TOXICOLOGIA AMBIENTAL

MOMENTO 3
DESARROLLO DE BIOENSAYO

PRESENTADO POR

INGRID DAYANA TENORIO AREVALO

CODIGO: 94100500277

TUTOR
Daniel Mejía

GRUPO
358027A_288

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

(UNAD)
24 ABRIL DE 2016
 INTRODUCCION

El bioensayo con toxicología con semillas de lechuga es una prueba estática de toxicidad
aguda (120 horas de exposición) en el que se pueden evaluar fitotoxicos de compuestos
puros o de mezclas complejas en el proceso de germinación de las semillas y en el
desarrollo de las plántulas durante los primeros días de crecimiento. En los efectos
fitotoxicos, se determina la inhibición en la elongación de la radícula y del hipocolito.

Durante el periodo de germinación y posteriormente los primeros días del desarrollo de la

plántula ocurren procesos fisiológicos en donde sustancias toxicas pueden inferir
alterando la supervivencia y el desarrollo normal de la planta, siendo una etapa de
sensibilidad frente a factores adversos. Es importante determinar el desarrollo de la
radícula y del hipocolito, ya que son indicadores representativos para determinar la
capacidad de establecimiento y desarrollo de las plantas.
Además al evaluar el efecto de la elongación de la radícula y del hipocolito se puede
ponderar el efecto toxico de compuestos solubles presentes en niveles bajos de
concentración, los cuales no son suficientes para inhibir la germinación, pero pueden
retardar o inhibir los procesos de elongación de la radícula o hipocolito.
MAPA CONCEPTUAL

DIAGRAMA DE FLUJO DE LA PRÁCTICA ELABORADA
Caja 1: Control negativo 1
Caja 2: Control negativo 2
Caja 3: Control positivo
Caja 4: M R1: (Muestra tomada replica 1)
Caja 5: M R2 (Muestra tomada replica 2)
Caja 6: M R3 (Muestra tomada replica 3)
Colocar las cajas en un lugar seguro a temperatura ambiente
por cinco días a resguardo de la luz solar directa.
Colocar cada caja de Petri envueltas en papel aluminio
dentro de una bolsa plástica (Ziploc) para prevenir que se le
escape la humedad.
Asegúrese de no voltear (no dar vuelta) a las cajas de Petri
boca abajo etiquetando “Parte de arriba” en cada placa
envuelta para que no se confunda.
Marcar con cinta de enmascarar cada caja de Petri envuelta con
papel aluminio. Los controles negativos se marcaran como: C(-1) y
C(-2), el control positivo C(+) y las muestras como M1, M2 y M3
según la réplica correspondiente.
Repetir el procedimiento pero utilizando el agua embotellada (control
negativo) y solución de sal (NaCl) como control positivo.
MONTAJE DEL BIOENSAYO
Colocar en caja de Petri un disco de papel filtro o un
recorte de papel absorbente con la forma de
circunferencia de la caja de Petri.
Marcar correctamente cada caja de Petri con la dilución
correspondiente y la solución que se aplicara, así como
la fecha y hora de inicio de bioensayo. Marcar de la
siguiente manera:
Colocar 4mL de cada solución en la caja de Petri
correspondiente, saturar el papel filtro o absorbente
dispersando homogéneamente la solución sobre este
video evitando que se formen bolsas de aire. Utilizar
pipetas (o goteros de jeringa) distintos para la aplicación
de la muestra y los controles positivos y negativos.
Con la ayuda de una pinza, colocar cuidadosamente 20
semillas (cinco hileras de cuatro semillas o cuatro hileras de
cinco semillas) dejando espacio suficiente entre las semillas
para permitir la elongación de la raíces. Seleccione semillas
de tamaño forma y color similar.
Tapar las cajas de Petri y cubrirlas de la luz inmediatamente
después de colocar las semillas en su interior, dado que
algunas variedades de semillas de lechuga requieren de
oscuridad para que se produzcan la germinación (semillas
fotoblasticas negativas) para esto debe envolverse cada caja
de Petri con papel aluminio.
 DESCRIPCION DE LA MUESTRA LLEVADA AL BIOENSAYO

El número de semillas germinadas en cada placa:

Caja 1: Control Negativo C(-) 1 germinaron 10

Caja 2: Control Negativo C(-) 2 germinaron 8
Caja 3: Control Positivo C (+) germinaron 0
Caja 4: M R1 germinaron 6
Caja 5: M R2 germinaron 7
Caja 6: MR3 germinaron 8
RESULTADOS

