RESUMEN DILUSION TUBERCULINIZACION

Habla de la elaboración de la guía y los temas, células sanguíneas, aglutinación, como elaborarla y poner los nombres…

Introducción, fuente bibliográfica mínimo 5, luego objetivos en infinitivo, materiales: equipos y reactivos y muestras,
metodología: paso a paso de diferentes pruebas, evidencia fotográfica, resolución y diferentes resultados, anotaciones.
Cuestionario con 5 preguntas y fuente bibliográfica, y la parte B con los posibles resultados.

DILUCIONES:

Es una práctica común en laboratorio en muchas disciplinas, va a estar conformada con un soluto y solvente, el universal
es el agua destilada, cuando se quiere hacer titulación de un anticuerpo el AC va a ser el soluto y el solvente el agua o el
material usado para realizar la dilución, se define que es cuando se tiene una sustancia que se puede llamar soluto, la
cual se quiere reducir su concentración. La utilización en laboratorios de inmuno, se puede realizar titulación en
antígenos, y así mismo es usada para realizar una correlación clínica del paciente, entonces a través de una prueba
enzimática como Elisa podría concluir si hay una infección activa o a un proceso previo como una infección previa,
también sirve para determinar si la efectividad de las vacunas es buena, ellos parametrizan sus titulaciones, que títulos
se espera tener en las vacunaciones y bajo que limites en una vacunación se puede considerar en cual titulación se
puede llegar a un rango de protección del 90%.

En matemáticas se conoce como proporción, es decir pueden aparecer 1:10 o 1/10, es decir cuantas partes se pueden
tener de soluto y solvente (1 de soluto y 9 de solvente, juntas forman 10 unidades en total). El 10 es el factor de
dilución: el número de veces que tuvo que ser diluida para llegar al rango de titulación, no todas son 1:10, sino tienen
diferente rango, depende del antígeno, condiciones de la prueba, también va a depender del individuo, si tiene infección
activa o fue vacunado hace mucho, si tiene infección activa la titulación si el rango de referencia puede ser 1:50, su
titulación va a ser muy por encima de 1:50 porque hay mayor [] de AC.

Bueno se habla de esa proporción, pero no de volumen, pero se puede preservar la proporción en cualquier volumen,
puede estar en 1ml, 20, 1l…

En este ejemplo habla que: en primera instancia

hay una solución que esta dividida en 4partes y
una de ellas es el soluto… se quiere realizar una
dilución con un volumen de 20ml a partir de una
existente, se debe garantizar que la dilución se
mantenga ¼, para poder sacar eso se debe sacar
el volumen de transferencia, que se calcula al
dividir el volumen total entre el denominador
de la proporción de la dilución, en ese caso 5
ml, se debe siempre homogeneizar siempre, se
puede preparar varios tubos con ese volumen
de transferencia, pero debe tener al final un
volumen de 20ml para que la dilución sea 1:4.
Eso hablando de diluciones sencillas…

Existen tipos de diluciones, pero las que importan son la directa y la seriada, en otras pruebas como fijación de
complemento, Elisa que usan soluciones buferadas, de frenado que se anejan con porcentaje…

Para la muestra con suero se realizan las directas o seriadas.

Directa: de un solo paso, se tiene una solución madre, original [azul de metileno] y se hace u solo paso para obtener una
solución diluida, se permite tener resultados cuantitativos porque se conoce el resultado matemático sencillo (1:10 por
ejemplo, sacando el volumen de transferencia). Se conoce siempre el resultado final
Seriadas: son logarítmicas, es muy útil para investigaciones y DX, no se reconoce el resultado final, sirve para resultados
semi cuantitativos… son diluciones secuenciales y como hay muchos pasos y como eso no permite un resultado
cuantitativo completo:

