Instituto Tecnológico de Minatitlán

Laboratorio de Procesos Biológicos de Tratamiento de Aguas

Practica No. 4

“Evaluación de la Eficiencia de Desinfección en un Tratamiento

Biológico”

Objetivo de la Práctica:

El estudiante determinará la concentración de coliformes totales y fecales en el

tratamiento biológico de aguas residuales, con la finalidad de calcular el porcentaje
de remoción, utilizando métodos de muestreo analíticos para aguas residuales.

Introducción:

El crecimiento de la población a nivel mundial y el aumento del uso del agua para
diferentes actividades, ha incrementado los niveles de contaminación. Esta
contaminación está relacionada con los vertidos de origen doméstico e industrial a
los cuerpos de agua. En el caso de los residuos de origen doméstico, la carga
contaminante está representada por altos porcentajes de materia orgánica y
microorganismos de origen fecal. Estos microorganismos son causantes de
enfermedades de origen hídrico, que generan altos porcentajes de morbi-
mortalidad en la población. El control de la calidad microbiológica del agua de
consumo y de vertido, requiere una serie de análisis dirigidos a determinar la
presencia de microorganismos patógenos. El diagnóstico de estos
microorganismos, requiere laboratorios especializados y representa varios días de
análisis y costos elevados. Como alternativa a estos inconvenientes, se ha
propuesto el uso de indicadores microbianos que se puedan identificar mediante el
uso de métodos sencillos, rápidos y económicos. Este trabajo hace una revisión
de los principales indicadores de contaminación fecal y su significado en la
evaluación de la calidad del agua.
Materiales y Equipos:

- 3 Vasos de PPT de 50 ml (uno para cada medio de cultivo)

- 3 Vasos de PPT de 500 ml (uno para cada medio de cultivo)
- 1 Probeta grad de 250 ml
- 3 Espátulas
- 3 Agitadores de vidrio
- 6 Pipetas de 10 ml
- 2 Gradillas para tubos de cultivo
- 2 Perillas
- 1 Pizeta
- Algodón
- Papel estraza
- 6 Tubos de cultivo de concentración doble (capacidad para 20 ml)/ para
diluciones
- 40 Tubos de cultivo de concentración sencilla (capacidad para 12 ml)
- 20 Tubos de cultivo para fecales pequeños (con capacidad para 5 ml)
- 60 Tubos de durhan (campanillas)
- 12 Pipetas graduadas de 2, 5 a 10 ml
- 2 envases de plástico (resistente a esterilización) de 300 ml de capacidad,
de boca ancha y tapa de plástico.

Reactivos y soluciones:

- Medio de cultivo caldo lactosado

- Medio de cultivo caldo verde bilis brillante
- Medio de cultivo caldo Ec-Broth
- Solución madre de fosfatos

Formatos:

- Norma Técnica para coliformes Totales y Fecales (NMX-AA-042-1987)

- Bitácora de Analista
- Cadena de custodia
- Listado de artículos
- Plan de muestreo
Procedimiento:

► Preparación del medio de cultivo Caldo E C Broth

1. Pesar la cantidad necesaria de 9.5 gr de reactivo para preparar el medio de

cultivo
2. Se virtio en la probeta
3. Homogeneizar y disolver con varilla de vidrio
4. Una vez disuelto el medio, distribuirlo en porciones de 5 ml en tubos de
ensayo
5. Ingresar las campanitas a los tubos, agitar para retirar el aire
6. Tapar con tapones de plástico esterilizables, o en su defecto con torundas
de algodón
7. Esterilizar en autoclave o a vapor fluente según corresponda
8. Dejar en refrigeración

► Procedimiento de muestreo

Ref: NMX-AA-042-1987

Muestreo de Coliformes Fecales en Canales y Colectores.

1. Se recomienda tomar la muestra en el centro del canal o colector donde el

flujo sea turbulento a fin de asegurar un buen mezclado
2. En canales se sumerge el recipiente en el agua con el cuello hacia abajo
hasta una profundidad de 15 a 30 cm, abrir y enderezar el recipiente
ligeramente hacia arriba, procurando que sea a contracorriente.
3. Se destapa el recipiente y se llena hasta 2/3 partes, se tapa y se retira
4. Se preserva en una hielera a 4°C
5. Se lleva al laboratorio para efectuar su análisis

Desarrollo:

Desarrollo de la siembra en caldo lactosado

1. Se limpió con agua y jabón la mesa y las paredes, y después se flameo con
mechero la superficie de la mesa de trabajo
2. Se sacó de la incubadora los tubos de ensayo con el caldo lactosado
 3. Se tenían 7 pipetas de 1 ml esterilizadas y envueltas en papel estraza.
También se tenían etiquetas ,cinta maskin, torundas de algodón, tubos de
dilución y los tubos de caldo lactosado
4. Se tomó una pipeta de 1 ml, se le quitaba el papel estraza y se hacía pasar
la punta y la parte superior por el mechero y se tomó 1 ml de la muestra y
se depositó en los tubos de caldo lactosado y también se le añadió 1 ml de
tubo de dilución
5. Se agitaba el tubo de dilución y se tomaba 1 ml y se sembraba en los tubos
de caldo lactosado, esto se hizo 3 veces, la siembra se hacía de la misma
concentración se tomaban 3 ml y se depositaba 1 ml en cada tubo de caldo
6. Lo anterior de destapar la pipeta, se debía hacer para cada dilución, se
realizó para 7 tubos, se tenían 7 tubos de caldo lactosado con diferentes
diluciones
7. Cada tubo una vez que se le había depositado la siembra se tapaba con
una torunda de algodón y se le ponía cinta maskin para sellarlo, antes de
agregarle la muestra la boquilla del tubo se pasaba ligeramente por la flama
del mechero para esterilizar.
8. Una vez sellados los tubos de ensayo, se colocaban en una gradilla y se
metieron a la incubadora con una temperatura de 54°C y se dejó ahí hasta
el día siguiente para hacer el conteo a las 24 hrs luego a las 48 hrs

