Preparación y observación de células sanguíneas. Practica #2.

Presentado el 15 de mayo de 2019

PRÁCTICA #2

Sofía Bedoya Flórez, Yulissa Durango Mendoza, María Moreno Álvarez, José Francisco Espitia,
Day Rubio Burgos.

Universidad de Córdoba
Facultad de Ciencias Básicas
Biología
Montería
2019

Presentado a: Karina Susana Pastor Sierra.

Docente Biología Celular, Universidad de Córdoba.
Fecha de entrega del informe: 15 de mayo de 2019

RESUMEN: La práctica del laboratorio de biología celular, consistió en la observación de células

sanguíneas, mediante los distintos métodos de tinción celular, (wright, giemsa y hematoxilina).
Procedimientos que se llevaron a cabo teniendo en cuenta las indicaciones de la guía.

1. OBJETIVO células que están principalmente en la sangre

 Observar el tejido sanguíneo e identificar
las diferentes células, mediante las
diferentes técnicas de coloración.
2. INTRODUCCIÓN.
y circulan por ella con la función de combatir
las infecciones o cuerpos extraños; pero en
ocasiones pueden atacar los tejidos normales
del propio cuerpo. Es una parte de las
defensas inmunitarias del cuerpo humano.

La sangre es un tipo de tejido conjuntivo
especializado, con una matriz coloidal liquida
de constitución compleja., cuya función tiene
que ver con el transporte de oxigeno dióxido
de carbono, distribución de hormonas por
medio de su efecto buffer, y control de la
temperatura corporal. Tiene una fase solida
(que incluye glóbulos rojos, glóbulos rojos y
plaquetas) y una fase liquida, representada
por un plasma sanguíneo.
Los glóbulos rojos o eritrocitos son las
células sanguíneas que contienen en su
interior la hemoglobina, cuya función
principal está relacionada con el transporte de
oxígeno a las células y tejidos del cuerpo.
En el presente informe observaremos las
diferentes clases de tinción en las células
sanguíneas.
3. MARCO TEORICO.
Las células sanguíneas forman un 40% de la
sangre y existen tres tipos: leucocitos,
eritrocitos y plaquetas. Los leucocitos son
Se llaman glóbulos blancos ya que este color
es su aspecto al microscopio. Hay diferentes
grupos de glóbulos blancos: los llamados
polinucleares (neutrófilos, eosinófilos y los
basófilos) y los mononucleares (los linfocitos
y los monocitos). El origen de todas las
formas de leucocitos es a partir de las células
madres de la medula ósea.
Los glóbulos rojos son las células sanguíneas
que contienen en su interior la hemoglobina.
Los glóbulos rojos son los principales
portadores de oxígeno a las células y tejidos
del cuerpo.
Tienen una forma bicóncava para adaptarse a
una mayor superficie de intercambio de
oxigeno por dióxido de carbono en los
tejidos.
La hemoglobina es una proteína que contiene
hierro lo que le da el color rojo a la sangre,
por ello el nombre de los glóbulos rojos o
Eritrocitos: eritro: rojo + Citos: (células).
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Las plaquetas son células de sangre
producidas por megacariocitos en la medula
ósea mediante el proceso de fermentación
citoplasmática, circulan por la sangre y tienen
un papel muy importante en la coagulación.
Son los componentes celulares más pequeños
de la sangre.
4. MATERIALES Y REACTIVOS.
1.5 se lavó con agua destilada durante 5
minutos, dejando la placa inclinada hasta
eliminar el exceso de colorante, se colocó la
placa sobre un papel filtro y se dejó secar al
aire libre.
1.6 se observó en el microscopio a 400
aumento y luego con el objetivo de

 Microscopios
 Portaobjetos
 Cubreobjetos
 Lanceta Estéril
 Algodón
 Alcohol
 Guantes de látex
 Goteros
inmersión.
 Puente de coloración
 Colorante Giemsa Figura 1. Muestra con Giemsa
 Colorante de Wright
 Eosinato de azul de metileno 2.Tecnica de Wrigth
 Agua destilada
2.1 se rotulo un portaobjeto luego se realizó
 Aceite de inmersión
un frotis sanguíneo, se depositó una gota de
 Papel filtro sangre en un extremo del portaobjeto, y con
 Alcohol metílico absoluto. ayuda de otro portaobjeto, se realizó un
extendido de la muestra deslizando
5. PROCEDIMIENTOS suavemente el portaobjeto hacia el otro
1.Tecnica de Giemsa extremo y se dejó secar al aire libre.

