina en

Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasa negativos resistentes a eritromicina y
susceptibles o medianamente susceptibles a clindamicina.
3.-Beta lactamasas de espectro extendido (BLEE): Son enzimas producidas por bacilos
Gram negativos capaces de hidrolizar penicilinas, cefalosporinas incluyendo las de 3ª y 4ª
generación y monobactámicos.
4.- Carbapenemasas: Son enzimas que tienen la capacidad de hidrolizar a todas las
penicilinas, cefalosporinas y carbapenémicos.
8.2 INDICACIONES
1.-Cefinasa: análisis rápido de colonias aisladas de Neisseria gonorrhoeae,

Staphylococcus, Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, enterococos y bacterias
anaerobias
2.- Prueba del D-test: Se debe realizar en Staphylococcus y Streptococcus beta

hemolíticos resistentes a eritromicina (como Strepto.pyogenes y Strepto.agalactiae).
3.-Beta lactamasas de espectro extendido (BLEE): Toda cepa en la cual se necesite

confirmar y/o corroborar la información entregada por el método automatizado de
antibiograma, el cual dentro de sus paneles está incorporada esta prueba.
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Se debe realizar en forma simultánea cada vez que se realice un antibiograma por
difusión en Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Klebsiella oxytoca.
4.- Carbapenemasas: Se realizará el test en Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli,

Enterobacter spp de procedencia hospitalaria independiente del tipo de muestra, y en los
cuales se detectó halos de inhibición a Imipenem o Meropenem menor o igual a 22 mm o
CIM mayor o igual 2 ug/ml.
También deben estudiarse las Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter baumannii

carbapenémicos resistentes.
Todo resultado positivo o dudoso debe enviarse este aislamiento al laboratorio de

referencia del ISP. Se utilizará el formulario B3 de envío de cepas del ISP dispuesto en la
página web (www.ispch.cl). Sólo se debe enviar una cepa por paciente.
Materiales:
-Pinzas
-Bastoncitos plásticos
Reactivos:
-Discos de cefinasa
-Sensidiscos de eritomicina, clindamicina, ceftazidima, cefotaxima, ceftazidima con ac.
clavulánico, cefotaxima con ac. Clavulánico.
-Agar Mueller Hinton
-Caldo nutritivo para antibiogramas
-Kit para Carbapenemasas (comercial)
Equipos:
-Estufa de cultivo microbiológico a 35º C
8.4 PROCEDIMIENTO
8.4.1 PRUEBA DE LA CEFINASA

Procedimiento:
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BACTERIOLOGIA
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8.4.2 PRUEBA DEL D-TEST
Procedimiento:
- Este test se realiza normalmente en forma simultánea con el antibiograma por
difusión Kirby Bauer de la bacteria en estudio, por lo tanto, se realiza el inóculo y
siembra correspondiente en Agar Mueller Hinton.
- Poner el sensidisco de clindamicina y el de eritromicina a una distancia entre 15 a
26 mm.
- Incubar a 35°C en estufa de cultivo.

Resultado positivo: Las bacterias con resistencia inducible a clindamicina forman una letra
“D” en la zona circular de inhibición alrededor del disco de clindamicina de 2 ug hacia el
lado que enfrenta al disco de eritomicina de 15 ug.
Se debe informar como Clindamicina Resistente.
Resultado negativo: No hay formación de la letra “D”.
8.4.3 ESTUDIO DE BETA LACTAMASAS DE ESPECTRO EXTENDIDO (BLEE)
Procedimiento:
- Este test se realiza como un antibiograma por difusión Kirby Bauer de la bacteria
en estudio, por lo tanto, se realiza el inóculo y siembra correspondiente en Agar
Mueller Hinton.
- Poner los sensidiscos de cefotaxima, cefotaxima con ac. clavulánico, ceftazidima y
ceftazidima con ac. clavulánico.
- Incubar a 35°C en estufa de cultivo.
Resultado positivo: Aumento de mayor o igual a 5 mm en el diámetro de la combinación
de cualquiera de esas drogas beta lactámicas con ac. clavulánico versus el diámetro de la
droga sola confirma la producción de BLEE.
Resultado negativo: No se registra aumento del halo por sobre los 5 mm de los
sensidiscos con ac. clavulánico versus la droga sola.
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8.4.4 ESTUDIO DE CARBAPENEMASAS
Procedimiento:

8.5 REFERENCIAS
9° edición.
- Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing;Twentieth
Informational Suplemment, M100-S22 de la CLSI, Vol 32 N° 3, 2012.
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BACTERIOLOGIA
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9.- TINCIÓN GRAM
9.1 FUNDAMENTO
La tinción de Gram permite diferenciar las bacterias en dos grupos según el color de la
célula después de la tinción: Gram positivas (se tiñen azules) y Gram negativas (se tiñen
rojas) y está basado en las diferencias existentes entre las paredes celulares de las
bacterias.
9.2 TIPO DE MUESTRA
Muestra clínica que requiera de esta tinción.
Materiales:
-portaobjetos
-asa bacteriológica
-esterilizador de asa o mechero
-gabinete de bioseguridad
-aceite de inmersión
Reactivos:
-colorante Cristal violeta
-solución de bicarbonato 1%
- lugol
-decolorante alcohol acetona 2:1
-colorante safranina
Equipos:
- microscopio
9.4 PROCEDIMIENTO
La siguiente técnica corresponde a la tinción con los reactivos preparados en nuestro

laboratorio y sus preparaciones se encuentran detalladas en el “Manual de preparación de
medios de cultivo y reactivos” el cual se encuentra en mueble “Manuales y documentos”.
También se pueden combinar reactivos comerciales como es el caso del Cristal violeta y
Safranina, con los reactivos preparados en el laboratorio.
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En todos los casos, se debe siempre realizar un control de la tinción con frotis preparados
con una mezcla de bacilos Gram negativos y cocaceas Gram positivas.
- Realizar un frotis en un portaobjetos estéril y nuevo, puedes ser directo de la

muestra frotando la tórula en el portaobjetos, o bien, extrayendo muestra con una
pipeta de transferencia estéril en caso de que la muestra sea líquida.
En caso de ser directo de colonia, agregar una gota de agua estéril en el
portaobjeto y realizar un frotis agregando la colonia a estudiar.
- Dejar secar
- Poner el portaobjeto en un lavatorio de tal manera de poder realizar los lavados y
agregar 2 gotas aprox. de Cristal violeta y además adicionarle igual cantidad de
solución de bicarbonato 1% a la preparación.
Dejar actuar el colorante durante 1 minuto.
Lavar la preparación con agua corriente suavemente dejando correr lo que salga
de colorante.
- Agregar 2 gotas de solución de lugol y dejar actuar por 1 minuto.
Transcurrido el tiempo, lavar de la misma manera al punto anterior.
- Con cuidado, añadir gota a gota el alcohol acetona en la preparación y dejar
actuar por 30 segundos.
Luego lavar la preparación con agua corriente como en el pinto anterior.
- Añadir 2 gotas de safranina aprox. hasta cubrir la preparación y dejar actuar por 1
minuto y luego lavar como en los puntos anteriores.
- Dejar secar y observar al microscopio con lente de inmersión.
** Del mismo modo la tinción de Gram se puede realizar con Kit comerciales y con
equipos automatizados, en los cuales viene especificado el procedimiento y los tiempos
de cada colorante.
En caso de estar ocupando estos Kit o equipo automatizado de tinción, dirigirse al inserto
correspondiente que se encuentra en archivador “Insertos” o al manual del equipo
automatizado, en el mueble llamado “manuales y documentos”,
9.5 REFERENCIAS
- Schlegel H., Zaborosch C. Microbiología general. Ediciones Omega S.A.

Barcelona; 1997. p: 50-54.
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10. TINCIÓN VB
10.1 FUNDAMENTO
Se basa en la tinción especial para observar bacterias del género Campylobacter a través
del colorante cristal violeta y agregando bicarbonato de sodio, que permitirá la correcta
observación de la bacteria.
10.2 TIPO DE MUESTRA

Esta tinción está dedicada exclusivamente a los coprocultivos.
Materiales:
-portaobjetos
Reactivos:
-cristal violeta
-solución de bicarbonato de sodio 1%
-aceite de inmersión.
Equipos:
-microscopio.
10.4 PROCEDIMIENTO
- Realizar un frotis a la muestra de deposición y dejar secar a temperatura ambiente.
- Teñir la preparación anterior con el colorante cristal violeta y bicarbonato de sodio
por partes iguales, durante un minuto.
- Lavar con agua corriente y secar a temperatura ambiente.
- Leer con lente de inmersión, buscando formas típicas de Campylobacter spp.

Resultado positivo: presencia de formas espirilares semejantes a gaviotas.
Resultado negativo: no hay formas espirilares.
10.5 REFERENCIAS
- “Manual de diagnóstico bacteriológico en el laboratorio clínico”, Instituto de Salud
Pública de Chile 1994.
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PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
- CULTIVOS -
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11. PROCEDIMIENTO GENERAL DE SIEMBRA
11.1 FUNDAMENTO
Se basa en el crecimiento de microorganismos en distintos medios de cultivo. Los

componentes de estos medios, otorgan un valor nutritivo que permite el crecimiento de
una gran variedad de microrganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes.
La muestra puede ser orina, secreciones, deposición, sangre, líquidos, etc.

Todas las muestras deben venir tomadas de acuerdo al “Manual de toma de muestra
bacteriología”. Si la muestra no cumple con los requisitos solicitados en dicho Manual,
debe ser rechazada y avisada por citófono al servicio respectivo. Además, debe quedar
registrada en el cuaderno “Registro de rechazos” el cual se encuentra en el mesón donde
está ubicado el citófono de la sección.
Materiales:
-Elementos de protección personal según “Manual de bioseguridad”, el cual se
encuentra en mueble llamado “Manuales y documentos”.
-Asas bacteriológicas
-Esterilizador de asas o mechero
-Asas calibradas 1ul
-Cajas contenedoras de plástico para desechos de material sucio
-Portaobjetos
-Jarra con vela para atmósfera de CO2
Reactivos:
-Placas con agar (agar sangre cordero 5%, McConkey, Chocolate, XLD, etc.)
-Tubos con medio de cultivo
Equipos:
-Estufa de cultivo a 35°C
-Refrigerador 4-8 °C
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11.4 PROCEDIMIENTO
- Importante: Cada tipo de muestra tiene asignado los medios de cultivo en los
cuales se deben sembrar. Esta información se encuentra en una tabla llamada
“Agares para siembra de muestras” y se encuentra en el gabinete de bioseguridad
donde se realiza la siembra primaria de las muestras.
- Importante: Cuando una muestra tenga siembra en más de un agar, siempre

sembrar los agares en orden del menos inhibitorio al más inhibitorio, es decir:
primero sembrar el agar chocolate, luego el agar sangre, agar McConkey en caso
de secreciones u otro tipo de muestra que lo requiera.
En caso de un coprocultivo: agar McConkey, agar XLD, agar TCBS.
- Rotular la(s) placa(s) con la letra y número que corresponda al cuaderno de la

sección. La letra dependerá del tipo de muestra que se siembre:
• O = Orina
• P = Pus o secreción
• H = Hemocultivo
• C = Coprocultivo
• F = Flujo vaginal
En caso de que la muestra llegue en horario de fuera de la rutina, las placas se
pueden rotular con las etiquetas que entrega el sistema informático del LIS central
del laboratorio. Posteriormente el personal de la sección de rutina, asignará el
número interno de los cuadernos a cada muestra.
- En el gabinete de bioseguridad, tomar el tubo que contiene la muestra y destápelo.

- Si la muestra viene tomada con tórula, sacarla del contenedor y a hacerla rodar por
el o los agares a sembrar.
- Si la muestra viene sin tórula o líquida, tomar una tórula estéril o una pipeta de
transferencia estéril y extraer muestra.
- Las muestras que se hacen en el laboratorio se hacen en estrías, con el fin de
obtener colonias aisladas.
- Colocar el asa o tórula con la muestra en un extremo de la placa y distribuirla en
forma de zig-zag, de extremo a extremo, cubriendo la mitad del agar.
- Rotar la placa en 90° y continuar el estriado en el otro sentido de la placa, tocando
las estrías anteriores solamente una o dos veces, a fin de tomar unos pocos
microorganismos. Cubrir la mitad del espacio no estriado del agar.
- Finalmente, estriar la última sección del agar, girar la placa en 90° y tocar apenas
sólo unas estrías. Cerrar la placa y dejar invertida.
- Llevar a incubación en estufa a 35°C. El agar chocolate se introduce en tarro con
vela y se incuba en la estufa.
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- Si es en tubos con agar sólido de superficie plana: la muestra se siembra con

tórula o asa por sobre el agar en forma de zig-zag.
- Si es en tubos de caldo: la muestra se transfiere al caldo, se homogeniza con éste
y se tapa.
11.5 REFERENCIAS
- Murray, P.R.,E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tennover, and R.H. Yolken. 1999.
Manual de Clinical Microbiology, 7° ed. American Society for Microbiology.
Washington, D.C.
- T.M.Mg.Cs. Erwuin Landskron V.T.M.Mg.Pedro Cortés A. Manual de Microbiología
Clínica y Diagnóstico Microbiológico,2012,edición N° 4.
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12. ASPIRADO ENDOTRAQUEAL CUANTITATIVO (AETC)
12.1 FUNDAMENTO
Se utiliza para el diagnóstico microbiológico en todos los pacientes con sospecha de

neumonía asociada a ventilación mecánica (NAVM) (conexión a VM > 48hrs y presencia
de criterios clínicos-radiológicos).
Muestra de Aspirado endotraqueal tomado en un tubo plástico estéril con tapa rosca.
Materiales:
-Perlas de vidrio estéril.
-Pipeta automática con graduación de 10 -100 µl con puntas estériles
-Rastrillos plásticos estériles
-Tubos de ensayo tipo centrifuga estéril
-Tarro con vela
Reactivos:
-Solución de suero fisiológico estéril.
-Placas con medios de cultivo McConkey, Sangre y Chocolate.
Equipos:
-Estufa de cultivo microbiológico a 35ºC.
-Vortex
12.4 PROCEDIMIENTO
- Diluir la muestra con suero fisiológico estéril duplicando el volumen de ésta. Por
ejemplo, 1mL de muestra se diluye con 1mL de suero fisiológico.
- Agregar al tubo perlas de vidrio estériles. Agitar en Vortex durante 2 minutos para
homogenizar lo mejor posible la muestra.
- Extraer de la muestra homogeneizada 100 ul de muestra y diluir en un tubo con
9,9mL de suero fisiológico estéril (dilución 1:100) y agitar para obtener una mezcla
homogénea.
- Rotular una placa de agar chocolate, agar sangre y una placa de agar McConkey
con el respectivo número de la muestra y junto a éste escribir en la placa “100 µL”.
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- Rotular otra placa de agar chocolate, agar sangre y otra de agar McConkey con el
número de la muestra y “10 µL”.
- Inocular 100 µL de la dilución (1:100) en el set de placas rotuladas con “100 µL”
(dilución final 1:2000).
- Inocular 10 µL de la dilución (1:100) en el set de placas rotuladas con “10 µL”
(dilución final 1:20.000).
- Sembrar las placas con rastrillo estéril, estriando el agar en todos los sentidos
girando la placa, de modo que la muestra quede uniformemente repartida.
- Incubar las placas a 35ºC de 18-24 horas en atmósfera normal, y el agar chocolate
en tarro con vela.
Se realizará recuento por separado (en caso de que exista más de una especie) de las
distintas colonias bacterianas desarrolladas en cultivo, seleccionando la placa más
propicia para realizar dicho recuento:
• Las placas marcadas con 100uL se deberán multiplicar por 2.000
• Las placas marcadas con 10uL se deberán multiplicar por 20.000
De esta manera se obtiene el recuento real de cada bacteria encontrada en el cultivo.
Realizar identificación y antibiograma según corresponda.
• Recuento ≥ 1.000.000 UFC/ml, de importancia clínica.

