EL LABORATORIO EN LAS

ENFERMEDADES
OSTEOARTICULARES

Dra. Lucia Ruggieri

Módulo Osteoarticular
PBE 1 -2019
 EL LABORATORIO EN LAS ENFERMEDADES
OSTEOARTICULARES
• Diagnóstico, dentro del contexto clínico: ANA +,
poliartritis, serositis, alopecia
• Seguimiento y evaluación de la actividad de la enfermedad:
PCR en AR, Anti DNA en LES
• Decidir el tratamiento:Anti DNA positivo e
hipocomplementemia en LES
• Contribuye a confirmar o negar la impresión clínica: Anti
CCP
• Determinar el pronóstico de la enfermedad: SAF triple
positivo (Anticardiolipinas +, anti B2 glicop.+ e inhibidor
lúpico+)
 Laboratorio en Enfermedades OART
• Hemograma
• Enzimas y función hepática
• Enzimas musculares,
• Función renal, orina
• Uricemia, uricosuria
• Calcemia, fosfatemia, magnesemia, calciuria, fosfaturia, FAL.
• Reactantes de Fase Aguda
• Autoanticuerpos
 REACTANTES DE FASE AGUDA

• Acompañan la inflamación, tanto aguda como

crónica
• Pueden estar presentes en diversas
enfermedades:
• Infección
• Enfermedades inflamatorias no infecciosas
• Neoplasias
• Trauma o infarto
• Enfermedades autoinmunes
 REACTANTES DE FASE AGUDA
• Proteínas cuya concentración aumenta (PFA positivas)
o disminuyen (PFA negativas) al menos un 25%
durante los estados inflamatorios.
• A pesar de su denominación también aparecen en
procesos crónicos (infecciones ,E.Autoinmunes,
Neoplasias)
• Los cambios reflejan su producción en el hepatocito
• Los RFA evidencian la presencia de procesos
inflamatorios y la intensidad de los mismos
 REACTANTES DE FASE AGUDA

• PFA +:
PCR, Proteína amiloide A del suero, fibrinógeno, ferritina,
haptoglobina, ceruloplasmina, componentes del complemento,
alfa 1 Antitripsina

• PFA -:
Albúmina y transferrina.
 REACTANTES DE FASE AGUDA: inducción por
citoquinas
• Cambios en las PFA provienen del efecto sobre el
hígado de citoquinas producidas en la inflamación,
principalmente por macrófagos y monocitos
• IL1 Beta
• IL6 (principal inductor de respuestas de fase aguda PCR)
• TNF alfa
• IFN gamma
• TGF Beta
• IL8
REACTANTES DE FASE AGUDA

 Defensas del huésped: reconocimiento y eliminación de

patógenos(PCR y SAA se ligan a paredes microbianas,opsoninas:
complemento)

Eliminación de células necróticas: ligan cromatina

 Inhibidoras de proteinasas de serina: limitan el daño tisular por

enzimas proteolíticas y metabolitos de oxígeno (alpha-1
antitrypsin and alpha-1-antichymotrypsin )

Las transportadoras con actividad antioxidante: limitan la

reacción inflamatoria y el daño de especies reactivas de oxígeno
o anión superóxido(antiinflamatorias: alfa 1 antitripsina y alfa 1
quimiotripsina)
 REACTANTES DE FASE AGUDA:

• Efectos deletéreos:
• Anemia de enfermedades crónicas :el aumento de
hepcidina reduce la disponibilidad de hierro
• Caquexia
• Freno en el crecimiento
• Amiloidosis secundaria
• En infección severa contribución al shock séptico
 REACTANTES DE FASE AGUDA

• Eritrosedimentación

• Ventaja: simple, económica, conocida

• Desventaja: medidor indirecto de las proteínas
plasmáticas de fase aguda, ya que es influenciada por el
tamaño, forma y número de glóbulos rojos y por otras
proteínas plasmáticas (Ig., fibrinógeno)
• VN hombre: 0 a 15mm-Mujer: 0 a 20mm en la 1º hora
• Util para reconocer procesos inflamatoros, evaluar
extensión y gravedad, pronóstico.
• Puede aumentar en la obesidad, con la edad.
• Util e el seguimiento de AR, Polimialgia reumática; menos
importante en el LES, Polimiositis
Eritrosedimentación:

