DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA HUMANA

CÁTEDRA 1 - MATERIA QUÍMICA BIOLÓGICA II - CICLO LECTIVO 2020

SEMINARIO 17
TEXTO ADICIONAL

TRANSCRIPCIÓN Y MADURACIÓN DEL ARN

Prof. Dra. Cristina Paz

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Introducción

En las células eucariontes la información genética (genes) está contenida como moléculas
de ADN en los cromosomas, los que se localizan en el núcleo. Por otro lado la información que
contienen los genes se expresa en el citoplasma. ¿Cómo se transmite la información entre estos
compartimentos?
En 1961 François Jacob y Jacques-Lucien Monod propusieron la hipótesis del mensajero:
"debe existir una molécula que transporte la información fielmente desde el ADN hasta las
proteínas". En ese mismo año se demostró que esa molécula intermediaria es una molécula de
ácido ribonucleico, que se denominó ARN mensajero o ARNm (ácido ribonucleico, ARN) .El ARNm
debía entonces traducirse en una proteína. En otras palabras, el ARNm es el intermediario en el
flujo de la información desde el ADN a las proteínas. Jacob y Monod compartieron junto con Andre
Lwoff el Premio Nobel de Fisiología o Medicina en 1965.
En base al modelo propuesto por Jacob y Monod, Francis Crick propuso un sistema de
mantenimiento y flujo de la información genética en los organismos vivos que denominó Dogma
Central de la Biología Molecular. Según este modelo, la información genética contenida en el ADN
se mantiene mediante su capacidad de replicación y se expresa dando lugar a proteínas. La
información contenida en el ADN se transfiere a una molécula de ARN mensajero (ARNm)
mediante el proceso denominado transcripción. El mensaje que transporta el ARNm se traduce a
proteína mediante el proceso de la traducción. Crick recibió, junto a J D Watson y M Wilkins, el
Premio Nobel de Medicina en 1962 "por sus descubrimientos concernientes a la estructura
molecular de los ácidos desoxirribonucleicos (ADN) y su importancia para la transferencia de
información en la materia viva".

MECANISMO DE TRANSCRIPCIÓN

La transcripción consiste en copiar la secuencia de ADN de un gen para producir una

molécula de ARN. En otras palabras es el paso de la información contenida en el ADN hacia el ARN,
y consiste en la síntesis de una molécula de ARN tomando como molde una hebra de ADN. En el
proceso de síntesis de ARN los nucleótidos trifosfato que van a formar la molécula de ARN se van
adicionando conforme a la secuencia de una de las hebras del ADN, hebra que se "se copia"
siguiendo el apareamiento de bases propuestos por Watson y Crick.
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Las enzimas que catalizan la reacción de adición de cada nucleótido para formar la cadena
de ARN se denominan ARN polimerasas. El ARN producto de la transcripción recibe el nombre de
transcripto.
Las ARN polimerasas catalizan la siguiente reacción:

ARN (n nucleótidos) + NTP → ARN (n+1 nucleótidos) + PPi

El ARN contiene como azúcar a la ribosa y las bases nitrogenadas mayoritarias que posee
son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por tanto, el uracilo (U) es característico del
ARN. En el esquema de la reacción catalizada por la ARN polimerasa NTP simboliza uno de los
siguientes nucleótidos: ATP, GTP, CTP UTP. La ARN polimerasa selecciona el NTP correcto y cataliza
la formación del enlace fosfodiéster.
El enlace fosfodiéster se establece al unirse el extremo 5’ del nucleótido entrante al
hidroxilo 3' libre la cadena en crecimiento, siendo por lo tanto la dirección de síntesis 5'→3'.