• Recuento < 1.000 UFC/ml, excluye diagnóstico de NAVM.
• Recuento entre 1.000 a 1.000.000 UFC/ml, requiere interpretación según criterio
clínico.
12.5 REFERENCIAS
- Arancibia H, Francisco et al. Diagnóstico de neumonía asociada a ventilación

mecánica. Rev. Chilena de Infectología, 2001, vol.18, supl.2, p.41-57. ISSN 0716-
1018.
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12.6 FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA ASPIRADO ENDOTRAQUEAL

CUANTITATIVO
MUESTRA
Diluir en cantidad igual con suero fisiológico (dilución 1:1)
Agitar por 2 minutos en Vortex con perlas de vidrio
Mezclar 100ul de muestra con 9.9 ml de suero

fisiológico (dilución 1:100)
Sembrar 100ul en placa de agar Sembrar 10ul en placa de agar

Chocolate, Sangre y placa de Chocolate, sangre y McConkey
McConkey (dilución 1:10) (dilución 1:100)
Estriar por toda la superficie con rastrillo.
Incubar a 35ºC por 18-24hrs.
Recuento de las colonias Recuento de las colonias
1 colonia = 2.000 UFC/ml 1 colonia = 20.000 UFC/ml
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13. ANAEROBIOS
13.1 FUNDAMENTO
El cultivo de bacterias anaerobias in vitro requiere de medios de cultivos específicos

enriquecidos y de un sistema anaeróbico de incubación que contenga 85% de N2, 10% de
H2 y 5% de CO2 para desarrollarse.
Muestras aspiradas: pus, abscesos, LCR, líquido pleural, ascítico, articular, sinovial, etc. Y
debe ser colocada en un medio de transporte en condiciones anaerobias solicitado
previamente al laboratorio según “Manual de toma de muestra de microbiología”.
Materiales:
-Asa metálica
-Jarra Gaspak o jarra anaeróbica
-Portaobjetos
Reactivos:
-Medio de transporte para anaerobios
-Sobres comerciales de generador de anaerobiosis
-Sobres comerciales de Indicador de anaerobiosis
-Agar sangre para anaerobios
-Agar sangre de cordero 5%
-Tinción de Gram
-Aceite de inmersión
Equipo:
-Microscopio
-Lupa estereoscópica
-Estufa de cultivo a 35ºC
-Espectrómetro de masas
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13.4 PROCEDIMIENTO
- Destapar el frasco de medio de transporte anaerobio que contiene la muestra. El

medio de transporte del frasco se teñirá azul, lo que indica que el frasco perdió la
anaerobiosis, por lo que se debe trabajar rápido la siembra.
- Extraer muestra con una pipeta Pasteur estéril y sembrar agregando 1-2 gotas de
la misma en un agar sangre para anaerobios, un agar sangre de cordero 5%
corriente y un frotis para tinción de gram.
- Introducir el agar sangre para anaerobios en una jarra anaeróbica.
- Introducir en la jarra el indicador de anaerobiosis. Al abrir el sobrecito, el papel se
torna rosado por la presencia de oxígeno.
- Abrir el sobre con el generador de anaerobiosis (hidrógeno y CO2) y rápidamente
introducir en la jarra.
- Cerrar la jarra lo antes posible.
- Incubar jarra anaeróbica por 48 horas a 35ºC.
- El papel indicador de anaerobiosis debe tornarse blanco en el transcurso de las
horas.
- Incubar la placa de agar sangre de cordero 5% corriente en una jarra con vela
(microaerofilia) a 35ºC por 24-48 hrs.
- Al término de la incubación, sacar las placas anaerobias de la jarra, eliminar los
sobres generadores e indicadores.
- Observar el desarrollo de las placas bajo lupa estereoscópica y buscar colonias
sospechosas de anaerobios.
- Realizar identificación bacteriana por espectrometría de masas. No se realiza
antibiograma.
13.5 REFERENCIAS
- “Manual de diagnóstico bacteriológico en el laboratorio clínico “, Instituto de salud

Pública de Chile, 1994.
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13.6 FLUJOGRAMA DE ANAEROBIOS
Muestra
Agar sangre anaerobio → incubar jarra Gaspak x 48 hrs a 35ºC

Agar sangre corriente → incubar en Jarra con vela x 24-48 hrs a 35ºC
Colonias sospechosas
Identificación por espectrometría de masas
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14. BRONQUIAL Y DE EXPECTORACIÓN
14.1 FUNDAMENTO
El estudio microbiológico de secreciones bronquiales o de expectoración, permite el

estudio de bacterias involucradas en procesos infecciosos, del tracto respiratorio inferior.
Muestra bronquial o de expectoración, tomada en contenedor plástico estéril, tapa rosca.

La saliva no sirve para realizar este estudio.
Materiales:
-Contenedores plásticos estériles tapa rosca
-Porta objetos
Reactivos:
-Tinción de Gram
-Placas de Agar Sangre de cordero 5%
-Placas de Agar McConkey
-Placas de Agar Chocolate
-Tubos o placas de Agar Sabouraud (cultivo de hongos sujeto a solicitud del médico)
-aceite de inmersión
Equipos:
-Estufa de cultivo microbiológico a 35ºC
-Estufa de cultivo microbiológico a 25-28ºC. (para cultivo de hongos)
-Microscopio corriente
14.4 PROCEDIMIENTO
- Con una tórula estéril, tomar muestra para sembrar una placa de agar chocolate,
una placa de agar sangre de cordero 5%, una placa de McConkey, y en caso de
ser solicitado por el médico, sembrar en un tubo o placa de agar Sabouraud.
- Realizar un frotis de la muestra en un portaobjetos.
- Incubar agar Chocolate en la jarra con vela, a 35º C por 18-24 horas.
- Incubar el agar Sangre y agar McConkey en atmósfera normal, a 35º C por 18-24
horas.
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- Una vez realizada la tinción de Gram del frotis, observar la calidad de la muestra:
Si la muestra es buena o representativa debe presentar al microscopio en
aumento menor (10x):
Polimorfonucleares en cantidad ≥ 25 por campo.

Células epiteliales en cantidad ≤ 10 por campo.
- Posterior a la incubación, realizar la lectura de las placas buscando bacterias

patógenas del tracto respiratorio.
- Realizar identificación y antibiograma según corresponda.
14.5 REFERENCIA
- Shorr AF, Sherner JH, Jackson WL, Kollef MH. Invasive approaches to the
diagnosis of ventilator-associated pneumonia: a meta-analysis. Crit Care Med.
2005; 33:46-53.
- Bouza E, Torres MV, Burillo A. Aportación del laboratorio de microbiología al
diagnóstico de la numonía asociada a ventilación mecánica. Enferm Infecc
Microbiol Clin. 2005; 23:2.
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14.6 FLUJOGRAMA DE SECRECIÓN BRONQUIAL O EXPECTORACIÓN
Secreción bronquial o
expectoración
Realizar tinción de
o Gram
Agar chocolate Agar sangre y

McConkey
Incubar por 18-24hrs Incubar por 18-24hrs

a 35ºC en jarra con a 35ºC en atmósfera
vela. normal
Identificación y antibiograma
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15. CATETER TÉCNICA SEMICUANTITATIVA DE MAKI
15.1 FUNDAMENTO
Las infecciones asociadas a catéteres constituyen la principal causa de bacteremia

nosocomial y están relacionadas con una con una alta morbilidad y mortalidad.
El estudio está indicado en pacientes con catéter venoso central que presenta fiebre
>38°C sin foco infeccioso aparente que la explique y/o signos de infección a nivel de la
herida cutánea donde se inserta el catéter.
Punta de catéter en un tubo boca ancha estéril, dentro de un plazo no superior a 2 horas.
No se deben procesar puntas de catéter que vengan en caldo de cultivo o suero
fisiológico.
Materiales:
-Pinza estéril
-Bisturí
Reactivos:
-Placa de agar sangre de cordero 5%
Equipos:
-Estufa de cultivo 35°C
15.4 PROCEDIMIENTO
- En una placa Petri estéril depositar el catéter y cortar 3 cms con un bisturí.
- Luego colocar este trozo de punta de catéter sobre la superficie de una placa de
agar sangre de cordero 5%.
- Con pinzas estériles, hacer rodar la punta del catéter hacia adelante y hacia atrás,
a lo menos 4 veces.
- Incubar la placa por 18-24 horas a 35°C.
- Observar el desarrollo de colonias en la superficie de la placa y aplicar las pruebas
de identificación y antibiograma según corresponda.
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• Si en la placa se desarrollan menos de 15 colonias (<15 UFC): se interpreta
como una contaminación del catéter al momento de retirarlo.
(*) Este recuento debe interpretarse en el contexto clínico ya que existen
diversos estudios con CVC que han demostrado la existencia de casos de
sepsis asociados a recuentos inferiores a 15 UFC.
• Si en la placa se desarrolla un número igual o superior a 15 colonias (>15
UFC): se interpreta como una “infección” del catéter, la cual puede ser la
causa de la fiebre del paciente.
15.5 REFERENCIAS
- “Manual de diagnóstico bacteriológico en el laboratorio clínico”, T.M.Rosa Bustos

V., Rosario Lepe L., Aurora Maldonado B., Berta Olivares V., M.Soledad Prat M.,
Mabel Seoane M., Wally Silva SC., M.Teresa Ulloa F., M.Eugenia Valenzuela M.
Instituto de Salud Pública de Chile.1994.
- “Diagnóstico microbiológico de las infecciones asociadas a catéteres
intravasculares”, Emilio Bouza, Josefina Liñares, Álvaro Pascual. 2004.
Recomendaciones de la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y
Microbiología Clínica.
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15.6 FLUJOGRAMA TÉCNICA DE MAKI EN CATÉTER
Cortar 3 cms del catéter con

bisturí.
Hacer rodar 3-4 veces sobre

agar sangre con pinza estéril.
Incubar a 35°C en atmósfera

normal por 18-24 horas
Realizar recuento de colonias
Realizar identificación y
antibiograma
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16. COPROCULTIVO
16.1 FUNDAMENTO
El estudio microbiológico de deposiciones, permite el estudio de bacterias patógenas

involucradas en procesos infecciosos del tracto intestinal.
Muestra tomada en tórula rectal con medio Cary-Blair.
Materiales:
-Porta objetos
Reactivos:
-Tubos con medio de transporte Cary Blair
-Placas de agar Mc Conkey Sorbitol
-Placas de agar XLD
-Placas de agar TCBS
-Tubos con caldo peptonado pH 8.6
-Antisuero para Escherichia coli Entero hemorrágico O:157
-Antisueros para Shigella: A, A1, B, C, D
-Antisueros para Salmonella: A, B, C1, C2, D, E
Equipos:
-Estufa de cultivo microbiológico a 35ºC
-Microscopio
16.4 PROCEDIMIENTO
- Sembrar la muestra en el siguiente orden:

1.- Agar McConkey sorbitol
2.- Agar XLD
3.- Agar TCBS
- Incubar los medios sembrados en estufa de cultivo a 35°C.

- Con la tórula, realizar una extensión en un portaobjetos. Teñir este frotis mediante
la tinción VB para la búsqueda de formas sugerentes de Campylobacter. Reservar
la tórula en el medio Cary-Blair.
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- En caso de sospecha diagnóstica de Vibrio, se debe además emulsionar la tórula

en caldo peptonado a pH= 8,6 e incubar el caldo por 6 horas a 35ºC.
- Luego de las 6 horas, aspirar la zona superior del caldo (primer 1/3 del caldo) con
una pipeta Pasteur estéril e inocular una placa de agar TCBS. Incubar por 18-24
horas a 35ºC.
- Realizar identificación, serología y antibiograma según corresponda.
- En pacientes con sospecha diagnóstica de SHU (Síndrome hemolítico urémico) o
colitis hemorrágica se debe buscar Escherichia coli productor de toxina shiga
(STEC), para lo cual se debe estudiar de 3 a 5 colonias, por ejemplo 3 colonias
lactosa positiva y 2 colonias lactosa negativa.
- Realizar identificación bacteriana y si corresponde a E. coli enviar al I.S.P. hasta 3
colonias distintas de un paciente.
Importante:
En caso de aislar cepas de Salmonella spp., Shigella spp., Escherichia coli entero-
hemorrágica, Campylobacter spp., Vibrio spp. se debe enviar al ISP.
Las especificaciones técnicas y formularios para procedimiento de envío de cepas, están
disponibles en www.ispch.cl. y en capítulo 42 “Derivación de muestras”.
16.5 REFERENCIAS
- Mota F., Gutiérrez C. Diarrea aguda. PAC P-1, Parte B Libro 4. Academia
Mexicana de Pediatría. http://www.drscope.com/
- CHOICE Study Group. Multicenter, randomized, double-blind clinical trial to
evaluate the efficacy and safety of a reduced osmolarity oral rehydration salts
solution in children with acute watery diarrhea. Pediatrics 2003; 107:613-8.
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16.6 FLUJOGRAMA DE COPROCULTIVO
Muestra en Medio Cary-Blair Frotis para

Tinción VB
Diagnóstico Sembrar: Lectura en

McConkey sorbitol
de Cólera microscopio
XLD
TCBS
Emulsionar tórula Incubar 18-24 h a

en caldo 35º C
peptonado pH 8.6
Diagnóstico de
Colonias sospechosas
SHU
Incubar por 6 horas
a 35º C
Identificación bacteriana y Identificar 3-5 colonias

antibiograma de E. coli
Aspirar zona
superior del caldo
con pipeta
Enviar cepas al ISP Enviar 3 cepas al ISP de

