FUNDACIÓN UNIVERSITARIA AGRARIA DE COLOMBIA

Recuento de Staphylococcus aureus coagulasa positiva

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I. INTRODUCCIÓN
Generalidades

Los Staphylococcus son como su nombre lo indica cocos con metabolismo anaerobio
facultativo, son Gram positivos y se presentan en pares (diplococo) o racimos
(estafilococos), estos microorganismos no son móviles, ni esporulados.
Algunos biotipos son capaces de producir una toxina altamente termoestable.
En el caso de los Staphylococcus aureus, esta produce cinco toxinas que
puede provocar serias intoxicaciones en el hombre.

Al ser anaerobio facultativo su metabolismo es oxidativo fermentativo, es

catalasa y coagulasa positiva, puede metabolizar una gran variedad de CHO
en condiciones aerobias con una posterior liberación de ácido acético
principalmente con pequeñas cantidades de CO 2 en condiciones anaerobia.
Su producto final de la fermentación es el ácido láctico.

Condiciones de crecimiento y supervivencia

Este microorganismo tiene tres condiciones fundamentales para su crecimiento: pH neutro,

temperatura 40°C y una actividad de agua de 0,98, crece en ausencia de microorganismos
competitivos; esta última condición es fundamental ya que Staphylococcus no es competitivo así
que no crece en presencia de otros microorganismos.

Staphylococcus aureus es una de las bacterias patógenas humanas formadoras de toxinas más
resistente y puede sobrevivir durante largos periodos de tiempo en un ambiente seco, y son muy
persistentes en alimentos con contenido alto en sales y azúcares. Sus toxinas son altamente
estables, y resistentes al calor, congelación e irradiación, por lo que una vez formadas en el
alimento y es extremadamente difícil eliminarlas.

Tabla 1 Condiciones de crecimiento y supervivencia de Staphylococcus aureus coagulasa positiva

Condición Mínimo Optimo Máximo

Temperatura °C 10 40 - 45 48
pH 4 7-8 9,6
Actividad de agua 0,85 0,98 0,99
Fuente: Ficha de seguridad Staphylococcus aureus. 2013
Reservorio

Su principal reservorio son los animales y humanos, encontrándose en la piel, cabello, fosas
nasales y garganta es por eso que el Staphylococcus aureus es una bacteria muy resistente en el
medio ambiente y ampliamente distribuida en la naturaleza que puede encontrarse en el aire,
agua, residuos, maquinaria y superficies de la industria alimentaria. Por esto último, pueden
transmitirse a una amplia gama de alimentos, principalmente alimentos derivados de animales
como leche, carne, huevos, productos derivados y alimentos consumidos en crudo como frutas y
verduras.

Tabla 2 Características etiológicas de Staphylococcus coagulasa positiva

Período
Epidemiología
Agente Enfermeda de (DM Alimentos
Síntomas (Población que
Etiológico d Incubació I) Implicados
ataca)
n
Reservorio:
Mamíferos y aves
Invasión directa Carne bovinos
Mucosas hombre
Staphylococc (piel) Huevo
2–4 Zoonosis
us aureus Profunda: artritis Ensaladas
Intoxicació horas Ataca:
Gram + séptica y Pasteles con
n 5 – 25°C Diabéticos
Coagulasa + osteomielitis 106 carne
staphilotóxi Fisión insulinodependiente
Catalasa + Síndrome shock Salsas
ca binaria 27 s
Inmóvil toxico Lácteos/leches
– 30°C Inmunocomprometi
No esporas Síndrome piel liquidas
dos
escaldada Helados
En lesiones
cutáneas
Fuente: Exposiciones microorganismo patógenos. 2018

Vías de transmisión

Las toxinas estafilocócicas se pueden transmitir a las personas a través del consumo de alimentos
contaminados por falta de higiene e inadecuadas prácticas
de cocinado y conservación:

 Contaminación cruzada: Esta puede ocurrir en las

fases posteriores de transformación de los
alimentos y durante la preparación o cocción de los
alimentos.
 Personas: Los manipuladores de alimentos pueden
ser portadores de Staphylococcus, así que al
preparar los alimentos sin tener en cuenta unas
buenas prácticas de higiene y conservación no se garantiza la inocuidad y ocurre una
contaminación alimentaria.

Alimentos implicados

Los brotes de Staphylococcus aureus ocurridos en Europa en los últimos cinco años se han
asociado a leche cruda y quesos elaborado con ella, carnes de bovino, caprino y ovino, carne cruda
y productos cárnicos (salchichas, salami, jamones, etc.). También se ven implicados los huevos y
productos derivados (pastelería, cremas, salsas), ensaladas, sándwich, conservas de pescado,
carne y verduras, en general todos aquellos alimentos preparados y consumidos en crudo que
permanezcan a temperaturas de refrigeración durante largos periodos de tiempo.

Fuente: [ CITATION Eli13 \l 9226 ].

