ABSTRACT

Las células T reguladoras que expresan el factor de transcripció n Foxp3 suprimen

patologías dadas por respuestas inmunes contra antígenos propios, exó genos y
microorganismos que invaden el cuerpo. La expresió n sostenida del factor de
transcripció n foxp3, clave distintiva de las células t reguladoras, es requerida para su
diferenciació n y su funció n supresora de ciertas patologías. Adicionalmente, la
expresió n de foxp3 previene la conversió n de células T reguladoras en células T
efectoras, haciéndolas dependientes de factores de crecimiento para su supervivencia
y expansió n, principalmente la interleucina 2, que es provista por células t efectoras
activadas.

ARTÍCULO

Hace un siglo Paul Ehrlich propuso que el sistema inmune está programado par evitar
la generació n de respuestas inmunes autoreactivas; le llamó a estas respuestas
autorreactivas patoló gicas “horror autotoxico” en 1906. Las observaciones sobre la
capacidad de las cabras para generar anticuerpos contra las células sanguíneas de
otras cabras pero no para sus propias células sanguíneas representó la primera
evidencia de la autotolerancia inminoló gica y le llevó a su predicció n de que la
autotolerancia está mediada principalmente por la ausencia de receptores que activen
respuesta inmune o la presencia de antiautotoxinas. Actualmente se acepta que la
tolerancia inmunoló gica está mediada por dos mecanismos (recesivo y dominante). La
tolerancia recesiva se refiere a los mecanismos intrínsecos de la célula que incluyen la
eliminació n de timocitos autorreactivos, apoptosis de células t activadas cró nicamente
en sangre periférica, o inactivació n de las mismas inducida por energía. La tolerancia
dominante es mediada por un subconjunto de células má s especializadas que actú an
para restringir la respuesta inmune patogénica (autoinmune). Aunque muchas clases
de células linfoides tienen propiedades supresivas o inmunomoduladoras, las células t
reguladoras que expresan foxp3 representan la ú nica població n que actualmente
actú a como un mediador propio de la inmunotolerancia dominante, por lo que su
trabajo es vital para el mantenimiento de la homeostasis inmunoló gica. Las células t
reguladoras suprimen la respuesta inmune por medio de mecanismos como la
secreció n de citoquinas antiinflamatorias, contacto directo con otras células y la
modulació n del estado de activació n y la presentació n de antígeno en células
presentadoras de antígenos.

Foxp3 y la diferenciación de células t reguladoras

La timectomía neonatal fue uno de los acercamientos principales que reveló la

existencia de un subgrupo de células derivadas del timo que eran capaces de mediar la
respuesta inmune a través de la supresió n de otras células. Estudios hechos en
ratones revelaban que tras la timectomía, entre los días 2 y 4 de vida se daban
lesiones mediadas por células T, que mejoraban tras transfundirles timocitos o
esplenocitos de ratones adultos sanos. Así mismo, se ha descrito que una població n de
células t cd4+ que expresaban receptores de interleuquina 2 de cadena alfa, que eran
capaces de suprimir respuesta inmune. El progreso má s reciente se ha dado tras
descubrir un gen codificado en el cromosoma X llamado foxp3, que se hizo buscando
la base genética de una enfermedad conocida como ipex por sus siglas en ingles
(desregulació n autoinmune, poliendocrinopatía y enteropatía ligadas al cromosoma
X).
Ratones y humanos que presentan una perdida de la funció n o mutaciones en el gen
foxp3 suelen ser afectados tempranamente por enfermedades linfoproliferativas
autoinmunes que afectan varios tejidos. Luego se descubrió que la expresió n estable y
en alta cantidad de este gen, se encontraba restringida ú nicamente a células t
reguladoras y es un requerimiento para la diferenciació n de las mismas, ademá s de
mediar su funció n supresora, su proliferació n y su adecuado metabolismo. Ademá s, la
expresió n de este gen es necesaria para que las células t reguladoras mantengan su
fenotipo y su funció n supresora. La disminució n o perdida de la funció n del gen foxp3
lleva a que las células t reguladoras adquieran propiedades de las células t efectoras,
incluyendo la secreció n de citoquinas que estimulan la respuesta inmune y la
inflamació n como interleuquinas 2, 4, 17 e interferó n gamma.