Como sucede con las ADN polimerasas que catalizan la síntesis de ADN, las ARN
polimerasas dependen absolutamente de un molde. Sin embargo, a diferencia de las ADN
polimerasas que requieren un cebador para iniciar el proceso de polimerización, las ARN
polimerasas no requieren cebador (cebador: secuencia mínima a partir de la cual la polimerasa
comienza a agregar los monómeros). Dado que la síntesis de ARN requiere un molde de ADN, la
transcripción eucariótica comienza en el núcleo y en la matriz mitocondrial y la traducción se
realiza en el citoplasma. En las bacterias la transcripción y la traducción tienen lugar en el
citoplasma bacteriano y al mismo tiempo, es decir son simultáneas.
Durante la transcripción se producen cambios notables en la estructura del ADN. Tanto en
los procariotas como en los eucariotas la doble hélice del ADN se abre (desenrolla)
transitoriamente, a medida que el complejo de transcripción se desplaza por el ADN. La apertura y
desenrollamiento del ADN son procesos absolutamente necesarios porque la molécula de ADN es
una doble hélice y la transcripción se realiza tomando como molde sólo una de las hebras del ADN,
si esto no se realizara se dificultaría el copiado de la hebra de ADN y la cadena de ARN en
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formación se enrollaría sobre la cadena de ADN, lo cual dificultaría todo el proceso de
transcripción.

LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN

El ARN está constituido por una sola hélice o cadena de nucleótidos, aunque puede formar
una amplia gama de estructuras tridimensionales diferentes.
Existen diferentes tipos de ARN los cuales pueden agruparse como ARN funcionales y ARN
informativos. Los llamados ARN funcionales son aquellos que no se traducen a proteína pero que
tienen una función determinada en la célula. A este grupo pertenece el ARN ribosómico (ARNr),
que forma parte de los ribosomas y que interviene en la traducción, los ARN de transferencia, que
transportan a los aminoácidos en el proceso de traducción, los ARN nucleares pequeños (ARNnp)
que forman complejos con proteínas que participan en el procesamiento de los transcriptos en el
núcleo y los ARN citoplásmicos pequeños (ARNcp) que intervienen en el trasporte de los
polipéptidos en las células eucarióticas.
Los ARN informativos los que se van a traducir a proteínas. Estos ARN informativos son los
ARN mensajeros (ARNm). El ARN recién transcripto se denomina ARN heterogéneo nuclear
(ARNhn) y es un pre-ARNm que es procesado antes de convertirse en el ARNm maduro que
posteriormente se traducirá a proteína.
Las ARN polimerasas de células procariotas y eucariotas son grandes complejos
enzimáticos. En bacterias, existe solamente una ARN polimerasa que es capaz de sintetizar todos
los tipos de ARN (ARNr, ARNt y ARNm). La ARN polimerasa de Escherichia coli (E. coli) está formada
por 5 subunidades. El complejo formado por cuatro de ellas (2 α, ẞ, ẞ’), que se denomina núcleo,
puede llevar a cabo la transcripción pero no reconocer el sitio de iniciación de la transcripción. La
enzima completa incluye una 5ta subunidad, subunidad σ o factor σ (Factor sigma), que es
necesario para iniciar la transcripción. La subunidad σ una vez iniciada la transcripción se libera y
el núcleo central prosigue con la elongación del ARN.

En bacterias, los ARNm son poligénicos o policistrónicos, de manera que un solo ARNm
contiene información para la síntesis de varios polipéptidos distintos. En eucariontes los ARNm
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son monogénicos o monocistrónicos, de manera que un ARNm contiene información para
sintetizar un solo polipéptido.

En eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.

La ARN polimerasa I sintetiza ARN ribosómico (ARNr). La ARN polimerasa II produce ARN
heterogéneo nuclear (ARNhn) que luego del procesamiento origina los ARN mensajeros (ARNm)
que se traducen a proteínas. La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN de
transferencia (ARNt), los ARN nucleares y citoplásmicos de pequeño tamaño y los genes para el
ARN 5S que forma parte de la subunidad grande de los ribosomas.
Las ARN polimerasas eucarióticas son bastante más complejas que las de E. coli, poseen
subunidades semejantes o correspondientes a las de E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas, o transcriptasas, a diferencia de lo que ocurre con las ADN
polimerasas, carecen de función "correctora de pruebas". Esta diferencia se debe en primer lugar
a que los transcriptos son cortos y la probabilidad de que uno de los ARN posea una alteración es
baja, y en segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar
otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con una alteración no es grave ya que
durará poco y será remplazado pronto por otro nuevo sin la alteración. Sin embargo, un error en la
replicación del ADN puede transmitirse a todas las células que deriven por división de la célula
afectada.

