INSTITUTO TECNOLOGICO BOLIVIANO CANADIENSE

“EL PASO”

QUIMICA INDUSTRIAL

MEDIOS DE CULTIVO

ASIGNATURA: BROMATOLOGIA Y MICROBIOLOGIA

INDUSTRIAL-I

SIGLA: BMI-I

NIVEL: 300-A

DOCENTE: LIC. FANNY ESCALERA CLAROS

ESTUDIANTES: GUACHALLA CHOQUE JHAMIL MARCO A.

CALLISAYA BUENO JESUS VICTOR

ANDRADE FERNANDEZ JUAN MANUEL

FECHA DE REALIZACION: 01/09/2020

FECHA DE ENTREGA: 02/09/2020

COCHABAMBA_EL PASO
TEMA Nº3

MEDIOS DE CULTIVO

1. INTRODUCCIÓN:

Un medio de cultivo es una

técnica de laboratorio que
consta de un gel o una
solución que contiene los
nutrientes necesarios para
permitir, en condiciones
favorables de ph y
temperatura, el crecimiento
del virus, microorganismos,
células, tejidos vegetales o
incluso pequeñas plantas.
Según lo que se quiera
hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones. Generalmente se presentan
desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya preparados
pueden encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido. El objetivo último del cultivo
es variado: antibiograma, identificación, multiplicación.

Los medios de cultivo se utilizan además para demostrar ciertas características

bioquímicas de los microorganismos. Por ejemplo: producción de ácido y gas en medios
de fermentación de hidratos de carbono.

CULTIVO DE AGARES

2. CONSTITUYENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

Los constituyentes habituales de los medios de

cultivo son:

Las peptonas

se obtienen por digestión enzimática o química

de proteínas animales o vegetales.
Son muy ricas en péptidos y aminoácidos.

Extractos

Los extractos más habituales son:

-Extracto de Carne: contiene bases orgánicas solubles, vitaminas y minerales

-Extracto de Levadura: es fuente de aminoácidos y de vitaminas del complejo B.
Fluidos corporales

Los fluidos corporales que

habitualmente se utilizan son la
sangre y el plasma.
Se añaden a los medios de cultivo
porque contienen factores de
crecimiento que facilitan el
crecimiento de algunos
microorganismos exigentes.

Sistemas amortiguadores

Los Sistemas Amortiguadores se

utilizan para mantener el pH del
medio en un determinado valor.

Se usan sobre todo fosfatos

bisódicos y bipotásicos.

Indicadores de PH

Los indicadores de pH se añaden con frecuencia a

los medios de cultivo para poner de manifiesto
ciertas propiedades bioquímicas.

Como consecuencia de la fermentación de un azúcar

(lactosa, glucosa, xilosa, etc.) disminuye el pH del
medio y se produce un viraje del indicador.
En otros medios de cultivo pretendemos comprobar
si el microorganismos es capaz de utilizar ciertas
sustancias como la urea y algunos aminoácidos. Si
lo hace aumenta el pH del medio y se produce un
viraje del indicador.
Agentes reductores

Son la cisteina, tioglicolato y otros. Se añaden a los medios de cultivo para crear
condiciones que permitan el desarrollo de microorganismos microaerófilos o
anaerobios.

Agentes selectivos

La adición de determinadas sustancias al medio de

cultivo puede convertirlo en selectivo para
determinados microorganismos.
Por ejemplo: cristal violeta, sales biliares, azida
sódica, determinados antibióticos.

Agar

El agar es un agente gelificante. Es un polisacárido

que se obtiene de las algas marinas.

3. FACTORES DE CRECIMIENTO

1- Disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la

investigación microbiológica ha de
contener, como mínimo, carbono,
nitrógeno, azufre, fósforo y sales
inorgánicas. En muchos casos serán
necesarias ciertas vitaminas y otras
sustancia inductoras del crecimiento.
Siempre han de estar presentes las
sustancias adecuadas para ejercer de
donantes o captadores de electrones para
las reacciones químicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban
originalmente en forma de infusiones de
carne, extractos de carne o extractos de
levadura. Sin embargo, la preparación de estas sustancias para su aplicación a los
medios de cultivo provocaban la pérdida de los factores nutritivos lábiles.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar
peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón
ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las
proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más
simples de nitrógeno presentes en la peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a muchos
medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente pueden ser
necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio,
manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente
de naturaleza vitamínica.

Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores
de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores
selectivos de ciertos microorganismos.

2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos

modificar su consistencia añadiendo
productos como albúmina, gelatina o agar,
con lo que obtendríamos medios en estado
semisólido o sólido.

Los medios solidificados con gelatina

tienen el gran inconveniente de que
muchos microorganismos no se
desarrollan adecuadamente a temperaturas
inferiores al punto de fusión de este
solidificante y de que otros tienen la
capacidad de licuarla.

Actualmente los medios sólidos son de

uso universal, por su versatilidad y
comodidad, pero hay también gran
cantidad de medios líquidos cuyo uso está
ampliamente extendido en el laboratorio.

3- presencia (o ausencia) de oxígeno y

otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden

crecer en una atmósfera con tensión de
oxígeno normal. Algunas pueden
obtener el oxígeno directamente de
variados sustratos. Pero los
microorganismos anaerobios estrictos
sólo se desarrollarán adecuadamente en
una atmósfera sin oxígeno ambiental.
En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en
condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida),
mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a
cualquiera de las citadas condiciones.

4- condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas
de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la
humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el
medio.

5- Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en

presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos

6- pH

La concentración de iones hidrógeno es muy

importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayoría de ellos se
desarrollan mejor en medios con un pH neutro,
aunque los hay que requieren medios más o menos
ácidos. No se debe olvidar que la presencia de
ácidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo
inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos
normales.

7- Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC.

Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas
superiores (hipertemófilos).

En líneas generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho

más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.
8- Esterilidad del medio

Todos los medios de

cultivo han de estar
perfectamente estériles
para evitar la aparición de
formas de vida que
puedan alterar,
enmascarar o incluso
impedir el crecimiento
microbiano normal del o
de los especímenes
inoculados en dichos
medios. El sistema clásico
para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión
como agente esterilizante) La evolución de los medios de cultivo Podemos decir que la
microbiología empieza su verdadero desarrollo como ciencia en el momento en que se
descubre el microscopio y comienza la observación de los primeros microorganismos,
pero es indudable que la puesta a punto de los medios de cultivo y la utilización del agar
como solidificante, marcan dos importantes puntos de inflexión en su evolución.

La primera noticia de la utilización de medios de cultivo nos llega del micólogo Brefeld,
que consiguió aislar y cultivar esporas de hongos en medios sólidos realizados a base de
gelatina.

Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamaño) y no
fue hasta el año 1878 cuando Lister popularizó un método enfocado al cultivo puro
basado en diluciones seriadas en un medio líquido.

4. INDICADORES DE PH DE UN
MEDIO DE CULTIVO

Los indicadores de pH se añaden con

frecuencia a los medios de cultivo para
poner en manifiesto ciertas propiedades
Bioquimicas.

5. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero los más
importantes son aquellos que se basan en:
a) Su consistencia.
b) Su utilización.
c) Su composición.
d) Su origen.

SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA):

1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta
razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto
principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente
cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada
concentración.
2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente
gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una proteína
animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas
bacterias, y además su uso está muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a
temperatura ambiente) razón por la que no puede utilizarse para cultivos a 37ºC, que es
la tempera óptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar: Es un
polímero de azúcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molécula insoluble
enagua pero soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre
32 y 39ºC y no se funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido
alrededor de los 45ºC. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgánicos
indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un
microorganismo. Aunque el agar es una mezcla de polisacáridos, Araki, en 1937, los
dividió en dos grupos:
- agarosa, con poco sulfato, libre de ácido pirúvico, y - agaropectina, con mucho sulfato
y gran cantidad de cenizas. La proporción de agarosa a agaropectina en el agar varía
según el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los más
importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriológico, agares
purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de
todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo microbiológico, por lo que es
importante la ausencia de metales tóxicos.
3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos
un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno
de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias
SEGÚN SU UTILIZACIÓN.