El cuadro A muestra có mo la mayoría de células t reguladoras foxp3+ se diferencian a

partir de células foxp3- cd4+ en el timo. El proceso de diferenciació n se trata de
inducir el gen foxp3 para activar su expresió n y requiere
1). Estimulació n incrementada de los TCR (receptores de célula t) a partir de un MHC
(complejo mayor de histocompatibilidad) presentado por células epiteliales del timo o
células dendríticas
2). Señ alizació n CD28 inducida por CD80 y CD86 (ligandos que se expresan en células
presentadoras de antígeno).
3). Receptores de Interleuquina 2 de alta afinidad y receptores de otras citoquinas. La
homeostasis de las células T reguladoras es dependiente de la secreció n exocrina de
interleuquina 2 por parte de células t efectoras.

El cuadro B muestra có mo las células t reguladoras foxp3+ pueden ser inducidas a

partir de células t CD4+ vírgenes en tejidos periféricos. Las condiciones para que esto
se de incluyen dosis bajas cró nicas de un antígeno, que generen tolerabilidad. Las
células t reguladoras inducidas suelen aparecer en tejido linfoide asociado a mucosas
donde la exposició n cró nica a antígenos presentes en la comida, microorganismos
comensales o antígenos ambientales variados, facilita su inducció n. La coestimulació n,
particularmente a partir de factor de crecimiento transformante beta (TGF-B) es
importante para esta inducció n. Adicionalmente, la interleuquina 2 y la vitamina A
(derivada del á cido retinó ico) facilitan la inducció n. Las células dendríticas CD103+
que producen á cido retinó ico y TGF-B (numerosas en los tejidos linfoides asociados a
mucosas) son importantes para la inducció n en células t activadas, por lo que tienen
un papel preponderante en limitar la respuesta inmune inflamatoria en estos tejidos.

Rol de las señales TCR en la diferenciación de células t reguladoras

Las señ ales de TCR (receptores de células t) de diferente intensidad y duració n se han
propuesto como guía para determinar la diferenciació n entre linfocitos t cd4+ y cd8+
durante la diferenciació n tímica. Ademá s, señ ales de TCR de distinta fuerza facilitan la
generació n de células t especializadas como las células natural killer CD1d- (NKT
CD1d-). Células t de acú mulo linfoide asociado a mucosas MR1, células CD8alfa-alfa y
células T CD8 H-M3.
Considerando que las interacciones TCR-ligando son esenciales para definir la
diferenciació n de células t, este tipo de interacció n también tiene un papel en la
inducció n de células t foxp3- a foxp3+. Adicional a las señ ales TCR, la coestimulació n
por señ ales CD28 tienen un rol esencial en la diferenciació n de células t reguladoras
(existe menor nú mero de ellas en ratones deficientes de CD28, CD80 y CD86). El
dominio lck de unió n de la cola citoplasmá tica de DC28 es crítico para la inducció n de
foxp3, lo que sugiere una acció n coordinada de señ ales TCR y señ ales CD28 en la
diferenciació n tímica.
Otros factores de transcripció n aparte de las señ ales TCR y la señ ales CD28 como
NFAT, NK-kB y AP-1 se ven implicados en la diferenciació n de células t reguladoras.
En concordancia con el rol propuesto de regulació n positiva de foxp3, NFAT y AP-1 se
unen al promotor de foxp3. Así mismo, una mutació n generada en la proteína
CARMA1 genera un bloqueo completo en la diferenciació n tímica de células t
reguladoras que no se puede corregir incluso con la administració n de señ ales de
supervivencia. Aú n no es claro có mo la familia NF-kB actú a para mediar la
diferenciació n de células t reguladoras, a que lugares del locus foxp3 se unen o có mo
afectan la expresió n de foxp3.

En la imagen se observa có mo factores como la Interleuquina 2, el TGF-B, las señ ales

TCR y la coestimulació n por señ ales CD28, actú an positivamente para la supervivencia
y proliferació n de las células t reguladoras. Las señ ales TCR y CD28 inician una
cascada de señ alizació n de NF-kB mediada por PDK1, PKC, BCL-10, MALT1, CARMA1,
y una parte crítica para la expresió n de foxp3 en el timo: IKK. CReB, NFAT y AP1 se
unen a elementos reguladores del DNA en el locus de foxp3. En contraste con las
señ ales TCR-CD28 fuertes del timo, otras señ ales má s débiles de TCR-CD28 parecen
contribuir a la inducció n periférica de foxp3. STAT5 que se activa por la cascada de
señ alizació n del receptor de interleuquina 2, se une a un promotor y a una regió n ADN
intró nica regulatoria dentro del locus de foxp3, y puede tener actividad en la
regulació n transcripcional de foxp3. La unió n de NFAT y SMAD3 a regiones no
codificantes conservadas (CNS1), dependiente de TGF-B tiene un rol importante en la
inducció n periférica de foxp3. La transcripció n del gen foxp3 es dependiente de otros
elementos regulatorios del DNA, en adició n al promotor de foxp3. Foxp3-CNS2 puede
tener funció n en la expresió n estable y continua de foxp3. Esta funció n de CNS2 es
dependiente de desmetilació n de la regió n CpG localizada esta regió n, indicando que
la expresió n contínua de foxp3 puede ser mediada por factores de transcripció n metil-
sensibles. Cuando CNS2 se encuentra fuertemente metilado, suele expresarse só lo de
forma transitoria el gen foxp3. Modificaciones en la cromatina como metilació n de la
histona 3 en su residuo 4 de lisina (H3K4me) o acetilació n de la histona 3 (H3Ac) en el
promotor y CNS1 se asocian con transcripció n activa del gen foxp3, mientras que la
cromatina en CNS2 con motivos CpG desmetilados se encuentra en células maduras t
reguladoras que expresan foxp3 de forma estable.