Sembrar en agar según corresponda. E. coli.
TCBS
Incubar 18 – 24 h a
35º C
Identificación
bacteriana Vibrio
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17. FLUJO VAGINAL
17.1 FUNDAMENTO
El estudio microbiológico de secreción vaginal, permite el estudio de las bacterias

involucradas en procesos infecciosos.
En pacientes pediátricos, Haemophilus y Streptococcus pneumoniae adquieren un rol
significativo, en esta localización.
En pacientes mayores, tienen importancia, Gardnerella vaginalis, Trichomonas vaginalis,
especies de Candida, Streptococcus agalactiae, Neisseria gonorrhoeae.
Muestras de flujo vaginal tomadas en tórula en medio Stuart.
Materiales:
-Tubos con medio de transporte Stuart
-Portaobjetos
Reactivos:
-Tinción de Gram
-Placas de Agar Sangre de cordero 5%
-Placas de Agar Candida (cromógeno)
-Placas de Agar Mc Conkey
Equipos:
-Estufa de cultivo microbiológico a 35ºC.
-Microscopio
-Jarra con vela
17.4 PROCEDIMIENTO
- Sembrar en placa en agar Chocolate, agar sangre de cordero y agar cromógeno

para Candida (también puede ser en agar Sabouraud).
- En muestras de pacientes menores de 14 años agregar a la siembra un agar
McConkey.
- Realizar frotis en portaobjeto estéril y dejar secar para realizar Tinción de Gram.
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- Posteriormente emulsionar rotando la tórula en un tubo con 1 ml aproximadamente

de suero fisiológico. Reservar a temperatura ambiente hasta realizar la
observación del directo al fresco en microscopio.
- Incubar placas en estufa de cultivo a 35ºC por 18 a 24hrs. en atmósfera normal. La
placa de Agar Chocolate se incuba en microaerofilia (jarra con vela) en estufa a
35ºC.
- Revisar las placas después de 18-24 hrs. de incubación. Realizar búsqueda de
colonias de patógenos en las placas de medio de cultivo. En caso de no haber
desarrollo, proceder a incubar las placas en estufa de cultivo a 35ºC por otras 18-
24 hrs.
- Realizar identificación bacteriana y estudio de sensibilidad cuando corresponda.
17.5 CONSIDERACIONES ESPECIALES
Las muestras de flujo vaginal que llegan al laboratorio como “Víctima de violencia
sexual” deben ser procesadas con el procedimiento normal descrito en el punto 17.4.
El profesional de turno (ya sea de rutina o turno de urgencia) debe informar a la brevedad
el examen directo al fresco, el cual se informará en el sistema informático de
bacteriología.
17.6 REFERENCIAS
- Anderson M, Karasz A, Friedland S. Are vaginal symptoms ever normal. A review

of the literature. MedGenMed. 2004;6(4):49.
- Eckert LO, Lentz GM. Infections of the lower genital tract: vulva, vagina, cervix,
toxic shock syndrome, HIV infections. In: Katz VL, Lentz GM, Lobo RA,
Gershenson DM, eds. Comprehensive Gynecology. 5th ed. Philadelphia, Pa:
Mosby Elsevier; 2007:chap 22.
- Sanfilippo JS. Vulvovaginitis. In: Kliegman RM, Behrman RE, Jenson HB, Stanton
BF, eds. Nelson Textbook of Pediatrics. 18th ed. Philadelphia, Pa: Saunders
Elsevier; 2007: chap 549.
- Spence D, Melville C. Vaginal discharge. BMJ. 2007; 335:1147-1151.
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17.6 FLUJOGRAMA DE FLUJO VAGINAL
Tubo con Stuart
Emulsión en suero Agar Chocolate Frotis para Tinción

fisiológico Agar sangre de cordero de Gram
Agar McConkey <14 años
Agar cromógeno Candida
Lectura Directo al Lectura en

fresco en Incubar a 35ºC por 18-24 hrs. microscopio
microscopio en atmósfera normal.
microscopio del Agar Chocolate en jarra con
vela a 35°C.
- Realizar frotis y tinción

Gram.
Identificación
- Lectura bacteriana
del directo al
yfresco.
antibiograma
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18. GONOCOCO (cultivo)
18.1 FUNDAMENTO
El cultivo de gonococo está orientado a la pesquisa de Neisseria gonohrroeae, agente

causal de la “gonorrea”, una enfermedad de transmisión sexual que se presenta en los
humanos.
Neisseria gonohrroeae es muy susceptible a condiciones adversas del ambiente como
temperaturas extremas y la desecación y no es capaz de sobrevivir por largos períodos
fuera de su huésped natural.
En hombres, la manifestación más común es la uretritis aguda. La incidencia de gonorrea
asintomática en el hombre se estima entre 1-5 %. En mujeres el sitio primario de infección
es el endocérvix.
Un pequeño porcentaje de individuos con gonorrea (0.5-3%) presentan infección
diseminada, caracterizada por la presencia de rash en extremidades y artritis.
Los recién nacidos de madres infectadas pueden desarrollar una oftalmia gonocócica la
cual debe ser tratada inmediatamente pues podría resultar en ceguera.
Muestra tomada en tórula con Stuart de los siguientes sitios:

• Uretral
• Endocervical
• Flujo vaginal
• Conjuntival
• Líquido articular
• Lesiones de piel
• Sangre (en este caso la muestra se toma en un frasco de hemocultivo)
• Tórula rectal
Materiales:
-Porta objetos
Reactivos:
-Tinción de Gram
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Equipos:
-Microscopio
18.4 PROCEDIMIENTO
- Sembrar la muestra lo antes posible una vez llegada al laboratorio.

- Sembrar la muestra en agar Chocolate y realizar un frotis en un portaobjetos.
- Eliminar la tórula y guardar a temperatura ambiente el tubo con medio de
transporte.
- Incubar el agar Chocolate a 35°C en jarra con vela. Observar las placas
diariamente hasta 72 horas antes de informarlas como negativas.
- Realizar tinción de Gram y observar al microscopio en búsqueda de Diplococos
gram negativos extracelulares e intracelulares.
- Importante: En muestras uretrales, correctamente preparadas, teñidas e

interpretadas, la correlación con el cultivo es mayor que un 95%.
En mujeres, sin embargo, las secreciones endocervicales detectan solo un 50-70%
de las muestras con cultivo positivo, por lo tanto, en este caso la muestra debe ser
cultivada.
Las tinciones realizadas a partir de tórulas rectales son dificultosas de interpretar y
por ello no se recomiendan, al igual que las tinciones de muestras orofaríngeas en
que otras especies de Neisseria son indistinguibles morfológicamente de
gonococo.
- En caso de que el cultivo de positivo a Neisseria gonohrroeae, la cepa debe

enviarse al I.S.P.
- Las especificaciones técnicas y formularios para procedimiento de envío de cepas,
están disponibles en www.ispch.cl.
18.5 REFERENCIAS

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18.6 FLUJOGRAMA GONOCOCO
Muestra en tubo con

Stuart
Sembrar en agar Frotis en portaobjetos

Chocolate para Tinción de Gram
Incubar a 35°C en jarra Realizar lectura en

con vela microscopio
Realizar búsqueda de
Gonococo e
identificación bacteriana
Cultivo (+) a Gonococo

enviar cepa a I.S.P.
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19. HEMOCULTIVOS
19.1 FUNDAMENTO
Los sistemas automatizados para hemocultivos consisten básicamente en botellas con

diversos medios de cultivo (aeróbicos, anaeróbicos, hongos, micobacterias y con resinas
que captan antibióticos) que se incuban en equipos que agitan constantemente las
muestras y que poseen modernos sistemas de detección microbiana. Estos se basan en
la detección de productos del metabolismo bacteriano (CO2) mediante técnicas
radiométricas, espectrofotométricas, fluorométricas y/o colorimétricas. El computador
asociado a los equipos relaciona las mediciones con índices y/o gráficas de crecimiento
microbiano que dan un aviso cuando la detección sobrepasa un punto de corte.
Muestra de sangre tomada en frasco de hemocultivo.

• Muestra adulta: frasco Adulto con 10 ml de sangre
• Muestra pediátrica: frasco pediátrico con 3 ml de sangre
• Muestra anaerobios: Frasco de anaerobios con 10 ml de sangre
Materiales:
- Portaobjetos
- Agujas de hemocultivos.
-Asa bacteriológica
-Toallitas con alcohol al 70% estériles (Alcohol Pad)
Reactivos:
-Frascos de hemocultivos pediátricos
-Frascos hemocultivos adultos
-Frascos hemocultivos anaerobios
-Placas de agar sangre cordero 5%
-Placas de agar McConkey
-Placas de agar Chocolate
-Reactivos para tinción de Gram
Equipos:
-Equipo automatizado Bactec
-Microscopio
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19.4 PROCEDIMIENTO
- Para la introducción y retiro de frascos en equipo automatizado ver “Manual del

usuario del instrumento” BD BACTEC FX. Este manual se encuentra en mueble de
bacteriología llamado “Manuales y documentos”.
- El equipo de hemocultivos incuba por defecto todas las muestras por 5 días.
La excepción la constituyen aquellos hemocultivos en los cuales se extiende el
tiempo de incubación a 10-15 días, como es el caso de las muestras con
diagnóstico de EBSA o aquellas muestras con búsqueda de algunas bacterias de
crecimiento fastidioso y a petición del médico.
Procedimiento en hemocultivo positivo:
- El equipo anunciará con una alarma el frasco positivo. Extraer del equipo.
- Desinfectar la tapa del frasco con alcohol Pad. Introducir aguja especial para
extraer muestra del frasco de hemocultivos.
- Sembrar muestra (1 o 2 gotas) en agar sangre y agar McConkey. Colocar una gota
de sangre en un portaobjetos y extender la gota con la misma aguja para realizar
un frotis para tinción de Gram.
- Incubar las placas en estufa de cultivo a 35ºC por 18-24 horas.
- Al día siguiente realizar lectura de las placas y efectuar identificación y estudio de
sensibilidad según corresponda.
- Si en la lectura de la tinción de Gram se observan bacterias, realizar un informe
parcial con la descripción de la forma, afinidad tintorial y agrupación.
- Si en la lectura de la tinción de Gram no se observan bacterias, reincubar el frasco
nuevamente en el equipo.
Importante:
La muestra de hemocultivo con una tinción de Gram en la cual se observan
bacterias constituye un “Valor crítico” según documento “Notificación de
Exámenes de Laboratorio con Valor Crítico en HRLBO”, por lo tanto, posterior al
informe parcial en el sistema informático de bacteriología, se debe realizar la
notificación telefónica al servicio respectivo antes de 1 hora y debe quedar
registrado en el formulario correspondiente como se detalla en el documento, el
cual es una planilla Excel llamada “Registro VC digital bacterio” en PC lado
izquierdo del citófono en bacteriología.
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Procedimiento en hemocultivo negativo:
- El equipo anunciará con una alarma los frascos negativos con su correspondiente
incubación.
- Retirar los frascos del equipo e informar.
19.5 REFERENCIAS
- Everts RJ; Vinson EN; Adholla PO; Reller BL. Contamination of catheter-drawn
blood cultures. J. Clin. Microbiol. 2001; 39:3393-3394
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19.6 FLUJOGRAMA DE HEMOCULTIVO
Muestra en frasco
Incubar frascos en equipo automatizado
Hemocultivo negativo
Hemocultivo positivo
(hasta 5 días)
**Salvo excepciones
Sembrar: Realizar tinción Gram

Agar sangre T
Agar McConkey Informar
Informe preliminar
Incubar a 35ºC por 18-

24hrs.
CULTIVO POSITIVO CULTIVO NEGATIVO
Realizar tinción Gram

Identificación y antibiograma Sembrar en agar Chocolate T
Incubar 35°C Jarra con
vela.
No se observan bacterias
Reincubar frasco en
equipo.
T
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20. HONGOS (cultivo)
20.1 FUNDAMENTO
Investigar la presencia de hongos de importancia clínica en muestras.
• Muestras clínicas de pelo, piel y uñas (raspado) de los sitios de lesión tomadas en
placa Petri estéril.
• Muestras respiratorias, oculares, óticas en tubo plástico estéril tapa rosca
(respiratorias) y tórula con Stuart (óticas, oculares)
• Muestras genitales en tórula con Stuart
• Muestras de orina en frasco estéril
• Muestras de sangre y líquidos estériles en frasco de hemocultivo o tubo plástico
estéril tapa rosca.
• Muestras de tejidos, etc. en frasco o tubo estéril tapa rosca.
20.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:
Materiales:
-Portaobjetos
-Cubreobjetos
-Asa metálica
- Cinta scotch
-Pipetas de transferencia estéril
Reactivos:
-Tubo con agar Sabouraud dextrosa 4%
-Placas con agar Sabouraud dextrosa 4%
-Placas con agar cromógeno CAN
-Solución de Hidróxido de potasio al 10%
-Azul de Lactofenol
Equipos:
-estufa de cultivo a 25° +/- 2 °C
-Microscopio
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20.4 PROCEDIMIENTO
Dependiendo del tipo de muestra se procederá de la siguiente manera:
Dermatofitosis (piel, uñas, pelos):
Examen directo al fresco:

- Depositar escamas de piel o pelos, o raspado de uñas en un portaobjeto, agregar
una gota de Hidróxido de potasio al 10% y cubrir con un cubreobjetos y esperar 15
a 20 minutos para que la preparación se clarifique.
- Observar al microscopio con aumento de x10 y x40 para determinar la presencia
de elementos fúngicos; hifas hialinas, septadas, ramificadas y/o la presencia de
conidios y artroconidios.
Cultivo en dermatofitosis:
Se recomienda sembrar bastante material en 6 a 8 puntos de inoculación.
- Siembra: (escamas, raspados, pelos) 1 placa de agar Sabouraud dextrosa 4%.
- Incubación: a 25 +/-2°C
- Tiempo: 3 semanas
Otras muestras:
Muestras respiratorias:
- Siembra: 2 tubos de agar Sabouraud dextrosa 4%.
- Incubación: a 25 +/-2 °C y 35°C
- Tiempo: 2 semanas
Muestras genitales y orina:

- Siembra: 1 placa de agar Cromógeno CAN
- Incubación: a 35°C
- Tiempo: 2 días
Muestras oculares y óticas:

Siembra: 2 tubos de agar Sabouraud dextrosa 4%
- Incubación: a 25 +/-2°C y 35°C
- Tiempo: 2 semanas
Muestras de líquidos estériles (LCR, sinovial, pleural, etc):

Idealmente centrifugar a 1500-2000 rpm por 20 minutos y utilizar el sedimento para
siembra. Inocular 0.5 ml en el medio.
- Siembra: 1 tubo de agar Sabouraud dextrosa 4%
- Incubación: a 35°C
- Tiempo: 2-3 semanas
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Muestras de tejido:
Fragmentar con bisturí o tijera estéril en pequeñas porciones, transferir con el asa o tórula
2 o 3 inóculos a la superficie del medio, efectuando una pequeña presión para que se
hunda parcialmente.
- Siembra: 2 tubos de agar Sabouraud dextrosa 4%
- Incubación: a 25 +/-2°C y 35°C
- Tiempo: 4 semanas
Identificación de hongos filamentosos:

- Realizar observación macroscópica de cada uno de ellos, en el anverso y en el reverso
de las colonias cultivadas en los agares, observando textura, producción de pigmentos,
difusión de este etc.
- Montar preparación con las cepas, tomando parte del desarrollo del hongo con un trozo
de cinta adhesiva y depositarla sobre una gota de azul de lactofenol y cubrir con el
portaobjetos.
- Realizar observación microscópica, diferenciando hifas, tipos de conidias:
macroconidias y microconidias (presencia de septos).
- Es frecuente que en las preparaciones de las cepas en estudio no se observen formas
típicas como para llegar a una clara identificación. En estos casos es posible realizar la
identificación por Espectrometría de masas usando el método de extracción del ácido
fórmico. Ver “IVD MALDI Biotyper 2.2 Manual del usuario”.
20.6 REFERENCIAS
- “Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnóstico micológico”
Universidad de Chile, Facultad de Medicina, Instituto de Ciencias Biomédicas,
Programa de Microbiología y Micología. T.M. María Cristina Díaz J., Dra. Andrea
Elgueta N. Dra. Denisse Sepúlveda B. Santiago de Chile 2009.
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21. LAVADO BRONCOALVEOLAR (LBA)
21.1 FUNDAMENTO
El estudio microbiológico de lavado broncoalveolar consiste en un cultivo cuantitativo el

cual permite el estudio de las bacterias involucradas en procesos infecciosos
broncopulmonares entre ellos la neumonía.
Muestra de lavado alveolar tomado con fibrobroncoscopio en tubo de plástico estéril tapa
rosca.
Materiales:
-Tubos plásticos tapa rosca estériles.
-Puntas amarillas estériles.
-Pipeta automática 10-100 ul
-Tubos con 9,9 ml de suero fisiológico
-Jarra con vela
Reactivos:
-Placas de agar Sangre de cordero 5%
-Placas de agar Mc Conkey
Equipos:
21.4 PROCEDIMIENTO
- Debe llegar muestra entre 5-10 ml de lavado. Homogeneizar la muestra en Vortex

- Aspirar muestra y realizar un frotis para tinción de Gram.
El análisis microscópico de la muestra a través de la tinción de Gram nos permite
conocer la excesiva contaminación de la muestra por secreciones orofaríngeas, la
cual se visualiza por la existencia de más de un 1% de células escamosas
epiteliales en la muestra. Por otra parte, el hallazgo de bacterias intracelulares es
muy indicativo de infección pulmonar.
- Aspirar 100 ul de la muestra, y vaciar en tubo que contiene 9,9 ml. de suero
fisiológico (dilución 1: 100).
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BACTERIOLOGIA
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- Homogeneizar en Vortex.
- Depositar 100 ul. de la dilución anterior, en placa de agar Chocolate, (dilución
1:10), 100 ul en agar sangre y 100 ul en agar McConkey.
- Esparcir con rastrillo estéril, por toda la superficie de cada medio de cultivo
cambiando el rastrillo por uno nuevo en cada agar.
- (*) En algunos casos el médico solicita en forma especial el cultivo de hongos de la
muestra, por lo cual se debe realizar sembrando 100 ul en los agares descritos en
el capítulo de hongos de muestras respiratorias (capítulo 20) con sus respectivas
incubaciones.
- Incubar agar Sangre y Mc Conkey, en estufa de cultivo a 35 ºC por 18-24hrs. en
atmósfera normal. La placa de Agar Chocolate se incuba en atmósfera de
microaerofilia, (jarra con vela), en estufa de cultivo a 35 ºC por 18-24 hrs.
- Observar el desarrollo de colonias de bacterias patógenas. Si el cultivo está
negativo, incubar por otras 18-24 hrs. Respetar la atmósfera de incubación según
el medio utilizado.
Se realizará recuento por separado (en caso de que exista más de una especie) de las
distintas colonias bacterianas desarrolladas en cultivo:
• Cada colonia de importancia clínica se multiplica por 1.000.

