MICROBIOLOGÍA

QFB. Yessica Yamileth Juárez Alarcón

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una
serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno
adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en
composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se
añadirán otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de

cultivo. Se disuelve completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, etc.
Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de
los microorganismos que ayuden a identificarlos.
El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los
microorganismos menos resistentes.
También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y
no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y
amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el
crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram-positivas).
 Los medios de cultivo pueden dividirse en:

Selectivos: se añaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de

bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras.
Un ejemplo de medio selectivo sería usar un medio rico en un antibiótico, como la
ampicilina, para permitir únicamente el crecimiento de las bacterias resistentes a éste

Enriquecidos: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia
variedad de microorganismos (Sangre, suero glucosa, entre otros), se utiliza para la
cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio.

Diferenciales: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio. Puede
ser por su crecimiento, su metabolismo, su respiración, etc.
 AGAR SANGRE

Medio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos.

Con la adición de sangre, el medio es útil tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos
aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras,
como para la observación de reacciones de hemólisis
.
También, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar
chocolate.
 Microorganismo Hemolisis

E. Coli Gamma
S. aureus Beta
S. pyogenes Beta
S. pneumoniae Alfa

•alfa: (lisis parcial de glóbulos rojos)

presenta halos verdosos, debido a la
oxidación de hemoglobina a metahb, por
el peróxido de hidrogeno generado por
los microorganismo

•beta: (hemolisis total) halos incoloros y

brillantes

•gamma: inexistencia de halos (sin

hemolisis)
 AGAR CHOCOLATE

Medio de cultivo enriquecido y no selectivo. Es una variante del agar sangre. Contiene glóbulos rojos,
que han sido lisados. Es utilizado para la recuperación de toda clase de microorganismos, tanto Gram-
positivos como Gram-negativos. Este medio debe permitir el crecimiento de toda clase de
microorganismos incluyendo algunos de crecimiento exigente, el medio no debe presentar ningún tipo
de inhibición.
El agar se llama así debido a su parecido con el chocolate,
pero no contiene nada de éste.
Este agar se usa comúnmente para el delicado y exigente crecimiento de bacterias
respiratorias, como por ejemplo Haemophilus influenzae. Estas bacterias necesitan factores de
crecimiento, como el NAD y hematina, componentes que podemos encontrar dentro de los
glóbulos rojos; por lo tanto, un prerrequisito lógico para el crecimiento es la lisis de los glóbulos
rojos.

Haemophilus influenzae. Cocobacilos Gram negativos

 AGAR EMB
Es un medio ligeramente selectivo y de diferenciación para el aislamiento y la diferenciación de bacilos
gram negativos, permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Contiene colorantes de azul de metileno y eosina , que inhiben las bacterias gram-positivas en cierto
grado. Los colorantes también actúan como indicadores diferenciales en respuesta a la fermentación de
la lactosa o la sacarosa por parte de los microorganismos.
Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada,
mientras que las que no lo hacen son incoloras. Muchas cepas de Escherichia coli presentan
un característico brillo metálico.

Microrganismo Colonias
Escherichia coli Verdosas con brillo metálico y centro
negro azulado

Klebsiella Mucosas, rosa púrpura

pneumoniae
Proteus mirabilis Incoloras

Enterococcus faecalis Incoloras

Shigella flexneri Incoloras

Salmonella Incoloras
typhimurium
 AGAR GLUCOSA DE SABOURAUD

Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente los

asociados con infecciones cutáneas (piel, pelo).
En el medio de cultivo la peptona, la tripteína y la glucosa son los nutrientes para el desarrollo
de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH acido,
inhibe el desarrollo bacteriano y favorecen el crecimiento de hongos y levaduras.

Algunos microrganismos más comunes

que crecen en este agar son:

Candida albicans
Aspergillus brasiliensis
Trichophyton mentagrophytes
Aspergillus Trichophyton mentagrophytes
 AGAR MAC CONKEY
El agar MacConkey es un medio de cultivo selectivo y diferencial para bacterias diseñado para
aislar selectivamente bacilos Gram negativos y entéricos (encontrados normalmente en el tracto
intestinal) y diferenciarlos sobre la base de la fermentación de la lactosa. El cristal violeta y las
sales biliares inhiben el crecimiento de organismos grampositivos, lo que permite la selección y
el aislamiento de bacterias gramnegativas. Las bacterias entéricas que tienen la habilidad de
fermentar lactosa pueden ser detectadas utilizando el carbohidrato lactosa y el indicador de pH
rojo neutro.
Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo
así las bacterias gram negativas que pueden
fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden
(Lac-).

