E.

coli

Escherichia coli es un bacilo gram negativo, anaerobio facultativo de la familia Enterobacteriaceae,

de metabolismo fermentativo, su crecimiento óptimo es a 37 °C, se le considera un
microorganismo de la microbiota intestinal normal, pero hay cepas que pueden ser patógenas y
causar daño produciendo diferentes cuadros clínicos, entre ellos diarrea.

Estos se clasifican de acuerdo con tres serotipos, es decir, según los antígenos que presentan en su
superficie celular. O: Antígenos somáticos , H: Flagelares, K: Capsulares

Con base en su mecanismo de patogenicidad y cuadro clínico, las cepas de E. coli causantes de
diarrea se clasifican en seis grupos: enterotoxigénica (ETEC), enterohemorrágica también
conocidas como productoras de toxina Vero o toxina semejante a Shiga (EHEC o VTEC o STEC),
enteroinvasiva (EIEC), enteropatógena (EPEC), enteroagregativa (EAEC) y adherencia difusa
(DAEC).

Para identificar la presencia de e coli, se usan diferentes medios de cultivo, los más usados son:

Bilis-Rojo Neutro-Violeta Cristal con Lactosa (VRBL), Agar: La presencia simultánea de violeta
cristal y sales biliares asegura la inhibición del crecimiento de las bacterias Grampositivas. A su vez
la fermentación de la lactosa da lugar por un lado a la formación de ácido, que hace virar a rojo el
indicador, y por otro a la precipitación de las sales biliares alrededor de las colonias. Las colonias
de e coli, presentan un color rojo púrpura y aparecen rodeadas por una franja rojiza.

Bilis-Verde Brillante 2%, Caldo: Se emplea para la investigación y recuento de bacterias Coliformes
en aguas, leches, productos alimenticios y cualquier material de interés sanitario. Recomendado
para el enriquecimiento selectivo y enumeración de E. coli. El objetivo de este medio es el de
poder inhibir el crecimiento de los microorganismos distintos de los del grupo de Coliformes, al
tiempo que éstos puedan crecer sin restricción. Con la presencia de la Bilis de buey y del Verde
Brillante se consigue la inhibición de casi la totalidad de los microorganismos Gram-positivos y de
los Gram-negativos distintos de los del grupo de los Coliformes. Debe confirmarse la identificación
por otras pruebas ya que la fermentación de la lactosa con formación de gas se interpreta como
indicativo de E. coli. La producción de gas se evidencia con la campana de Durham.

Endo, Base de Agar: La presencia de Sodio Sulfito y Pararrosanilina inhibe el crecimiento de las
bacterias Gram-positivas. Además las proporciones de ambos son tales que la Pararrosanilina se
mantiene decolorada, de tal manera que sólo con el acetaldehído generado en la fermentación de
la lactosa se consigue restablecer su color original. Así, las bacterias lactosa-negativas
permanecerán incoloras, mientras que las lactosa-positivas toman un color rojo intenso que llega a
colorear el medio que las rodea. La colonia de E. coli, además del color rojo intenso, puede
presentar un brillo metálico.

MacConkey, agar: Se emplea para la investigación de Coliformes en aguas, leches, productos

alimenticios y otras muestras de interés sanitario. Por la presencia de las sales biliares y el cristal
violeta se inhibe el crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Por la presencia de la lactosa, las
bacterias capaces de fermentarla acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y
formando colonias rojas o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio correspondiente al
precipitado biliar. Las bacterias lactosa-negativas dan colonias incoloras.

Lactosado, Caldo: Medio para la detección de Coliformes, especialmente E. coli, y otros

fermentadores de la lactosa, en muestras de agua, leche y alimentos. Por la composición del
medio, el contenido en elementos nutritivos y energéticos hace que permita el desarrollo sin
restricción de bacterias Coliformes. La fermentación de lactosa producirá desprendimiento de gas
que se pondrá de manifiesto en la campana de Durham.