1 colonia = 1.000 UFC/ml
De esta manera se obtiene el recuento real de cada bacteria encontrada en el cultivo.

Realizar identificación y antibiograma según corresponda.
• Recuento ≥ 10.000.000 UFC/ml. Se considera de importancia clínica.
21.5 REFERENCIAS
- Liebler JM, Markin C: Fiberoptic bronchoscopy for diagnosis and treatment. Crit
Care Clin 2000; 16: 83-100. “Resultados preliminares y factibilidad del mini lavado
broncoalveolar en pacientes cursando falla respiratoria severa”. Rev. Médica Chile
2011;1292-1297
- “Experiencia clínica de la utilidad del lavado broncoalveolar en pediatría” Rev.
Chilena Pediátrica 73(6);576-582,2002.
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
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21.6 FLUJOGRAMA DEL LAVADO BRONCOALVEOLAR
Muestra por fibrobroncoscopía

5-10 ml de lavado
Vortex Frotis para tinción de

Gram
Tomar 100 ul muestra y

diluir en 9.9 de suero
Lectura en
fisiológico
microscopio
Vortex
Sembrar 100 ul en:

Agar Chocolate
Agar sangre
Agar McConkey
-Agar sangre y McConkey

a 35°C en atmósfera Cultivo positivo
normal.
-Agar Chocolate a 35°C en
jarra con vela.
Realizar recuento de
colonias:
1 colonia = 1.000 UFC/ml
Cultivo negativo
Incubar por 24 Identificación bacteriana y

horas más. antibiograma
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BACTERIOLOGIA
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22. LEUCOCITOS FECALES
22.1 FUNDAMENTO
Los leucocitos fecales son utilizados para identificar diarrea invasiva y decidir el uso de
antibióticos.
En las infecciones por bacterias enteroinvasivas, la respuesta inflamatoria intestinal que
involucra activación de leucocitos polimorfonucleares, suele ser más intensa y puede
expresarse en la presencia de deposiciones con moco y sangre, además de abundantes
leucocitos en las heces.
Deposición fresca en frasco plástico tapa rosca.
Materiales:
-Frasco plástico tapa rosca
-Portaobjetos
-Cubreobjetos
-Paleta de plástico o madera
- Tubos plásticos chicos o tubo de vidrio tipo Khan
Reactivo:
-Hayem B
Equipo:
-Microscopio
22.4 PROCEDIMIENTO
- Con una paleta de madera o plástica, tomar una pequeña cantidad de muestra de
heces, preferentemente de la zona con mucosidades y depositar en un tubo
plástico o vidrio.
- Agregar aproximadamente 5 gotas de Hayem B y homogenizar con un palo de
madera o plástico.
- Depositar gota con homogeneizado en un portaobjetos y cubrir la preparación con
un cubreobjeto.
- Observar la preparación al microscopio con aumento de 10x buscando leucocitos.
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BACTERIOLOGIA
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Informar en cruces:
3+ = Abundante Cantidad. ( +++ )
2+ = Moderada Cantidad. ( ++ )
1+ = Escasa Cantidad. (+)
22.5 REFERENCIAS
- “Leucocitos fecales en niños con diarrea aguda”. Revista de gastroenterología del

Perú. ISSN 1022-5129
22.6 FLUJOGRAMA LEUCOCITOS FECALES
Deposición fresca
Tomar muestra zona mucosa
Depositar en tubo plástico
Agregar 5 gotas Hayem B.

Homogeneizar
Depositar 1 gota de la
preparación en un
portaobjetos
Observar al microscopio
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23. LÍQUIDO CEFALORRAQUIDEO
23.1 FUNDAMENTO
Investigar la presencia de microorganismos patógenos en el líquido cefalorraquídeo, que

causan meningitis, o que pueden estar infectando válvulas derivativas.
Muestra obtenida por punción lumbar en frasco de hemocultivo o en tubo plástico estéril
tapa rosca.
Materiales:
-Frasco de hemocultivo pediátrico o tubo plástico estéril tapa rosca de 15ml.
-Pipetas de transferencia estériles.
-Porta objetos
-Toallitas con alcohol al 70% estériles (Alcohol Pad)
-Agujas hemocultivos
-Jarra con vela
Reactivos:
-Tinción de Gram.
-Placas de agar sangre de cordero 5%
Equipos:
-Estufa de cultivo a 35ºC.
-Centrifuga
-Microscopio
-Equipo automatizado hemocultivos
23.4 PROCEDIMIENTO
Siembra de la muestra tomada en tubo estéril:
- Concentrar el LCR por centrifugación a 3.000 rpm por 10 minutos.

- Aspirar el sedimento con una pipeta de transferencia estéril y sembrar una placa
de agar Chocolate y agar sangre de cordero.
- Colocar 3 gotas del sedimento del LCR sobre un portaobjetos, efectuar tinción de
Gram y realizar lectura en microscopio.
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- Importante:
Para realizar el informe de la Tinción de Gram, dirigirse al capítulo VI: “Tiempos de
respuesta”- “Muestras prioritarias”.
- Incubar la placa de agar sangre en atmósfera normal a 35°C y el agar Chocolate

en jarra con vela a 35°C por 18-24 hrs.
- Guardar el tubo con muestra a 4-8°C en refrigerador de muestras de bacteriología.
- Los cultivos negativos se informarán a las 72 hrs.
Muestra tomada en frasco de hemocultivo:
- Incubar el frasco en equipo automatizado para hemocultivos.

- El tiempo de incubación debe cambiarse a “3 días” puesto que el equipo incuba
por defecto todas las muestras por 5 días.
- Si además del frasco de hemocultivo, la muestra viene tomada en tubo sin
anticoagulante, concentrar el LCR por centrifugación a 3.000 rpm por 10 minutos.
- Aspirar el sedimento con una pipeta de transferencia estéril, colocar 3 gotas en un
portaobjetos y efectuar tinción de Gram.
• Siembra de frasco positivo:

- Extraer frasco del equipo automatizado.
- Desinfectar la tapa del frasco con una toallita de Alcohol Pad.
- Introducir aguja especial para hemocultivos.
- Sembrar muestra (1 o 2 gotas) en agar sangre y agar chocolate.
- Colocar una gota de muestra en un portaobjetos y extender con la misma aguja la
muestra a modo de frotis delgado para realizar tinción de Gram.
en jarra con vela a 35°C.
- Al día siguiente realizar lectura de las placas y efectuar identificación y
antibiograma según corresponda.
-
23.5 CONSIDERACIONES ESPECIALES
El Instituto de Salud Pública, establece que el laboratorio local deberá enviar la

muestra de LCR al laboratorio de referencia de la sección Bacteriología del ISP, para su
estudio de PCR (Polimerasa en cadena en tiempo real) si a las 24 hrs. no presenta
desarrollo en cultivo de LCR y además presenta alguna de las siguientes condiciones:
3
• Estudio Citoquímico: Recuento de leucocitos: mayor 100/mm y/o
Glucorraquia menor o igual a 40 mg/dl.
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Los hallazgos microbiológicos en LCR de Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae,

Streptococcus Beta hemolítico, Listeria monocytogenes y Streptococcus pneumoniae,
deben ser enviados al ISP.
Cuando la bacteria desarrollada pertenece a la flora cutánea, la interpretación deberá
basarse en los antecedentes clínicos del paciente, unido a las características citoquímicas
del líquido.
23.6 REFERENCIAS
- Curso Post Título Estudio y Estandarización de Líquidos Biológicos en el

Laboratorio Clínico. 2001.
- Aplicación de la citocentrifugación en el diagnóstico precoz de las infecciones
bacterianas de líquidos estériles. Tesis doctoral Jesús Turiño Luque. Universidad
de Granada 2007.
- Recomendaciones para el estudio de líquidos biológicos serosos en el laboratorio
de urgencias. A. Noguera y col. Quim Clin 2004:23(3) 141-145.
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23.7 FLUJOGRAMA DE LCR
LCR en tubo estéril

LCR en frasco de hemocultivo
Centrifugar a 3.000rpm por 10min
Incubar en equipo automatizado por 3

días Del sedimento
Sembrar en agar Chocolate y

En frascos positivos
Tinción Gram agar sangre
seguir esquema del
tubo (sin centrifugar)
Presencia de bacterias
Incubar a 35ºC por 18-24 horas.

Cultivos negativos Agar Chocolate en jarra con vela.
informar a las 72 horas
informar INFORMAR
DE
INMEDIATO
Cultivo negativo
Cultivo positivo
Incubar por 24-72 horas a

35ºC
Identificación y sensibilidad
Negativo Positivo
Informar negativo a las

72horas”
ENVIO DE CEPAS AL ISP Identificación y sensibilidad
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24. LÍQUIDOS ESTÉRILES
24.1 FUNDAMENTO
El estudio de los líquidos estériles nos permite el estudio de microorganismos causantes

de infecciones.
Se deben obtener estas muestras frente a la sospecha clínica, radiológica y/o ecográfica
de derrame pleural, ascitis, derrame pericárdico, artritis supurada, etc.
Muestras tomadas en frasco de hemocultivo o en tubo plástico estéril tapa rosca de:
• Líquido pleural
• Líquido ascítico
• Líquido articular
• Líquido sinovial
• Líquido peritoneal
• Líquido pericárdico
• Bilis
• Cualquier otro líquido distinto de orina.
Materiales:
-Tubos plásticos estéril tapa rosca
-Frasco de hemocultivo
-Pipetas de transferencia estériles.
-Porta objetos esmerilados.
-Agujas de hemocultivos
Reactivos:
-Tinción de Gram.
-Placas agar Chocolate
-Placas agar sangre de cordero 5%
Alcohol de 70º.
Equipos:
-Microscopio
-Centrífuga
-Equipo automatizado hemocultivos
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24.4 PROCEDIMIENTO
Siembra de la muestra tomada en tubo estéril:
- Concentrar la muestra por centrifugación a 1.500 rpm por 10 minutos, excepto

aquellas muestras de aspecto turbio.
- Los líquidos purulentos pueden ser sembrados directamente, sin centrifugar.
- Aspirar el sedimento con una pipeta de transferencia estéril y sembrar una placa
de agar Chocolate y agar sangre de cordero.
- Colocar 3 gotas del sedimento del líquido sobre un portaobjetos y efectuar tinción
de Gram.
- Incubar en estufa a 35º C por 18-24 horas. Incubar placa de agar chocolate en
jarra con vela.
- Incubar hasta 72 horas para dar por negativo.
Muestra tomada en frasco de hemocultivo:
- Incubar el frasco en equipo automatizado para hemocultivos.

- El tiempo de incubación debe cambiarse a “3 días” puesto que el equipo incuba
por defecto todas las muestras por 5 días.
- Si además del frasco de hemocultivo, la muestra viene tomada en tubo sin
anticoagulante, concentrar por centrifugación a 1.500 rpm por 15 minutos, excepto
aquellas muestras de aspecto turbio.
- Aspirar el sedimento con una pipeta de transferencia estéril, colocar 3 gotas en un
portaobjetos y efectuar tinción de Gram.
• Siembra de frasco positivo:

- Extraer frasco del equipo automatizado.
- Desinfectar la tapa del frasco con una toallita de Alcohol Pad.
- Introducir aguja especial para hemocultivos.
- Sembrar muestra (1 o 2 gotas) en agar sangre y agar chocolate.
- Colocar una gota de muestra en un portaobjetos y extender con la misma aguja la
muestra a modo de frotis delgado para realizar tinción de Gram.
en jarra con vela a 35°C.
- Al día siguiente realizar lectura de las placas y efectuar identificación y
- Importante: Por tratarse de líquidos normalmente estériles, cualquier desarrollo

bacteriano puede tener importancia clínica.
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24.5 REFERENCIAS
- Curso Post Título Estudio y Estandarización de Líquidos Biológicos en el

Laboratorio Clínico. 2001.
Aplicación de la citocentrifugación en el diagnóstico precoz de las infecciones
bacterianas de líquidos estériles. Tesis doctoral Jesús Turiño Luque. Universidad
de Granada 2007.
24.6 FLUJOGRAMA LÍQUIDOS ESTÉRILES

Muestra tomada en
Muestra tomada en
tubo
frasco de hemocultivo
Centrifugar 1.500 rpm x 10 min.

Ingresar muestra en
equipo automatizado
Extraer del sedimento
Muestras positivas en
Preparar frotis Sembrar:
equipo, seguir
Agar sangre y Chocolate
esquema
Realizar tinción de Incubar por 24-72 horas a

Gram 35ºC. Agar Chocolate en jarra
con vela con vela.
Muestras negativas en
equipo: informar a las
72 horas.
Observar posible desarrollo

microbiano.
Identificación y
antibiograma
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25. SECRECIONES
25.1 FUNDAMENTO
El estudio microbiológico de secreciones, permite el estudio de bacterias involucradas en

procesos infecciosos, de diversa índole, siendo generalmente del grupo de las aerobias y
facultativas.
Muestra tomada en tubo con Stuart o tubo estéril tapa rosca en caso de muestras de
tamaño grande. Comprende una gran diversidad de muestras, entre ellas:
Secreción ocular, biliar, peritoneal, ótica, piel, herida, escara, nasal, ulcera, quemadura,
tejido, uretral, endotraqueal, faríngea, etc.
Materiales:
-Tubos con medio de transporte Stuart
-Portaobjetos
-Tubos de plástico estériles tapa rosca
Reactivos:
-Tinción de Gram
- Placas con Agar Chocolate
-Placas de agar sangre de cordero 5%
-Placas de agar Mc Conkey.
-Tubos con caldo soya.
Equipos:
-Microscopio
-refrigerador 4-8 °C
25.4 PROCEDIMIENTO
- Previamente a sembrar la muestra, dirigirse a la tabla N°2: “Agares para siembra

de muestras”, la cual se encuentra siempre visible en la zona de siembra de
muestras.
En esta tabla resumen, se especifica los medios de cultivo a utilizar en cada tipo
de muestra.
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BACTERIOLOGIA
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- Sacar tórula del medio de trasporte y sembrar en los medios de cultivo respectivos.
- Con la misma tórula, realizar frotis en portaobjetos. Dejar secar.
- Incubar placas y caldo de cultivo, en estufa de cultivo a 35ºC por 18 a 24 hrs.
- Una vez seco el portaobjetos con el frotis, proceder a realizar Tinción de Gram
para su lectura en el microscopio.
- Revisar las placas y tubos después de 18-24 hrs. de incubación. Realizar
búsqueda de colonias de patógenos en las placas de medio de cultivo.
- En caso de no haber desarrollo, revisar caldo soya. Si está turbio, proceder a
realizar traspaso en Agar Sangre y Mac Conkey desde este caldo; incubando las
placas en estufa de cultivo a 35ºC, por 18-24 hrs. En caso contrario, incubar por
18-24 hrs. más, las placas y tubos negativos, sin desarrollo bacteriano.
- Informar la o las bacterias patógenas encontradas, realizando identificación y
(*) La excepción a los tiempos de incubación la constituyen muestras de huesos o prótesis

las cuales deben incubarse hasta 15 días, o cualquier otra muestra en la cual sea
solicitado por el médico o infectólogos la prolongación de su incubación.
25.5 REFERENCIAS
- Manual de microbiología clínica, Patrick Murray, 9º Edición 2007,
- Manual de diagnóstico bacteriológico en el laboratorio clínico, Rosa Bustos y col.