Son diluciones sucesivas en los cuales el

factor de dilución siempre va a ser igual,
1:10, 1:100, 1:1000… se debe tener en
cuenta que también se mantiene el
mismo volumen de transferencia y
todos los tubos deben ser iguales en la
proporción, muchas veces cunado se
conoce que solvente se usa entonces
antes de comenzar a adicionar el soluto
se preparan los tubos con los ml del
solvente (10 tubos con 9ml de agua
destilada), quedan con 10 ml el primero
pero de ahí se toma 1ml y se trasfiere al
otro tubo, y luego otro ml y se transfiere a otro tubo y así sucesivamente, el ultimo tubo no puede quedar con 10ml se
debe desechar 1ml para que todos se queden con 9ml, ahí por ejemplo en el caso de azul de metileno ahí se debe
observar si queda azul de metileno, lo ideal en la práctica es medir con equipos las absorbancias a una longitud
especifica que vendría a ser los lectores de Elisa o un espectrofotómetro sencillo, entonces esos equipos pueden calcular
mas exacto… depende el numero de diluciones de que tan contaminada este una muestra para ir limpiando la solución
para poder calcular la titulación efectivamente.

Estas soluciones pueden tener diferentes bases, por

ejemplo: en base 10 se llaman diluciones logarítmicas
decimales, pero hay dobles, triples o cuádruples… cuando
se pida que realicen una doble se refiere a que sea 1:2.

En esta dilución dependiendo del número de diluciones

se vayan realizando, la dilución como tal será como se
indique en la tabla, en los decimales puede ser 5x10000 o
5x10—4 osea indica que se tuvieron que hacer 4 diluciones
logarítmicas decimales.

La titulación corresponde a la última dilución que da una

reacción positiva, si se colocara azul de metileno se va a
ir perdiendo el color azul, pero en el ultimo tubo donde
se detecte color así sea mínimo, en esa dilución se
presenta la titulación.

Si la titulación fue 1:20 y 1:500, ¿cuál es el que tiene más anticuerpos? respuesta: 1:500, porque es la última dilución en
la que fue positiva, al primer individuo se le tuvieron que hacer 20 diluciones y al segundo 500, había mas ahí, en
procesos de vacunación viejos puede que sea difícil titulara por la cantidad mínima de AC.
Cuando hay titulaciones de 1:20 por lo general se realizan muestras pareadas 15 días después y si sigue en 1:20 o 1:19
puede que sea negativo a la infección, si sube puede ser positivo, hay una actividad inmunológica, cuando cambian las
titulaciones eso se conoce como seroconversión.

Para perfiles reproductivos en bovinos se usa Elisa y son importantes si se usan bien, en vacunaciones también para ver
si los títulos se están desarrollando de manera correcta, si hay que volver a vacunar, etc.

estos se usan en la, por eje se parte de 1/1 que es azul de

metileno concentrado donde se manejan diferentes
diluciones (doble, seriada). Se deben usar pipetas
diferentes para no contaminar y evitar errores en
transferencia.
TUBERCULINIZACION Y LEGISLACION NACIONAL

Recordar que es de hipersensibilidad retardada, para detectar procesos de tuberculosis, nocardiasis, brucella (brucellina,
en el manual terrestre de OIE), pero para brucella es mas eficaz en serología.

En tuberculosis se usa mucho, se debe siempre consultar el manual de OIE para las pruebas que siempre se deben usar.
Cada país decide de acuerdo al contexto epidemiológico, esas pruebas deben estar avaladas.

Tuberculosis es una enfermedad zoonótica, afecta a muchos mamíferos y en Colombia ha llevado mas tiempo en ser
erradicada, los bacillos han sido detectados en los 70s en Colombia, pero la enfermedad lleva mucho tiempo antes acá y
es una enfermedad asociada a factores socioeconómicos, es decir mayor prevalencia de pobreza, sida y contacto de
animales reservorio como silvestres. Se puede adquirir por micobacterias con un hospedero humano como M
tuberculosis o con hospederos intermedios. En Colombia por lo general la que presenta un riesgo alto es la producida
por M. bovis, es por eso que ICA e instituto nacional de salud unen esfuerzos para hacer control sobre la enfermedad y
el instituto nacional de salud hace lo pertinente en el control de M. tuberculosis y reportes que se reciben sobre M:
bovis, el ica se encarga del control de M. bovis, esta causa enfermedad en humanos, bufalinos, bovinos, y gatos incluso.

En Colombia el programa de control es muy importante. La prueba de la tuberculina se realiza en bovinos y bufalinos,
porque hay una gran población de estos, existen pruebas serológicas como interferón gamma, pero requieren de
laboratorios especializados y pues se necesita que la muestra llegue en menos de 3 o 4 horas y es muy complicado hacer
que se llegue rápido., se prefiere que se realice en campo.

