HSV  IgG Estabilidad

Los reactivos son estables hasta las fechas de caducidad señaladas en las
Prueba ELISA para la detección de anticuerpos etiquetas individuales cuando se almacenan a 2...8°C.
IgG Anti-Herpes Simplex 1 en suero humano Después de abierto los reactivos deben almacenarse a 2...8°C y utilizarse
dentro de 60 días (ver también „Nota“).
Presentación del estuche
[REF] 51216 96 determinaciones Estuche completo [MIC] (Código HS1 G)
[IVD] − están envasadas en bolsas de aluminio selladas con un desecante
− deben estar a temperatura ambiente antes de abrir
Uso esperado
− no utilizados: devolver junto con el desecante en las bolsas de aluminio
La prueba ELISA HSV 1 IgG está destinada a la detección de anticuerpos y almacenar de 2...8°C.
clase IgG contra el Virus Herpes Simplex 1 en suero humano.
− No tocar el borde superior o el fondo de los micropocillos con los dedos.
Las infecciones por HSV se distribuyen en todo el mundo. Luego de la
exposición al virus, el período de incubación es de aproximadamente 1 Preparación de reactivos
semana (2 a 26 días). Los signos clínicos incluyen herpes genital y labial. Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente (15...25°C) antes
Las infecciones herpéticas en recién nacidos (menos de 6 semanas de del uso. Los reactivos que no están en uso deben siempre estar
edad) son frecuentemente devastadoras. Sin tratamiento, la mortalidad almacenados a 2...8°C.
excede el 65%. Muchos de los sobrevivientes quedan con secuelas de
desarrollo. La mayor parte de las infecciones se produce durante el parto Notas especiales
cuando el neonato atraviesa un canal de parto infectado. Los reactivos de propósito general con los denominaciones
[DIL-G] 5121, [WS]20x]5102, [SUB] 5103, [STOP] 5104 de diferentes lotes y
Principio - EIA clásico -
pruebas son intercambiables entre estos lotes y pruebas. Para análisis IgG
La prueba HUMAN ELISA HSV 1 IgG está basada en la clásica técnica usar solamente Buffer de Dilución IgG [DIL-G] 5121.
ELISA. Los micropocillos ELISA son recubiertos con antígenos de virus de
Herpes Simplex 1 (HSV 1-Ag) derivados de cultivos celulares. En la Todos los demás reactivos son específicos para los lotes individuales y no
primera etapa de incubación, los anticuerpos IgG contra el virus de HSV 1 deben ser intercambiados con otros lotes o otras pruebas. Ningún
(anti-HSV1-IgG Ac) contenidos en la prueba o el control se fijan reactivo de otra procedencia debería utilizarse junto con los reactivos de
específicamente a los antígenos inmovilizados. Al final de la incubación, este estuche.
los componentes excesivos son eliminados por lavado. En la segunda
Solución de lavado de trabajo [WASH]
etapa de incubación, se añade un conjugado anti-IgG (anticuerpos anti-
IgG-humana, marcados con peroxidasa) que se fija específicamente a los − Diluir 1 porción de [WS]20x]5102 con 19 porciones de agua desionizada
anticuerpos IgG. Se forman inmunocomplejos típicos. Después de fresca, por ejemplo: 50 ml [WS]20x]5102 + 950 ml = 1000 ml.
eliminar el conjugado excesivo por lavado (segunda etapa de lavado) y − Estabilidad: hasta 60 días a 15...25°C.
añadir TMB/Substrato (etapa 3), se forma un color azul que se transforma
a amarillo después de parar la reacción. La intensidad de este color es Muestra
directamente proporcional a la cantidad de anticuerpos anti-HSV1 IgG en Suero
la muestra. No usar muestras altamente lipémicas o hemolíticas.
