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, ISSN: 2477-8818
Vol. 3, núm. 1, enero, 2017, pp. 443-461
Evaluación del grado de contaminación microbiana con Streptococcus mutans y Streptococcus sanguis en fresas de
diamante
http://dx.doi.org/10.23857/dom.cien.pocaip.2017.3.1.443-461
Número Publicado el 18 de enero de 2017 URL:http://dominiodelasciencias.com/ojs/index.php/es/index
Correo: soporte@dominiodelasciencias.com
Liliana A. Rubio-Carrilloᶦ
Universidad Central del Ecuador
Quito, Ecuador
ucefoa@hotmail.com
Juan A. Viteri-Moyaᶦᶦ
Universidad Central del Ecuador
Quito, Ecuador
javiteri@uce.edu.ec, drtdjuanvimo@hotmail.com
Evaluación del grado de contaminación microbiana con Streptococcus mutans y Streptococcus sanguis en fresas de
diamante
Resumen.
identificación API 20 STREP V7.0 en fresas diamantadas, posterior a la preparación cavitaria clase I
según Black, empleadas en el área clínica de odontología del centro médico Martha Bucaram de
Roldós; la muestra a ser analizada fue de 96 unidades muéstrales, en las cuales se realizó el análisis
microbiológico. En base a los resultados obtenidos en este estudio se puede concluir que la
V7.0 determinó la presencia de S. mutans al producir mayor cantidad de reacciones bioquímicas que
microbiológico de toda la muestra estudiada del área clínica de odontología del centro médico ya
mencionado.
Evaluación del grado de contaminación microbiana con Streptococcus mutans y Streptococcus sanguis en fresas de
diamante
Abstract.
The current comparative experimental and observational study was conducted in order to determine
software API 20 STREP V7.0 in diamond bits, after preparing cavities class I pursuant to Black,
used in the dentistry clinical area in the medical center Martha Bucaram de Roldòs. The sample to
be analyzed was composed by 96 units, on which microbiologic analysis was made. Based on results
obtained in the current study, it was concluded that microbial contamination in diamond bits,
identified through API 20 STREP V7.0 detected the exixtence of S. mutans, when a high amount of
biochemical reactions occurred among those available by the used gallery; regarding S. sanguis no
unit was found in the microbiologic study of the entire samplestudied in the destistry clinical area of
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diamante
Resumo.
preparação de cavidades de classe I de acordo com Black utilizadas na clínica odontológica Área no
centro médico Martha Bucaram de Roldòs. A amostra a ser analisada foi composta por 96 unidades,
nas quais foi realizada análise microbiológica. Com base nos resultados obtidos no presente estudo,
STREP V7.0, detectou a exixência de S. mutans, quando ocorreu uma grande quantidade de reações
bioquímicas entre as disponíveis pela galeria utilizada ; Em relação a S. sanguis não foi encontrada
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diamante
Introducción.
odontólogo y el personal auxiliar; para lograr tal objetivo se implementaron distintas normas de
bioseguridad, que comprenden métodos biológicos, físicos, químicos y mecánicos ante los
cricetus, han sido asociados a la caries dental. La presencia de bacterias en la cavidad bucal expone
a un alto grado de contaminación, por esta razón cualquier elemento que esté en contacto con la
cavidad bucal del paciente debe ser considerado como instrumental contaminado. (1)
En la actualidad todas las especialidades sanitarias en las que se produce contacto con
mucosas, o fluidos corporales contaminados con sangre, están sometidas a regulación con métodos
estandarizados de protección de barrera del personal, del equipo, esterilización de los instrumentos
facilitando contaminar los instrumentos de uso diario como las fresas de diamante, se cree
conveniente aportar con una investigación en donde se pretende evaluar el grado de contaminación
microbiana con Streptococcus mutans y Streptococcus sanguis; en vista de no contar con suficiente
es por eso, la importancia de contar con datos que demuestren la existencia o no de la contaminación
presumida.
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diamante
Materiales y métodos.
selectivos y específicos para el crecimiento de Streptococcus, cada uno de ellos fueron importados
de diferentes casas comerciales, de los Estados Unidos de América; así el Agar Mitis Salivarium
(DifcoTM); Telurito de potasio 1% (BBL TM); 4 kit de galerías API 20 Strep para la realización de
Para la toma de la muestra fue necesario Tioglicolato (Difco TM), también se requirió de
fresas de diamante redonda N.- 0.14 nuevas y previamente autoclavadas. Fue necesaria una mesa
estériles, papel aluminio, caja de tecnoport (o llamada cooler) para el transporte de las muestras.
uso de instrumental para remoción de caries que emplean los estudiantes de octavo semestre de la
investigación.
