5.

RESULTADOS DEL ESTUDIO DEL EFECTO BIOLOGICO DE

LA INOCULACIÓN DE A. glutinosa CON B. pumilus Y B.
licheniformis SOBRE LA EXUDACIÓN RADICAL Y SOBRE
CARACTERÍSTICAS FISICOQUÍMICAS DEL SISTEMA
RIZOSFÉRICO
5.1. Análisis fisicoquímico de los suelos rizosféricos de plántulas crecidas en los suelos A y
B
Se analizaron los 2 suelos utilizados, aliseda (suelo A) y parcela (suelo B), en los 4
tiempos de muestreo determinados, en el momento de la inoculación (T0), a las 2 semanas (T1),
a las 6 semanas de la inoculación (T2) y a las 8 semanas de ésta (T3). Todos los análisis se
realizaron tanto en la rizosfera de plántulas inoculadas con B. pumilus o B. licheniformis como
en la rizosfera de plántulas no inoculadas (control). Se realizaron los siguientes análisis
físicoquímicos: pH, amonio, nitrato, nitrógeno total, carbono orgánico y capacidad de
intercambio cationico (CIC) en los 4 tiempos de muestreo. Los resultados se exponen en las
Tablas 5.1 y 5.2 como la media de los 4 tiempos de muestreo para cada tratamiento y el control.
.

5.1.1. Análisis fisicoquímico de los suelos rizosféricos de plántulas crecidas en suelo A

Los resultados del análisis de los suelos rizosféricos de plántulas crecidas en suelo A
aparecen en la Tabla 5.I. En esta Tabla se expone la significación de las diferencias según el
LSD, en aquellos casos en los que el ANOVA realizado fuera significativo (Tablas de la I a la
VI, Apéndice 2), según se describe en el Apartado 2.3.4.1 de Materiales y Métodos.

Tabla 5.I. Resultados correspondientes a la caracterización fisicoquímica de los suelos rizosféricos

procedentes de plantas inoculadas con B. pumilus o B. licheniformis y no inoculadas crecidas en el suelo
A. Cada valor es la media de 12 réplicas por tratamiento. El error estándar aparece en cursiva. Las letras
a, b, c indican la significación de las diferencias según el LSD; letras iguales indican que no existen
diferencias significativas (p<0.05)

pH NH4+ NO3- N total C orgánico CIC

µg/ g suelo µg/ g suelo µg/ g suelo % meq/100g suelo
Control 5,59±0,28 a 0,75±0,10 a 9,22±2,40 a 4,30±0,43 a 7,18±0,48 a 39,91±3,41 a
B. pumilus 5,67±0,28 b 0,66±0,15 b 7,48±2,07 b 4,80±0,73 b 6,56±0,83 b 43,87±2,81 b
B. licheniformis 5,50±0,09 c 0,55±0,24 c 7,46±1,90 b 4,85±0,32 b 6,81±0,40 b 36,60±1,19 c

El pH del suelo rizosférico es ácido en todos los casos, hecho ligeramente más acusado
bajo el efecto de B.licheniformis.
En la rizosfera de las plantas control las concentraciones de amonio presentan unos
valores medios de 0,75 ppm, sin embargo, bajo la influencia de ambos tratamientos se aprecian
significativas disminuciones de la concentración de amonio, especialmente bajo la influencia de
B. licheniformis. También las concentraciones de nitrato disminuyen significativamente con
ambos tratamientos, no detectándose diferencias entre ambos.

118
 A pesar de la disminución de la concentración de las dos formas de nitrógeno mineral
analizadas, el contenido en nitrógeno total de la rizosfera de las plántulas inoculadas registraba
valores superiores que el control y estas diferencias eran significativas.
La concentración de carbono orgánico disminuye significativamente en la rizosfera de
las plantas inoculadas, aunque las diferencias no superan en ningún caso el 1 %, las diferencias
entre tratamientos no son significativas.
La capacidad de intercambio catiónico presenta diferencias significativas en los tres
tratamientos, aunque los resultados varían según el inóculo empleado. Bajo la influencia de B.
pumilus aumenta la CIC, mientras que en el caso de B. licheniformis disminuye por debajo del
control.