Lactosa positiva (Fig. lado A)

Al utilizar la lactosa en el medio, bacterias Lac+
como Escherichia coli, Enterobacter y Klebsiella
producen acidez, lo cual baja el pH bajo 6,8 lo que
tiene como consecuencia la aparición de colonias
de color rosadas o rojas.

Lactosa negativa (Fig. lado B)

Bacterias que no fermenten la lactosa como
Salmonella, Proteus y Shigella utilizaran peptona en
su lugar, formando amoníaco, lo cual incrementa el
pH del agar, formando colonias blancas o incoloras.
 AGAR NUTRITIVO

El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria,
Es un medio de cultivo no selectivo, en el cual al pluripeptona y el extracto de carne constituyen la
fuente de carbono y nitrógeno y aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. El agregado de
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente solidificante
Puede ser suplementado con sangre ovina desfibrinada estéril para favorecer el crecimiento
de microorganismos exigentes en sus requerimientos nutricionales y permite una clara
visualización de las reacciones de hemolisis

Los microrganismo mas comunes que crecen en este agar son: Escherichia coli,
Sthaphylococcus aureus, Enterococcus faecalis y Pseudomona aeruginosa.

Escherichia coli Sthaphylococcus aureus Enterococcus faecalis Pseudomona aeruginosa

 AGAR NYC
Medio selectivo para Neisseria. Contiene proteína peptona, plasma de caballo y hemoglobina que proporcionan
nutrientes para el crecimiento de N. gonorrhoeae y N. meningitidis. Así mismo, contiene un suplemento selectivo
de antibióticos vancomicina, colistina, nistatina y trimetoprim para suprimir la flora que lo acompaña. La
vancomicina es inhibidora de las bacterias gram-positivas y la colistina inhibe las bacterias gram negativas,
incluyendo las especies de Pseudomonas , mientras que Proteus es inhibido por el trimetoprim .
Contiene almidón que neutraliza los metabolitos tóxicos producidos por Neisseria y un suplemento de
autolisado de levadura que cumple con los requisitos de CO2 necesarios para mejorar el crecimiento de
Neisseria .
 Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis
Diplococos Gram negativos (gonococo) Diplococos Gram negativos (meningococo)
 AGAR BGA

Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., excepto S. typhi y
S. paratyphi, a partir de muestras clínicas, alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria.
En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno,
vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es
el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación de
azúcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente
selectivo para inhibir la flora acompañante.
Microorganismo Colonias
Escherichia coli Crecimiento entre nulo y
moderado, colonias entre
amarillas
y amarillas verdosas, halo
amarillo
Salmonella Colonias rosas o blancas
enteritidis con halos rojos
Salmonella typhi Crecimiento inhibido
Salmonella Abony Colonias blanquecinas con
halo rojo
Shigella flexneri Crecimiento inhibido
Staphylococcus Crecimiento inhibido
aureus
 AGAR SAL Y MANITOL
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de Staphylococcus,
permite el crecimiento de bacterias Gram-positivas mientras inhibe el crecimiento de Gram-negativas.
Contiene una alta concentración de sal (NaCl), haciéndolo inhibitorio para la mayoría de las bacterias Gram
negativas. Además contiene manitol, otro inhibidor de bacterias Gram negativas.

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno,

vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se
encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y
el rojo fenol es el indicador de pH.
Los Staphylococcus coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen
rodeadas de una zona amarilla brillante.

Los Staphylococcus coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura.
.
 AGAR XLD
El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio selectivo diferencial, utilizado para el aislamiento y
diferenciación de patógenos entéricos Gram negativos (Salmonella y Shigella), sin embargo, se utiliza
especialmente para el crecimiento del género Shigella.