Se realizan mucho en zoológicos por los primates, acá en Colombia la normatividad dice que todos los predios de
producción de leche deben entrar en certificación de libre de enfermedad porque a través de la leche puede haber
infección, la leche también se somete a pasteurización, garantiza la destrucción de estos bacilos acido alcohol resistente.

La leche puede transmitir brucella, listeria, etc.

Cuando un predio tiene tuberculosis Ica entra a hacer el reporte a instituto nacional de salud, hace muestreos en
personal para hacer control de tuberculosis y humanos, así como otros animales que comparte espacio con los bovinos.
M bovis se transmite de bovinos a humanos a través de leche, productos lácteos y vía aerógena, generalmente no se ve
al bovino con proceso respiratorio, si se ve con signos puede que lleve 4 años con la enfermedad.

Dosis infectivas: vía aerógena mucho menor al consumo digestivo.

Se debe tener en cuenta que la prueba de la tuberculina es indirecta porque s e mide una reacción que sucede en los
tejidos para evidenciar si ha habido una exposición de estros microorganismos.

Hubo u contacto con la enfermedad, se activan el sistema innato (macrófagos), se engloban los bacilos, no puede haber
una fagocitosis porque inhibe el fagolisosoma y usa al macrófago para viajar a oros sitios. existe otras células como CD,
mastocitos y monocitos, muchos de esos macrófagos al englobar ese bacilo pueden llevar parte de ese bacilo (antígeno)
al sistema de inmunidad adquirida, a LT.

LT se demoran un poco en reconocer y en dar respuesta adaptativa de 10 a 30 días, y hay una sensibilización total para
hacer el reconocimiento de mycobacterium, cuando se encuentra nuevamente se estimula una respuesta como
liberación de citoquinas e interferón gamma. Este bacilo promueve mucho la pros de interferón gama, por eso esta
prueba se ha tenido en cuenta para que se use también, pero es muy difícil estandarizar esta prueba en Colombia. En
plantas de beneficio se usa cultivo e histopatología (ziel Nielsen).

LT activan nuevamente inmunidad innata, macrófagos y factores quimiotácticos, se acumulan macrófagos y luego
células epitelioides, células NK hasta llegar a la formación de tubérculo, hay influencia de LB para producción de AC anti
bacilo T., y también se activan otras LT porque s necesita un proceso mediado por la inmunidad celular y se necesita
destruir las células infectadas (macrófagos), y la inmunidad humoral es importante para opsonizar a los bacilos, la
prueba de la tuberculización mide la acción celular.
Puede haber 1 solo tubérculo, en esos casos se logra controlar la situación peeero hay una diseminación a tejidos
respiratorios, y digestivo, no solamente van a haber lesiones respiratorias sino digestivo, en la zona ganglionar. Hay
exposiciones subsecuentes, como más macrófagos presentando antígenos a LT que ya están sensibilizados, entonces
estos van a seguir liberando citocinas y va a ser mas generalizado. Cuando el bacilo llega a un tejido nuevo los
polimorfonucleares llegan, luego monocitos y la respuesta sigue latente. 3-6 días después siguen llegando macrófagos
activados, luego 6-16 días se forman las células gigantes de langhans y como ese proceso es tan demorado se lo
reconoce como un proceso de inmunidad tardía, y se lo conoce también como u proceso de hipersensibilidad celular,
sonde hay necrosis, remodelación, fibrosis… siempre se dice que cuando se tenga una lesión donde se sospeche que se
granuloma, se debe tener todas las precauciones y se deben incidir y observa caseificación y cierto grado de
calcificación, siempre se siente mineralización al corte, puede que esos granulomas sean producidos por patógenos
ambientales también como el Nocardia, entonces, se pueden hacer pruebas de confirmación.

En Colombia la prueba solo se realiza en bovinos y bufalinos a partir de 6 semanas de edad, hembras y machos y se exige
sobre todo a los predios de producción de leche y en caso de transporte de animales en el territorio nacional, hay
puntos de control (guía de movilización), la vigencia dura 60 días. Se exige que tenga la prueba de la tuberculina o que
venga de un predio certificado como libre de tuberculosis, a animales de plata de beneficio llegan con guía de
movilización también para saber la procedencia en caso de tuberculosis.