ETAPAS DE LA TRANSCRIPCION EN CÉLULAS PROCARIOTAS

El proceso de transcripción se divide en tres etapas: 1- iniciación, que básicamente incluye

el reconocimiento por parte de la polimerasa de un punto de inicio de la transcripción de un
determinado gen y la puesta en marcha del proceso de polimerización que implica ruptura y
generación de nuevos de enlaces químicos; 2-la elongación, que consiste en la formación de la
cadena de ARN y 3-la finalización y liberación de la cadena.

1-INICIO DE LA TRANSCRIPCIÓN
Como se mencionó previamente, la ARN polimerasa agrega nucleótidos al hidroxilo 3’ de la
cadena en crecimiento de modo que la cadena de ARNm crece en sentido 5→3’. Cada uno de los
nucleótidos de la cadena en formación se adiciona conforme a la secuencia de la cadena molde,
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guardando el principio de complementariedad de bases con la salvedad de que las bases de
adenina del ADN copiado darán lugar a bases de uracilo en la copia de ARN.
Sólo se usa una cadena de ADN molde que es copiada en su dirección 3'→5', la cadena de
ARN en formación queda situada en dirección antiparalela a la cadena molde de ADN. La cadena
de ADN que sirve de molde para la síntesis de ARN es complementaria al transcri pto de ARN.
Convencionalmente, la hebra molde suele ser la “inferior” cuando se escribe la secuenc ia de un
ADN doble cadena. La otra hebra, la “superior”, tiene la misma dirección que el transcri pto y se la
denomina hebra codificante.

Se denomina unidad transcripcional al segmento del ADN comprendido entre la iniciación y

la terminación de la transcripción.
La transcripción se inicia con el reconocimiento por parte de la ARN polimerasa de una
secuencia específica en la unidad transcripcional de una zona denominada promotor.
Por convenio, para describir la región del ADN dónde se sitúa el gen a transcribir, se da el
número +1 al par de bases (ADN) dónde comienza la síntesis del ARN, hasta +n que será el último
par de bases dónde acaba la síntesis. La secuencia promotora, que esta hacia el extremo 5', se
denomina secuencia “corriente arriba”, y se expresa -1 a - n. De ahí el hecho de que los
promotores se sitúen a -10 y a -35 del punto de aparición del ARN.
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En procariotas la transcripción comienza con la unión específica de la ARN polimerasa al

promotor de un gen. El reconocimiento del promotor es una función de la ARN polimerasa. El
promotor procariota consta de dos secuencias cortas de bases situadas 10 y 35 pares de bases del
punto inicial de la síntesis. La ARN polimerasa se une a una cara del ADN que se extiende a lo largo
de aproximadamente 45 pares de base del lado 5’ y 10 pares de base del lado 3’ en torno del inicio
de la transcripción. En esa región se encuentran dos secuencias cortas altamente conservadas.
Una secuencia está localizada aproximadamente 10 pb más arriba del inicio de la transcripción
(caja -10 o de Pribnow) cuya secuencia consenso es T*A*TAAT* (TATA box). Las posiciones
marcadas con asterisco son las más conservadas, por ejemplo el último residuo T se encuentra en
todos los promotores en E.coli. Más arriba de la secuencia Pribnow se encuentra una segunda
secuencia consenso, es la llamada secuencia -35: T*T*G*ACA (los asteriscos señalan nucleótidos
conservados).Esta secuencia se localiza aproximadamente 35pb más arriba del inicio de la
transcripción. Normalmente la distancia entre las secuencias -35 y -10 es de 17 pb.
Las mediciones de la afinidad de unión de la ARN polimerasa al ADN y de la eficiencia de la
iniciación con diferentes secuencias promotoras indican que los promotores más activos son
aquellos más similares a los promotores consenso. En ensayos in vitro se demuestra que la
capacidad cinética de una ARN polimerasa purificada para iniciar la transcripción (o “fuerza” del
promotor) es proporcional al grado de homología de los promotores con las secuencias consenso.
El inicio de la síntesis de ARN involucra dos pasos. En el primer paso la enzima se une al
promotor de forma débil, formando un complejo “cerrado” (doble hélice cerrada). En el segundo
paso la enzima se une fuertemente al promotor y el ADN se abre formando una abertura de
aproximadamente 10pb (burbuja de transcripción). Luego el NTP inicial se une al ADN
desenrollado, la polimerasa cataliza la formación de la primera unión fosfodiester y a continuación
la polimerasa avanza. Poco después de formado el primer enlace fosfodiéster la subunidad o
factor sigma de la polimerasa se libera y la enzima continúa funcionando en la elongación. En otras
palabras, la holoenzima (enzima completa) es necesaria para reconocer el promotor e iniciar la
transcripción. El factor sigma ejerce esta función de reconocimiento del promotor. Pasada esa
etapa continúa la elongación, un proceso que no requiere la presencia del factor σ.
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2-ELONGACIÓN: A medida que la ARN polimerasa se desplaza sobre la doble hélice se