► Preparación de la resiembra (caldo verde bilis)

1. Con una barilla de platino a aquellos tubos que dieron positivo se

introducían al tubo con caldo verde bilis
2. Se tapaban y se colocaron en una gradilla y se metieron a la incubadora
con una temperatura de 54°C y se dejó ahí hasta el día siguiente para
hacer el conteo a las 24 hrs luego a las 48 hrs

► Preparación de la resiembra (caldo E C Broth)

1. Con una barilla de platino a aquellos tubos que dieron positivo del caldo
verde bilis,se introducían al tubo con caldo E C Broth
2. Se tapaban y se colocaron en una gradilla y se metieron a la incubadora
con una temperatura de 54°C y se dejó ahí hasta el día siguiente para
hacer el conteo a las 24 hrs luego a las 48 hrs
► Tabla de Conteo

Disoluciones 1 ml x10 -1 x10-2 x10-3 x10-4 x10-5 x10-6 x10-7

Caldo 3/3 3/3 2/3 2/3 1/3 0/3 0/3 0/3
Lactosado
24 hrs
Caldo 3/3 3/3 2/3 2/3 1/3 0/3 0/3 0/3
Lactosado
48 hrs
Caldo verde 3/3 3/3 2/3 2/3 1/3 0/3 0/3 0/3
Bilis
Brillante 24
hrs
Caldo Verde 1/3 2/3 3/3
Billis
Brillante 48
hrs
E.C Broth 1 1
24 hrs

Cálculos y resultados:

Para determinar la concentración de coliformes totales y fecales se pueden utilizar

las tablas de número más probable o bien las fórmulas de Thomas.

NMP = ( # tubos positivos x 100 ) .

100ml √(𝑚𝑙 𝑚𝑡𝑟𝑎 𝑡𝑢𝑏𝑜𝑠 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠)(𝑚𝑙 𝑚𝑡𝑟𝑎 𝑒𝑛 𝑡𝑜𝑑𝑜𝑠 𝑙𝑜𝑠 𝑡𝑢𝑏𝑜𝑠)

►Coliformes Totales

Ml mtra tubos negativos

2/3 = 0.001 ml

0/3 = 0.0002 ml

0/3 = 0.00003 ml

1.69x10-3 ml

ml. mra en todos los tubos

2/3 = 0.003

0/3 = 0.0003

0/3 = 0.00003

0.01809 ml

NMP = (2 x 100) .

100 ml √(1.69𝑥10 − 3)(0.01809 𝑚𝑙)

NMP = 200 .= 200 . = 36171. 57 NMP/100ml

100 ml √3.05721𝑥10^ − 5 5.52x10-3

►Coliformes Fecales

NMP = (2 x 100) .
100 ml √1.33 𝑚𝑙)(1 𝑚𝑙)

NMP = 200 .
100 ml 1.15
NMP = 174
100 ml

►verde billis

NMP = (2 x 100) .
100 ml √1.33 𝑚𝑙)(3.33𝑥10 − 3 𝑚𝑙)

NMP = 200 .
100 ml 0.066

NMP = 3007
100 ml

►caldo C E Broth

NMP = (1 x 100) .
100 ml √0.233 𝑚𝑙)(0.333𝑚𝑙)

NMP = 100 .
100 ml 0.2785

NMP = 359
100 ml

► Porcentages de remoción

Laguna de maduración

Desarenado: 75993458 mg/lt -------100%

Laguna de maduración: 148 mg/lt---x%

% de remoción= 100% - 1.94x10¨4= 99.99%

Salida

Desarenado: 75993458 mg/lt-------100%

Salida: 36171.57 mg/lt---------------x%

% de remoción= 100%- 0.0475=99.95%

Puntos de muestreo Coliformes totales % remoción

Desarenado 75993458 -
Laguna de maduración 148 99.99
Salida al humedal 36171. 57 99.95%

Conclusión:

El objetivo de esta práctica era el de determinar la concentración de coliformes

totales y fecales en la entrada de la laguna de la PTAR al momento de realizar los
cálculos de NMP/100 ml de los coliformes totales se obtuvo un resultado de
36171. 57 y de coliformes fecales se obtuvo un 174 NMP/100 ml de , así que se
podría decir que existe una baja cantidad de colonias de microorganismos en la
salida de las lagunas, esto se podría justificar dado que son las aguas residuales
que han sufrido tratamiento lagunar o de otro tipo.

Asi como también la NOM-003-SEMARNAT-1993 marca como LMP de descarga

en contacto directo 1000 NMP/100ml, la muestra a la salida presento un valor de
359 NMP/100 ML, cumpliendo asi con la norma.