UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA MESA

FACULTAD DE CIENCIAS
N° 4
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA N° 8

DETERMINACIÓN
ESPECTROFOTOMÉTRICA
DE GLUCÓGENO HEPÁTICO

Integrantes:

 Blaz Villafuerte, Fiorella Romina 20141013

 Fuentes Guevara, Dennisse Yeriot 20161438

 Mendizábal Huaman, Camila 20161448

 Morales Robladillo, Sammy Anthony 20161449

Grupo: Lunes 2:00 – 4:00 PM (F*)

Fecha de la práctica: 30/10/17

Fecha de entrega del informe: 06/11/17

2017-I
I. INTRODUCCIÓN

El glucógeno es una de las fuentes de energía más importantes del metabolismo, se degrada por
medio de glucólisis y produce ATP. Los organismos superiores se protegen de una posible escasez
de energía mediante la polimerización del exceso de glucosa y su almacenamiento. En animales se
almacena como glucógeno, este presenta ramificaciones cada 8 a 14 residuos de glucosa (Voet,
2006). El glucógeno se encuentra principalmente en el músculo y en el hígado, habiendo en el
músculo mayor cantidad de glucógeno.

Las unidades de glucosa del glucógeno se movilizan por la remoción secuencial de los extremos no
reductores de las cadenas de glucano (extremos que carecen del grupo C1-OH). Por lo tanto, la
estructura muy ramificada del glucógeno es fisiológicamente muy importante: permite la
degradación rápida del glucógeno por medio de la liberación simultánea de las unidades de glucosa
en el extremo de cada ramificación.

Cuando la concentración de glucosa sanguínea disminuye, el glucógeno se hidroliza rápidamente

dando unidades de glucosa libre que pasan a la sangre para mantener sus niveles normales.

La determinación espectrofotométrica del glucógeno se basa en la transformación inicial del

glucógeno a glucosa mediante hidrólisis alcalina y su posterior reacción con el reactivo Antrona. La
glucosa es deshidrata por medio de un ácido mineral como es el ácido sulfúrico Q.P, produciendo
derivados del furfural, los cuales reaccionan con la antrona produciendo un complejo coloreado que
absorbe a 620nm.

La reacción de los carbohidratos con Antrona en ácido sulfúrico produce un color azul-verdoso
característico que ha sido atribuido al producto de la reacción entre el hidroximetifurfural o el
furfural con la antrona (Rojas, 2000).

II. RESULTADOS
Cuadro N°1: Absorción y concentración de glucosa en los tubos rotulados

TUBO DE
BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA
REACTIVO
Absorbancia
corregida - 0.235 0.102
promedio
Concentració
- 7.143x10-3 CM
n (mg/ml)
(Fuente: Manual de Prácticas de Bioquímica)

Cuadro N°2: Concentración de glucosa en la muestra de hígado

C St
CM= x AM
A St
−3
CM = 3.1x10-3 mg/mL
C M = 7.143 x 10 x 0.102
0.235
3.1x10-3 mg ----------- 1 ml W = 5.425x10-3 mg de glucosa en el
 W ----------- 1.75 ml volumen total del tubo Muestra

5.425x10-3 mg -------------- 1.75 ml X = 7.75x10-4 mg de glucosa en la

X -------------- 0.25 ml alícuota de la disolución de la muestra

7.75x10-4 mg ------------- 0.25 ml

Y ------------- 100 ml
0.31 mg ------------- 0.5 g Híg
0.5 g Híg ------------- 100%
0.31x10-3 g ------------- C
Y = 0.31 mg de glucosa en la Disolución
C = El contenido de glucosa en la
muestra de hígado representa el
0.062%
(Fuente: Elaboración propia)

Cuadro N°3: Concentración de glucógeno en la muestra de hígado

Glucosa: 0.31 mg ------------- 0.5 g Híg

x0.9
C = El contenido de glucógeno en la
Glucógeno: 0.279 mg ------------- 0.5 g Híg muestra de hígado representa el
0.0558%
0.5 g Híg ------------- 100%
0.279x10-3 g ------------- C
(Fuente: Elaboración propia)