1994, Instituto de Salud Pública.
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TABLA N°2: AGARES PARA SIEMBRA DE MUESTRAS

LIQUIDOS: TRACTO GENITOURINARIO:
LCR-Articular-Pleural- Agar Chocolate Flujo vaginal Agar Chocolate
Sinovial-Amniótico Agar Sangre Agar Sangre
Ascítico-Pericárdico Caldo - Gram Agar McConkey >14 a
Agar Sangre Gram
Liquido Peritoneal Agar McConkey Directo al Fresco
Caldo - Gram Agar Cromo Candida
PIEL: Endocervical-Cervix Agar Chocolate
Absceso-Furúnculo Agar Sangre Trompa - Ovario Agar Sangre
Herida-Quemadura Agar McConkey Semen Agar McConkey
Ulcera-Flictena- Caldo - Gram Uretral Gram
Piel - Escara Agar Sangre Urocultivo Agar Sangre
Agar McConkey Agar McConkey
RESPIRATORIAS: Portación SGB Agar Cromógeno SGB
Bronquial Agar Chocolate TRAUMATOLÓGICAS:
Expectoración Agar Sangre Hueso Agar Chocolate
Agar McConkey Cadera Agar Sangre
Gram Prótesis Agar McConkey
Traqueal Agar Sangre Gram
Endotraqueal Agar McConkey Trozo tejido en frasco Caldo
Gram COPROCULTIVO:
Endotraqueal Agar Chocolate Deposición Agar McConkey Sorb.
Cuantitativo Agar Sangre Agar XLD
** Ver Manual** Agar McConkey Agar TCBS
OTORRINO-OFTAMOL.: Gram (tinción BV)
Ocular - Otica Agar Chocolate En sospecha de colera Caldo peptonado
Agar Sangre agregar:
Agar McConkey Estudio de VRE Agar Cromógeno VRE
Gram
Nasal - Faríngea Agar Chocolate CULTIVO DE HONGOS:
Nasofaringea Agar Sangre Muestra respiratoria Agar Sabouraud Tubo
Amígdala Gram Secreciones - orina Agar Sabouraud placa
OTRAS SECRECIONES: Uñas-Pelos Agar Sabouraud placa
Gástrica-Episiotomía Agar Sangre
Bilis-Umbilical - GGT Agar McConkey OTRAS MUESTRAS:
Gram - Caldo Lav. Broncoalveolar Agar Chocolate
Punta de cateter Agar Sangre ** Ver Manual** Sangre-McConkey
**Sembrar 3-4 cms ** Gram
CULTIVO DE GONOCOCO: Empiemas Agar Chocolate
Vaginal-Uretral Agar Chocolate Meninges Agar Sangre
Ocular -Umbilical Gram Subdural Gram
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26. TINTA CHINA
26.1 FUNDAMENTO
Técnica utilizada para la observación de la estructura de la cápsula, principalmente en

Cryptococcus neoformans. Las partículas de pigmento de tinta no se introducen en la
cápsula que rodea la célula de levadura esférica, resultando en una zona de aclaramiento
o “halo” alrededor de las células.
Muestras de LCR, líquido ascítico, líquido articular o sinovial, líquido peritoneal, líquido
pleural.
Materiales:
-Portaobjetos
-Cubreobjetos
-Tubos plásticos estériles tapa rosca
-Pipetas Pasteur estériles
Reactivos:
-Tinta china
Equipos:
-Centrífuga
-Microscopio
26.4 PROCEDIMIENTO
- Centrifugar LCR (u otro líquido) a 3.000 rpm por 10 minutos y eliminar

sobrenadante.
- Colocar en un tubo de Khan estéril, una gota de tinta china de buena calidad y
agregar una gota del sedimento del LCR (u otro líquido).
- Homogenizar.
- En un portaobjetos colocar con una pipeta Pasteur estéril una gota de la mezcla.
- Colocar cubreobjeto sobre la preparación.
- Observar en el microscopio con aumento 10x y luego confirmar con aumento 40x,
buscando las levaduras con cápsula típica.
- Informar resultados enseguida.
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• Positivo: Se observa fondo negro y las levaduras con cápsula sin color (“halo”).
• Negativo: Ausencia de cápsula.
La sensibilidad de la tinción oscila entre el 25-50% en los casos de meningitis,

aunque en los pacientes con sida puede ser mayor. Pueden producirse falsos
resultados positivos en presencia de levaduras de los géneros Rhodotorula y
Candida, de otras especies de Cryptococcus, Klebsiella pneumoniae, así como por
artefactos. La técnica requiere personal entrenado y siempre hay que confirmar
este diagnóstico inicial con el cultivo.
26.5 REFERENCIAS
- Manual de microbiología clínica, Patrick Murray 9º Edición 2007.

- Cryptococosis: Diagnóstico microbiológico y estudio de la sensibilidad in vitro”.
Control de Calidad SEIMC. Estrella Martin-Mazuelos, Anastasio Valverde-Conde.
Servicio de Microbiología. Hospital de Valme. Sevilla.
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26.6 FLUJOGRAMA TINTA CHINA
LCR (u otro líquido)
Centrifugar LCR y eliminar sobrenadante.
En un tubo khan: 1 gota tinta China +1 gota

sedimento muestra
Homogenizar
Agregar en un portaobjeto una gota de la

mezcla + cubreobjetos
Observar en el microscopio en aumento 10x

y confirmar en 40x.
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27. UROCULTIVOS
27.1 FUNDAMENTO
La técnica de Urocultivo se basa en la búsqueda de bacterias uropatógenas, presentes en

la orina de pacientes, y que se detectan durante el estudio del cultivo de orina adicionado
del sedimento urinario; éste completa el estudio del cultivo.
En frasco plástico estéril tapa rosca:

• Orina de primera micción 2º chorro
• punción vesical
• Catéter
• sonda vesical
Materiales:
-Frascos plásticos estériles con tapa rosca
-Asas plásticas de 1µL estériles (o asa metálica de 1 ul)
-Portaobjetos
-Cubreobjetos
-Tubos plásticos 15 ml
Reactivos:
-Placas con agar sangre de cordero 5%
-Placas con agar McConkey
Equipos:
-Estufa de cultivo a 35 ºC.
-Centrífuga
-Microscopio
27.4 PROCEDIMIENTO
- Agitar bien la muestra.

- Tomar muestra de orina con asa calibrada1 ul desechable.
- Sembrar y estriar en un cuarto de placa de agar sangre de cordero al 5%,
previamente cortada y marcada.
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- Sin volver a la muestra, sembrar y estriar en un cuarto de placa de agar Mc

Conkey, es decir, con la misma gota se siembran los dos agares, lo que permite
tener colonias más aisladas en este agar.
- Finalmente, y después de haber realizado la siembra en los dos agares, realizar
tajo en agar sangre y eliminar el asa.
- Incubar en estufa a 35 ºC por 18-24 horas.
- Posterior a la siembra, la muestra se traspasará a un tubo plástico 15 ml para ser
llevado a la sección de orinas en donde se realizará la lectura del sedimento
urinario.
- El recuento de colonias se realiza preferentemente desde el agar sangre y se
multiplicará por 1.000 cada colonia.
• 1 colonia = 1.000 UFC/ml
- Para la interpretación del cultivo ver tabla N°3 en la siguiente página:
“Interpretación del urocultivo y conducta recomendada”
(*) En caso de obtener un cultivo negativo en presencia de un sedimento alterado y/o con
bacteriuria, se debe hacer una resiembra de la muestra en un agar sangre cordero al 5%,
agar Chocolate y agar McConkey o en otro medio de cultivo según criterio del profesional.
Además, se realizará un sedimento urinario y frotis para tinción de Gram directo del
sedimento.
Este criterio se aplica a cualquier discordancia que se presente entre la lectura del
sedimento y el resultado de la siembra.
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BACTERIOLOGIA
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TABLA N°3:INTERPRETACION MICROBIOLOGICA DEL UROCULTIVO Y CONDUCTA

RECOMENDADA.
INTERPRETACION MICROBIOLÓGICA DEL UROCULTIVO

Y CONDUCTA RECOMENDADA
Recuento Condición clínica o Sedimento Microorganismo Interpretación/Conducta
de método de urinario (s) Aislado (s) recomendable
Colonias recolección
(UFC/ml)
0 Independiente Urocultivo negativo
del resultado
Cualquier Punción suprapúbica Independiente Cualquier Identificación y estudio
recuento del resultado microorganismo de susceptibilidad
1.000 Caterización Independiente ≤ 2 especies Identificación y estudio
transitoria del resultado uropatógenos de susceptibilidad
≥ 10.000 Segundo chorro en Independiente ≤ 2 especies Identificación y estudio
paciente especial (***) del resultado uropatógenos de susceptibilidad
≥ 10.000 Orina por catéter Patológico ≤ 2 especies Identificación y estudio
permanente uropatógenos de susceptibilidad
≥ 10.000 Primera micción, Patológico ≤ 2 especies Identificación y estudio

Segundo chorro uropatógenos de susceptibilidad
≥ Primera micción, Patológico 2 uropatógenos + Identificación y estudio

100.000 Segundo chorro otra bacteria con de susceptibilidad solo
recuento 10 veces de los uropatógenos
menos
≥ Primera micción, Sin ≤ 2 especies Identificación y estudio
100.000 Segundo chorro antecedentes uropatógenos de susceptibilidad
≥ ≤ 3 especies Polimicrobiano
100.000 Uropatógenos sin Solicite nueva muestra
Predominio de
ninguno
(***) Mujer embarazada, paciente diabético o urológico
27.5 REFERENCIAS
- Comité de Microbiología Clínica. Encuesta sobre métodos de diagnóstico

microbiológico de la infección urinaria. Rev Chilena de Infectología 2001.
- Sobel J D, Kaye D. Urinary tract infections. In: Mandell, Douglas & Bennett's
Principles and Practice of Infectious Diseases. Mandell G L, Bennett J E, Dolin R,
eds. 5th edition, 2000. Churchill Livingstone, New York.
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BACTERIOLOGIA
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27.6 FLUJOGRAMA UROCULTIVOS
ORINA
Muestra en tubo sembrar con asa de

plástico de 15 ml 1ul en agar sangre y
McConkey.
Sedimento urinario en Incubar en estufa por 18-

sección de orinas 24hrs a 35ºC.
POSITIVO NEGATIVO: Informar

como: 0 UFC/ml
Realizar
identificación y
antibiograma Cultivo negativo con
sedimento alterado y/o
bacteriuria: resiembra en
agar sangre, Chocolate y
McConkey,
Sedimento, Gram
Incubar en estufa por

18-24hrs a 35ºC.
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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ESTUDIO DE PORTACIONES
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BACTERIOLOGIA
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28. PORTACIÓN DE ENTEROCOCO VANCOMICINA RESISTENTE (VRE)
28.1 FUNDAMENTO
Las infecciones por Enterococcus sp. Resistentes a vancomicina (VRE) se han expandido
en diferentes partes del mundo incluyendo Chile, agregando morbilidad, letalidad y
aumento de los costos de hospitalización.
Para contener este riesgo, el Ministerio de Salud de Chile dispuso a mediados del 2000 la
vigilancia de portación intestinal de VRE en forma mensual a todos los pacientes
hospitalizados en Unidades de Cuidados Intensivos y Unidades críticas.
Tórula rectal en medio Stuart
Reactivos:
-Tórulas con Stuart
-Agar Cromógeno para Enterococo vancomicina resistente
Equipos:
28.4 PROCEDIMIENTO
- Sembrar la muestra directamente en un Agar Cromógeno para Enterococos

Vancomicina Resistente y estriar.
- Incubar la placa en estufa a 35°C por 24-48 horas (según recomendación del
fabricante).
- Realizar lectura de la placa

La interpretación del resultado de la siembra (reacciones cromogénicas) depende del
fabricante, por lo tanto, se debe consultar el inserto técnico respectivo en archivador
“Insertos” que está en el mueble llamado “Manuales y documentos”.
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BACTERIOLOGIA
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Página 89 de 149
28.5 REFERENCIAS
- Ministerio de Salud de Chile. Circular 4/C28, 9 de mayo del 2000.

- “Estudio de factores de riesgo para colonización por Enterococo resistente a
vancomicina en el Hospital Militar de Santiago” Revista Chilena de Infectología,
Agosto 2009.
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BACTERIOLOGIA
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29. PORTACIÓN DE STREPTOCOCCUS GRUPO B (SGB) EN EMBARAZADAS
29.1 FUNDAMENTO
El Streptococcus agalactiae (Streptococcus grupo B) es un patógeno que causa diversas

infecciones en el adulto y es una de las causas más importantes de sepsis neonatal
precoz dentro de las tres primeras semanas de vida. Su transmisión se produce de madre
a hijo por vía transplacentaria, ascendente o, principalmente durante el parto.
Dado que la sepsis neonatal por Streptococcus grupo B es una enfermedad de alta
letalidad, resulta muy importante disponer de una prueba para poder pesquisar la
portación de la bacteria en mujeres embarazadas.
Tórula en medio Stuart:

• Vaginal
• Perianal
Reactivos:
-Tórulas con medio Stuart
-Placas con agar cromógeno para Streptococcus grupo B
-Tubos con caldo Todd Hewitt
Equipos:
29.4 PROCEDIMIENTO
- Extraer la tórula del medio Stuart y emulsionar en un caldo Todd Hewitt.