5.1.2. Análisis fisicoquímico de los suelos rizosféricos de plántulas crecidas en suelo B

En el suelo B, los experimentos se realizaron separados en el tiempo por lo que cada
tratamiento tiene su control. Los resultados correspondientes a esta parte del experimento
aparecen en la Tabla 5.II y cada valor es la media de los resultados obtenidos en los cuatro
tiempos de muestreo. En esta Tabla aparece la significación de las diferencias según el LSD,
realizado en aquellos casos en los que el ANOVA (Tablas de la VII a la XII, Apéndice 2)
resultó significativo, según se detalla en el Apartado 2.3.3.1 de Materiales y Métodos.

Tabla 5.II. Resultados correspondientes a la caracterización fisicoquímica de los suelos rizosféricos

procedentes de plantas inoculadas con B. pumilus o B. licheniformis y no inoculadas crecidas en el suelo
B. Cada valor es la media de 12 réplicas por tratamiento. El error estándar aparece en cursiva. Las letras
a, b indican la significación de las diferencias según el LSD para B. pumilus y su control, y las letras x, y,
para B. licheniformis y su control; letras iguales indican que no existen diferencias significativas (p<0.05)

pH NH4+ NO3- N total C orgánico CIC

µg/ g suelo µg/ g suelo µg/ g suelo % meq/100g suelo
Control 8,14±0,11 a 0,24±0,13 a 3,72±2,44 a 0,87±0,28 a 2,75±0,35 a 18,5±2,60 a

B. pumilus 8,33±0,24 b 0,28±0,09 a 3,72±0,99 a 0,98±0,25 a 2,56±0,44 a 19,42±4,50 a

Control 7,36±0,28 x 0,19±0,07 x 1,75±0,38 x 1,23±0,05 x 2,75±1,50 x 14,88±2,32 x

B. licheniformis 7,08±0,10 y 0,23±0,08 y 1,98±0,58 x 1,41±0,03 x 2,75±0,82 x 15,16±1,35 x

Los valores de pH de los suelos empleados para los experimentos realizados con B.
pumilus presentan valores de pH más básicos que los empleados en las experiencias con B.
licheniformis. Sólo en el caso de la inoculación con B. licheniformis se aprecia una significativa
disminución del pH.
Los valores de amonio detectados en la rizosfera de plántulas inoculadas con B. pumilus
y no inoculadas no presenta diferencias significativas. Sin embargo, bajo la influencia de B.
licheniformis, los valores aumentan significativamente. Con respecto a los resultados obtenidos
119
en el análisis de la concentración de nitrato, no se encuentran diferencias significativas entre
cada tratamiento y su control en ningún caso. Tampoco se aprecian diferencias significativas en
ninguno de los restantes parámetros analizados: nitrógeno total, carbono orgánico y CIC

120
5.2. Caracterización de los exudados recogidos de plántulas inoculadas y no inoculadas
crecidas en los suelos A y B
En los exudados obtenidos en cada momento de muestreo, procedentes de plántulas
inoculadas con B. pumilus o B. licheniformis y no inoculadas, crecidas en los suelos A y B, se
analizaron los siguientes parámetros fisicoquímicos: pH, amonio, nitrato, nitrogeno total y
carbono orgánico, y bioquímicos: proteínas, azúcares y lípidos.

5.2.1. Exudados recogidos de plántulas crecidas en el suelo A

La caracterización de los exudados extraídos de plántulas crecidas en el suelo A aparece
en la Tabla 5.III. En esta Tabla se muestra la significación de las diferencias según el LSD en
aquellos casos en los que el ANOVA demuestra diferencias significativas (Tablas XIII a XIX,
Apéndice 2), según se describió en el apartado 2.3.3.2. de Materiales y Métodos. Cada dato es la
media de los resultados obtenidos en los cuatro tiempos de muestreo.

Tabla 5.III. Resultados correspondientes a la caracterización de los exudados extraídos de plantas

inoculadas con B. pumilus o B. licheniformis y no inoculadas crecidas en el suelo A. Cada valor es la
media de 12 réplicas por tratamiento. El error estándar aparece en cursiva. Las letras a, b indican la
significación de las diferencias según el LSD; letras iguales indican que no existen diferencias
significativas (p<0.05)

pH NO3- N total C organico Proteínas Azúcares Lípidos

µg/ mL µg/ mL % µg/ mL µg/ mL µg/ mL
Control 7,22±0,16a 1,68±0,93a 0,13±0,06a 0,12±0,12a 3,95±0,42a 10,25±10,4a 2,49±0,97
B. pumilus 6,92±0,12b 3,85±0,57b 0,22±0,05b 0,037±0,04a 4,45±0,89b 13,62±8,60b 2,62±1,40
B. licheniformis 6,71±0,31c 5,12±1,15c 0,25±0,07b 0,087±0,05a 5,20±3,24c 16,0±19,12c 3,10±1,60