III. DISCUSIONES
El Hígado tiene una gran capacidad de almacenar glucógeno. En una persona bien nutrida el
contenido de glucógeno hepático puede constituir hasta el 10% del peso húmedo de este órgano.
Los depósitos de glucógeno muscular y hepático desempeñan papeles completamente diferentes. El
glucógeno muscular sirve como combustible de reserva para la síntesis de ATP, mientras que el
glucógeno hepático (del Hígado) funciona como reserva de glucosa para el mantenimiento de las
concentraciones de glucosa sanguínea. Las cantidades de glucógeno hepático varían ampliamente
en respuesta a la ingestión de alimento, poco después de la ingesta se acumulan grandes cantidades
que luego disminuyen a medida que son movilizadas para ayudar al mantenimiento de un nivel de
glucosa sanguínea prácticamente constante (Devlin, 2004).

Basándonos en la composición química del pescado, los carbohidratos se encuentran en pequeñas

cantidades en el pescado con una media no superior al 1%. El carbohidrato más importante en el
pescado es el Glucógeno encontrándose en cantidades aproximadas de 0.6% como máximo en el
hígado. Cuando el pescado ha sufrido algunas sacudidas poco después de ser capturado, el
contenido de ácido láctico se eleva, mientras que el de glucógeno decrece, momentos en el que el
pescado pasa a la rigidez cadavérica (Pigott & Tucker, 1990).

Al analizar las muestras entregadas, tomando en consideración un peso de 0.5 g de la muestra de

Hígado, podemos verificar que el 10% de dicho peso (0.05 g) se aproxima a la cantidad de
Glucógeno hallado en la experimentación (0.558%).
Cálculos de una muestra fresca, indican 3-5g de Glucógeno por cada 100 g de tejido fresco (Lorduy,
2014), que llevándolo a los cálculos realizados, deberían haber representado 10 veces la cantidad
obtenida. Esa reducción precisa el tiempo prolongado luego de haber sido capturado, así como
producto de las sacudidas en su extracción, tal como se mencionó anteriormente.

IV. CONCLUSIONES

 La cantidad de glucógeno hallado experimentalmente en la muestra de hígado de pescado se

aproxima al porcentaje de glucógeno que tiene un hígado de pescado según la literatura.
 Utilizando el factor de conversión, pudimos hallar la cantidad de glucógeno en la muestra de
hígado a partir de la cantidad de glucosa presente en la muestra.

V. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA
 Rojas, J.O. (2000). INFORMACIÓN TECNOLÓGICA. Chile: Editorial del norte.
 Voet, D.V. (2006). Bioquímica: Metabolismo del glucógeno. Buenos Aires, Argentina:
Médica Panamericana.
 Devlin, T.M. (2004). Bioquímica Libro de Texto con Aplicaciones Clínicas. Barcelona,
España: Editorial Reverte.
 Pigott, G. & Tucker. (1990). B. SEAFOOD. Effects of Technology on Nutrition. Estados
Unidos.
 Lorduy, D. (2014). Informe "Porcentaje Teórico de Glucógeno en Hígado y Corazón".
Colombia: Universidad de Córdoba.
 PROBLEMAS ENCARGADOS
1. Un paciente excreto 1130 ml de orina en 24 horas. Una alícuota de 2ml se coloca en la fiola de
100 ml se trató con 1ml de reactivo molibdato y 4 ml de reactivo aminonaftosulfonico y se
diluyo hasta enrasarse. De manera similar se preparó una serie de 5 estándares en los que se
emplearon 0, 1, 2, 3 y 4 ml de estándar fosfato (0.4 mg en 5 ml), los que se diluyeron a 100 ml
después de añadir los mismo reactivos. Obteniendo las siguientes absorbancias.

