CARBOHIDRATOS Y PROTEÍNAS

Javier Leonardo Villamizar Sanabria

Sara María Espitia Rincón

Materiales II

Javier Uribe

PROGRAMA: Conservación y restauración del Patrimonio Cultural Mueble

FECHA: 12 de octubre de 2016.

 RESUMEN

En esta práctica se identificarán carbohidratos y proteínas, cada una dividida en

procedimientos determinados para analizar, en el caso de los carbohidratos:
identificación de polisacáridos (lugol) y reactivo de Molish. Para las proteínas:
fucsina ácida, negro de amida, reacción de Biuret y reacción xantoproteica. Las
observaciones realizadas se plasmarán en tablas de resultados con su respectivo
procedimiento. Posteriormente se realizará unas conclusiones que analicen los
aminoácidos presentes en diferentes materiales, los cuales permiten proyectar
tratamientos de conservación y restauración del Patrimonio cultural mueble.

1. Objetivo general

Identificar y analizar los aminoácidos presentes en materiales encontrados en

la conservación y restauración mediante una práctica de laboratorio que
permita observar por medio de procedimientos, una identificación de
carbohidratos y proteínas y en algunos casos, determinar el grupo estructural
para una reacción positiva y establecer proteínas con aminoácidos con anillos
aromáticos.

1.2. Objetivos específicos

1.2.1. Realizar la identificación de polisacáridos con lugol y observar
cada solución al calentarse y enfriarse.
1.2.2. Determinar si el color de la solución es reversible al calentarse y
vuelve al enfriarse.
1.2.3. Realizar el procedimiento de fucsina ácida y negro de amida para
determinar si hay presencia de proteínas en las muestras.
1.2.4. Determinar mediante la reacción de Biuret el grupo estructural
que deben contener las moléculas que dan positiva en la
reacción.
1.2.5. Determinar mediante la reacción xantoproteica las proteínas que
contienen aminoácidos con anillos aromáticos.
1.2.6. Observar el desarrollo del color en diferentes soluciones con el
reactivo de Molish para determinar carbohidratos.
1.2.7. Clasificar las observaciones realizadas en la práctica de reactivo
de Molisch en ensayos negativos o positivos.
 MATERIALES Y MÉTODOS

1. Identificación de polisacáridos

Para esta práctica se utilizaron 3 tubos de ensayo, pinzas para tubo y

mechero de Bunsen. En el primer tubo, se vertió 1ml de solución de
Almidón. Luego se le agregaron 2 gotas de solución de lugol.
Posteriormente se calentó hasta ebullición y se dejó enfriar. Los resultados
en cada paso fueron los siguientes:

Al agregar
Ebullición Enfriamiento
Lugol

Color violeta El color violeta oscuro prevalece. No Sigue la solución con el color
oscuro. cambia a un estado inicial respecto a violeta oscuro. No hay
la solución de almidón diferencias.

Solución de
Almidón y Lugol
 Al agregar Lugol Ebullición Enfriamiento

Color: con el lugol, se torna Color amarillo claro, Vuelve a su coloración inicial.
amarillo transparentoso. formación de burbujas

Solución de goma
arábiga y Lugol

Color café Formación de grumos en la Los grumos blancos en la

superficie, el color es superficie persisten. No hay un
transparente. retorno al color café.

Solución de
albúmina y Lugol

Se repitió el procedimiento con goma arábiga y albúmina. Los resultados

fueron:

2. Fucsina ácida y Negro de amida

 2.1. Para esta práctica se utilizaron láminas porta-objeto y goteros para la
fucsina y el Negro de amida. Se colocaron pedazos muy pequeños
de gelatina y colofonia en las láminas porta – objeto. Se le agregó a
cada muestra unas gotas de Fucsina ácida hasta cubrirlas. Luego de
30 minutos, se lavó cada solución con agua destilada hasta que
fueran incoloras. Los resultados después del tiempo establecido
fueron:

Solución Estado inicial Estado final

Transparente. Toma el color de la Fucsina (rojo).

Gelatina y Fucsina ácida

Amarillo oscuro Se disuelve medianamente; el color

se oscurece levemente.

Colofonia y Fucsina ácida

2.2. Para la práctica del Negro de amida, se colocó un pedazo pequeño

de gelatina en una lámina porta-objeto. Luego se agregó a la
 muestra unas gotas de Negro de Amida (NA II) hasta cubrirlo.
Después de 10 minutos se lavó la solución con agua destilada hasta
que fuera incolora. Se repitió el procedimiento con un pedazo
pequeño de colofonia. Los resultados fueron los siguientes:

Solución Estado inicial Estado final

Transparente. Capa delgada que toma el color

azul oscuro.

Gelatina y Negro de Amida

Amarillo oscuro. Pierde un poco el color. Sin

embargo, no hay cambios
relevantes.

Colofonia y Negro de
Amida

3. Reacción de Biuret

Para esta práctica se utilizaron 5 tubos de ensayo, NaOH al 10% y CuSO 4 al 10%.
En un tubo de ensayo se agregó 1 ml de albúmina de huevo. Luego se colocaron
1 ml de NaOH al 10% y una gota de CuSO 4 al 10%. Se anotaron las
 observaciones. El procedimiento se realizó igual para trozos de gelatina, colofonia,
lana y algodón. Para determinar qué grupo estructural debe contener las
moléculas que dieron positiva la reacción, se tuvieron en cuenta los siguientes

Muestra Reacción de Biuret Descripción

Albúmina Presenta un color morado.