- Incubar el caldo 18-24 horas a 35°C.
- Al día siguiente, sembrar del caldo Todd Hewitt en agar cromógeno para
Streptococcus grupo B.
- Incubar la placa a 35°C por 24-48 horas (según recomendación del fabricante).
- Realizar lectura de la placa.
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BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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La interpretación del resultado de la siembra (reacciones cromogénicas) depende del

fabricante, por lo tanto, se debe consultar el inserto técnico respectivo en archivador
“Insertos” que está en el mueble llamado “Manuales y documentos”.
29.5 REFERENCIAS
- “Guía Perinatal” 2015, Subsecretaría de Salud Pública, División Prevención y

Control de Enfermedades. Departamento de Ciclo Vital. Programa Nacional Salud
de la Mujer.
- “Sepsis neonatal por Streptococcus grupo B”, Magdalena Cruz O., Adriana Doren
V., José Luis tapia I., Fernando Abarzua C., Revista Chilena de Pediatría,
2008;79(5):462-470
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BACTERIOLOGIA
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30. PORTACIÓN DE ENTEROBACTERIAS CIPROFLOXACINO RESISTENTE

(PROTOCOLO DR. BONOMO)
30.1 FUNDAMENTO
El principal objetivo de esta técnica es identificar la resistencia bacteriana a

fluoroquinolonas en pacientes llevados a biopsia de próstata.
Aunque la biopsia transrectal de próstata es una técnica segura, no está exenta de
complicaciones; las más graves son las infecciones urinarias o sepsis, por lo cual se han
establecido protocolos de profilaxis antibiótica de tal modo de reducir estas
complicaciones.
El grupo de antibióticos más empleado para la profilaxis son las fluorquinolonas por su
elevada biodisponibilidad oral y las elevadas concentraciones que alcanzan tanto en orina
como en el tejido prostático. Paralelamente, con el uso de las quinolonas se ha
incrementado el número de cepas resistentes a éstas.
Tórula rectal en medio Cary Blair.
Reactivos:
-Tórula con medio Cary Blair
-Placas de agar Mueller Hinton
-Sensidiscos de Ciprofloxacino
Equipos:
-Estufa de cultivo a 35°C.
-Refrigerador 4-8°C.
30.4 PROCEDIMIENTO
- Extraer tórula del medio de transporte y sembrar directamente la placa de agar

Mueller Hinton abarcando toda la superficie del agar.
- Posteriormente poner un sensidisco de ciprofloxacino en le medio de la placa.
- Incubar en estufa a 35°C por 18-24 horas.
- En la lectura de placa, observar si hay desarrollo de colonias alrededor del borde
del disco.
- Si hay colonias, se deben aislar en un agar McConkey e incubar a 35°C por 18-24
horas.
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BACTERIOLOGIA
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- Realizar identificación y antibiograma.

- Si no hay colonias alrededor del borde del disco (se forma un halo de inhibición) se
debe informar como negativo.
30.5 REFERENCIAS
- “Profilaxis antibiótica en la biopsia transrectal de próstata”, Daniel Muñoz Velez,

Antoni Vicens y mariano Ozonas Morangues. Actas Urológicas Españolas Vol.33
N°8., 2009.
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
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TEST RÁPIDOS
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
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31. ANTÍGENO STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE
31.1 FUNDAMENTO
Ver inserto de la Técnica en archivador “Insertos”.

Este archivador se encuentra en mueble llamado “manuales y documentos”.


31.4 PROCEDIMIENTO

31.5 REFERENCIAS

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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
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32. ANTÍGENO DE LEGIONELLA
32.1 FUNDAMENTO



32.4 PROCEDIMIENTO

32.5 REFERENCIAS

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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
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33. CLAMIDIA
33.1 FUNDAMENTO



33.4 PROCEDIMIENTO

33.5 REFERENCIAS

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BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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34. CLOSTRIDIUM DIFFICILE
34.1 FUNDAMENTO



34.4 PROCEDIMIENTO

*** Ver algoritmo del procesamiento de muestras para Clostridium difficile.
34.5 REFERENCIAS

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BACTERIOLOGIA
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ALGORITMO CLOSTRIDIUM DIFFICILE
Deposición fresca
Determinación GDH Conservar

inmediatamente la
muestra a 4-8°C
GDH POSITIVO GDH NEGATIVO
Determinación Toxina Informar como:

A+B NEGATIVO
A+B NEGATIVO A+B POSITIVO
PCR Informar como:

(Polimerasa en cadena) POSITIVO
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
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35. HANTA VIRUS
35.1 FUNDAMENTO



35.4 PROCEDIMIENTO

35.5 REFERENCIAS

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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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36. LEPTOSPIRA
36.1 FUNDAMENTO



36.4 PROCEDIMIENTO

36.5 REFERENCIAS

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BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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37. MICOPLASMA-UREAPLASMA
37.1 FUNDAMENTO



37.4 PROCEDIMIENTO

37.5 REFERENCIAS

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BACTERIOLOGIA
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38. ROTAVIRUS-ADENOVIRUS
38.1 FUNDAMENTO



38.4 PROCEDIMIENTO

38.5 REFERENCIAS

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BACTERIOLOGIA
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IX. CONTROL DE CALIDAD
1. CEPAS ATCC (AMERICAN TYPE CULTURE COLLECTION)
1.1 FUNDAMENTO
Las cepas ATCC es un material biológico de referencia certificado y son una herramienta
indispensable y eficaz para el control de calidad interno en los cultivos de microbiología.
La colección certifica que se suministra una determinada cepa, que es un cultivo puro, y
que se han observado las convenientes pruebas morfológicas, bioquímicas y moleculares
correspondientes.
1.2 INDICACIONES
Control de calidad interno de bacteriología.
Materiales:
-Tubos eppendorf estériles o criotubos
Reactivos:
-Cepas ATCC liofilizadas
-Placas con agares dependiendo de la cepa (sangre de cordero 5%, McConkey,
Chocolate, etc.)
-Caldo soya tripticasa con 10-15 % de Glicerol
Equipos:
-Congelador a -80°C
-Vortex
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
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1.4 PROCEDIMIENTO
1.4.1 CULTIVO DE CEPAS DE REFERENCIA:
- Para la siembra de la cepa una vez llegado al laboratorio, se debe seguir las
instrucciones del fabricante según su presentación (Loop, Liofilizado, etc).
- Según la bacteria los agares más indicados son:
o Staphylococcus: Agar sangre de cordero 5% en atmósfera normal.
o Streptococcus: Agar sangre de cordero 5%
(Streptococcus pneumoniae en microaerofilia)
o Enterobacterias: Agar McConkey en atmósfera normal y/o Agar
sangre de cordero 5%
o Haemophilus influenzae: Agar Chocolate en microaerofilia
o Candida spp.: Agar Sabouraud en atmósfera normal
- Incubar las placas a 35°C en la atmósfera respectiva según la bacteria por 18-24
horas.
- Al día siguiente, realizar un subcultivo de las cepas en los agares respectivos e
incubarlas a 35°C por 18-24 horas nuevamente.
1.4.2 CONSERVACIÓN DE CEPAS DE REFERENCIA:
- A partir del subcultivo realizado en el paso “Cultivo de cepas de referencia”,

realizar un traspaso de abundante cantidad de cepa a un tubo eppendorf o similar
que contenga Caldo Tripticasa con 10-15 % de Glicerol. Homogeneizar en Vortex.
- Congelar a -80°C.
1.4.3 CULTIVO DE CEPAS DE TRABAJO:

Los aislamientos a partir de cepas congeladas se deben traspasar dos veces antes
de ser usados, por lo tanto, se debe proceder de la siguiente manera:
- La(s) cepa(s) a probar deben ser retiradas del congelador a -80°C y esperar a que
se descongelen a temperatura ambiente.
- Una vez descongelada, homogeneizar el caldo en un Vortex.
- Con un asa o pipeta estéril sacar inóculo y cultivar en el agar sangre de cordero
5% y/o agar chocolate dependiendo de la bacteria.
- El criotubo descongelado debe ser eliminado.
- Incubar las placas a 35°C en la atmósfera respectiva según la bacteria por 18-24
horas.
- Al día siguiente, realizar un subcultivo de las cepas en agar sangre de cordero 5%
(Staphylococcus, Enterococcus y/o Enterobacterias), agar McConkey si es una
Enterobacteria, agar chocolate si es un Haemophilus e incubarlas a 35°C por 18-
24 horas nuevamente.
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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- En este momento la cepa está en condiciones de ser usada para el control de

calidad.
1.5 REFERENCIAS
- “Recomendaciones para el control de calidad en bacteriología”. T.M. Ingrid Araya

Díaz, T.M. María Soledad Prat Miranda, Dra. Verónica Ramírez Muñoz.
Documentos técnicos para el laboratorio clínico. ISP. Marzo 2015.
2. CONTROL DE CALIDAD
2.1 FUNDAMENTO
El establecimiento de un programa de control de calidad permite monitorizar con carácter

continuo las actividades del laboratorio de bacteriología en todas sus etapas para lograr
un proceso de constante mejoría de la calidad, permitiendo alertar a los profesionales
responsables de posibles resultados insatisfactorios que pueden y deben ser corregidos.
2.2 INDICACIONES
Control de calidad interno de bacteriología.
Materiales:
-Tórulas estériles.
-Porta y cubreobjetos
-Pipetas automáticas
-Pinzas
-Puntas de pipetas estériles
Reactivos:
-Cepas ATCC
-Tubos plásticos estériles con suero fisiológico y/o con caldo nutritivo.
-Medios de cultivos enriquecidos, selectivos, diferenciales.
-Medio Mueller Hinton corriente y con sangre de cordero 5%
-Etalón McFarland 0.5
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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-Sensidiscos con antibióticos, optoquin.

-Paneles de antibiogramas automatizados, placas antibiogramas levaduras.
-Tiras para epsilometría
-Tinción de Gram
-Tiras de oxidasa
-Agua oxigenada
-Slidex Staph-Kit
-Reactivo de Kovacs
-Test rápidos (Antígenos urinarios, Rotavirus; Clamidia; etc)
Equipos:
-Estufa de Cultivo a 35°C.
-Congelador -80°C
-Nefelómetro o Turbidímetro
-Equipo automatizado para antibiogramas.
2.4 PROCEDIMIENTO
2.4.1 ANTIBIOGRAMA POR DIFUSIÓN KIRBY Y BAUER
• Requisito de calidad:
- Las cepas ATCC a probar deben dar dentro de los rangos establecidos por la
CLSI, midiendo para tal efecto los halos de inhibición en milímetros (mm).
- Las cepas de control de calidad deben ser probadas con el procedimiento estándar
del método de difusión en disco, utilizando los mismos materiales y métodos que
se utilizan para las cepas clínicas.
• Procedimiento:
o El primer paso es recuperar y procesar las cepas ATCC correspondientes
según el paso del capítulo 39.4.3 “Cultivo de cepas de trabajo”.
o Luego se procede a inocular los antibiogramas según metodología descrita
en capítulo 1 “Antibiogramas por difusión Kirby y Bauer”.
• Formularios y registros:
- Los resultados se anotan en el archivador “Control de medios de cultivos y
Antibiogramas” el cual se encuentra en sala de lectura de placas en la
sección de bacteriología. En este archivo se encuentran los rangos
establecidos, esperados y actualizados para cada antibiótico según la cepa
ATCC y según la bacteria probada.
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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- Las planillas de las tablas respectivas para este archivo, se encuentran

debidamente actualizadas en formato digital en PC de bacteriología, lado
derecho del citófono en carpeta llamada: “Planillas QC”.
- Ver planilla tipo en Anexo N°1.
Nota: Tanto los antibióticos a probar, como los rangos de las cepas ATCC,
pueden ser susceptibles de modificación, por lo cual no son incluidos en
esta planilla tipo.
• Discos de antimicrobianos:
Con respecto a la utilización de los sensidiscos se debe tener las siguientes
consideraciones:
- El número de discos a utilizar puede variar dependiendo del tipo de bacteria,
entre un máximo de 12 discos en placas de 150 mm o 6 discos en placas de
100 mm.
- Utilizar sólo discos que se encuentren dentro de su período de vigencia.
- Almacenar congelados a -20°C. en envases individuales herméticos con
desecador y sello con papel Parafilm en la tapa.
• Cepas a usar y frecuencia del control:
Antibiograma por
difusión Cepas ATCC Frecuencia
Gram negativo E. coli ATCC 25922

Ps. aeruginosa ATCC 27853 Mensual
H. influenzae ATCC 49247
Gram positivo S. aureus ATCC 25923
Str.pneumoniae ATCC 49619 Mensual
E. faecalis ATCC 29212
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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2.4.2 ANTIBIOGRAMA AUTOMATIZADO
- Las cepas ATCC a probar deben dar dentro de los rangos de Concentración
mínima Inhibitoria (CIM) establecidos por la CLSI, expresados en ug/ml.
• Procedimiento:
en capítulo 2: “Antibiograma automatizado”.
o Ver “Manual del usuario del sistema de microbiología automatizado” BD
Phoenix M50 para introducción de paneles de control de calidad al
instrumento.
o Este manual se encuentra en mueble de bacteriología llamado “Manuales y
documentos”.
- Los registros de los antibiogramas automatizados pueden visualizarse en el
mismo instrumento (Ver “Manual del usuario del sistema de microbiología
automatizado” BD Phoenix M50), como también en el programa de
bacteriología. En ambos se obtienen informes analíticos y acumulados de
QC.
- Las acciones correctivas quedan registradas en archivador “Controles de
Equipos” que se encuentra al lado del equipo automatizado.
- Las cepas a usar en el control de calidad automatizado están definidas por

el fabricante.
- Ver insertos de cada panel con sus respectivas cepas ATCC en archivador
“Insertos” que se encuentra en mueble “Manuales y documentos”.
- Se realizará control de calidad a los paneles en cada cambio de lote.
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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2.4.3 ANTIBIOGRAMA PARA LEVADURAS
• Procedimiento:
en inserto “Sensititre Yeastone”.
o Este inserto se encuentra en archivador “insertos” en mueble de
bacteriología llamado “Manuales y documentos”.
esperados y establecidos para cada antifúngico según la cepa ATCC y
según la levadura probada.
- Las planillas de las tablas respectivas para este archivo, se encuentran con
sus rangos esperados actualizados en formato digital en PC de
bacteriología, lado derecho del citófono en carpeta llamada: “Planillas QC”.
- Ver planilla tipo en Anexo N°2
Nota: Tanto los antifúngicos a probar, como los rangos de las cepas ATCC,
esta planilla tipo.
- Las cepas a usar en el control de calidad están definidas por el fabricante.

- Ver insertos de las cepas ATCC a probar en archivador “Insertos” que se
encuentra en mueble “Manuales y documentos”.
- Se realizará control de calidad a las placas en cada cambio de lote.
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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2.4.4 EPSILOMETRÍA
• Procedimiento:
o Luego se procede a inocular la prueba según metodología descrita en
capítulo 1 “Antibiogramas por difusión Kirby y Bauer”.
esperados actualizados y establecidos para cada antibiótico según la cepa
ATCC y según la bacteria probada.
- Las planillas de las tablas respectivas para este archivo, se encuentran en
formato digital en PC de bacteriología, lado derecho del citófono en carpeta
llamada: “Planillas QC”.
- Ver planillas tipos en Anexo N°1 y 3.
Nota: Tanto los antibióticos a probar, como los rangos de las cepas ATCC,
esta planilla tipo.
Tiras epsilometría Cepas ATCC Frecuencia
Imipenem E. coli ATCC 25922 Cambio de lote

Meropenem E. coli ATCC 25922 Cambio de lote
Penicilina Str.pneumoniae ATCC 49619 Cambio de lote
Ceftriaxona Str.pneumoniae ATCC 49619 Cambio de lote
Vancomicina Sta. aureus ATCC 29213 Cambio de lote
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BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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2.4.5 PRUEBAS BIOQUÍMICAS Y DE SCREENING:
- Ausencia, presencia de reacciones bioquímicas o halos esperados según
cada bacteria a probar.
• Procedimiento:
o Las cepas de trabajo a utilizar se encuentran a temperatura ambiente en

sala de lectura de placas y son traspasadas semanalmente. El respaldo de
estas cepas se encuentra en congelador a -80°C.
capítulo 6 “Identificación bacteriana por pruebas bioquímicas”.
sección de bacteriología. En este archivo se encuentran los resultados
esperados establecidos para cada bacteria probada.
- Ver planilla en Anexo N° 4, 5, 6, 7 y 8.
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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Medio Cepas control Frecuencia
TSI Escherichia coli Mensual

Proteus mirabilis Mensual
Shigella flexneri Mensual
Pseudomonas aeruginosa Mensual
LIA Escherichia coli Mensual

Proteus mirabilis Mensual
Shigella flexneri Mensual
MIO Escherichia coli Mensual

Klebsiellla pneumoniae Mensual
UREA Proteus mirabilis Mensual

Klebsiellla pneumoniae Mensual
Escherichia coli Mensual
CITRATO Klebsiellla pneumoniae Mensual

Escherichia coli Mensual
Prueba Cepas a probar Frecuencia
Slidex Staph-kit Sta. aureus Cada lote

S. epidermidis
Oxidasa Pseudomona aeruginosa Mensual

Escherichia coli
Cada vez que se

Catalasa Staphylococcus aureus ocupe
Streptococcus sp.
Optoquin Streptococcus pneumoniae Cada lote

Streptococcus viridans
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BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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2.4.6 MECANISMOS DE RESISTENCIA
- Ausencia o presencia de reacciones bioquímicas o halos esperados según
cada bacteria a probar.
• Procedimiento:
o Las cepas de trabajo a utilizar se encuentran a temperatura ambiente en
sala de lectura de placas y son traspasadas semanalmente. El respaldo de
estas cepas se encuentra en congelador a -80°C.
capítulo 8: “Mecanismos de resistencia”.
Nota: las cepas Staphylococcus aureus BAA-976 y BAA-977 no deben ser
usadas para el control de los discos de eritromicina ni clindamicina.
- Ver planilla en Anexo N°9, 10, 11 y 12.