Reactivos y contenidos Muestras pueden almacenarse hasta por 7 días de 2...8°C o por más largo
[MIC] 12 Micropocillos en portatiras tiempo a -20°C. Congelar y descongelar solamente una vez. Al
(Código HS1 G) descongelar una muestra debe ser homogeneizada. Eliminar el material
Tiras (desprendibles) de 8 micropocillos cada uno, particulado por centrifugación o filtración.
recubiertas con antígeno de HSV 1 (derivados cultivo
Procedimiento
celular)
Seguir el procedimiento exactamente como se describe.
[NC] 2,5 ml Control HSV 1 IgG negativo (tapa verde)
listo para el uso, humano Notas de uso
[PC] 2,5 ml Control HSV 1 IgG positivo (tapa roja) U1: No mezclar tapas de envases (riesgo de contaminación). No usar
listo para el uso, humano reactivos despúes de sus fechas de caducidad.
[DIL-G] 100 ml Buffer de dilución IgG (tapa blanca) U2: No usar reactivos que pueden ser contaminados (turbidez u olor).
5121 listo para el uso, color verde pH 6,5 ± 0,2 U3: Notar el reparto de las muestras y de los controles cuidadosamente
Buffer Fosfato 10 mmol/l en la hoja provista en el estuche.
NaCl 8 g/l
U4: [MIC] – colocar el número requerido firmemente en el portatiras.
Albúmina 10 g/l
U5: Analizar los controles en duplicado. Pipetear los controles y las
[CON] 12 ml Conjugado Antígeno IgG (tapa blanca)
muestras en el fondo de los micropocillos.
listo para el uso, color rojo
Anticuerpos anti-IgG-humano, marcados con peroxidasa U6: Siempre deben agregarse los reactivos en el mismo orden para
(conejo) minimizar diferencias en los tiempos de reacción entre los
micropocillos y obtener resultados reproducibles. El pipeteo de las
[WS]20x] 50 ml Solución de lavado (tapa blanca)
muestras no debería exceder de 5 minutos para evitar diferencias en
5102 Concentrado para aprox. 1000 ml pH 7,2 ± 0,2
los tiempos. De lo contrario pipetear los controles en las posiciones
Buffer TRIS 10 mmol/l
indicadas en la mitad del intervalo de la serie. Si se emplea más de
NaCl 8 g/l
una placa, repetir los controles.
[SUB] 13 ml Reactivo Substrato (tapa negra)
U7: Remover burbujas de aire antes de las incubaciones y lecturas de
5103 listo para el uso, sin color a azulado pH 3,7 ± 0,2
absorbancia.
3,3', 5,5'-Tetramethylbenzidin (TMB) 1,2 mmol/l
Peróxido de Hidrógeno 3 mmol/l U8: Incubar [SUB] en la oscuridad. [SUB] inicia y [STOP] termina la
reacción encimática.
[STOP] 15 ml Solución de parada (tapa roja)
5104 Acido sulfúrico, listo para el uso 0,5 mol/l Procedimiento de lavado
2 Tiras adhesivas El procedimiento de lavado es crítico. Un lavado insuficiente producirá
Preservativos: Concentración total < 0,1% una mala precisión o absorbancias falsamente elevadas.
L1: Remover las tiras adhesivas, aspirar el contenido (en un envase con
Notas de seguridad solución de Hipoclorito de Sodio al 5%), agregar [WASH], aspirar
No ingerir los reactivos. Evitar el contacto con los ojos, piel y membranas después de aproximadamente 30 sec. y repetir el lavado 3 ó 4 veces.
mucosas. Todas las muestras de pacientes y controles del estuche
L2: En el caso de lavadores automáticos, se deben llenar y enjuagar con
deberían ser manipulados como posibles agentes infecciosos. Los
[WASH] y después lavar los pocillos 4 ó 5 veces con [WASH].
controles han sido encontrado negativos para HBsAg y anticuerpos contra
Asegurarse que los pocillos son llenados completamente y espirados
VHC y VIH 1 + 2 en los donantes. Usar ropa protectora y guantes
después de 30 sec. (líquido remanente: < 15 µl).
desechables según las buenas prácticas de laboratorio (GLP).