1.1 se rotulo un portaobjeto luego se realizó
un frotis sanguíneo, se depositó una gota de
sangre en un extremo del portaobjeto, y con
ayuda de otro portaobjeto, se realizó un
extendido de la muestra deslizando
suavemente el portaobjeto hacia el otro
extremo y se dejó secar al aire libre.
2.2 se cubrió la preparación con colorante de
wright y se dejó actuar por 5 minutos.
2.3 se lavó con agua destilada hasta que
desapareció la coloración, se colocó la placa
sobre un papel filtro, se dejó secar al aire
libre y se observó en el microscopio.

1.2 se realizó la fijación de la muestra

introduciendo la laminilla con el frotis en un
frasco que contenía alcohol metílico absoluto,
se dejó durante 10 minutos.

1.3 se colocó la laminilla en un el puente de

coloración y se adiciono eosinato azul de
metileno y se dejó de 5 a 15 minutos.

1.4 sin lavar, se adiciono colorante Giemsa y

se dejó de 7 a 30 minutos. Figura 2. Muestras con colorante Wright
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3.Tecnica con Hematoxilina
3.1 se rotulo un portaobjeto luego se realizo
un frotis sanguíneo, se deposito una gota de
sangre en un extremo del portaobjeto, y con
ayuda de otro portaobjeto, se realizó un
extendido de la muestra deslizando
suavemente el portaobjeto hacia el otro
extremo y se dejó secar al aire libre.
3.2 se colocó el frotis de sangre sobre la
cubeta de tinción y se añadió unas gotas de
alcohol absoluto y se dejó evaporar el alcohol
para que la preparación se fijara.
3.3 se cubrió con unas gotas de hematoxilina
y se dejó actuar durante 15 minutos
3.4 se le adiciono más liquido evitando así la
desecación del colorante.
3.5 se lavó la preparación y se añadió unas
gotas de eosina y se dejó actuar por un
minuto.
3.6 se volvió a lavar hasta que no quedaran
restos de colorante.
3.7 se dejó secar aireando al portaobjeto y se
observó al microscopio.
Figura 3. Muestra con hematoxilina
6. DATOS OBTENIDOS
En la práctica realizada de tinción de células
sanguíneas que se llevó acabo se utilizando
tres diferentes técnicas de tinción para
observar las células de la sangre
detalladamente núcleo, leucocitos glóbulos
blancos entre otros, para ver las células se
tomó una lanceta estelarizada donde se tomó
el dedo de un compañero pinchando el dedo
para tomar la muestra de sangre y ponerla en
tres distintas laminas, para la tinción de
Wright se agregó de diez a quince gotas de
agua destilada, después se le agrego el
colorante de Wright y se dejó secar por cinco
minutos para después ser lavado con agua
destilada para fin dejarlo secar unos minutos
para ser observado en el microscopio a 40x y
a 100x con aceite de inmersión donde se
logró identificar neutrófilos, eritrocitos, en la
otra técnica empleada de tinción con
hematoxilina se tomó una lámina con muestra
de sangre se le agrego alcohol absoluto y se
dejó que se evaporara esto hace que los
colorantes se fijen con más efectividad en las
células, después esperar que alcohol
evaporara se le adiciono el colorante
hematoxilina y se dejó secar durante quince
minutos para evitar desecación del colorante
se le agrego más liquido después de unos
minutos sé que se secara se llevó al
microscopio y se observó el resultado no era
el esperado ya que el colorante era viejo y no
coloreo bien y se lograron observar los
disintió leucocitos , y la última técnica fue la
de May-Grünwald-Giemsa se tomó la última
lamina y se le agrego alcohol metílico durante
diez minutos esto para que la tinción sea más
concisa, después se le agrego azul de
metileno y se dejó secar durante cinco a diez
minutos, si dejar secar se le agrega el
colorante Giemsa y se dejó secar por treinta
minutos o menos, después se lavó con agua
destilada se procedió a secarse para observar
la muestra en 40x se observó los glóbulos
blancos, los resultados de las observaciones
fueron los esperados pero algunos colorantes
por el tiempo que tiene no dieron una tinción
adecuada.
7. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE LOS
RESULTADOS