Se utiliza el desoxicolato de sodio como agente selectivo y, por consiguiente, inhibe los microorganismos
gram positivos. La xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan prácticamente todos los entéricos,
excepto Shigella, y esta propiedad hace posible la diferenciación de dicha especie. La lisina se incluye para
permitir la diferenciación del grupo Salmonella de los organismos no patógenos, dado que, sin lisina,
Salmonella fermentaría rápidamente la xilosa y no se distinguiría de las especies no patógenas
Microorganismo Colonias
Salmonella Typhimurium Crecimiento de bueno a excelente; colonias rojas con centros de color negro
Salmonella Abony Crecimiento de bueno a excelente; colonias rojas con centros de color negro
Escherichia coli Inhibición de parcial a completa; colonias amarillas
Shigella flexneri Crecimiento de bueno a excelente; colonias rojas
Shigella sonnei Crecimiento de bueno a excelente; colonias rojas
Microorganismo y agar en el que
crece
Escherichia coli
Sangre, Mac Conkey, Nutritivo y EMB
Staphylococcus aureus
Sangre, Nutritivo y Sal y Manitol
Streptococcus pneumoniae y S.
pyogenes
Sangre
Haemophilus influenzae
Chocolate
Características
Bacilo gramnegativo, localizado principalmente en el intestino, se adquiere al consumir
alimentos contaminados
Síntomas: Diarrea, nauseas o vomitos, cansancio y fiebre
Cocos grampositivos, se considera el mas peligroso de todos los estafilococos, se adquiere
por contacto directo, objeto contaminados o inhalación
Síntomas: Foliculitis, impétigo, abscesos, celulitis o infecciones como mastitis, infección en el
flujo sanguíneo, endocarditis, neumonía, entre otros
Cocos grampositivos. El contagio se produce habitualmente por las gotitas expulsadas por la
tos o por estornudos.
Streptococcus pyogenes es la causa bacteriana más frecuente de faringitis y también de
distintas infecciones cutáneas.
Streptococcus pneumoniae persiste como un importante patógeno del tracto respiratorio. Es
causa frecuente de neumonía extrahospitalaria, meningitis, otitis medias y sinusitis.
Cocobacilos gramnegativos, H. influenzae es responsable de un amplio rango de
enfermedades como meningitis, neumonía, sepsis y otras de menor gravedad, se propaga a
través de las mucosidades y/o de la saliva
Esta enfermedad no es lo mismo que la gripe (influenza), la cual es causada por un
virus.
Microorganismo y agar en el que
crece
Candida albicans
Glucosa de Sabouraud
Aspergillus
Glucosa de Sabouraud
Klebsiella pneumoniae
EMB y Mac Conkey
Características
Es un hongo en forma de levadura. Habitualmente se encuentra en la cavidad oral, en el
tracto gastrointestinal y en la vagina.
Candida albicans puede asumir patogeneidad, provocando la candidiasis; en ese caso, se
presenta como una afección vaginal (vaginitis), de la cavidad oral (muguet), del intestino o de
la piel. También puede provocar hongos vaginales.
Se ha investigado una posible relación entre la candidiasis y el cáncer, bien mediante la
producción de micotoxinas o compuestos cancerígenos o mediante el desarrollo de
inflamación crónica y procesos que interfieren con el ciclo vital de las células
El Aspergillus es un hongo y las patologías más frecuentes que produce son:
Aspergilosis pulmonar invasiva
Onicomicosis: enfermedad de las uñas.
Otomicosis: enfermedad principalmente del oído externo.
Sinusitis alérgica.
Es la especie de mayor relevancia clínica dentro del género bacteriano Klebsiella, compuesto
por bacterias Gram negativas
Es el agente causal de infecciones del tracto urinario, neumonías, sepsis, infecciones de
tejidos blandos, e infecciones de herida quirúrgica. Son especialmente susceptibles los
pacientes ingresados en unidades de cuidados intensivos, neonatos, pacientes con EPOC,
diabetes mellitus o alcohólicos. A día de hoy también existe una fuerte teoría que la relaciona
con la espondilitis anquilosante
Microorganismo y agar en el que
crece
Salmonella
EMB, Mac Conkey, BGA y XLD
Características
Bacilos gramnegativos, el hábitat natural de esta especie normalmente es en los intestinos.
Generalmente produce salmonelosis o Tifoidea
La transmisión alimentaria, en especial por alimentos de origen animal, provoca diarrea y
fiebre.

Proteus Proteus es un género de bacterias gramnegativas. Hay tres especies que causan infecciones
en el hombre: P. vulgaris, P. mirabilis, y P. penneri. Causan infecciones urinarias (más del 10%
EMB, Mac Conkey de complicaciones del tracto urinario incluyendo cálculos y lesiones celulares del epitelio
renal), enteritis (especialmente en niños), abscesos hepáticos, meningitis, otitis media y
neumonía, entre otros. Es un frecuente invasor secundario de quemaduras y heridas, así
como infecciones nosocomiales

Shigella Shigella es un género de bacterias gramnegativas. La infección por Shigella, típicamente

comienza por contaminación fecal-oral.
EMB, Mac Conkey y XLD Los síntomas más comunes son diarrea, fiebre, náusea, vómitos, calambres estomacales y
otras manifestaciones intestinales. Las heces pueden tener sangre, moco, o pus: clásico de la
disentería (trastorno inflamatorio del intestino, especialmente del colon.

Neisseria Las Neisseria son diplococos gramnegativos. El género incluye las especies Neisseria
gonorrhoeae (llamada también gonococcus), causante de la gonorrea, y Neisseria meningitidis
NYC (llamada también meningococcus), una de las causas más comunes de meningitis bacteriana.