T1 T2 T3 T4 T5 M
Estándar 0 ml 1 ml 2 ml 3 ml 4 ml ---
ABSORBANCIA 0.000 0.175 0.350 0.525 0.700 0.845
Concentración (mg/mL)
sacada a partir del 0.00 8x10⁻⁴ 1.6x10⁻ᵌ 2.4x10⁻ᵌ 3.2x10⁻ᵌ X
estándar

Absorbancia - Concentracion
0.8
0.6
Absorbancia

Absorbancia -
0.4 Concentracion

0.2
0
T1 T2 T3 T4 T5

Del gráfico se obtiene que la recta es representada por: Y = Mx + b

Se cumple que Y2 – mX2 = Y3 – mX3  m(X3 – X2) = Y3- Y2  m = 72.92
Hallando b en T2:
0.175 =72.92 (8x10⁻⁴) +b  b =0.117
Por lo tanto la ecuación es: Y = 72.92X + 0.117
Reemplazando con la absorbancia de la muestra: 0.845 = 72.92X + 0.117 
X =9.99 mg/mL

a) ¿Cuantos gramos de fosfato han sido excretados por día?

9.99 mg ----- 1 Ml
0.999 mg ---- 1 ml
0.999 mg ---- 2 ml
0.499 mg---- 1 ml
564.33 mg ---- 1130 ml --- 24 h  0.564 g/24 horas

b) Calcular la concentración de fosfato en mili moles por día?

El número de moles es: masa / masa molar  0.564 g/ (94.9714 g/mol) = 5.93 mili
moles por día.

2. En un análisis espectrofotométrico de colesterol se realizó el siguiente procedimiento. Muestra

1ml de suero con 4.5 ml de reactivo ext1ractante. Estándar: 0.5 g/L de colesterol. ¿Cuál es la
concentración de colesterol en la muestra de suero?
 Reactivo Blanco Estándar Muestra
Estándar (ul) - 10 -
Muestra tratada(ul) - - 25.0
Agua destilada(ul) 50.0 40.0 25.0
Reactivo de trabajo (ml) 3.0 3.0 3.0
Absorbancia 0.056 0.312 0.350
Absorbancia corregida 0.000 0.256 0.294

El volumen total es: 50 ul + 3ml =3.05 ml

Concentración del estándar: 0.5 mg --- 1ml  5mg --- 10ml  5mg --- 3.05ml
CE= 1.64 mg/ml
Concentración de la muestra = CE (A. Muestra) / (A. estándar) = 1.64 mg/ml(0.294)/0.256
=CM = 1.88 mg /ml
De la muestra tratada: 1.88 mg --- 1ml  10.36 mg --- 5.5 ml
10.36 mg ---- 1 ml  CONCENTRACION= 10.36 mg/ml

3. ¿Qué es glucógeno y cuál es su estructura química?

Se trata de un polisacárido formado por moléculas de D-Glucosa unidas por enlaces a (1 - 4) y a
(1 - 6), pero mucho más ramificado.
Una rama del árbol del glucógeno
se caracteriza por poseer
ramificaciones cada cuatro restos
glucósido dentro del núcleo más
central de la molécula. La principal
función del glucógeno, como
principal polisacárido de reserva de
las células animales, es la de
reservorio nutricional en los tejidos
animales, debido a su capacidad
para almacenar glucosa de rápida
movilización, ya sea en los periodos
interdigestivos o mientras se
produce la actividad muscular.

4. ¿Por qué se realiza la hidrolisis básica?

Explique.
La hidrolisis básica en la preparación de la muestra, se realizó para que los enlaces glucosidicos
se rompieran en el glucógeno presente en el hígado, así en el tubo al secarse quedaría un
solución de glucosas y ya no glucógenos.
5. ¿Por qué se emplea el ácido sulfúrico en la preparación del reactivo de antrona?
La Antrona forma un compuesto verde en medio ácido fuerte (Ácido sulfúrico) con ciertos
carbohidratos y sacáridos, en especial con azúcares y almidones. La reacción de la Antrona en
medio sulfúrico produce un derivado del furano que tiene su máximo de absorción en 620 nm.
Su disolución en acido se hace para poder dar la coloración y el cambio de esta en su
calentamiento, danto también una coloración proporcional a la concentración.