Tomamos una lanceta estéril y pinchamos
a un compañero, después agregamos una
gota de la muestra sanguínea a un
portaobjetos, con otro portaobjetos
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realizamos un esparcido rápido para así
obtener una muestra delgada, dejamos
secar a temperatura ambiente, luego
agregamos colorante de Wright dejando
actuar por 5 minutos, pasados los 5
minutos lavamos con agua destilada hasta
retirar el exceso de colorante, dejamos
secar a temperatura ambiente, luego de
haberse secado la muestra, observamos a
través del microscopio a 40X y 100X con
aceite de inmersión.
Mediante la utilización de esta técnica y
con el objetivo de 40X logramos observar
un gran número de eritrocitos los cuales
se pueden ver con una forma oval plana
carentes de núcleo. Estos son los
encargados del transporte de O2 y CO2
por toda la célula y los tejidos del cuerpo.
Observamos un glóbulo blanco
(Neutrófilo) que posee un núcleo
alargado. Logramos observar la presencia
de glóbulos blancos no granulados
(linfocitos), estos poseen núcleo y ocupa
casi la totalidad de volumen celular.
Con la técnica de coloración Wright
logramos observar un gran número de
eritrocitos que se encuentran presentes en
nuestra sangre, al igual que varios
glóbulos blancos que ayudan a nuestro
cuerpo a estar libre de microorganismos
patógenos. Nos dimos cuenta que en los
eritrocitos no se encuentra núcleo, esto
debido a que al no poseer uno, pueden
contener más hemoglobina. Gracias al
colorante de Wright los núcleos se
pueden ver al momento en que estos se
tiñen de morado.
8. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS.
1) Describa el fundamento de cada una
de las técnicas empleadas en laboratorio
R/ Técnica de May Grünwald: Usada en
hematología, la tinción de May Grünwald
permite la diferenciación de las distintas
células sanguíneas. Así, permite revelar,
eritrocitos, basófilos, eosinófilos,
polimorfonucleares, linfocitos y plaquetas.
La solución de May Grünwald tiñe los
elementos acidófilos y las granulaciones
neutrófilas de los leucocitos.
Técnica de Wright. La tinción de Wright
es una tinción de tipo Romanowsky.
Una tinción de Romanowsky consiste en
azul de metileno y sus productos de
oxidación, así como eosina Y o eosina B.
La acción combinada de estos colorantes
produce el efecto Romanowsky que da
una coloración púrpura a los núcleos de
los leucocitos y a los gránulos
neutrofílicos y da color rosado a los
eritrocitos. Los componentes de este
efecto son el azul B y la eosina Y.
Las propiedades de tinción de
Romanowsky dependen del enlace de los
colorantes a las estructuras químicas y de
las interacciones del azul B y la eosina Y.
Los agrupamientos de ácidos nucleicos,
las proteínas de los núcleos celulares y el
citoplasma inmaduro reactivo, fijan el azul
B, colorante básico
La eosina Y, colorante ácido, se fija a los
agrupamientos básicos de las moléculas de
hemoglobina y a las proteínas básicas.
Técnica con hematoxilina: la hematoxilina
es una sal neutra, suele ser denominada
como un colorante básico, ya que el
componente cromógeno reside en el
complejo catiónico "básico” dela misma.
Es de notar que la tinción histológica por
hematoxilina no indica tanto laconstituci!n
química de los componentes celulares,
sino la densidad de cargas eléctricas
negativas de los mismos. La mayoría de
las células y matrices extracelulares no
poseen un color propio por lo que su
observación directa al microscopio óptico
no permite observar sus características
morfológicas. Para poder observarlos se
emplean colorantes, sustancias dotadas de
color que se unen de manera específica a
determinadas estructuras del tejido
2) Escriba el color de los núcleos de los
leucocitos con cada una de las técnicas
empleadas.
R/ Técnica May-Grünwald-Giemsa: en lo
observado el núcleo tenía un color azul
oscuro, los leucocitos se observaban de un
color azul con morado
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Técnica de Wright: en esta técnica
empleada el núcleo tomo color de un