Una vez obtenidos los resultados; el trabajo experimental se desarrolló en el CENTRO MÉDICO
MARTHA BUCARAM DE ROLDÓS, en el área de odontología contando para ello con las
autorizaciones necesarias.
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Ecuador, se preparó el medio de cultivo Agar Mitis Salivarium y Telurito de Potasio al 1%, al ser un
Para su preparación se pesó en una balanza digital marca CAMRY 90 g de polvo de Agar y se
mezcló en 1000ml de agua destilada estéril, se homogenizó dicha suspensión para disolver
completamente, hasta lograr su punto de ebullición, inmediatamente fue llevado al autoclave marca
MRC para esterilizar el medio de cultivo a 121 ºC, a 1 atmósfera o 15Lb de presión por 20
minutos, luego de lo cual se dejó enfriar hasta 0 at. Dado el proceso descrito anteriormente, es decir
una vez frio se añadió asépticamente 1ml de telurio de potasio al 1 %, para evitar que no se
desarrollen otros microorganismos. Luego de lo cual la solución líquida fue colocada dentro de la
cabina de seguridad biológica de tipo: CLASE II según normativa EN12469 que filtra aire estéril.
La solución líquida se distribuyó 20 ml de agar fundido por cada caja monopetri descartable, hasta
alcanzar el número deseado para las muestras, para dejar que solidifique y se refrigeren hasta que
sean usadas.
Recolección de la muestra.
Una vez colocado todos los materiales a utilizar y medidas de bioseguridad, se procedió a
verificar que el espécimen cumpla con los criterios de inclusión, se entregó el consentimiento
informado y una encuesta que brindó información sobre los hábitos del paciente. Luego el
odontólogo inició la preparación cavitaria con fresa de diamante redonda N: 0.14 en esmalte
codificada R: 01, al terminar se retiró la fresa con una pinza estéril, llevándola al tubo de ensayo
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rotulado R: 01 que contiene tioglicolato; luego de lo cual el tubo fue sellado con una tapa para evitar
Figura N° 1.- A) Materiales para la toma de muestras; B) Caries de fosas y fisuras; C y D): Toma
Procesamiento en el laboratorio.
seguridad biológica; en dicha cabina se ejecutó la codificación en cada medio de cultivo y se realizó
fenotípicas y la identificación de las bacterias aisladas mediante tinción Gram y prueba de catalasa.
Luego de lo cual se usó la galería API 20 Strep que contiene cada kit 20microtubos con sustratos
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ausencia de microorganismos S. mutans y S sanguis, cabe mencionar que uno de los requisitos para
Preparación de la galería.
(reacción de Gram), se tomó una colonia aislada, se disolvió en suspensión en 3 ml de agua estéril y
incubación y se repartió aproximadamente 5ml de agua destilada en los alvéolos para crear una
atmósfera húmeda, fue inscrito el código de la muestra en la lengüeta lateral de la cámara, se sacó
Una vez colocada la galería, en la primera mitad de la galería (desde el ensayo VP al ADH),
se repartió la suspensión densa realizada anteriormente, evitando la formación de burbujas para ello
se inclinó hacia adelante la cámara de incubación y se colocó la punta de la pipeta sobre el borde
En la segunda mitad de la galería (desde el ensayo RIB al GLYG), se abrió una ampolla de API
aproximadamente 0,5ml como mínimo, se homogenizó y fue repartido esta nueva suspensión sólo
en los tubos. Se llenó las cúpulas de las pruebas subrayadas desde la ADH al GLYG con aceite de
en la incubadora marca INCUCELL a 36 ± 2 oC en aerobiosis durante 4 o 4.5 horas para una primera
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Lectura e interpretación.
Después de cuatro horas de incubación: se añadió los reactivos: a) ensayo VP: 1 gota de VP1
y VP2; b) ensayo HIP: 2 gotas de NIN; y, c) ensayo PYRA, α GAL, βGUR, β GAL, PAL, LAP;
una gota de ZYM A ZYM B, se esperó 10 minutos para leer todas las reacciones y a las 24 horas se
La identificación se obtuvo a partir del perfil numérico. En la hoja de resultados, los ensayos
cada grupo los números que corresponden a reacciones positivas (Figura 13), se obtuvieron 7 cifras
que constituyeron el perfil numérico, así la lectura de estas reacciones se realizó utilizando el
presentada y según el procedimiento rutinario que realizan los profesionales clínicos para no alterar
el medio ambiente.