El pH de los exudados liberados por las plantas control es ligeramente básico. Sin
embargo, bajo la influencia de ambas bacterias se produce un descenso del pH, hecho
especialmente marcado cuando la inoculación se realiza con B. licheniformis.
El nitrógeno amonio presentaba en todos los casos valores por debajo del límite de
resolución del método de análisis empleado.
Los exudados de las plantas control presentan contenidos de nitrato significativamente
mayores que los de plantas inoculadas, a su vez la concentración de nitrato es significativamente
mayor cuando la inoculación se realiza con B. licheniformis.
Con respecto a la concentración de nitrogeno total se aprecia un significativo
incremento en la exudación de compuestos nitrogenados cuando se inoculan las plantas, aunque
en este caso no se aprecian diferencias significativas.
La concentración de carbono orgánico experimenta una ligera disminución en los
exudados de plántulas inoculadas y no es significativa en ningún caso con repecto al control.
121
 Tanto el contenido protéico como el de azúcares y lípidos resultó ser mayor en los
exudados de las plántulas inoculadas con respecto a las plantas control. Las diferencias fueron
especialmente acusadas, en todos los casos, cuando la inoculación se realizó con B.
licheniformis.
El análisis cualitativo de lípidos se realizó a partir del extracto resuspendido, que se
analizó por cromatografía en capa fina. En las Figuras 5.1 y 5.2, se expone una representación
esquemática de la separación cromatográfica de los lípidos extraídos de los exudados de
plántulas de aliso inoculadas con B. pumilus y B. licheniformis y no inoculadas, en los cuatro
tiempos de muestreo. La separación se produce en orden decreciente de polaridad. En el punto
de aplicación quedan los fosfolípidos, más polares, y junto al frente cromatográfico se detectan
los ésteres de esteroles, más apolares. Entre ambos, y en orden decreciente de polaridad:
monoglicéridos, diglicéridos, esteroles, ácidos grasos libres y triglicéridos. No existen
diferencias importantes entre tiempos de muestreo dentro de cada tratamiento, ni entre
tratamientos. Todos los exudados muestran la presencia de ésteres de esteroles en cantidad
apreciable, el resto de las manchas corresponden con fosfolípidos, monoglicéridos, diglicéridos,
esteroles y ácidos grasos. Sin embargo en las Figuras 5.23. y 5.24 se puede observar que las
manchas correspondientes a los tratamientos inoculados presentan una menor abundancia de
ésteres de esteroles en todos los tiempos de muestreo.

Trip Ch Ac. palm Lec C T0 BP T0 BL T0 C T1 BP T1 BL T1

Figura 5.1. Representación de la separación cromatográfica de lípidos extraídos de exudados de plantas

no inoculadas (control-C-) e inoculadas con B. pumilus (P) y B. licheniformis (L), en el suleo A, en T0 y
T1. En las posiciones 1, 2, 3 y 4 aparecen los patrones (Trp: tripalmitato, Ch: colesterol, Palm:
ac.palmítico, Lec: lecitina).

122
 Trip Ch Ac. palm Lec C T2 BP T2 BL T2 C T3 BP T3 BL T3

Figura 5.2. Representación de la separación cromatográfica de lípidos extraídos de exudados de plantas

no inoculadas (control-C-) e inoculadas con B. pumilus (P) y B. licheniformis (L), en el suelo A, en T2 y
T3. En las posiciones 1, 2, 3 y 4 aparecen los patrones (Trp: tripalmitato, Ch: colesterol, Palm:
ac.palmítico, Lec: lecitina).

5.2.2. Exudados recogidos de plántulas crecidas en el suelo B

La caracterización de los exudados extraídos de plántulas crecidas en el suelo B aparece
en la Tabla 5.IV. En esta Tabla se muestra la significación de las diferencias según el LSD en
aquellos casos en los que el ANOVA (Tablas XX a XXVI, Apéndice 2) resultó significativo,
según se describió en el apartado 2.3.3.2 de Materiales y Métodos. Cada dato es la media de los
resultados obtenidos en los cuatro tiempos de muestreo.