siguen separando las dos hebras de ADN. Esto permite que la hebra molde se aparee con la hebra
de ARN naciente.

3-TERMINACIÓN: La proteína rho participa en la terminación de la transcripción en

procariotas. Hay dos mecanismos de terminación, uno de ellos es dependiente de la proteína rho.
En este caso rho reconoce una secuencia en el ARN y se une a éste, desestabilizando la interacción
ARNm y ADN (cadena molde).
En la terminación de la transcripción independiente de rho se generan secuencias en el
ARN en crecimiento que permiten la formación en el ARN de una horquilla, estructura que lleva al
cese de la transcripción.
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LA TRANSCRIPCION EN EUCARIOTAS

La transcripción en los eucariotas y procariotas difiere sustancialmente. Sobre todo los

eventos moleculares que participan en la iniciación de la transcripción en eucariotas son más
complejos que los que ocurren en procariotas. Con respecto a la etapa de iniciación, en primer
lugar la cromatina que contiene la secuencia promotora en eucariotas tiene que ser modificada
para que la maquinaria de transcripción acceda a la región promotora. Segundo, en la iniciación y
regulación de la transcripción participan numerosos factores de transcripción y activadores que
se unen a promotores y secuencias intensificadoras. Además, en la transcripción en eucariotas
participan 3 tipos de ARN polimerasas y cada una de ellas reconoce promotores específicos.
Finalmente, el ARN eucariota sufre un extenso proceso de procesamiento y maduración.

La enzima ARN polimerasa II interviene en la síntesis de precursores del ARNm. Está

formada por 8-12 subunidades, entre ellas dos grandes subunidades, RPB1 y RPB2 (β y β’
respectivamente). La subunidad RPB1, homologa a la subunidad β de procariotas, presenta un
dominio C-terminal con múltiples repeticiones (50 en mamíferos) de la secuencia Tyr -Ser-Pro-Thr-
Ser-Pro-Thr llamado dominio CTD (por C-terminal domain) que es clave para la iniciación y la
elongación y otras funciones. Cuando CTD está desfosforilado la ARN polimerasa II puede iniciar la
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transcripción pero no puede elongar, en contraste cuando CTD está fosforilado, la polimerasa
puede elongar pero no iniciar la transcripción.
Por otra parte RPB1 une los NTPs que serán polimerizados mientras que RPB2 participa en
la unión de la polimerasa al ADN.