Los resultados fueron tabulados y procesados por el paquete de datos SPSS versión 23 se
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diamante
Resultados.
en tablas cruzadas, en donde se registró y analizó la relación entre dos o más variables de
Pearson, para probar la independencia de las variables entre sí, mediante la presentación de los datos
en tablas de contingencia.
tanto que el 25,52% de las fresas de diamante no se identificó contaminación, y como se refirió en la
Pruebas de chi-cuadrado
Sig. asintótica
FRESAS Valor gl
(bilateral)
Chi-cuadrado de
Total 6,478 1 0,01
Pearson
Tabla N° 1.- Relación de presencia de Streptococcus mutans por género del paciente
intervenido
Se observa que la prueba chi cuadrada de Pearson, estimó una significancia p = 0,01 para el
análisis de la contaminación por sexo, con lo que se concluye que si existió relación con el género, a
nivel global se observa que existe mayor probabilidad de que la fresa se encuentre contaminada si se
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diamante
Se observa una tendencia, la contaminación fue mayor para las fresas extraídas en pacientes
del sexo femenino en comparación a la presencia de contaminación en las fresas extraídas de los
varones.
Pruebas de chi-cuadrado
Sig. asintótica
FRESAS Valor Gl
(bilateral)
Chi-cuadrado de
Total 4,44 3 0,218
Pearson
Tabla N° 2.- Relación de presencia de Streptococcus mutans por edad del paciente
intervenido
Se observa que la prueba chi cuadrado de Pearson, estimó una significancia p >0,05 para el
análisis de la contaminación en fresas de diamante redonda y tipo pera, con lo que se concluyó que
etario, casi aumentó la probabilidad de contaminación con la ascendencia de la edad, de hecho 33%
77% en los casos de 24 a 28 años fue de 70% en el grupo de 29 a 33 años y se incrementó hacia un
Pruebas de chi-cuadrado
Sig. asintótica
FRESAS Valor Gl
(bilateral)
Chi-cuadrado de
TOTAL 2,6 3 0,5
Pearson
Tabla N° 3.- relación de presencia de Streptococcus mutans por hábito de higiene oral del
paciente intervenido
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diamante
Se observa que la Prueba chi cuadrada de Pearson, estimó una significancia p >0,05 para el
con lo que se concluyó que NO existe influencia de la frecuencia diaria de cepillado con la presencia
de contaminación de S. mutans.
frecuencia de cepillado; así, quienes se cepillan una sola vez tienen una probabilidad del 100% de
que se encuentre contaminación, en tanto que quienes se cepillan reducen esta probabilidad al 46%,
Pruebas de chi-cuadrado
Sig. asintótica
FRESAS Valor gl
(bilateral)
Chi-cuadrado de
Total 1,565 1 0,21
Pearson
Se observa que de acuerdo a la prueba chi cuadrado de Pearson, todas las significancias
estimadas son mayores que 0,05 luego NO existe influencia de la ingesta de bebidas alcohólicas
El 96,2% de las fresas que provenían de pacientes que refieren consumo de alcohol de forma
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Pruebas de chi-cuadrado
Sig. asintótica
FRESAS Valor Gl
(bilateral)
0,684 2 0,711
Chi-cuadrado de
Pearson 1,191 2 0,551
Total 0,873 2 0,646
Tabla N° 5.- relación de presencia de Streptococcus mutans por tipo de fresa y hábito
De acuerdo a la Prueba chi cuadrada de Pearson, en todos los casos la significancia (p) fue
mayor que 0,05, con lo que se infiere que NO existe influencia del hábito de fumar sobre la
tratamiento de Streptococcos mutans, para los dos tipos de fresas empleadas, quienes no fumaban
Discusión.
desarrollar la percepción de riesgo necesaria para proteger su salud, de esta condición no están
exentos los trabajadores de la salud, que precisan conocer e incorporar a sus prácticas profesionales
las medidas de prevención establecidas en los diferentes lugares de trabajo, con el objetivo de
preservar su salud y contribuir a proteger la del paciente. Todos los profesionales del área de salud
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diamante
De la misma manera, este riesgo es igual para el individuo que asiste a la consulta dental,
razón por la cual es necesario poner el material contaminado en un lugar específico del consultorio
todo tipo de instrumental que este en contacto con la cavidad bucal, que habitualmente se
contaminan con bacterias, saliva o sangre, permitiendo proporcionar una atención segura; por ello,
aplicación universal. Concordamos con González-Escudero MA, 2008, (3) sobre la importancia de
y el paciente.