1. Calculo De Porcentaje De Germinación

CAJAS DE PETRI

Variables C(-)1 C(-) 2 C(+) M1 M2 M3

Numero De 10 8 0 6 7 6
Semillas
Germinadas

Promedio
De Los 9 0 6,333333333
Controles
Negativos

Porcentaje
De 41111% 0% 67% 78% 67%
Germinación

2. Calculo De Porcentaje De Inhibición De La Germinación

%inhibición germinación = (SgCneg- SgMR) *100

SgCneg

SgCneg = semillas germinadas control negativo (promedio C(-)1 y C(-)2) 9= 6,333333333

SgMR= semillas germinadas muestra (promedio de las 3 cajas de Petri: M1, M2 y M3) 9

%Inhibición 29,6
 3. Medida De Elongación De Hipocotilo (EH) En Cada Caja De Petri

LONGITUD DE HIPOCOLITO

SEMILLAS C(-)1 C(-)2 C(+) M1 M2 M3

1 4 2 0 1 2 4
2 2.5 4 1 3 3
3 3 1.5 3 2.5 2
4 3 3 1 2 1
5 2 2.5 1 1.5 1
6 3 2.5 1 1 1
7 2 1.5
8 2.5 1
9 1
10 1

PROMEDIO EH 2,375 2,500 0,000 1,333333 1,8 2

MEDIANA 2,5 2,5 0 1 2 1,5

VARIANZA 0,984 1,67 0 0,6666667 0,7 1,6

DESVACION ESTANDAR 1,37 1,58 0 0 1,11 1,26

COEFICIENCIA DE 58% 63% 0 61% 62% 63%

ESTANDAR

4. Cálculo De Porcentaje De Inhibición De Hipocotilo

4,875 5,133333333 % IDH

4,875 -
5,299145299
 5. Medida De Elongación De Radícula (ER) En Cada Caja De Petri

LONGITUD DE RADICULA

SEMILLAS C(-)1 C(-)2 C(+) M1 M2 M3

1 3.5 3.7 0 1 2 2
2 1 3.5 1 2 1
3 2.5 1.5 2 2 3
4 3 2.5 1 2 2
5 2 3 1 1 2
6 4 2.5 1 1.5 1
7 2.5 2.5 1
8 2.5 1
9 1.5
10 1

PROMEDIO EH 2,500 2,000 0,000 1,166667 1,666667 1,833333

MEDIANA 2 2 0 1 2 2

VARIANZA 1,360 2,00 0 0,166667 0,266667 0,566667

DESVACION ESTANDAR 1,45 1,07 0 0,41 0,79 0,75

COEFICIENCIA DE 0
ESTANDAR 66% 53% 35% 47% 41%

6. Cálculo De La Inhibición De Radícula

% Inhibición Desarrollo Radícula = (PromedioERCneg - PromedioER_M) x 100

PromedioERCneg

4,500 4,66666667 % IDR

-3,7037037
4,500
 % L radícula
5,133333333 105,299
4,875

7. Cálculo De Índice De Germinación IG

% Longitud de radícula muestra = Longitud radícula Muestra (mm) x 100

Longitud radícula Control neg (mm)
Para germinación:

% Germinación muestra = Número de semillas germinadas muestra x 100

Número de semillas germinadas Control neg

IG
111,0
105,299 105,5555556

% GM
19 105,555556
18
 CONCLUSIONES

Se concluyó de acuerdo a los resultados el comportamiento de la germinación y

crecimiento de las planta de lechuga que fueron expuestas a distintas concentraciones fue
que detuvieron su crecimiento.
La muestra que supera la inhibición de germinación fue la del hipocolito -52,9%
Hay diferentes riesgos de toxicidad en las muestras tomadas.

BIBLIOGRAFIA

Centro Internacional de Investigaciones para el Desarrollo de Canadá (CIID). (2000).

Aquatox 2000. Canadá: Autor. Disponible en

http://idl-bnc.idrc.ca/dspace/bitstream/10625/31600/1/118283.pdf

Sobrero, M. C. & Ronco, A. (2008). Ensayo de toxicidad aguda con semillas de lechuga
Lactuca sativa L. En Ramírez, P. & Mendoza, A. (ed.). Ensayos toxicológicos para la
evaluación de sustancias químicas en agua y suelo. La experiencia en México. (pp. 55-68).
México: Secretaría de Medio Ambiente y recursos Naturales. Instituto Nacional de Ecología.
Recuperado de http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/download/573.pdf