ETAPAS DE LA TRANSCRIPCIÓN EN CÉLULAS EUCARIOTAS

PROMOTORES Y FACTORES PROTEICOS DE UNIÓN AL ADN

La cromatina, forma en que se encuentra el ADN en el núcleo, es un complejo integrado
por ADN, ARN y proteínas (histonas y proteínas no histonas). En los genes activos, es decir
aquellos a transcribir, la cromatina tiene una conformación más “laxa”, esto f acilita la unión de
todos los factores que intervienen en la transcripción con el gen a transcribir. En otras palabras,
los genes activos son los que se transcriben y éstos están asociados a la cromatina en su
conformación “laxa”. Los estímulos que promueven la expresión de determinados genes pueden
activar a las acetil transferasa de las histonas y éstas promueven la acetilación de las histonas de
modo que las histonas acetiladas favorecen la activación de determinados genes. En contraste, la
estimulación de las histonas deacetilasas interfiere con la activación génica, en general.
Los factores proteicos eucarióticos, independientemente de la secuencia al ADN a la cual se
unen, actúan en forma distinta al factor σ de los procariotas. Los factores eucarióticos, en lugar de
formar parte de un complejo proteico y después “buscar” la secuencia en el ADN donde unirse, se
unen a secuencias específicas del ADN, luego se unen entre ellos y finalmente se unen a la ARN
polimerasa para iniciar la transcripción. Es lo que se denomina reclutamiento de factores. El
ensamblaje de estas moléculas forma el aparato básico de transcripción, el cual incluye a la ARN
polimerasa II y los factores generales de transcripción (FGT o GFT).
Promotores: Los promotores de la ARN polimerasa II son más variables que los de las ARN
polimerasas I y III pero a pesar de esta variación tienen una estructura general bastante
conservada, de manera que se han reconocido al menos tres secuencias canónicas o consenso: la
caja TATA (TATA box, cuya secuencia es TATAAAA), localizada en la posición -25, más arriba la caja
CAAT (secuencia GGCCAATCT) y más arriba aún la caja GC (secuencia GGGCGG). La caja TATA es
equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
La secuencia correspondiente a la CAAT box no es tan conservada como la secuencia de la TATA
box.

Secuencias intensificadoras (enhancers): Estas secuencias incrementan la expresión de un gen

unas 100 veces. Los factores de transcripción que se unen a estas secuencias se denominan más
apropiadamente, activadores. Las secuencias intensificadoras (o potenciadores o enhancers) son
elementos reguladores distales (40 a 50 Kb), que pueden encontrarse tanto en 5´ al promotor que
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regulan o en 3´a la región codificante del gen. Las proteínas activadoras tienen dos dominios, uno
que establece la unión con el ADN y otro que establece la unión con otra proteína o con la ARN
polimerasa. El modelo más aceptado para explicar el efecto de los activadores supone la
formación de un “bucle” que facilita el acercamiento entre la secuencia enhancer y el promotor,
aun cuando éstas puedan estar en sitios distantes.

Factores de transcripción: Un factor de transcripción es una proteína necesaria para iniciar el

