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Práctica Hidrolisis de una proteína y ensayos para proteínas y 24/09/19 Foli

6 aminoácidos o
1
Integrante 1 Integrante 2 Equipo 5
María Fernanda González Juárez Alexis Gudiño García 3QV1
Objetivos: - Efectuar la hidrolisis total de una proteína.
- Identificar algunos aminoácidos presentes en un hidrolizado de proteína, por medio de las propiedades
fisicoquímicas.
- Identificar por cromatografía en placa fina algunos de los aminoácidos presentes en un hidrolizado de
proteína
Resultados.
1. Reacción Xantoproteíca.
Sustrato Observaciones
Solución A Cambio de color ámbar a incoloro.
Solución D Cambio de color ámbar a naranja.
Mecanismo:

2. Reacción de precipitación.
Sustrato Observaciones
Solución A Precipitado blanco.
Solución D La sol. Se tornó de color negro.
Mecanismo:
 3. Reacción de Biuret.
Sustrato Observaciones
Agua destilada Tubo 1: Coloración azul en todo el tubo.
Solución A Tubo 4: Coloración azul intenso.
Tubo 6: Coloración azul claro.
Solución C Tubo 2: Formación de dos fases; azul claro y azul
intenso.
Solución D Tubo 3: Coloración azul claro.
Tubo 5: Coloración azul intenso.

4. Reacción con Ninhidrina.

Sustrato Observaciones
Agua destilada No hubo cambió de color
Solución B Cambio de color (azul intenso)
Solución C No hubo cambio de color
Solución D No hubo cambio de color
Solución aminoácido patrón Cambio de color ligeramente a azul más intenso
Mecanismo:
No. Folio.
3
 No. Folio. No. Folio.
4 5
7. Cromatografía en placa fina.

Prueba
En una2.placa
Adición
finanucleofílica
colocamos dos
(adición
muestras
bisulfítica):
una muestra solución “B” (solución neutra de hidrolizado de grenetina), y en el
siguiente punto se colocó una muestra de glicina.

se corrió la cromatografía en una solución de alcohol terbutílico-agua (3:1), las muestras al ser polares corrieron con la
fase móvil dando los siguientes resultados:
Prueba 2. Adición nucleofílica (reactivo de schiff): El Reactivo de Schif es incoloro o rosa tenue. Cuando reacciona
Muestra Distancia recorrida Rf
con un aldehído, se origina una coloración violeta oscuro. Por otra parte, las cetonas tienden a dar solo una
Solución B 2.8 0.7
tonalidad rosada con el reactivo de Schiff. A veces, cuando un supuesto aldehído no da un resultado positivo, puede
Glicina 2.9 0.72
ser la causa de la solubilidad del compuesto carbonílico. La adición de una pequeña cantidad de acetona como
disolvente puede permitir la observación de la coloración característica. La prueba dio positiva en el Formaldehido ya
que este presenta
Análisis poco impedimento estérico, en los demás compuestos es negativa ya que cuentas con grupos
de resultados.
alquilo, los grupos alquilo otorgan densidad electrónica causando el impedimento del ataque nucleofílico.
1. Reacción xantoproteíca. Esta reacción es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de
Prueba 3. proteínas
Enolizaciones:
solubles en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en
aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si
una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se vuelve color naranja.
La reacción xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofílica aromática de los residuos de
tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un compuesto coloreado naranja a pH básico.
2. Reacción de precipitación. Las proteínas precipitan por la acción de los iones del metal pesado plomo, ya que
forman sales insolubles con las formas aniónicas (-) de la proteína necesitándose entonces un pH más alcalino que
el punto isoeléctrico, es por esto que se le agrega previamente el hidróxido de sodio.
3. Reacción de Biuret. Esta reacción identifica enlaces peptídicos demás de 3 unidades, gracias a la formación de un
complejo de color violeta o azul intenso, al ser necesario un medio básico los tubos que dieron positivo fueron
únicamente los que contenían proteínas sin hidrolizar en un medio básico obtenido al agregar el hidróxido de
sodio al 10%. En dipéptidos no se forma el complejo ya que al protonarse el oxígeno unido al carbonilo, estanca
en doble enlace evitando la formación del complejo.
4. Reacción con Ninhidrina. Identifica grupos aminos libres en aminoácidos, por lo tanto, los tubos que dieron
positivo fueron los que contenían únicamente una proteína hidrolizada y un aminoácido patrón, como lo fue el
tubo 2 y 5 que contenían grenetina hidrolizada.
5. Reacción con ácido nitroso. Esta prueba nos permite determinar la cantidad de hidrogeno liberado de una amina,
con la reacción de ácido nitroso, identificando los grupos aminos libres de los péptidos y las proteínas midiendo la
cantidad de nitrógeno liberado en la reacción, las pruebas donde haya un burbujeo continuo, indica la existencia
de dichos aminos libres. Las pruebas positivas se dieron en los tubos donde se contenía las soluciones A, C y D. Lo
que se concluye de esta prueba y reacción, es que la hidrolisis fue parcial, ya que quedaron aminos libres con los
cuales pudo reaccionar el ácido nitroso y liberar nitrógeno gaseoso.
No. Folio.
5