1) MEDIOS COMUNES: Son

aquellos que poseen los
componentes mínimos para que
pueda producirse el crecimiento
de bacterias que no necesiten
requerimientos especiales. El
medio más conocido de este
grupo es el agar nutritivo o agar
común, que resulta de la
adición de agar al caldo
nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar
Columbia, etc.
2) MEDIOS DE
ENRIQUECIMIENTO: Son
aquellos que, además de las
sustancias nutritivas normales,
incorporan una serie de factores
indispensables para el crecimiento
de microorganismos exigentes.
Este enriquecimiento se hace por
adición de sangre u otros productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.)
que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a
los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex,
etc ) El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas
sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar
chocolate).
3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas
bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios
consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana
específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para
favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.
4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden
totalmente el crecimiento de una población microbiana, se denomina inhibidor. Los
medios inhibidores podrían considerarse como una variante más restrictiva de los
medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adición de
sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo
de una población determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el
crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram
positivos.
5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas
que ayuden a diferenciar géneros o especies. La adición de un azúcar fermentable o un
sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio
diferencial porque permite distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos
que no lo hacen. También lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de
hemólisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc.
6) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica
que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios
han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de los
microorganismos, el sustrato específico que vaya a ser metabolizado y el indicador que
nos muestre el resultado. El agar Kligler, el medio de Simmons y en general, cualquier
medio al que se le haya añadido un elemento diferencial de un microorganismo, son
medios utilizados en identificación. Actualmente están apareciendo en el mercado una
gran cantidad de medios específicos de identificació n para ciertos microorganismos,
con lo cual se consigue simultáneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de
identificación. Son ejemplos de esto últimos los medios CPS ID3 o Uriline ID
(Biomerieux), utilizados para identificar los gérmenes urinarios más importantes a partir
de la placa de cultivo gracias a la utilización de sustratos cromogénicos específicos.
7) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir
de un microorganismo ya aislado. Se emplean en la obtención de vacunas, en la
investigación y en la industria. Los medios más adecuados para la multiplicación suelen
ser líquidos. El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI), es un ejemplo típico de estos
medios.
8) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas
razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad
de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiología. En el
laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas:
a) haciendo pases periódicos de placa a placa.
b) mediante liofilización de una suspensión bacteriana
c) congelando las cepas en leche descremada estéril al 0,1%.
9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden
sembrarse inmediatamente. Su utilización debe hacerse introduciendo la torunda con la
que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). Son
ejemplos típicos de este grupo los medios de Stuart -Amies, Cary-Blair, etc.
ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN.

Según las sustancias que entren a formar parte en su composición, los medios de cultivo
pueden ser clasificados en:
1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los más empleados se preparan
a partir de tejidos animales, y más raramente de vegetales. Su composición no es
exactamente definida, y por consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede
tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales, donde la reproductibilidad
no podrá ser exacta. En la práctica corriente estos medios dan excelentes resultados y
son los más empleados.
2) Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición exclusivamente
sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones
determinadas, resultando un medio de composición perfectamente definida.
3) Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento exigidos para
ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio sintético para estos gérmenes sea
imposible o demasiado cara. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la
forma de un extracto orgánico complejo (extracto de levadura, extracto de tejidos,
etc.).Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio por muy enriquecido que esté éste,
haciéndolo exclusivamente en células vivas con unas características determinadas.
Ejemplos de este tipo son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.
SEGÚN SU ORIGEN:

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o

vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se
conoce exactamente.
b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida
cualitativa y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factore s de crecimiento
bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de
levadura.

6. AJUSTE DE PH DE UN MEDIO DE CULTIVO

El estudio del intervalo de tolerancia de pH se ha realizado modificando el pH del