La reacción es positiva.

Gelatina No se disuelve completamente el

CuSO 4. Gelatina disuelta
completamente. Color morado más
claro que la muestra anterior.

La reacción es positiva.

Colofonia Presenta un color amarillo verdoso.

La reacción es negativa.
 Absorbe el color del CuSO 4, por
Lana
tanto, la lana se tintura de un color
azul rey.

La reacción es negativa.

Algodón Se torna en un color azul claro. El

algodón se expande y se forma una
masa de color, aunque quedan
grumos de CuSO 4.

La reacción es negativa.

4. Reacción xantoproteica

Para esta práctica se utilizaron 3 tubos de ensayo y HNO3. En un tubo de

ensayo, se mezcló 1 ml de albúmina de huevo con 1 ml de HNO3 concentrado.
Se realizó el mismo procedimiento con trozos de gelatina y lana natural. Para
determinar cuáles proteínas contienen aminoácidos con anillos aromáticos, se
consignaron los datos siguientes:

Muestra Reacción xantoproteica Descripción

 Amarillo leve y lechoso,
Albúmina de huevo espuma en la superficie.

Gelatina Color amarillo, solución

espesa, la gelatina no se
disuelve completamente.

Lana natural La lana se expande. El color

es amarillo muy leve, más
transparente.

5. Reactivo de Molisch.
Para esta práctica se utilizaron 5 tubos de ensayo con las respectivas
muestras y 5 con ácido sulfúrico concentrado y aparte el reactivo de
Molisch. Por seguridad, el profesor a cargo realizó esta prueba con glucosa,
sacarosa, almidón, goma arábiga y glicerina. En un tubo de ensayo se
disuelve 100 mg de Glucosa en 1 ml de agua más 2 gotas del reactivo de
Molisch. En otro tubo de ensayo seco, se colocó 1 ml de Ácido sulfúrico
concentrado. Inclinando un poco el tubo se agregó lentamente la solución
anterior por las paredes del tubo, de tal manera que quedara encima del
ácido sin agitar. Se realizó el mismo procedimiento para las demás
soluciones. Las observaciones fueron las siguientes:
 Solución Descripción
Glucosa Presenta una separación no tan notoria de
capas, por una banda ancha blanca.
Sacarosa Presenta coloración amarilla tenue. No hay
separación.
Almidón Se presenta una separación de capas en
tres niveles: transparente, lechosa,
transparente, desde la inferior a la superior.
Goma arábiga Separación de capas: rosada tenue y
blanca.
Glicerina Separación de capas en tres niveles, del
inferior al superior: transparente, anillo
blanco, superficie rosada.

Cabe aclarar que, en el anterior procedimiento, el reactivo no estaba bien

preparado, así que se podría notificar que en la separación de capas hubo una
reacción positiva. Según las aclaraciones del docente y los recursos bibliográficos
encontrados, la glucosa, sacarosa y almidón debieron tener un anillo violeta en la
interface de dos capas, lo cual determina que son carbohidratos [ CITATION Bio14 \l
9226 ].

6. CONCLUSIONES Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

 En la primera práctica de identificación de polisacáridos con el lugol, se

aclara que hubo un cambio notorio y positivo al calentarse en las muestras
de goma arábiga y albúmina, ya que, volvieron a una coloración inicial,
Mientras que el almidón, que alteró la absorción lumínica y no fue reversible
luego de la ebullición, posiblemente por la concentración del lugol.

 En la prueba de Fucsina ácida, la gelatina dio cuenta de la presencia de

proteínas, mientras que la colofonia sólo se oscureció levemente.

 Para la prueba de Negro de amida, la gelatina tiñe de color azul mientras

que la colofonia no. Es evidente la presencia de proteínas en la gelatina.
 En la reacción de Biuret, la reacción es positiva si el compuesto torna a un
color violeta, de lo contrario, se determina que no hay presencia de
proteínas. La coloración violeta da cuenta de que la albúmina y la gelatina,
tienen dos o más enlaces peptídicos, que, según la teoría, el color violeta
se debe a la formación de un complejo de coordinación entre los iones
Cu2+ y los pares no compartidos del Nitrógeno que forma parte de los
enlaces peptídicos [ CITATION Catna \l 9226 ].

 En la reacción xantoprotéica, las reacciones positivas fueron la albúmina de

huevo y la gelatina, aunque la lana presentó una coloración muy débil de
amarillo, se puede determinar que, en la albúmina y la gelatina, hay
presencia más diciente de proteínas que contienen aminoácidos con anillos
aromáticos como la Tirosina, triptófano y fenil alanina.

 Para la identificación de carbohidratos con el reactivo de Molisch, ya dando

cuenta de un soporte teórico, se concluye que, si hubo formaciones de
capas en algunas soluciones, tales como la glucosa, almidón, goma arábiga
y glicerina. Sin embargo, quedó pendiente la verificación de las reacciones,
ya que, por aclaración del docente, el reactivo estaba mal preparado. Cabe
resaltar que la glicerina mostró una separación de capas más contundente,
y con eso se da veracidad a las consideraciones dadas en la guía de
laboratorio, que algunos Glicoles, gliceroles y polialcoholes, pueden dar un
ensayo positivo.