violeta azulado sobresaliendo y los
leucocitos un azul menos fuerte
Técnica con hematoxilina: en esta técnica
los núcleos de un color amarillo claro y
leucocitos de un amarillo más oscuro
3) Explique ¿Qué tipo de técnica de
colorante empleo?
Se emplearon tres tipos de técnicas ya
vistas, las May-Grünwald-Giemsa: es
técnica de tinción utiliza dos tipos de
coloración May Grünwald y Giemsa, una
vez teñido y puesto en observación con el
microscopio se puede diferenciar el
núcleo, citoplasma, eritrocitos,
También se empleó la técnica de Wright
La tinción de Wright es un tipo de tinción
usada en histología para facilitar la
diferenciación de los tipos de células de la
sangre. Se usa principalmente para teñir
frotis de sangre y punciones medulares,
para ser examinadas al microscopio al
igual que la tinción de Giemsa.
Técnica con hematoxilina Se utiliza en
histología para teñir los componentes
anicónicos (ácidos) de los tejidos, a los
que da una coloración violeta. Tiñe
intensamente los núcleos de las células,
dado que estos contienen ácidos nucleicos
ricos en radicales ácidos.
4) ¿Cuál es la razón por la cual durante
una infección se incrementa el número de
leucocitos en la sangre?
R/ Cuando tenemos la gripe, el cuerpo
aumenta la producción de glóbulos
blancos para combatir los virus y bacterias
del organismo. Y así lo mismo cuando
entra alguna infección en el cuerpo
5) ¿Qué tipo de células sanguíneas están
más implicadas en la inmunidad del
organismo?
R/ todas las células encargadas de la
inmunidad son las células sanguíneas que
en ellas se encuentran:
Los leucocitos: se forman a partir de
células madre hematopoyéticas, un tipo de
células multipotenciales de la médula ósea
a partir de las cuales se desarrollan los
elementos formes de la sangre, lo que
incluye a leucocitos, eritrocitos y
plaquetas. Al compartir este origen, los
leucocitos se incluyen dentro del grupo de
las células sanguíneas, aunque muchos
migran a otros tejidos y pasan buena parte
de su ciclo vital fuera de la sangre.
Mielodes: son los monocitos, neutrófilos,
eosinófilos, basófilos y los conocidos
como leucocitos fijos, que abandonan la
circulación y migran a los tejidos para
ejercer allí su acción de forma localizada;
ejemplos de leucocitos fijos son las células
dendríticas, los mastocitos y las
microglias.
Linfoides: son los linfocitos B, los
linfocitos T y las conocidas como células
linfoides innatas.
Leucocitos mieloides: El linaje mieloide
de la hematopoyesis da lugar a los
monocitos y al grupo conocido como
granulocitos, que son los neutrófilos, los
eosinófilos y los basófilos. El linaje
mieloide es compartido también por los
eritrocitos y las plaquetas.
Los granulocitos: son leucocitos que
presentan numerosos gránulos en su
citoplasma, de ahí su nombre. También se
conocen como leucocitos
polimorfonucleares, o PMN, debido a las
diversas formas que puede adoptar su
núcleo.
Lo neutrófilos: se caracterizan
morfológicamente por un núcleo
multilobulado. Su citoplasma no se tiñe
fácilmente ni con colorantes ácidos ni con
colorantes básicos, por lo que se suelen
observar ligeramente coloreados o casi
transparentes.
La principal función de los neutrófilos es
la fagocitosis. Pueden atrapar sustancias y
cuerpos externos e introducirlos en el
citoplasma dentro de una vesícula. Esta
vesícula, el fagosoma, se fusiona con otro
tipo de vesículas, los lisosomas, que
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contienen enzimas capaces de degradar el
elemento fagocitado.
Los eosinófilos: presentan un núcleo
característicamente bi-lobulado, en
ocasiones tri-lobulado, y su citoplasma se
tiñe fácilmente con colorantes de carácter
ácido, como la eosina.
Los basófilos: se caracterizan por
colorearse fácilmente con colorantes
básicos, tales como la hematoxilina. Son
el tipo de leucocitos menos abundantes en
la circulación sanguínea.
Monocitos y macrófagos
Los monocitos son células fagocíticas,
como los neutrófilos, pero son más
longevos. Abandonan el torrente
circulatorio y se establecen en tejidos