medio de cultivo, en este caso TSB, en un rango de valores que ha oscilado entre 4 y 10.
Para la realización del ensayo se preparan soluciones de TSB cuyo pH se ajusta
añadiendo HCl 1N para la obtención de valores ácidos y NaOH 1N para los valores
básicos. Estas soluciones se esterilizan en autoclave en las condiciones habituales (121
ºC, 20 min) y posteriormente se toman alícuotas de cada solución para volver a
comprobar los valores de pH que se tomarán como definitivos. Las distintas soluciones
de TSB se reparten en placas de microtiter en cantidades de 200µL por pocillo. Para la
preparación de los inóculos de cada una de las cepas se utilizan tubos de Ringer 1/4 con
2 mL de solución, de manera que se obtengan suspensiones de una turbidez igual a 1 de
la escala de McFarland. Para inocular los tubos de Ringer ¼ se utilizan cultivos en TSA
de 3 d a 15 ºC. Una vez preparadas las suspensiones bacterianas se inocula la placa
microtiter con 10µL de la suspensión bacteriana por pocillo. Los cultivos se incuban a
15 ºC durante 14 d revisando los resultados a partir del tercer día. Como control del
medio se deja un pocillo de cada valor de pH sin inocular. Para el control de la turbidez
se inocula un pocillo de Ringer ¼ para poder comparar si la turbidez es debida al
inóculo o al desarrollo bacteriano.
Preparación de medios de cultivo Los medios de cultivo pueden adquirirse
comercialmente listos para su uso o se pueden preparar en el laboratorio a partir de
material deshidratado (el cual contiene los componentes necesarios para elaborar cada
uno de los tipos de medios existentes). Para su elaboración hay que seguir las
instrucciones dadas por el fabricante, que se especifican en el prospecto del envase.
Normalmente consiste en disolver el medio deshidratado en agua destilada, proceso que
se conoce como reconstitución. La cantidad de agua será la que indica el fabricante. En
el caso de medios que contienen agar como agente gelificante, hay que disolver
agitando y calentando a la vez, debido a que el agar funde en torno a 100 ºC. Para ello
se puede utilizar un termoagitador magnético (que evita una ebullición prolongada).
Una vez reconstituido el medio de cultivo, hay que esterilizarlo para asegurarse de que
no crecerá ningún microorganismo contaminante, ya que el objetivo del cultivo es
determinar el crecimiento de los microorganismos presentes en muestras clínicas para
su posterior identificación. La esterilización se realiza en un autoclave a 121 ºC durante
15-20 min. Los medios de cultivo en tubo se fraccionan antes de esterilizar y se
introducen en el autoclave tapados con algodón graso y papel de aluminio. Sin embargo,
los medios sólidos en placa se suelen esterilizar en recipientes grandes (botellas o
matraces) con tapón de plástico o algodón graso. Posteriormente se recomienda esperar
a que la temperatura baje a unos 45-50 ºC para fraccionarlo en placas, siempre cerca del
mechero para evitar contaminación ambiental. El fraccionamiento consiste en depositar
una pequeña cantidad en la placa, hasta que alcance unos 4 mm de altura. Dejar enfriar a
temperatura ambiente hasta que solidifique por completo. Una vez sólido, se invierte (de
tal forma que la superficie de apoyo sea la tapa de la placa) y se almacena refrigerado a
4 ºC.
Los medios de cultivo que incluyen en su composición sustancias termolábiles, es decir,
que se alterarían tras someterse a un tratamiento con calor, necesitan un procedimiento
alternativo para su esterilización. Generalmente se realiza filtración con membranas de
un diámetro de poro de 0,2 a 0,45 µm. Los virus no se eliminan, pero sí las bacterias y
hongos que pudieran contaminar el medio. Serían ejemplos de sustancias termolábiles el
suero y determinados antibióticos.

7. PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO SOLIDO Y LIQUIDO.

En la naturaleza, la mayoría de los microorganismos no se encuentran aislados, sino

integrados en poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos
microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar unos de otros y trabajar con
especies aisladas, obteniendo cultivos axénicos o puros. Un cultivo axénico o puro es
aquel que contiene un sólo tipo de microorganismo y que procede generalmente de una
sola célula; el crecimiento de ésta origina, en medio sólido, una masa de células
fácilmente visible que recibe el nombre de colonia. Para obtener cultivos puros a partir
de una población microbiana mixta, se utilizan las denominadas técnicas de aislamiento,
que fueron desarrolladas durante el siglo XIX. En un principio, Lister utilizó diluciones
seriadas en medio líquido con esta finalidad, pero la presencia de contaminación, es
decir, de microorganismos no deseados, dificultó el aislamiento. La escuela de Robert
Koch introdujo los medios sólidos, complementados con agar, y las placas de Petri en
Bacteriología, permitiendo así la separación física de las colonias sobre la superficie del
medio de cultivo o en el interior del mismo. El aspecto de las colonias sirve para
diferenciar distintas especies microbianas.