Prueba Cepas a probar Frecuencia
Cefinasa Sta. aureus ATCC 29213 Mensual
H. influenzae ATCC 49247
Prueba D-Test Sta. aureus BAA-976 Mensual
Sta. aureus BAA-977
BLEE E. coli ATCC 25922 Mensual
K. pneumoniae ATCC
700603
Carbapenemasas Según fabricante Cada lote
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BACTERIOLOGIA
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2.4.7 TINCIÓN DE GRAM
- Correcta coloración según el grupo de bacterias.
• Procedimiento:
- Realizar frotis con cepas de Staphylococcus aureus y Escherichia coli, las
cuales se encuentran dentro en las cepas de trabajo semanal a temperatura
ambiente. También se pueden dejar frotis confeccionados con anticipación y
guardados a temperatura ambiente.
- Realizar tinción de Gram según metodología descrita en capítulo 9: “Tinción
de Gram”.
- Ver planilla en Anexo N° 13.
Colorantes Cepas a probar Frecuencia

- Tinciones “caseras”
(Cristal violeta y
Cristal Violeta, Lugol, Staphylococcus aureus safranina pueden ser
Safranina Escherichia coli comerciales):
Cada preparación y
semanal.
- Tinciones comerciales:
Semanal.
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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2.4.8 MEDIOS DE CUTIVOS
- Ausencia o presencia de desarrollo bacteriano según cada medio de cultivo
a probar.
• Procedimiento:
- Realizar siembras en los medios a probar utilizando las cepas de trabajo
semanal.
- Incubar a 35°C por 24-72 horas y atmósfera respectiva según la bacteria.
- Ver planilla en Anexo N° 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 y 23.
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Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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Medios de cultivo Cepas a probar Frecuencia

Streptococcus grupo A Cada lote
Agar sangre de Streptococcus pneumoniae
cordero 5%
Agar Chocolate Haemophilus influenzae Cada lote
E. coli
Agar McConkey Proteus mirabilis Cada lote
Enterococcus faecalis
E. coli
Agar XLD Proteus mirabilis Cada lote
Shigella flexneri
E. coli O:157 Cada lote

Agar Sorbitol E. coli
Agar Cromógeno Enterococcus Vanco = Resistente

Enterococcus Enterococcus Vanco = Sensible Cada lote
Vancomicina E. coli
Resistente
Candida albicans
Agar Cromógeno Candida glabrata Cada lote
Candida E. coli
Agar Cromógeno Streptococcus grupo B

Streptococcus Enterococcus faecalis Cada lote
grupo B
Agar Sabouraud Candida albicans Cada lote
Candida kruzei
E. coli
Agar TCBS Vibrio cholerae ATCC 14033 Cada lote
V. parahemolyticus ATCC 17802
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BACTERIOLOGIA
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2.4.9 TEST RÁPIDOS
- Concordancia con resultado declarado en inserto técnico correspondiente a
cada test rápido.
• Procedimiento:
- Ver inserto técnico correspondiente a cada test rápido.
- Los resultados se anotan en el archivador “Control de calidad Test
Rápidos”.
- Ver planilla en anexos N°24
2.5 IDENTIFICACIÓN DE ERRORES Y RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS
Es necesario disponer de un sistema de registro de cualquier problema identificado en la

ejecución del control de calidad, así como de la obtención de resultados insatisfactorios.
Para tal efecto, cada planilla de registro cuenta con un espacio para anotar cualquier
inconveniente en el control de calidad.
Para los casos de resultados insatisfactorios, el procedimiento interno de control de
calidad incluye criterios para la ejecución de las acciones correctivas:
- Si cualquier halo de inhibición o CIM se encuentra fuera de los límites de

control se realiza lo siguiente:
o Se prueban las cepas de referencia que corresponda por cinco días
consecutivos.
o Si las cinco medidas para la combinación antimicrobiano-cepa están
dentro de los rangos aceptables no es necesario otra acción
correctiva.
o Ante cualquier resultado fuera de los límites del control, se asume
control diario de la combinación antimicrobiano-cepa por 20 días.
Para poder informar al clínico la sensibilidad del antimicrobiano en
cuestión, debe ser analizado por un método alternativo, mientras se
resuelve la situación.
- Posibles causas de errores en los controles de calidad en general:
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BACTERIOLOGIA
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o Revisar si la cepa control es la correcta.

o Observar si existe contaminación de la cepa o el medio.
o Las zonas de diámetro fueron medidas y transcritas correctamente.
o Los materiales utilizados no estuvieran vencidos y que fueran
almacenados a la temperatura correcta.
o La estufa de incubación tuviera la temperatura y atmósfera
adecuada.
o Funcionamiento correcto de los equipos utilizados.
o Conservación adecuada de los discos, paneles, pruebas, agares.
o Las cepas control no han sido cambiadas ni contaminadas.
o Las suspensiones del inóculo se han preparado y ajustado
correctamente y a partir de una placa incubada por no más de 24
horas.
o Puede ser necesario obtener una nueva cepa de control de calidad
y nuevos lotes de materiales. Hasta que el problema sea resuelto,
puedes ser necesario utilizar un método alternativo para evaluar la
sensibilidad.
o Una vez que el problema haya sido corregido, se debe documentar
el comportamiento satisfactorio de las pruebas.
2.6 EQUIPAMIENTO
- Los equipos utilizados tienen incluido un programa de mantención preventiva en el

cual se mantiene un registro de las mismas, así como los eventos de reparación y
mantención de los usuarios. Estos registros se encuentran en archivador “Ficha
Técnica Equipos” en mueble llamado “Manuales y documentos”.
- Los registros de calibraciones y controles de los equipos se encuentran en
archivador “Controles Equipos”.
- Los manuales del operador de los equipos utilizados se encuentran disponibles en
mueble “Manuales y documentos”.
- El registro de los controles diarios de temperatura de refrigeradores y
congeladores se encuentran en archivador “Registro control de temperatura
refrigeradores”, así como el de la estufa de cultivo se encuentra adosado a la
pared lateral de la misma.
- El registro de los refrigeradores que no cuentan con visor de temperatura, se
efectuará a través de sensores internos, a los cuales se les realizará la lectura en
forma digital y quedará registrado en una planilla Excel: carpeta “Registros T°” en
PC de bacteriología al lado izquierdo del citófono.
119
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 120 de 149
2.7 REFERENCIAS
- Recomendaciones para el control de calidad en bacteriología: estudio de

susceptibilidad antimicrobiana mediante difusión por disco.” Documentos técnicos
para el laboratorio clínico. Instituto de Salud Pública. Marzo 2015.
- Murray, Baron, Pfaller, Tenover, Yolken. Manual of Clinical microbiology. 8º
Ed.2003.
X. INDICADOR DE CALIDAD:
• “Tiempo de respuesta de Clostridium difficile realizados en la sección de

bacteriología”
Nombre del indicador % Folios con peticiones de Clostridium difficile informados

antes de 5 horas
Tipo de indicador Resultado
Fórmula (N° de Folios con peticiones de Clostridium difficile informados

antes de 5 horas, provenientes de unidades críticas en el
período /N° Total de Folios con peticiones de Clostridium
difficile provenientes de unidades críticas en el período) x100
Fuente de información Sistema informático del laboratorio
Periodicidad de Mensual
evaluación
Umbral de cumplimiento Mayor o igual a 80%
Responsable Profesional encargado de la sección de bacteriología
Observaciones Unidades Criticas son UPCs y Emergencias.
120
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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• “Tiempo de respuesta de Gram directo de LCR realizados en el laboratorio

clínico”
Se realizará la lectura de la tinción de Gram del LCR y se procederá a informarlo en el

sistema informático de bacteriología antes de 2 horas de ingresada la muestra al
laboratorio clínico.
Nombre del indicador % Gram directos de LCR informados antes de 2 horas.
Tipo de indicador Resultado
Fórmula (N° de Gram de LCR directos informados antes de 2 horas en

el período /N° Total de Gram directos de LCR recibidos en el
período) x100
Fuente de información Sistema informático de bacteriología
Periocidad de evaluación Mensual
Umbral de cumplimiento Mayor o igual a 80%
Responsable Profesional encargado de la sección de bacteriología
Observaciones Se exceptúan del denominador las muestras que no traen tubo

para realizar tinción de Gram.
121
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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XI. DERIVACIÓN DE CEPAS Y MUESTRAS
1 OBJETIVO
Dar cumplimiento del reglamento sobre “Notificación de Enfermedades Transmisibles de

Declaración Obligatoria” (ENO), Decreto Supremo N°158 del 2004.
2 RESPONSABLE DE LA PREPARACIÓN Y ENVÍO
El responsable de la preparación de las muestras y/o cepas es el profesional de la

sección, el cual realizará el triple embalaje de las mismas y coordinará el envío al ISP,
según la disponibilidad de movilización.
3 PROCEDIMIENTO
- Las cepas bacterianas se enviarán en tubo con medio Stuart, o en placa (Ej:
Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae) a temperatura ambiente.
- Las muestras de LCR para vigilancia de meningitis (por PCR) del ISP se enviarán
en el mismo tubo original con unidades refrigerantes.
- Las muestras de:
• Hanta virus
• Sarampión
• Rubeola
• Parálisis fláccida
se procesarán de acuerdo a la tabla vigente llamada “Tabla de conservación y envío

de muestras al ISP”, en la cual se especifica el volumen de la muestra, tubo a
utilizar, transporte al laboratorio, procesamiento de la muestra a nivel local, la
conservación, las condiciones de envío al ISP y el tipo de formulario.
Esta tabla se encuentra en sector junto al citófono en bacteriología, y en sección de
Urgencia.
- Las cepas a enviar quedarán registradas en archivador “Derivaciones ISP”, en el

cual también se anotan las confirmaciones y respuestas del ISP.
Este archivador se encuentra en mueble llamado “Manuales y documentos”.
- Cada cepa y/o muestra irá con su formulario respectivo, el que será digitado por el
Tecnólogo Médico de acuerdo al “Manual para generar formularios online y
obtener informes con firma electrónica avanzada” (Subdepartamento de
122
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 123 de 149
Tecnología de la Información y Comunicación (TIC), Instituto de Salud Pública de

Chile).
Nota: La excepción a esta regla la constituyen las muestras de Hanta virus,

Sarampión, Rubeola y Parálisis Fláccida, las cuales deben traer el formulario
respectivo realizado por el médico.
4 FORMULARIOS
Los cuatro tipos de formularios a utilizar son:

• B1: Formulario envío cepas bacterianas
• B2: Formulario envío muestras clínicas
• B3: Formulario envío estudio vigilancia resistencia antimicrobiana
• Formulario envío Micología clínica
Para consultas dirigirse a la página web: www.ispch.cl
5 HORARIOS
- El envío de las muestras de cepas bacterianas y muestras de LCR para vigilancia

de meningitis serán de responsabilidad de la sección de bacteriología y se
realizará los días hábiles (en los cuales se cuente con locomoción) de 8:00 a 17:00
hrs.
- El envío de las muestras de Hanta virus, Sarampión, Rubeola y Parálisis Fláccida
serán responsabilidad de la sección de bacteriología en días hábiles de las 7:30
hrs hasta las 16:00 hrs.
- El envío de las muestras de Hanta virus, Sarampión, Rubeola y Parálisis Fláccida
serán de responsabilidad del Tecnólogo Médico de turno de la sección de
Urgencia los días hábiles de las 16:00 hrs hasta las 7:30 hrs. y las 24 horas en
días no hábiles (sábado, domingo o festivos).
6 CEPAS Y MUESTRAS A ENVIAR
- Campylobacter sp.
- Candida sp. en sangre (hemocultivos)
- Corynebacterium difteriae
- Enterobacterias, Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter baumannii productoras
de carbapenemasas (*)
123
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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- Haemophilus influenzae en enfermedad invasora

- LCR vigilancia para meningitis (ver criterios) (**)
- Listeria monocytogenes
- Neisseria gonorrhoeae
- Neisseria meningitidis
- Salmonella sp.
- Shigella sp.
- Staphylococcus aureus meticilino resistente en sangre (hemocultivos)
- Staphylococcus aureus vancomicina intermedia o resistente
- Streptococcus agalactiae (grupo B) en enfermedad invasora
- Streptococcus pneumoniae en enfermedad invasora
- Streptococcus pyogenes (grupo A) en enfermedad invasora
- Yersinia
- Vibrio cholerae
- Vibrio parahemolyticus
(*) Según vigencia Norma Técnica N°0203 sobre “Contención de diseminación de agentes
con resistencia a los antimicrobianos de importancia en salud pública (ARAISP) en
establecimientos cerrados de salud” (noviembre 2018).
(**) Criterios de envío muestras de LCR para vigilancia de meningitis:
• Glucorraquia menor o igual a 40 mg/dl y/o recuento de leucocitos en
LCR mayor o igual a 100 x mm3, con cultivo negativo a las 24 horas.
Nota: Las Normas de envío de cepas pueden modificarse en el transcurso del tiempo, por
lo cual se deben consultar las modificaciones y actualizaciones que se encuentran
en archivador “VIGILANCIA”, en mueble “Manuales y documentos”.
7 REFERENCIAS
- www.ispch.cl
- www.minsal.cl
124
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 125 de 149
XII. CONTROL DE CAMBIOS
FECHA TIPO APROBACIÓN
02 Julio 2014 Versión 0: Se libera para su uso. Jefe Laboratorio
07 Enero 2019 Versión 1: Actualización de Jefe Laboratorio

técnicas. Se libera para su uso.
125
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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XIII. ANEXOS
ANEXO N°1
CONTROL DE CALIDAD ANTIBIOGRAMA POR DIFUSIÓN

CEPA:
Mes Mes
Responsable Responsable
Lote Agar Marca Agar Lote Agar Marca Agar
Cepa ATCC Cepa ATCC
Sensidiscos Marca Lote mm Rango Sensidiscos Marca Lote mm Rango
EPSILOMETRIA: EPSILOMETRIA:
No conformidad y Acciones correctivas :
126
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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ANEXO N°2
CONTROL DE CALIDAD ANTIBIOGRAMA HONGOS

(Técnica Sensititre )
Candida kruzei ATCC 6258
Mes
Responsable
Lote Placa : Marca:
Antifúngicos Rango ug/ml Resultado Rango ug/ml Resultado
24 Horas 24 horas 48 Horas 48 horas
Anidulafungina 0.03-0.12 ---