Tabla 5.IV. Resultados correspondientes a la caracterización de los exudados extraídos de plantas

inoculadas con B. pumilus o B. licheniformis y no inoculadas crecidas en el suelo B. Cada valor es la
media de 12 réplicas por tratamiento. El error estándar aparece en cursiva. Las letras a, b indican la
significación de las diferencias según el LSD entre B. pumilus y su control, y las letras x, y, entre B.
licheniformis y su control; letras iguales indican que no existen diferencias significativas (p<0.05)

pH NO3- N total C organico Proteínas Azúcares Lípidos

µg/ mL µg/ mL % µg/ mL µg/ mL µg/ mL
Control 7,81±0,11 a 4,67±1,03 a 0,66±0,08 a 0,10±0,07 a 3,60±0,46 6,87±0,20 a 7,31±1,92
B. pumilus 7,62±0,26 b 4,91±1,40 a 0,71±0,12 a 0,22±0,03 b 3,57±0,54 11,37±7,20b 6,30±3,45
Control 7,97±0,06 x 4,86±2,02 x 0,15±0,007 x 0,16±0,07 x 4,20±1,60 18,87±7,70x 9,80±4,20
B.licheniformis 8,20±0,23 y 6,97±2,46 y 0,21±0,11 y 0,09±0,09 y 6,02±2,03 22,6±6,70 x 8,60±0,67

En este suelo, los valores de pH de los exudados son más básicos que los procedentes de
plántulas crecidas en el suelo A. Las variaciones a lo largo del experimento son acusadas en el
123
tratamiento con B. pumilus donde se detecta una significativa acidificación, mientras que con B.
licheniformis se observa el efecto contrario.
El nitrógeno amonio presentaba en todos los casos valores por debajo del límite de
resolución del método de análisis empleado.
En el suelo B, el contenido en nitratos de los exudados en las plantas inoculadas con B.
pumilus no se altera significativamente con respecto a su control. Sin embargo, en el caso de B.
licheniformis, se detecta un incremento significativo bajo las plantas inoculadas. Se observa
exactamente la misma tendencia en el nitrógeno total.
Con respecto al contenido en carbono orgánico, los exudados de plántulas inoculadas
con B. pumilus presentaron niveles significativamente mayores que los de plántulas control. En
el caso de B. licheniformis la tendencia fue opuesta.
El análisis bioquímico de los exudados no demuestra diferencias significativas con
respecto a la concentración de proteínas. Sin embargo, la concentración de azúcares fue
significativamente mayor en los exudados de plántulas inoculadas con B. pumilus.
El análisis cuantitativo de lípidos extraídos de los exudados de plántulas inoculadas es
menor que en sus respectivos controles. El análisis cualitativó se realizó sobre el extracto
resuspendido, que se analizó por cromatografía en capa fina; en las figuras 5.3 (B. pumilus) y
5.4 (B. licheniformis) se representa la separación cromatográfica. La separación se produce en
orden decreciente de polaridad. En el punto de aplicación quedan los fosfolípidos, más polares,
y junto al frente cromatográfico se detectan los ésteres de esteroles, más apolares. Entre ambos,
y en orden decreciente de polaridad: monoglicéridos, diglicéridos, esteroles, ácidos grasos libres
y triglicéridos. No existen diferencias entre tiempos de muestreo dentro de cada tratamiento, ni
entre tratamientos. Todos los exudados muestran la presencia de ésteres de esteroles en cantidad
apreciable y una menor presencia de fosfolípidos en los exudados correspondientes a T0 y T1;
el resto de las manchas corresponden con fosfolípidos, monoglicéridos, diglicéridos, esteroles y
ácidos grasos.

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 Trip Ch Ac. palm Lec C T0 BP T0 C T1 BP T1 C T2 BP T2 C T3 BP T3

Figura 5.3. Representación de la separación cromatográfica de los lípidos extraídos de exudados de

plantas no inoculadas (control-C-) e inoculadas con B. pumilus (P), crecidas en el suelo B en T0, T1, T2
yT3. En las posiciones 1, 2, 3 y 4 aparecen los patrones (Trp: tripalmitato, Ch: colesterol, Palm:
ac.palmítico, Lec: lecitina).

Trip Ch Ac. palm Lec C T0 BL T0 C T1 BL T1 C T2 BL T2 C T3 BL T3

Figura 5.4. Representación de la separación cromatográfica de los lípidos extraídos de exudados de

plantas no inoculadas (control –C-) e inoculadas con B. licheniformis (L), crecidas en el suelo B, en T0,
T1, T2 y T3. En las posiciones 1, 2, 3 y 4 aparecen los patrones (Trp: tripalmitato, Ch: colesterol, Palm:
ac.palmítico, Lec: lecitina).

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