SIEMBRA Y FORMAS PARA REALIZAR LA TRANSFERENCIA

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un

medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano. Para sembrar en
microbiología es necesario mantener la habitación sin corrientes de aire y estar al lado
de la llama de un mechero (no más de 15 cm. de distancia). También se puede trabajar
bajo campana, o en flujo laminar, previa esterilización con luz UV.
La siembra puede realizarse en medio líquido, sólido o semisólido, utilizando ansa, hilo,
o bien hisopo o pipeta estéril. Se debe esterilizar en la llama (hasta que todo el filamento
se haya puesto al rojo vivo) el ansa o el hilo y enfriar, antes y después de realizada la
siembra. Para transferir los microorganismos, se recomienda: a) Medio líquido a medio
líquido: utilizar pipeta Pasteur o graduada, ansa o hilo. b) Medio líquido a medio sólido:
utilizar pipeta Pasteur o graduada, ansa o hilo, e hisopo. El ansa se toma del mango
como si fuera un lápiz 16 c) Medio sólido a medio sólido: utilizar ansa o hilo. d) Medio
sólido a medio líquido: ansa o hilo. Luego de sembrado, el medio de cultivo se incuba a
una temperatura adecuada para el crecimiento.

CULTIVO EN MEDIO SÓLIDO

Tubos con agar inclinado
Previo a la siembra y con posterioridad a ésta es importante pasar la boca del tubo (sin
la tapa) por la llama del mechero (flameado). Esta operación genera corrientes de
convección que previenen que los contaminantes del aire caigan dentro de los
recipientes. El calentamiento puede también matar los microorganismos que se
encuentren en la boca de los recipientes. Para realizar la siembra se puede utilizar el
ansa, realizando un movimiento suave sobre la superficie del agar en forma de zigzag,
desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar. También se puede
utilizar el hilo. En este caso, se realiza la punción y luego se siembra en la superficie de
manera similar a lo descripto, pero extremando los cuidados para no romper la
superficie. Luego de la incubación, se observará el aspecto general del medio y la
aparición de crecimiento sobre su superficie. Este tipo de siembra permite el cultivo de
microorganismos aerobios o anaerobios facultativos y además se utiliza para almacenar
cultivos durante cortos períodos de tiempo a temperaturas de 4°C, o para la
amplificación de un inóculo pequeño.

Siembra en placas
Puede ser en superficie (utilizando espátula de Drigalski, ansa o hisopo) o por mezcla
(el inóculo con el medio de cultivo agarizado aún fundido, a temperatura de unos 45°C,
se mezclan y se vierte en la placa de Petri, como se explica en detalle más adelante).
Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio
puede provocar condensación durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar,
se extiende dando un crecimiento confluente. En medio sólido cada célula viable dará
origen a una colonia y por lo tanto la siembra en placas se puede utilizar, no solo para
cultivar microorganismos, sino además para contar y aislar. En general cuando se
quieren tener colonias aisladas a partir de un material determinado, es necesario diluir la
muestra en tubos con suero fisiológico estéril.

CULTIVO EN MEDIO SEMISÓLIDO

Se utilizan tubos sin inclinar. Se siembra por picadura o punción utilizando un hilo. Este
tipo de medio contiene una proporción menor de agar que los medios sólidos. El medio
queda inoculado al introducir el hilo en profundidad, pero sin tocar el fondo del tubo,
retirándolo posteriormente por la misma trayectoria utilizada al realizar la picadura. En
medio semisólido se podrá comprobar si el microorganismo es o no móvil, ya que en el
primer caso se observará que el crecimiento difunde alrededor de la zona donde se hizo
la picadura, detectándose turbidez (ver ejemplo tubo 1 de la figura). Los
microorganismos inmóviles crecerán únicamente a lo largo de la picadura.
Una siembra con ansa o con un cierto movimiento de vaivén podría originar un patrón
de crecimiento que se interpretaría erróneamente como movilidad bacteriana. Este tipo
de siembra en picadura sirve, también, como otro método de conservación de
microorganismos anaerobios facultativos.

CULTIVO EN MEDIO LÍQUIDO

Habitualmente se realiza en tubos, frascos o erlenmeyers. Antes y después de realizada

la siembra, se debe pasar la boca del recipiente (sin tapa) por la llama del mechero
(flameado). En los cultivos líquidos no tiene lugar la formación de colonias, por lo
tanto, no sirven como técnica de aislamiento. La utilización de medios de cultivo
líquidos permite la obtención de una población microbiana grande, con un elevado
número de microorganismos, para ser utilizados posteriormente. En estos cultivos se
examinará la existencia de enturbiamiento más o menos intenso, la formación de una
película o velo sobre la superficie, la aparición de sedimento en el fondo del tubo, etc.