L3: Después del lavado, remover el líquido remanente invirtiendo los
Todos los materiales contaminados con muestras o controles deben
micropocillos sobre papel absorbante.
inactivarse por métodos aprobados (autoclavado o tratamiento químico)
según las regulaciones aplicables.
Esquema de pipeteo heterólogo. Resultados positivos para HSV 1-IgG, no implican
Los reactivos y las muestras deberían estar a temperatura ambiente necesariamente, entonces, exposición previa o infección con HSV 1 y vice
antes del uso. versa. Para determinar el serotipo al cual el paciente ha sido previamente
expuesto la muestra de suero debería ser analizada en paralelo con los
Preparación de muestras: métodos ELISA HUMAN HSV 1 y HSV 2. La mayor concentración de
Diluir el suero del paciente 1+100 con [DIL-G] 5121, por ejemplo 10 µl anticuerpos, expresada en HU, indica el tipo de anticuerpo predominante.
de suero + 1 ml de [DIL-G] 5121 y mezclar vigorosamente. Para tipificación exacta, se recomienda aislar el virus e identificar el
Las muestras diluidas se pueden almacenar hasta 48 horas entre antígeno con el antisuero específico.
2...8°C.
Pueden encontrarse resultados positivos por reactivación de infecciones
Los controles son listos para el uso.
latentes con otros virus relacionados con la familia Herpes viridae. Por ello
Etapa 1 Pocillo [µl] debería considerarse la posibilidad de estas infecciones junto con la
A1 B1/C1 D1/E1 F1... interpretación de resultados.
Blanco [NC] [PC] Muestra
Unidades para anticuerpos anti-HSV 1 IgG
[NC] en duplicado -- 100 -- --
Los resultados positivos encontrados en sueros de pacientes pueden
[PC] en duplicado -- -- 100 -- expresarse en Unidades HUMAN (HU/ml):
Muestra diluida -- -- -- 100
A450 (Paciente)
Cubrir [MIC] con tiras adhesivas HU/ml = ─────────────── ─X 100
Incubar por 30 min. a 17...25°C MPC
Lavar 4 veces como se describe (ver L1 – L3)
Características de la ejecución
[WASH] 350 350 350 350
Los datos de rendimiento típicos se encuentran en el Verification Report
Etapa 2 que está disponible en
[CON] -- 100 100 100 www.human.de/data/gb/vr/el-hsv1g.pdf o
Cubrir [MIC] con tiras adhesivas www.human-de.com/data/gb/vr/el-hsv1g.pdf.
Incubar por 30 min. a 17...25°C Si no puede acceder a las características de la ejecución vía internet,
Lavar 5 veces como se describe (ver L1 – L3) póngase en contacto con su distribuidor local quien se las proporcionará
[WASH] 350 350 350 350 sin costo alguno.
Etapa 3 Nota
[SUB] 5103 100 100 100 100 Los componentes del estuche son estables hasta la fecha de caducidad
Incubar por 15 min. a17...25°C (ver U8) aún después de abiertos. Sin embargo, la posibilidad de una
contaminación está directamente relacionada con el número de tomas
[STOP] 5104 100 100 100 100
del reactivo. Por lo tanto, el límite de 60 días en viales abiertos se fijó por
Mezclar cuidadosamente razones de seguridad.
Llevar a cero de absorbancia el instrumento lector ELISA (HumaReader) La manipulación debería siempre estar de acuerdo con las buenas
con el blanco de substrato con el pozillo A1. prácticas de laboratorio (GLP*). ¡Los criterios de validación del análisis
Medir la absorbancia a 450 nm lo más pronto posible o dentro de deben cumplirse siempre!