La prueba se realiza en campo con el animal en vivo, midiendo la respuesta de inmunidad celular mediante LT, con una
reacción de hipersensibilidad tardía, tipo IV, el éxito consiste en usar un personal capacitado, correctos reactivos, sitio
adecuado y dosis adecuadas. Los indicados a realizar la prueba son los funcionarios del ICA, pero ha delegado también
últimamente a ciertas personas para poder realizar el proceso (MVZ), para estar autorizado se necesita ala tarjeta
profesional y experiencia de trabajo con bovinos, e presentan exámenes que se realizan 2 ces al año mediante
convocatoria nacional, realizando un curso para el DX de la enfermedad (aplica también para brucella). Cuando se pasa
el examen (90/100) el vet debe estar inscrito a una empresa de inspección que es una empresa autorizada por el ICA
para realizar los exámenes. Esos procesos de autorización se hacen cada 2 años, en el caso de los inscritos en su
organismo de inspección pueden realizar las pruebas en el país. Los MVZ no pueden marcar animales positivos porque s
ello reserva al ICA, el MVZ solo dice que puede ser positivo, osea el MVZ hace la prueba para certificación de predios
libres de la enfermedad y para movilización.

Esta prueba requiere de un extracto proteico purificado (PPD), en el lab se tiene cultivo de micobacteria y se filtra un
extracto lleno de proteínas para cuando se inoculen los linfocitos T sensibilizados reaccionen, si no hubo nunca
sensibilización por la enfermedad a los LT no hay respuesta alguna dentro de esos extractos se usa a M. Bovis y Avium
que agrupa a muchas otras micobacterias que pueden ser ambientales, cuando hay una respuesta positiva puede ser por
M. Bovis o por otras, simplemente se sabe que hay una reacción positiva a la prueba mas no que sea positiva a M bovis.
M. Avium solo se usa en una modalidad de la prueba cervical comparativa. Para las demás solo se usa M. bovis como
extracto.

PPD solo esta suministrado en casas comerciales autorizadas por ICA y solo se entrega a quienes estén autorizados a
usarla. Esa reacción tiene un periodo de activación de 24h y 72h, osea a los 3 días.

Cada país determina [] de PPD, ahí garantiza el éxito de la prueba, en Colombia para PPD se usa de M. Bovis en una [] de
20.000 y 50.000 UI/ml y en el caso de M Avium es de 25.000 UI/ml, un frasco trae 5 ml, pero a cada animal se aplica
0.1ml, se aplica con jeringa insulínica. Se transportan en cava de refrigeración y sin luz.

DOTACION: bioseguridad, overol, tapabocas, gafas, botas, guantes, formas, lapicero, tabla, calculadora, toalla y
sombrero.

MANEJO DEL ANIMAL: chapetas, pinza placadora, manila, equipo de necropsia

 NEVERA: tuberculina, jeringuillas, agujas, cuchillas, barbera,
refrigerante, guardián, bolsas rojas, cepillo, desinfectante,
cutímetro.