repartidos por el todo el cuerpo, dónde se
diferencian en macrófagos, unas de las
células fagocíticas más importantes del
sistema inmune.
Leucocitos linfoides
Del linaje linfoide, el otro gran linaje de
leucocitos, se desarrollan los linfocitos.
Existen tres grandes poblaciones de
linfocitos: los linfocitos o células B, los
linfocitos o células T, y las conocidas
como células linfoides innatas. Los
linfocitos B y T desencadenan una
respuesta inmune específica, mientras que
los linfocitos innatos producen una
respuesta inespecífica
Células linfoides innatas
Las células linfoides innatas son linfocitos
cuya respuesta no es específica, y por ello
carecen de receptores B y de receptores T.
Existen subpoblaciones con diferentes
funciones fisiológicas, entre ellas
funciones reguladoras, parecidas a las de
los linfocitos T Helpers, y otras más
parecidas a los linfocitos T citotóxicos,
como las células Natural Killer.
6) ¿Cuáles células de la sangre son las
primeras en atacar las bacterias en una
infección?
R/ Una manera que tiene el organismo de
defenderse contra las infecciones es el
aumento en el número de ciertos tipos de
glóbulos blancos (neutrófilos y
monocitos), que se encargan de fagocitar
(ingerir) y destruir los microorganismos
que invaden el cuerpo. Dicho incremento
puede producirse en unas pocas horas, en
gran medida por la liberación de glóbulos
blancos desde la médula ósea, donde se
fabrican. El número de neutrófilos en la
sangre aumenta primero. Si la infección
persiste, la cantidad de monocitos
aumenta. La sangre lleva los glóbulos
blancos (leucocitos) a la zona de la
infección. El número de eosinófilos, otro
tipo de glóbulos blancos (leucocitos),
aumentan de manera característica en las
reacciones alérgicas y en algunas
infestaciones parasitarias, pero
habitualmente no lo hacen en las
infecciones bacterianas. Sin embargo,
ciertas infecciones como la fiebre tifoidea,
las infecciones víricas y las infecciones
bacterianas que superan el sistema
inmunitario, pueden producir una
disminución en el número de glóbulos
blancos (leucocitos).
7) ¿Por qué los eritrocitos no poseen
núcleo? ¿Cuál es el contenido del
eritrocito que se combina fácilmente con
el 02 y CO2?
R/ -Perder el núcleo permite al glóbulo
rojo contener más hemoglobina oxígeno-
que lleva, así permitiendo a más oxígeno
ser transportado en la sangre y reforzando
nuestro metabolismo.
- El oxígeno que se encuentra diluido en el
plasma sanguíneo no es suficiente para
cumplir con las exigentes demandas de la
célula, por esta razón debe existir en ente
encargado de transportarlo. La
hemoglobina es una molécula de
naturaleza proteica y es el transportador de
oxígeno por excelencia. La función más
importante de los eritrocitos es albergar a
la hemoglobina en su interior para
asegurar el suministro de oxígeno a todos
los tejidos y órganos del cuerpo, gracias al
transporte y al intercambio de oxígeno y
dióxido de carbono. El proceso
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mencionado no requiere de gasto

energético
8) ¿Por qué cree usted que el hombre
tiene un número mayor de eritrocitos por
mm2 de sangre que la mujer?
R/ porque en las mujeres los valores van
disminuyendo debido a las dietas, a las
hemorragias (menstruación).
•Hombre: de 4.7 a 6.1 millones de células
por microlitro (células/mcL)
•Mujer: de 4.2 a 5.4 millones de
células/mcL

9) ¿para qué otro tipo de células se

pueden emplear las técnicas anteriores
señaladas?
R/ Se utiliza para el diagnóstico de virus
como:

 La hematoxilina tiñe células con

cargas acidas que contienen en el núcleo, (
basófilas)
 La tinción con Wright se puede
emplear para ver las células sanguíneas, el
glóbulo blanco también se usa para teñir
cromosomas, tejidos, y detectar
enfermedades.

9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.

 docsity. (n.d.). Preparación y observación

de células sanguíneas,. [online] Available
at:https://www.docsity.com/es/preparacion
-y-observacion-de-celulas-
sanguineas/4121113/ [Accessed 15 May
2019].