30 min. después de terminar la reacción usando una longitud de onda (*Esto incluye: Colocar la tapa debida en el vial y cerrarlo firmemente / Sacar de los viales de
de referencia de 630-690 nm (si está disponible). stock solamente los reactivos necesarios para la corrida si entraran en contacto con otras
La absorbancia de los controles y muestras se determina haciendo uso de soluciones contaminantes como lo son las muestras, etc. / Las soluciones de stock siempre
un lector de micropocillos ELISA o sistemas completamente automati- deben regresarse a 2...8°C si no se usan.)
zadas (p.ej. instrumentos de las líneas HumaReader o ELISYS de HUMAN).
Notas de seguridad
Los resultados de los pacientes se obtienen por comparación con un valor
de punto de corte (cut-off value) o por expresión en unidades HUMAN por [STOP] ¡Atención!
ml basándose en el control positivo. · Indicaciones de peligro
H315 Provoca irritación cutánea..
Cálculos de valores de control y punto de corte (Cut-off)
Valores promedio de absorbancia del [NC] en pocillos B1 y C1 (MNC) y del H319 Provoca irritación ocular grave.
[PC] en pocillos D1 y E1 (MPC) se calculan de acuerdo a: · Consejos de prudencia
A450 (B1) + A450 (C1) A450 (D1) + A450 (E1) P280 Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección.
MNC =  ; MPC =  P305+P351+P338 EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar
2 2 cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de
El punto de corte o valor cut-off COV se calcula usando la fórmula: contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando.
COV = MNC + (0,1 x MPC) P321 Se necesita un tratamiento específico (ver en esta etiqueta).
La serie analítica puede considerarse válida si se cumple con los P362 Quitarse las prendas contaminadas y lavarlas antes de volver a
siguientes criterios : usarlas.
1. Blanco Substrato en pocillo A1 < 0,150 P332+P313 En caso de irritación cutánea: Consultar a un médico.
2. MNC ≤ 0,250 Referencias
3. MPC ≥ 0,750 1. Engvall, E., Perlmann, P., Immunochemistry 8, 871-874 (1971)
4. MPC : MNC ≥ 5 2. Engvall, E., Perlmann, P., J. Immunol. 109, 129-135 (1972)
3. Remington, J.S., Klein, J.O., Infectious diseases of the fetus and
Interpretación de resultados
newborn infant. Sanders, Philadelphia, London, Toronto (1976)
A450 (paciente) ≥ COV + 15%: anti-HSV 1-IgG-Ac-positivo
4. Bidwell, D.E. et al., J. Infect. Dis. 136, Supplement 274-278 (1977)
A450 (paciente) < COV - 15%: anti-HSV 1-IgG-Ac-negativo
5. Volk, W.A. Essentials of Medical Microbiology. Second ed., J.B.
Debido a variaciones fisiológicas y analíticas los resultados de los Lippincott Company, Philadelphia, New York, San Jose, Toronto, 574-
pacientes un 15% arriba o abajo del valor calculado como cut-off son 576 (1982)
equívocos. Es recomendable medir estas muestras en paralelo con una
muestra fresca tomada de 7 a 14 días después cada una en duplicado. El
cambio de la concentración específica de anticuerpos deberá ser EL-HSV1G INF 5121601 E 06-2015-17 |
evaluado, si es necesario, tomando en cuenta la anamnesis del paciente,
así como los resultados de más exámenes.
Si los resultados son repetidamente reactivos o equívocos, las muestras
pueden ser sometidas a un análisis de confirmación.
El significado clínico de los cambios en los niveles de IgG HSV 1
específicas deberían interpretarse cuidadosamente. Los serotipos HSV 1 y
HSV 2 muestran alta reactividad cruzada. Infecciones con virus 1 pueden Human Gesellschaft für Biochemica und Diagnostica mbH
producir también un título alto de anticuerpos contra el serotipo Max-Planck-Ring 21 · 65205 Wiesbaden · Germany
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