Anfotericina B 0.5-2 1-4
Micafungina 0.06-0.25 0.12-0.5
Caspofungina 0.12-1 0.25-1
5-Flucitosina 4-16 8-32
Posaconazol 0.06-0.5 0.12-1
Voriconazol 0.06-0.5 0.12-1
Itraconazol 0.12-1 0.25-1
Fluconazol 8-64 16-128
Candida parapsilosis ATCC 22019
Mes
Responsable
Lote Placa : Marca:
Antifúngicos Rango ug/ml Resultado Rango ug/ml Resultado
24 Horas 24 horas 48 Horas 48 horas
Anidulafungina 0.25-2 ---

Anfotericina B 0.25-2 0.5-4
Micafungina 0.5-2 0.5-4
Caspofungina 0.25-1 0.5-4
5-Flucitosina 0.12-0.5 0.12-0.5
Posaconazol 0.06-0.25 0.06-0.25
Voriconazol 0.015-0.12 0.03-0.25
Itraconazol 0.12-0.5 0.12-0.5
Fluconazol 0.5-4 2-8
127
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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ANEXO N°3
Control Calidad Epsilometría Vancomicina

Staphylococcus aureus ATCC 29213
Fecha :
Responsable
Lote Agar Marca Agar
Cepa Staphylococcus aureus ATCC 29213 ATCC
Marca Lote mm Rango ug/ml
Vancomicina 0.5 - 2
Fecha :
Responsable
Cepa Staphylococcus aureus ATCC 29213 ATCC ug/ml
Vancomicina 0.5 - 2
Fecha :
Responsable
Cepa Staphylococcus aureus ATCC 29213 ATCC ug/ml
Vancomicina 0.5 - 2
No conformidad y Acciones correctivas:
128
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
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ANEXO N°4
CONTROL DE CALIDAD BATERIA BIOQUÍMICA

FECHA:
MEDIO CEPAS CONTROL REACCION ESPERADA RESULTADO
TSI Escherichia coli Tendido: acidifica(amarillo)

Columna: acidifica(amarillo)
Gas: positivo(ruptura del agar)
H2S: negativo
Proteus mirabilis Columna: acidifica(amarillo)
H2S: positivo(ennegrecimiento)
Shigella flexneri Tendido: alcaliniza(rojo)
Columna (acidifica)
Gas: negativo
H2S: negativo
Pseudomonas Tendido: alcaliniza(rojo)
aeruginosa Columna: alcaliniza(rojo)
Gas: negativo
H2S: negativo
LIA Escherichia coli Columna: púrpura (decarboxilación +)
H2S: negativo
Proteus mirabilis Columna: amarilla
Tendido: rojo (deaminación)
Shigella flexneri Columna: amarilla (decarboxilación (-) )
Gas: negativo
H2S: negativo
MIO Escherichia coli Movilidad: positiva (columna turbia)
Indol: positivo (anillo rojo)
Ornitina:positiva (columna purpura)
Klebsiella Movilidad: negativa(desarrollo en la picada)
pneumoniae Indol: negativo (anillo amarillo)
Ornitina: negativa (columna amarilla)
UREA DE Proteus mirabilis Columna y tendido: fucsia
CHRISTENSEN Klebsiella Tendido: fucsia
pneumoniae
Escherichia coli Negativo (no vira)
CITRATO DE K.pneumoniae positiva (vira a azul)
SIMMONS Escherichia coli negativo (no vira)
129
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 130 de 149
ANEXO N°5
CONTROL DE CALIDAD DISCOS DE OPTOQUIN
Fecha Marca/Lote Cepa Resultado esperado OK? Responsable

Strepto. pneumoniae Zona de inhibicion según fabricante
Strepto. viridans Sin inhibicion
Strepto. pneumoniae Zona de inhibicion ≥ 14mm
Zona de inhibición BD : Mayor o igual a 14 mm

Zona de inhibición OXOID : Mayor o igual a 16 mm
130
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 131 de 149
ANEXO N°6
CONTROL DE CALIDAD CATALASA
Fecha Cepa Resultado esperado OK? Observación Responsable

Staphylococcus aureus Reacción (+) producción de burbujas
Streptococcus sp. Reacción (-) sin burbujas







131
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 132 de 149
ANEXO N°7
CONTROL DE CALIDAD DISCOS DE OXIDASA
Fecha Marca/Lote Cepa Resultado esperado OK? Observaciones Responsable

Pseudomona aeruginosa Reacción (+) coloración azul violeta
Escherichia coli Reacción (-) no vira








132
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 133 de 149
ANEXO N°8
CONTROL DE CALIDAD LATEX STAPHYLOCOCCUS
Fecha Marca/Lote Cepas control Resultados OK? Responsable

esperados
S .aureus ATCC 25923 Aglutinación (+)
S. epidermidis Aglutinaciòn (-)






133
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 134 de 149
ANEXO N°9
CONTROL DE CALIDAD CEFINASA
Fecha Marca/Lote Cepas control Resultados OK? Observac. Responsable

esperados
S .aureus ATCC 29213 Cambio de color (*)
H.influenzae ATCC 49247 No hay cambio







(*) El cambio de color en las cepas positivas dependerá del fabricante .Ver Inserto de la técnica.
134
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 135 de 149
ANEXO N°10
CONTROL DE CALIDAD D-TEST
Fecha Marca/Lote Cepas control Resultados OK? Observaciones Responsable

esperados
Eritro: Sta.aureus BAA-976 D-Test Negativo
Clinda: Sta.aureus BAA-977 D-Test Positivo







No conformidad y acciones correctivas:
135
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 136 de 149
ANEXO N°11
CONTROL DE CALIDAD DISCOS BLEE
FECHA SENSIDISCOS MARCA LOTE HALOS (mm) RESULTADO ESPERADO OK? RESPONSABLE
CONTROL NEGATIVO : E.coli ATCC 25922 OBSERVACIONES
Cefotaxima
Cefotaxima/Ac.clavulánico Aumento menor o igual a 2 mm (*)
Ceftazidima
Ceftazidima/Ac.clavulánico Aumento menor o igual 2 a mm (*)
CONTROL POSITIVO : K.pneumoniae ATCC 700603

Cefotaxima
Cefotaxima/Ac.clavulánico Aumento mayor o igual a 3 mm (*)
Ceftazidima
Ceftazidima/Ac.clavulánico Aumento mayor o igual a 5 mm (*)
CONTROL NEGATIVO : E.coli ATCC 25922

Cefotaxima
Cefotaxima/Ac.clavulánico Aumento menor o igual a 2 mm (*)
Ceftazidima
Ceftazidima/Ac.clavulánico Aumento menor o igual 2 a mm (*)
CONTROL POSITIVO : K.pneumoniae ATCC 700603

Cefotaxima
Cefotaxima/Ac.clavulánico Aumento mayor o igual a 3 mm (*)
Ceftazidima
Ceftazidima/Ac.clavulánico Aumento mayor o igual a 5 mm (*)
(*) Diferencia del diámetro del antibiótico solo comparado con el antibiótico con Ac.clavulánico.
No conformidad y acciones correctivas :
136
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 137 de 149
ANEXO N°12
CONTROL DE CALIDAD CARBAPENEMASAS
Fecha Marca/Lote Cepas control Resultados OK? Observaciones Responsable

esperados
K.pneumoniae ATCC BAA-1075 Reacción positiva
K.pneumoniae ATCC 700603 Reacción negativa






137
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 138 de 149
ANEXO N°13
CONTROL DE CALIDAD TINCION DE GRAM
Fecha Marca-Lote Cepa Resultado OK Observaciones Responsable

Staphylococcus aureus esperado
Coloración violeta
Escherichia coli Coloración rosa/roja
Staphylococcus aureus Coloración violeta






138
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 139 de 149
ANEXO N°14
CONTROL DE CALIDAD AGARES

AGAR SANGRE DE CORDERO 5%
Fecha Marca y lote Cepas Resultados esperados OK ? Observaciones Responsable

Strepto. grupo A Beta hemolisis
Strepto. pneumoniae Alfa hemolisis







Hubo desarrollo
139
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 140 de 149
ANEXO N°15

AGAR CHOCOLATE
Fecha Marca y lote Cepas Resultados esperados OK ? Observaciones Responsable
H.influenzae Hubo desarrollo
140
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 141 de 149
ANEXO N°16

AGAR McCONKEY
Fecha Marca y lote Cepas Resultados esperados OK? Observaciones T.M.responsable
Escherichia coli Desarrollo Lactosa +

Proteus mirabilis Desarrollo Lactosa -
Enterococcus faecalis Sin desarrollo o escaso
Desarrollo Lactosa + Desarrollo Lactosa +
Desarrollo Lactosa - Desarrollo Lactosa -
Sin desarrollo o escaso Sin desarrollo o escaso
141
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 142 de 149
ANEXO N°17

AGAR XLD
Fecha Marca y Lote Cepas Resultados esperados OK Observaciones T.M.responsable
Escherichia coli colonia amarilla

Proteus mirabilis colonia roja, centro negro
Shigella flexneri colonia roja
Proteus mirabilis colonia roja,centro negro
142
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 143 de 149
ANEXO N°18

AGAR McCONKEY SORBITOL
Fecha Marca y lote Cepas Resultados esperados OK? Observaciones T.M.responsable
Escherichia coli Desarrollo sorbitol +

E.coli O157 Desarrollo sorbitol -
143
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 144 de 149
ANEXO N°19

AGAR CROMÓGENO ENTEROCOCO VANCOMICINA RESISTENTE (VRE)
Fecha Lote y marca Cepas Resultado esperado OK? Observaciones Responsabel ™
Enterococcus Coloración esperada (*)
vancomicina resistente
Enterococcus Coloración distinta al VRE
vancomicina sensible
Eschericia coli Sin desarrollo
(*) La coloración esperada depende del fabricante. Ver inserto del agar.
144
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 145 de 149
ANEXO N°20

AGAR CROMÓGENO CANDIDA
Fecha Marca y Lote Cepas Resultado esperado OK? Observaciones Responsable
Candida albicans Coloración esperada (*)
Candida glabrata Coloración esperada (*)
Eschericia coli sin desarrollo
145
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 146 de 149
ANEXO N°21

AGAR CROMÓGENO PARA STREPTOCOCCUS GRUPO B
Fecha Marca y lote Cepas Resultado esperado OK? Observaciones Responsable
Strepto.grupo B Coloración esperada (*)
Enterococo faecalis Coloración distinta al Strepto.grupo B








146
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 147 de 149
ANEXO N°22

AGAR SABOURAUD
Fecha Marca y lote Cepas Resultados esperados OK? Observaciones Responsable
Candida albicans Buen desarrollo

Candida kruzei Buen desarrollo
Tras 72 horas en atmósfera aerobia a 25+/-2°C y 35°C
147
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 148 de 149
ANEXO N°23

AGAR TCBS
Fecha Marca y lote Cepas Resultados esperados OK? Observaciones Responsable
E.coli Inhibido
V.parahemolyticus ATCC 17802 Colonias azules
V.cholerae ATCC 14033 Colonias amarillas
E.coli Inhibido
E.coli Inhibido
E.coli Inhibido
E.coli Inhibido
E.coli Inhibido
E.coli Inhibido
E.coli Inhibido
E.coli Inhibido
148
Fecha: 07/01/2019
BACTERIOLOGIA
Versión: 1
Página 149 de 149
ANEXO N°24
CONTROL DE CALIDAD TEST RÁPIDOS
EQUIPO:
FECHA TEST MARCA/LOTE QC OK? RESPONSABLE COMENTARIOS
No conformidad/Acciones correctivas:
149

APL 1.3 Manual Bacteriología 2019 v1

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS

7. PRUEBAS DE SCREENING PARA LA IDENTIFICACIÓN BACTERIANA ...................................................... 24

8. ESTUDIO DE MECANISMOS DE RESISTENCIA ...................................................................................... 26

9.- TINCIÓN GRAM ............................................................................................................................... 30

IX. CONTROL DE CALIDAD .....................................................................................................104

IV. RESPONSABILIDAD Y AUTORIDAD

en el cuaderno “Registro de rechazos” el cual se encuentra en el mesón donde está

VI. TIEMPOS DE RESPUESTA

Debido a la importancia clínica y epidemiológica se debe realizar el procesamiento e

Los LCR con cultivo positivo: Máximo 5 días

- Hemocultivos: Máximo 7 días

o En relación a los tiempos de respuesta de los cultivos positivos, la mayoría

o La excepción la constituyen muestras de huesos o prótesis las cuales deben

** Las muestras de secreciones incluyen: heridas, líquidos, ulceras, exudados, etc.

- Urocultivos: Máximo 7 días

- Estudio completo de flujo vaginal negativo: Máximo 5 días.

 En muestras de “Víctima de Violencia Sexual” el profesional de turno (ya

o Muestras respiratorias: 30 días.

- Coprocultivo: Máximo 5 días.

- Rotavirus y adenovirus en deposición: Menos de 24 horas.

- Leucocitos fecales: Menos de 24 horas.

- Antígeno de Strep.pneumoniae y Legionella en orina: Menos de 24 horas.

- Test rápido de Clamidia: Menos de 24 horas.

- Test Ureaplasma y Mycoplasama: Máximo 72 horas.

- Test Clostridium difficile: Maximo 5 horas.

- Días hábiles: de 16:00 – 7:30 horas el test será realizado por

conservarse refrigerada hasta hacer entrega a la sección de

- Días sábado, domingo y festivos: el test será realizado por

- Test rápido de Hanta virus:

o Días hábiles: de 16:00 – 7:30 horas el test será realizado por

Todas las lecturas de microscopía, registros de técnicas y cultivos se realizarán en los

1. ANTIBIOGRAMAS POR DIFUSIÓN KIRBY Y BAUER

El objetivo del antibiograma es medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se

1.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

- Previamente a la realización del antibiograma, los sensidiscos deben ser sacados a

(*) Cada bacteria posee un panel específico de antibióticos, el cual es confeccionado en

(**) La tabla de lectura de halos se encuentra en el fichero en la sala de lectura de placas

- M100 CLSI Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing

TABLA N°1: ANTIBIOGRAMAS POR DIFUSION KIRBY BAUER

Bacteria Agar Suspensión Turbidez Temperatura Atmósfera Tiempo

2. ANTIBIOGRAMA AUTOMATIZADO (CIM: CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA)

2.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

- Ver “Manual del usuario del sistema de microbiología automatizado” BD Phoenix

- Para uso y calibración del Nefelómetro dirigirse al inserto correspondiente que se

3. ANTIBIOGRAMA PARA LEVADURAS

La prueba de sensibilidad Sensititre es una prueba de microdilución colorimétrica que

Realización de pruebas de sensibilidad a levaduras no exigentes como especies de

3.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

- Transfiera 20 ul de la suspensión a el tubo con Caldo de inóculo Yeast One (con 11

Observación: Estos pasos se deben completar en 15 minutos.

- Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of

Es un método que combina los principios de la difusión en disco y la dilución en agar en el

• CIM a penicilina y cefotaxima en Streptococcus pneumoniae recuperados de

4.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

- Realizar el mismo procedimiento que se utiliza para un antibiograma por difusión.

Interpretación de los resultados:

- National Commitee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for

5. IDENTIFICACION BACTERIANA POR ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Ver “IVD MALDI Biotyper 2.2 Manual del usuario” capítulo 2.

Cultivos con desarrollo bacteriano de importancia clínica.

5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

Ver “IVD MALDI Biotyper 2.2 Manual del usuario”

- Ver “IVD MALDI Biotyper 2.2 Manual del usuario”

6. IDENTIFICACION BACTERIANA POR PRUEBAS BIOQUÍMICAS Y