proceso de transcripción. Se unen a grupos concretos de secuencias cortas conservadas que se
encuentran dentro de cada uno de los promotores. Muchos de los factores de transcripción
actúan mediante el reconocimiento de las secuencias promotoras o a secuencias enhancers de los
genes. Sin embargo, un factor de transcripción no solo actúa por medio de su unión física al ADN.
Un factor puede reconocer a otro factor o a una de las polimerasas de ARN. En células eucariotas,
la función preponderante de los factores de transcripción es la de reconocer los promotores.
Los factores que intervienen en la transcripción mediada por la ARN polimerasa II se
clasifican en tres grandes grupos:
-Factores generales, necesarios para el comienzo de la síntesis de ARN a partir de todos los
promotores de clase II (genes codificantes). Junto a la ARN polimerasa II forman un complejo
alrededor del punto de inicio de la transcripción, denominado complejo de transcripción basal
(GTF).
-Factores corriente arriba (upstream), son proteínas de unión al ADN que reconocen secuencias
consenso cortas específicas situadas corriente arriba o en 5' (proximales) del punto de inicio de la
transcripción, por ejemplo el factor Sp1, que se une a la caja GC. Estos factores son ubicuos y
actúan sobre cualquier promotor que contiene el lugar apropiado de unión al ADN. Su función es
incrementar la eficiencia del comienzo de la transcripción.
-Factores inducibles, que funcionan de manera semejante a los factores corriente arriba, pero con
un papel más regulador. Se sintetizan o activan en momentos específicos en determinados tejidos.
Las secuencias a las que se unen se denominan elementos de respuesta.
Estructura de los factores de transcripción: Desde el punto de vista estructural los factores de
transcripción tienen motivos específicos que facilitan la interacción con el ADN. Uno de esos
motivos es el denominado “dedo de zinc”. Las proteínas de este grupo deben su nombre al hecho
que un grupo pequeño de aminoácidos conservados de estas estructuras se unen a un ión de zinc.
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Existen dos tipos de proteínas de unión al ADN que tienen estructuras de este tipo, las formas
"clásicas" y los receptores de esteroides.
Regulación de factores de transcripción: Otro punto importante a señalar respecto a los factores
de transcripción se relaciona con sus mecanismos de regulación, lo que contribuye a la regulación
de la expresión génica. Un mecanismo importante de regulación es la modificación covalente del
factor, fundamentalmente la fosforilación. Esta modificación puede modificar la localización
subcelular del mismo, variar su estabilidad, su interacción con el ADN. Un ejemplo de factor de
transcripción regulado por fosforilación es FOXO1, que puede ser fosforilado por diferentes
quinasas en distintos sitios y con efectos diferentes. Por ejemplo, en ciertos tejidos el factor de
transcripción FOXO1 se fosforila por PKA en residuos específicos y FOXO1 fosforilado se transloca
al núcleo para dirigir la expresión de genes específicos.
Enzimas claves de la gluconeogénesis como la fosfoenol piruvato carboxiquinasa (PEPCK) y
la glucosa 6 fosfatasa se inducen por la hormona glucagón, mediante la activación de factores de
transcripción claves como el factor CREB (cAMP Response Element Binding protein). El glucagon se
une a su receptor 7TMS asociado a Gs y activa la enzima adenilil ciclasa que incrementa los niveles
de AMPc. Estos eventos llevan a activación de la proteína quinasa A (PKA) y la subsecuente
fosforilación de CREB en un sitio específico (serina 133) y su activación. Este evento de
fosforilación lleva también al reclutamiento de una histona acetil transferasa (CBP/p300) en la
región promotora cuya actividad también contribuye a la activación del promotor.
FOXO1 también juega un papel importante en la regulación de la gluconeogénesis, cuando
los niveles de glucagón están elevados y está favorecida la fosforilación de FOXO1 por PKA. La
insulina promueve a la activación de AKT y ésta también fosforila a FOXO1 en sitios específicos que
determinan la exclusión nuclear de FOXO1 con lo cual se detiene la expresión de genes que
codifican enzimas de la gluconeogénesis cuando los niveles de insulina se elevan.
Las quinasas PKC, AKT, MAPK fosforilan y regulan la actividad de factores de transcripción
como AP-1, ELK-1, sp1, Smad. El factor de transcripción ELK-1 se regula, en parte, por fosforilación
catalizada por la MAPK del grupo ERK e interviene en la expresión de genes, por ejemplo aquellos
que participan en la proliferación celular y la angiogénesis. La actividad del factor CREB también
depende de los niveles de Ca, que promueve la activación de PKC y la consecuente fosforilación y
activación de CREB.

1- INICIACION Y ELONGACIÓN: La enzima ARN polimerasa II no es capaz de iniciar la transcripción