Después de su cultivo la identificación se hace mediante pruebas bioquímicas como:

TSI: r (agar triple azúcar hierro BD) 2. El agar triple azúcar hierro contiene tres carbohidratos
(glucosa, lactosa y sacarosa ). Cuando dichos carbohidratos se fermentan, la producción resultante
de ácido es detectada por el indicador rojo fenol. Se producen cambios de color: amarillo para la
producción de ácido y rojo para la alcalinización. Dado que la lactosa y la sacarosa se encuentran
presentes en concentraciones mucho más elevadas que la glucosa, la formación de ácido en la
base del tubo se debe a dichos azúcares. E.coli tiene un Crecimiento de bueno a excelente; y da
colonias amarillas, medio amarillo alrededor de las colonias

El IMViC es una prueba utilizada en biología para la identificación bacterias. Se compone de cuatro
pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato

INDOL: Consiste en cultivar al microorganismo en estudio en un caldo rico en triptófano; Se

determina si la bacteria posee una enzima (triptofanasa). La triptofanasa hidroliza el triptófano en
indol y alanina. El indol se detecta empleando un reactivo específico (Reactivo de Kovacs). El
triptófano forma parte de las peptonas del medio. un resultado positivo mostrará la formación de
un anillo de color rojo sobre el caldo de cultivo, lo cual pondrá de manifiesto la presencia de Indol
debido a la utilización del triptófano por el microorganismo, un resultado negativo solo mostrara
un anillo de color amarillo propio del reactivo de Kovacs. E.coli es indol positivo se forma anillo
rojizo en la superficie

ROJO DE METILO: El rojo de metilo es un indicador de pH. Actúa entre pH 4,2 y 6,3 variando desde
rojo (pH 4,2) a amarillo (pH 6,3). Por lo tanto, permite determinar la formación de ácidos orgánicos
que se producen durante la fermentación de un carbohidrato. El microorganismo en estudio se
cultiva en un caldo de cultivo con algún carbohidrato fermentable, el más común es la glucosa
aunque se pueden utilizar otros carbohidratos como lactosa, sacarosa, manitol, etc, adicionado
con el rojo de metilo como indicador de pH. Una reacción positiva, es decir, el viraje del medio a
un color rojo, indica que el microorganismo realiza la fermentación de la glucosa por la vía ácido-
mixta y el pH del medio se torna hasta 4.2 por la gran cantidad de ácidos orgánico producidos. Una
prueba negativa no cambia el color del medio (color amarillo), se puede ver como e.coli fermenta
la lactosa virando el color del medio a rojizo

Voges-Proskauer (Vi): Detecta la fermentación butanodiólica. En esta fermentación se producen

una menor cantidad de ácidos que en la fermentación ácido-mixta, y una gran cantidad de
butanodiol. Mediante un reactivo, (alfa-naftol y KOH al 40%), se detecta la presencia de un
precursor del butanodiol (acetilmetilcarbinol o acetoína). La acetoina en presencia de oxígeno se
oxida a diacetilo. El diacetilo oriigina una coloración roja al reaccionar con los restos guanidínicos
de algunos aminoácidos de la peptona del medio. La acetoína en contacto con el oxígeno y la
potasa origina diacetilo. El alfa naftol incrementa la sensibilidad de la reacción. El diacetilo origina
un compuesto de color rosado. Los cultivos negativos se incuban 1-2 horas a 37 oC en posición
inclinada efectuándose de nuevo la lectura. E coli es negativo así que el medio queda de color
amarillo

CITRATO: Sirve para determinar si un microorganismo puede crecer utilizando citrato como única
fuente de carbono debido a la síntesis de la enzima citrato permeasa la cual permite la
introducción del citrato al interior de la célula, una vez dentro, el citrato es incorporado al ciclo de
los ácidos tricarboxilicos o ciclo de Krebs. Se hace crecer al microorganismo en estudio en caldo
citrato. Un resultado positivo es cuando se observa turbidez en el tubo, debido al crecimiento
bacteriano. Un resultado negativo es cuando no se observa crecimiento. Actualmente el medio
más utilizado es el Agar Citrato de Simmons un medio sólido en tubo con pico de flauta el cual
posee un indicador de pH (azul de bromotimol) si el microorganismo es capaz de crecer con citrato
como única fuente de carbono, también será capaz de utilizar las sales de amonio como única
fuente de nitrógeno; con la liberación del amoniaco en utilización de las sales de amonio el pH
aumentara y el indicador dará un vire a azul, dando un resultado positivo. El medio sin inocular es
de color verde, de esta manera un resultado negativo no habrá crecimiento y el color seguirá
siendo verde.

Se determina que es e coli cuando las dos primeras pruebas dan positivo y las dos ultimas un
resultado negativo