II. OBJETIVOS
General:

Conocer la metodología adecuada para realizar recuento de Staphylococcus aureus coagulasa

positiva en el laboratorio de microbiología

Específicos:

 Conocer el fundamento de las etapas que componen el método para el recuento de

Staphylococcus aureus coagulasa positiva
 Conocer las condiciones de cultivo y las necesidades nutricionales de Staphylococcus
aureus coagulasa positiva

III. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO

1. 90 ml de agua peptonada
2. 3 tubos con 9 ml de agua peptonada
3. Cubiertos estériles
4. Gradilla
5. Alimento
6. Incubadora
7. Balanza
8. Pipetas estériles de 1 ml
9. 3 cajas de Petri con Agar Baird Parker

Agar Baird Parker: Es un medio moderadamente selectivo y de diferenciación para el aislamiento y

recuento de Staphylococcus aureus en alimentos, muestras ambientales y clínicas. La glicina, el
cloruro de litio y el telurito potásico actúan como agentes selectivos. La yema de huevo constituye
el sustrato para determinar la producción de lecitinasa y, además, la actividad de lipasa. Los
estafilococos producen colonias de color de gris oscuro a negro debido a la reducción del telurito;
los estafilococos que producen lecitinasa descomponen la yema de huevo y crean zonas
transparentes alrededor de las colonias correspondientes.
Tabla 3. Composición del Agar Baird Parker
Bacto Tryptone 10,0 g
Bacto Beef Extract 5,0 g
Bacto Yeast Extract 1,0 g
Cloruro de litio 5,0 g
Glicina 12,0
Piruvato sódico 10,0 g
Telurito potásico 0,1 g
Agar 20,0 g
 Emulsión de yema de 50,0 ml
huevo
Fuente: Ficha de seguridad Staphylococcus aureus. 2013

IV. PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES

 Usar bata, guantes de nitrilo, cofia y tapabocas.
 Revisar el material de trabajo entregado por el auxiliar de laboratorio, que se encuentre
en buen estado y cantidad suficiente para el desarrollo de la práctica
 Limpiar la zona de trabajo y mantenerla organizada durante todo el desarrollo de la
práctica.

V. PROCEDIMIENTO
1. Pesar 10 gramos del alimento utilizando los cubiertos estériles
2. Realizar las diluciones 10-1, 10-2 y 10-3
a. 10-1: Esta se obtiene a partir de diluir los 10 gramos de la muestra con los 90 ml de
agua peptonada.
b. 10-2: Se obtiene a partir de tomar 1 ml de la dilución 10 -1 y diluirla en 9 ml de agua
peptonada.
c. 10-3: A partir de 1 ml de 10-2 diluyendo en 9 ml de agua peptonada.
3. De cada una de las diluciones sembrar en superficie en cada una de las cajas de Petri que
contiene el Agar Baird Parker en estado sólido.
a. Marcar cada caja de Petri para cada dilución
b. Tomar 0,1 ml con la pipeta
c. Distribuir haciendo estriados en el medio
4. Llevar a incubar
a. 35 °C
b. 24 - 48 horas
Ilustración 1 Procedimiento para siembra y recuento de Staphylococcus aureus coagulasa positiva

VI. LECTURA E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Resultado presuntivo

Las colonias de Staphylococcus aureus en el medio selectivo Baird

Parker se caracterizan por:

 Color negro y brillante

 Puntiformes con un halo de degradación y zona de
precipitación.

Pruebas bioquímicas

Tabla 4 Pruebas bioquímicas confirmativas para Staphylococcus aureus coagulasa positiva

Interpretación de
Prueba Fundamento Procedimiento
resultado
Colocar sobre una lámina una
La enzima catalasa desdobla el
colonia de MO y adicionar unas Positivo
Catalasa peróxido de hidrogeno en agua y
gotas de peróxido de Hidrogeno Efervescencia
oxigeno
al 3%
Enzima que comprueba la
facultad de un MO de coagular el
plasma por acción de esta enzima Positivo
Coagulasa tubo: coagulasa libre: Coagulo completo o
detecta la producción de la En tubo que contiene plasma se parcial
Coagulasa enzima Estafilocoagulasa inocula la colonia. (0,5 ml de El coagulo no abarca
Coagulasa placa: detecta la plasma y 0,5 ml de inoculo) completamente la
producción de una proteína columna del fluido.
localizada en gran parte del
Staphylococcus

Determinar la presencia de
enzimas oxidasa. Sistemas
citocromooxidasa que activa la
Oxidasa oxidación del citocromo que es
reducido por el Oxígeno y
produce agua y peróxido de
Hidrogeno
Manitol Detectar si el MO es capaz de
fermentar el manitol liberando
Frotar la muestra de la colonia en
Positivo
la tirilla de prueba que contiene
Color azul
el reactivo p-fenilendiamina
Inocular en caldo rojo fenol Positivo
Amarillo
 productos ácidos que serán
detectados gracias al indicador
rojo de fenol que cambiará a
color amarillo.
Fuente: Las autoras

VII. BIBLIOGRAFÍA
Bejarano, N., Gómez, S., Ancasi, G., & Ahrendts, M. (2007). Manual de Microbiología de alimentos
(Vol. 1). San Salvador de Jujuy, Argentina.

Elika, F. V. (28 de Febrero de 2013). Ficha de seguridad Staphylococcus aureus. Ficha de seguridad
Staphylococcus aureus, 1, 1-4. (Elika, Ed.) Arkaute, Alava, España: Elika. Recuperado el 18
de Abril de 2018, de
http://www.elika.eus/datos/pdfs_agrupados/Documento95/7.Staphylococcus.pdf

FAO.org. (2017). Manual para manipuladores de alimentos. Manual para manipuladores de

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Vandevenne, C., & Escolá, M. (2002). Métodos de Analisis Microbiológicos de Alimentos. (J. Bravo,
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docID=3173330&query=NM