De acuerdo a los resultados obtenidos en esta investigación podemos señalar que, existe una
gran cantidad de microorganismos presentes en las fresas de diamante utilizadas durante los
riesgo alto de contaminación, lo que está en directa concordancia con estudios realizados por Forbes
en tanto que el 25,52% de las fresas de diamante no se identificó contaminación por S.mutans, y
como se refirió en la tabla 5 esta diferencia puede considerarse como significativa. En cuanto al S.
bacteriano entre estas dos especies. Además del riesgo de contaminación con los microorganismos
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diamante
diamante. Según el estudio de Palavecino RE, 2004, (5) en el cuál analizó 51 fresas de diamante se
identificaron una gran variedad de bacterias: Candida, Streptococcus bovis, Streptococcus Beta
desarrollo. Esto demuestra que no solo bacterias relacionadas con caries dental estarán inmersas en
la contaminación.
Streptococcus mutans sería el que causa mayor porcentaje de contaminación en fresas de diamante,
indicando una relación estrecha con la presencia de caries en la superficie dental de molares
estudio de Núñez DP; et al, 2010, (6) en donde manifestó que las fosas y las fisuras de los dientes,
son las áreas más susceptibles de caries y el hábitat más favorable para la presencia de
Streptococcus; dichas áreas no sólo sirvieron de refugio para las bacterias que residen en ellos, a su
vez posibilitan a la contaminación del instrumental usado para su remoción, esto nos revela la
importancia de la esterilización.
paciente, motivo de consulta frecuente y el consumo de alcohol no se observa una tendencia clara
en relación a la presencia de contaminación; así coincidimos con Nastri A, 2003, (1) en cuyo estudio
mencionaron que la edad no afecta los niveles de especies tradicionalmente consideradas como
cariogénicas.
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458 Liliana A. Rubio-Carrillo; Juan A. Viteri-Moya
Dom. Cien., ISSN: 2477-8818
Vol. 3, núm. 1, enero, 2017, pp. 443-461
Evaluación del grado de contaminación microbiana con Streptococcus mutans y Streptococcus sanguis en fresas de
diamante
género del paciente; la contaminación fue mayor para las fresas extraídas en pacientes del sexo
La higiene bucal deficiente fue otro factor que predominó en este estudio con un alto
frecuencia de cepillado; así, quienes se cepillan una sola vez tienen una probabilidad del 100% de
que se encuentre contaminación en las fresas de diamante, en tanto que quienes se cepillan más de
dos veces al día reducen esta probabilidad al 46%; resultados similares obtuvo Linossier A, et al,
2011, (7) con el 75,8 %, la cual confirma que la mala higiene bucal es un riesgo significativo de
1924, (8) reconocen que una buena higiene bucal tiene un gran impacto en la futura salud dental,
por lo que se deben cambiar los hábitos de higiene bucal inadecuados. Del mismo modo el 100% de
mutans, para los dos tipos de fresas empleadas, quienes no fumaban redujeron su probabilidad de
contaminación.
Conclusiones.
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diamante
el estudio microbiológico de toda la muestra estudiada del área clínica de odontología del centro
TW
El software apiweb 20 STREP V7.0 utilizado para la realización del presente estudio
clínica de odontología del centro médico M.B.R., en tanto que el 25,52% de las fresas de diamante
Por ser una técnica moderna, rápida, fácil de usar con resultados fiables y por tener la
capacidad de diferenciación de las especies bacterianas estudiadas (S. mutas y S. sanguis) se utilizó
un sistema estandarizado de galerías API 20 STREP V7.0 de bioMerieux que permitió realizar 20
pruebas bioquímicas a la vez, a partir de una única colonia bacteriana, facilitando la identificación
de dichas bacterias.
En base a las muestras tomadas y de acuerdo al estudio microbiológico realizado las fresas
así, que la cavidad bucal es un gran ecosistema bacteriano y el profesional odontólogo deberá tener
En relación a los factores intervinientes con la contaminación se estableció que existe una
diferencia marcada entre el porcentaje de S. mutans encontrados en relación al género del paciente,
presentandose mayor contaminación en el género femenino; la higiene bucal deficiente fue otro
factor que predominó en este estudio con un alto porcentaje, del mismo modo el 100% de quienes
mientras que, la identificación del microorganismo estudiado según la edad del paciente, motivo de
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presencia de contaminación.
cavidad bucal del paciente se encuentra contaminado; requiere limpieza manual, desinfección,
secado, empaquetado, esterilización y conservación del mismo; este protocolo debe ser de
acatamiento rutinario, sin importar el número de pacientes que se atiendan ni la insolvencia del
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