6. Acción reguladora de aminoácidos. En esta reacción se pone de manifiesto que un aminoácido actúa como
anfótero, es decir, como un ácido o una base. Los tubos en los que empleamos rojo Congo como indicador
observamos que ambas mostraron un color morado, esto quiere decir que las soluciones tenían un pH ácido. Al
añadir ácido clorhídrico presentaron un cambio de color (vire) a incoloro. El tubo que contenía agua destilada viro
al añadir 13 mL de HCl, mientras que el tubo que contenía la solución B cambio de manera más lenta. La
diferencia entre las velocidades de viraje se debe a que los aminoácidos presentes en la solución B producen un
efecto buffer provocando que la reacción se lleve a cabo de manera lenta. Sin embargo el agua tuvo que virar
apenas se le agregara una gota del HCl.
En el caso de la fenolftaleína al agregarla no se obtuvo ninguna coloración, sin embargo al agregar el NaOH el vire
fue de color rosa, esta vez solo con agregar una gota al agua viro a rosa y la solución B cambio de forma más lenta.
7. Cromatografía en placa fina. De la prueba de cromatografía se puede deducir que en la solución B (solución
neutra de hidrolizado de grenetina) se encuentran el aminoácido glicina. La solución B (solución neutra de
hidrolizado de grenetina) está constituido mayor parte por glicina.

Conclusiones.
Se logró efectuar la hidrolisis de proteínas, identificar algunos aminoácidos en el hidrolizado de estas mismas por medio
de sus propiedades físico-químicas y la identificación de algunos aminoácidos de estas por medio de una cromatografía en
placa fina.

Cuestionario.
1. En la hidrolisis de grenetina indicar, ¿cómo sabría si la hidrolisis fue parcial o total?
Con ayuda de la prueba de reacción de Biuret, ya que esta prueba identifica enlaces peptídicos. Si la prueba da
negativa, indica que la hidrolisis fue total. Si la prueba da positiva, significa que la hidrolisis fue parcial.
2. Describa 3 tipos de hidrólisis de proteínas.
- Hidrólisis ácida: Se basa en la ebullición prolongada de la proteína con soluciones ácidas fuertes (HCl yH2SO4).
Este método destruye completamente el triptófano y parte de la serina y la treonina.
- Hidrólisis básica: Respeta los aminoácidos que se destruyen por la hidrólisis ácida, pero con gran
facilidad, forma mezclas racémicas. Normalmente se utiliza NaOH ó BaOH.
- Hidrólisis enzimática: Se utilizan enzimas proteolíticas cuya actividad es lenta y a menudo
incompleta, sin embargo, no se produce racemización y no se destruyen los aminoácidos; por lo tanto, es muy
específica
3. Describa el mecanismo que se lleva a cabo en la reacción xantoproteíca.

Uno de los dobles enlaces del anillo aromático del aminoácido ataca al ácido nítrico adicionando a la molécula,
formándose un carbocatión. Posteriormente uno de los protones del NaOH regenera la doble ligadura
No. Folio
7
 No. Folio
6
4. Indicar cuál es la razón de agregar hidróxido de sodio en la reacción xantoproteíca.
Sirve para intensificar la coloración de amarillo a naranja.
5. Indicar que tipos de aminoácidos debe contener una proteína para dar positiva la reacción de precipitación con
acetato de plomo.
Debe contener aminoácidos que cuenten con el grupo sulfhidrilo, tal como la cisteína y la metionina.
6. Indicar por medio de reacciones, el efecto regulador de aminoácidos.

7. Explicar los resultados obtenidos en la prueba del efecto regulador de los aminoácidos.

Al agregar los indicadores logramos determinar que el pH de estas soluciones era ácido. Ambas soluciones son
anfóteras sin embargo la solución B, tiene un grado más alto de anfoterismo que el agua por ello tuvimos que
agregar mayor cantidad de HCl y NaOH para lograr que esta virara a incoloro y rosa respectivamente.
8. Indicar la fórmula de los aminoácidos que identificó por cromatografía.

GLICINA.
9. Investigar algunos de los aminoácidos que se encuentran presentes en la grenetina y albúmina.
Grenetina: Ácido aspártico, Leucina, Ácido glutámico, Lisina, Alanina, Metionina, Arginina, Prolina, Cistina, Serina,
Fenilalanina, Tirosina, Glicina, Treonina, Hidroxiprolina, Triptofano, etc.
Albúmina: Lisina, leucina, tirosina, fenilalanina, glicina, acido glutámico, prolina, arginina, sisteina, alanina, etc.

10. Investigar de que proteína se obtiene la grenetina.

Del colágeno.

Bibliografía.
1. John McMurry, Quimica orgánica. 7°ed. 2008.Editorial Cengage Learning (653-657)
2. A. Carey, Química Orgánica. 6°ed. 2006. Editorial McGraw Hilll (645-648,650)
3. Voet, Bioquímica. 3° Ed. 2006. México. Editorial Panamericana. (71-100)