SE REALIZA A TODOS LOS ANIMALES MAYORES DE 4 SEMANAS DE

EDAD (mes y ½) CHEQUEA LOS GANGLIOS LINFATICOS.
Generalmente ella lo hace en pliegue anocaudal izq., inspeccionar
por lesiones moscas u otras vacunas, recordad cual pliegue, hay
desinfectantes suaves o palas para quitar el exceso de m. fecal. Esa
tuberculina debe mantenerse en refrigeración desde que se recibe
hasta antes de aplicar. Si está bien aplicado se forma una pápula al
inyectar.
REACCIÓN NEGATIVA: Cuando no se presente inflamación o
cuando se observe una leve inflamación con un incremento de
espesor del pliegue de la piel menor de 2 mm y sin signos clínicos,
como edema difuso, exudación, necrosis, dolor o inflamación de los
ganglios linfáticos de la zona de aplicación de la tuberculina.
REACCIÓN SOSPECHOSA: Aumento de grosor del pliegue cutáneo de
2 a 4 mm y no se observan signos clínicos.
REACTOR: Aumento de grosor del pliegue cutáneo mayor a 4 mm y/o
se observan signos clínicos. La prueba cervical simple se realiza en
bufalinos, en el tercio medio del cuello previa limpieza solo con
papel, superficie e de a 6cm porque las pruebas ano caudales pueden arrojar falsos positivos.
Aquí no se habla de animales positivos sino reacciones a la prueba…
PRUEBA DE TUBERCULINA CERVICAL COMPARATIVA (PCC):
Prueba diagnóstica de campo empleada para confirmar la
infección por Mycobacterium bovis. Se aplican dos tipos de
tuberculina: DPP bovina y DPP aviar las cuales son
aplicadas vía intradérmica, en el tercio medio del cuello. Se
realiza la lectura de la prueba 72 ± 6 horas posteriores a la
aplicación. Se recomienda depilar. Por manejo es
complicada. Se usa la del cuello cuando hacen reacción sospechosa. Se espera 2 meses para que la sensibilidad alérgica
disminuye… en casos de urgencia se autoriza si el mismo día de la lectura se quiere realizar, en casos de campaña…
Avium es micobacteria ambiental y suelen haber reacciones cruzadas, se
mira cual es reactiva, si es bovis es definitivo, si es Avium es una reacción
cruzada a micobacterias del ambiente.
La distancia entre una y otra debe ser aproximadamente 12-15 centímetros,
dosis de 0.1 mL de bovino y 0.1 mL aviar. En animales jóvenes, en los que no
hay espacio para separar los puntos lo suficiente en un solo lado del cuello,
debe aplicarse una inyección a cada lado del cuello en puntos equivalentes.
En este caso de ese cuadro que no se entiende bien, se debe restar entre 0 horas y 72, luego entre diferencia y
diferencia de bovina y aviar y da milímetros… siendo positivo, dudoso o negativo y se debe poner la reacción más
evidente (A O B, si gana la aviar es negativa, como dije antes >: U en los positivos a veces los linfonodos de la zona donde
se aplicó la prueba suelen hincharse.
Recuerden que la tuberculina es una prueba basada en la alergia y puede haber: Manifestaciones de alergia: Hiperergia-
muy aumentada. Hipoergia- disminuida. Anergia- sin reacción.

Hipersensibilidad IV, cuando hay reacción recuerda al sistema inmune una anterior exposición, Linfocitos T- caracterizan
por tener receptor de memoria-se produce en el timo-pasan a ganglios donde después de la estimulación por el ag-van a
la superficie sitio de aplicación estimulan serotoninas, enzimas, Inflamación. (24H) lográndose su máximo a las 72 h.
Los programas de control toman en consideración los periodos de alergia para el establecimiento de intervalo entre las
pruebas 42-60 días (desensibilización) OIE capítulo 2.4.2 (2012), este es el periodo el que se espera encontrar nuevos
enfermos.
FACTORES QUE PUEDEN INFLUIR EN LA RESPUESTA ALÉRGICA
 Edad: Puede ser factor determinante. Animales muy viejos no responden
 Sitio de inoculación (ZONA BIEN CONTAMINADADA).
 Dosis de la tuberculina 0.1 mL intradérmica.
 Aplicación inapropiada de la prueba.
SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE LA TUBERCULINA: SENSIBILIDAD: identifique correctamente aquellos animales
infectados y enfermos.
ESPECIFICIDAD: de diagnóstico identifique correctamente aquellos animales no infectados o sanos.

La OIE menciona que de acuerdo al lugar donde se haga y tipo de prueba

puede haber % más altos de sens y especif, e Colombia gana la PAC, en
predios donde ha habido casos se recomienda PCS por mayor sensibilidad.

ADN; lab médico veterinario del doctor Potrino (parece que dice),
también el orozco torres, todos esos están inscritos en el ica para
entregar la tuberculina al ICA.
IMPORTANTE: PCR USCA LA PRESENCIA DEL GEN RvD1 DE
MYCIBACTERIUM BOVIS.

A los bufalinos cárnicos por lo general no se les pide mucho la

prueba pero si la cervical simple cuando se deben movilizar o en
exposiciones**