Rol de las citoquinas

Un señ al esencial para la diferenciació n de las células t reguladoras es la Interleuquina

2, aunque existen otras interleuquinas de cadena gamma que son importantes como
interleuquina 7 y 15. Ratones con deficiencia de IL-2 muestran un descenso de la
proporció n de células foxp3+ de hasta el 50%, y ratones carentes de interleuquinas de
cadena gamma muestran completa ausencia de células foxp3+ periféricas y
timocíticas.

Partiendo de la observació n de que células CD25+foxp3- preceden la generació n de

células CD25+foxp3+CD4+, se ha propuesto que señ ales TCR resultan en una
regulació n positiva de CD25, que incrementa la capacidad de respuesta de
precursores de células t reguladoras a las señ ales mediadas por IL-2, para poder ser
inducidas. STAT5, activado por una cascada mediada por IL-2R y otras interleuquinas
de cadena gamma, puede ser el factor que actú e en la regulació n directa de la
expresió n de foxp3, ademá s se ha probado que este se une al promotor de foxp3 y al
conjunto Foxp3-CNS2. La remoció n de un alelo Stat5 en timocitos resulta en la
reducció n drá stica de timocitos foxp3+. La expresió n de STAT5 de forma constitutiva
puede resultar en la expansió n de células t regulatorias y evitar el decrecimiento por
ausencia de IL-2. Permanece incierto bajo que mecanismos la IL-2 facilita la
diferenciació n de células t reguladoras o el mecanismo en que STAT5 influye en la
transcripció n de foxp3. Se ha encontrado que STAT5 no es un factor que intervenga en
mantener la expresió n de foxp3 en células t reguladoras.

Se ha sugerido que la generació n temprana de células t reguladoras foxp3+ es

dependiente de señ alizació n a partir de receptores de TGF-B para la expresió n de
foxp3, dado que la ablació n de una subunidad del TGF-B resulta en menor
diferenciació n a células t reguladoras foxp3+

Requerimientos para la diferenciación periférica

Se ha demostrado que la inducció n de la expresió n de foxp3 en células periféricas

vírgenes se facilita por señ ales TCR leves o por señ ales fuertes de TCR junto con altas
cantidades de TGF-B, pero esto no significa que exposició n cró nica a antígenos
diversos lleve a generació n periférica de células t reguladoras, ni que estas ocupen
una gran proporció n entre las células linfoides periféricas. Se cree que ciertas señ ales
TCR específicas ayudan a la diferenciació n de las células t reguladoras en la periferia y
estas señ ales tienen sus similaridades y diferencias con las señ ales TCR que actú an a
nivel del timo. La señ alizació n a partir de receptores de TGF-B parece ser requerida
para la mayoría del proceso de inducció n de foxp3 en células t periféricas vírgenes, así
mismo se requiere IL-2, la cual genera oposició n a la diferenciació n de células t cd4+ a
células th7 cd4+ ayudadoras. Los datos recopilados hasta ahora indican que la alta
expresió n de foxp3 mediada por TCR es influenciada por señ alizació n intracelular que
induce proliferació n, y actú a en sinergia con otras señ ales como TGF-B y IL-2.
Principalmente los acú mulos linfoides asociados a mucosas son tejidos que favorecen
la aparició n de células t regulatorias, dado que las células presentadoras de antígeno
presentes en estos tejidos promueven su generació n a partir de á cido retinó ico y TGF-
B. El á cido retinó ico puede tener efectos importantes en la diferenciació n acortando la
producció n de IL-4, 10, 21 e interferó n gamma, aunque al inhibir la inducció n de IL-10
se cree que las células t reguladoras y las células Tr1 productoras de IL-10 pueden
tener una relació n de competitividad.