por sí sola, sino que es absolutamente dependiente de factores de transcripción auxiliares,
denominados TFIIX (por Transcription Factor RNA pol II, donde la "X" es la letra concreta que
identifica a cada uno de los distintos factores individuales). Los factores de transcripción se unen
primero a una secuencia específica del ADN, y luego se unen entre ellos y a la ARN polimerasa. La
enzima, junto con estos factores, forma el complejo o aparato transcripcional basal o mínimo
necesario para la transcripción a partir de cualquier promotor de clase II (promotor asociado a la
ARN polimerasa II). Uno de los primeros eventos es la unión del factor TFIID a la caja TATA, a
continuación se produce la unión consecutiva de los factores TFIIA y TFIIB a la misma secuencia.
Estos eventos llevan al reclutamiento de polimerasa II unida a TFIIF. A continuación se une al
complejo TFIIE y de TFIIH y se forma el complejo cerrado de transcripción. El factor TFIIH es clave
en la transcripción, porque cumple diferentes funciones: abre la doble hélice (helicasa), fosforila al
dominio CTD1 de RPB1(tiene actividad de quinasa), promueve la separación de la ARN polimerasa
del promotor para iniciar la transcripción y desplazarse por el ADN. En síntesis: al iniciar la
transcripción el CTD1 está desfosforilado, luego se unen los distintos factores según mencionamos
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y se produce la apertura de la doble hélice, con lo cual se inicia la polimerización. Inmediatamente
RPB1 fosforila a CTD1 y se inicia la elongación del mensajero naciente.
Los eventos que ocurren en la transcripción en eucariotas pueden ordenarse en forma
aproximada, de la siguiente manera: 1-Modificación de las histonas, 2-unión de los activadores a
enhancers y de factores de transcripción a los promotores, 3-unión de la polimerasa unida al
factor TFIIF al complejo de activadores y factores, 4-formación del complejo cerrado, 5-apertura
de la doble hélice, 6-inicio de la elongación.

2-TERMINACIÓN: Los eventos que intervienen en la terminación de la transcripción en eucariotas

no están totalmente caracterizados. En algunos transcriptos existe la estructura en horquilla,
similar a lo descrito para la transcripción en procariotas como mecanismo de terminación.

MADURACIÓN DEL ARN

Algunas de las moléculas de ARN procariotas y la totalidad de las eucariotas recién

sintetizadas, denominados transcriptos primarios, experimentan una serie de modificaciones o
cambios que en conjunto se conocen con el nombre de maduración del ARN. A estos eventos se
los denomina procesos postranscripcionales y, en eucariotas, ocurren antes que ARN salga del
núcleo. Los transcriptos primarios de los ARNm y ARNt son los que experimentan más
modificaciones. Algunas de las reacciones que participan en la maduración del ARN son la
eliminación de nucléotidos, modificación de las bases, adición de
nucléotidos y remoción de secuencias de ARN.
El ARNt se modifica por corte de secuencias adicionales localizadas en los dos extremos, 3’
y 5’. Además, el ARNt se modifica por adición de la secuencia CCA en el extremo 3’. Esta
modificación es importante para que el ARNt acepte aminoácidos en la síntesis de proteínas. Este
tipo de ARN también se modifica mediante la modificación química tanto de la ribosa como de la
base.

MODIFICACIONES DEL ARNm

Participación de la ARN polimerasa II en el reclutamiento de enzimas que participan en la

maduración del ARNm: Las enzimas que participan en esas reacciones son reclutadas por la ARN
polimerasa II, más precisamente por el dominio C termina de la subunidad mayor de la
polimerasa, dominio que se mencionó al referirnos a la iniciación y elongación en eucariotas.
Cuando el transcripto ha alcanzado un tamaño de aproximadamente 25 nucleótidos, el dominio
CDT1 de la subunidad mayor se encuentra fosforilado y en esta forma recluta enzimas responsable
de las modificaciones en el mensajero, como la síntesis del casquete, los procesos de corte y
empalme y la poliadenilación. Por tal motivo estos procesos se consideran cotranscripcionales.
Poliadenilación: La ARN polimerasa II continúa elongando el ARN hasta que encuentra una señal
de poliadenilación (AAUAAA). En este punto la actividad de ARN polimerasa recluta enzimas de
corte y poliadenilación que catalizan el corte de una secuencia en el extremo del ARNm precursor
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y el agregado de una cola poli A (cola formada por nucleótidos de adenina) en el extremo 3’ del
mensajero. Esta cola poli(A) es importante para la exportación nuclear y la estabilidad del ARNm.

Síntesis del casquete: El casquete es un resto 7-metil guanosina unido al extremo 5’ del mensajero
a través de la unión 5’ –5’ trifosfato. Esta estructura se llama “caperuza” o CAP. El proceso
mediante el cual se agrega esta estructura se denomina capping, e incluye varios pasos. El
agregado del grupo metilo en la posición 7 de la guanosina se produce después que ésta se unió al
mensajero formando la unión trifosfato.
Esta estructura que se agrega al extremo 5’ protege al ARNm de la degradación. Es
importante notar que la unión de nucleótidos en la síntesis del ARN se realiza mediante la reacción
del hidroxilo del extremo 3’ con el grupo fosfato del extremo 5’ del siguiente. La adición del CAP es
una excepción, ya que se produce la unión de dos extremos 5’-fosfato.

Eliminación de intrones: En el ARN pre-mensajero o recién sintetizado, también llamado

transcripto primario, la información para la síntesis del producto proteico no está contenida como
una secuencia continua en la molécula de ARN, sino que se encuentran secuencias codificantes
interrumpidas por secuencias no codificantes. Estas secuencias no codificantes se denominan
intrones, y las secuencias codificantes, exones. Para obtener el ARNm funcional se deben eliminar
los intrones a través de un proceso que se denomina de corte y empalme o “splicing”,
permitiendo que los exones formen una secuencia ininterrumpida. A medida que el pre-mensajero
va saliendo del complejo de la polimerasa se le unen ribonucleoproteínas nucleares pequeñas
(small nuclear ribo nucleoproteins, snRNPs) que participan en los procesos de corte y empalme.
El proceso de corte y empalme está formado por un conjunto complejo de eventos
finamente articulados, en el caso en que ocurra una alteración en alguno de ellos se producirá un
ARNm no funcional. Se conoce que todos los intrones comienzan con el dinucleótido GU, de modo
que una mutación que altere esa secuencia ocasionará un error en el proceso de corte y empalme
que se traducirá en una proteína anómala y eventualmente en una enfermedad. Este es el caso de
las talasemias humanas, enfermedades en las que mutaciones en los sitios de corte y empalme
originan alteraciones en el corte y empalme del ARNm correspondiente a la beta-globina.
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CÁTEDRA 1 - MATERIA QUÍMICA BIOLÓGICA II - CICLO LECTIVO 2020

Corte y empalme alternativo: El empalme alternativo de un mensajero primario permite obtener

diferentes proteínas a partir de un único gen. A partir de ese gen se produce un único transcripto
primario que se modifica por cortes y empalmes diferentes y consecuentemente se originan
proteínas diferentes.

En algunos casos el empalme alternativo es tejido específico. Por ejemplo eso sucede con
el gen que codifica para la proteína tropomiosina, una proteína del aparato contráctil que se
expresa en los tres tipos de tejido muscular. En los tres tejidos se genera el mismo ARNm primario,
sin embargo éste se procesa por empalme alternativo de manera diferente en cada tipo muscular,
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originando diferentes variantes de ARNm maduro que se transcriben en proteínas diferentes
(isoformas de una misma proteína).
En algunos casos la pérdida de un exón en el empalme alternativo puede generar una
proteína anómala. Por ejemplo, por empalme alternativo puede eliminarse un exón que contiene
la información para la expresión de una secuencia aminoacídica que tiene importancia funcional
para ese proteína.
El gen DUSP6 codifica una fosfatasa dual que desfosforila a la MAP quinasa ERK en el
núcleo. Este gen genera un transcripto primario que por corte y empalme da origen al transcripto
1 o L (variante 1 o L) y por empalme alternativo origina el transcripto o variante 2 o S. La pérdida
del exón 2 en la variante S conlleva a cambios importantes en la función biológica de la proteína
que se transcribe, ya que ese exón contiene una secuencia vinculada con la actividad de fosfatasa
y una secuencia que señala localización en el núcleo. Por ejemplo la proteína S no se localiza en el
núcleo mientras que la variante L si lo hace, además proteína S no puede desfosforilar eficazmente
a ERK en el núcleo. En algunos tejidos prepondera la proteína producto de la variante L y se
detectan cantidades mínimas de la variante S , en otros tejidos esa relación se altera. Se investiga
actualmente si existe una vinculación entre el desarrollo de un proceso tumoral y una alteración
entre la relación L/S.