• Favorece su sedimentación con mayor velocidad que GR

aislados
• El fibrinógeno se liga a los eritrocitos favoreciendo la formación
de” pilas de moneda”
REACTANTES DE FASE AGUDA

• PCR:
• Recibe su nombre por su capacidad de precipitar el
polisacárido C del neumococo en presencia de calcio
• Tiene funciones en las defensas( PCR es un componente de la
respuesta inmune innata, es capaz de unirse a la fosfatidilcolina
de micro-organismos o células apoptóticas, que se unen a Rc en
fagocitos y activa C por la vía clásica.)
• Participa en el clearence de células apoptóticas
• Cumple un rol en la limitación y extensión de la respuesta
inflamatoria
REACTANTES DE FASE AGUDA

PCR

• Se puede medir a las cuatro horas del estímulo, máximo 24-

72 hs y disminuye cuando cesa el estímulo
• Es menos influenciable que la ERS
• Buena correlación clínica con algunas enfermedades
reumáticas (Polim Reum.; AR)
 Autoanticuerpos

• Los Autoanticuerpos son Ac dirigidos contra Antígenos del

propio organismo.
• Los Anticuerpos pueden reconocer :
Ag localizados en el núcleo ANAs
Ag localizados en el citoplasma o en las membranas
celulares ANCAs
Proteínas nucleares no histonas que pueden extraerse de los
tejidos Anti ENA
Ag órgano específicos Ac Antitiroideos

- Pueden ser importantes como marcadores serológicos en el

diagnóstico de algunas enfermedades, aunque la mayoría son
característicos de alguna enfermedad pero no específicos.
 AUTOANTICUERPOS

• Marcadores de enfermedad
• Patogénicos
• Epifenómenos
• Ausencia de enfermedad
• Individuos normales
• Neoplasias
• Infecciones
• Inducidos por drogas
• Preceder por años a la enfermedad
TÉCNICAS DE DETECCIÓN DE ANTICUERPOS

Inmunofluorescencia indirecta (IFI)

•En general, detecta anticuerpos contra múltiples antígenos

Técnica Inespecífica (screening)
Se realiza sobre cortes de riñón o hígado de rata, o sobre células tumorales
cultivadas en monocapa (Hep-2) o sobre un flagelado(Crithidia Lucillae)

ELISA

•Antígeno ESPECIFICOS
•Diagnóstico –pronóstico

RADIOINMUNOANÁLISIS (RIA)
Anti DNA-
Se basa en la capacidad del anticuerpo para unirse al antígeno marcado con un
isótopo radioactivo. Se incuba ADN marcado con el suero del paciente y se
forman complejos ADN/anti-ADN . El marcado con isótopos permite
cuantificar el anticuerpo unido.
AUTOANTICUERPOS: Algunos métodos de
detección: IFI
TÉCNICA de IFI
• AGLUTINACIÓN

• - Útil para detectar FR, anticuerpo anti ENA

•
- Se basa en la capacidad de los anticuerpos para aglutinar glóbulos
rojos (hemaglutinación) o partículas sintéticas recubiertas con
antígenos. La cantidad se expresa como la mayor dilución del suero
que produce aglutinación.
•
- La prueba Waaler-Rose :glóbulos rojos de carnero sensibilizados
con IgG de conejo dirigido contra glóbulo rojo de carnero. Se
considera positivo con títulos mayores o iguales a 1/40.
•
- La prueba del látex (Singer-Plotz) sustituye glóbulos rojos de
carnero por partículas de látex recubiertas por IgG humana
purificada. Esta prueba es más sensible y menos específica que la
técnica Waaler-Rose. Se considera positiva con títulos mayores o
iguales a 1/160.
•
• ELISA
- Significa: enzyme linked inmunoabsorbent assay.
- Es la técnica más sensible porque detecta menor cantidad de anticuerpos.
- Puede usarse para estudiar cualquiera de los anticuerpos anti nucleares.
- Consiste en fijar el antígeno en placas de poliestireno e incubarlo primero
con el suero del paciente y después con una anti-inmunoglobulina humana
marcada con una enzima.
- Luego de añadir el cromógeno y el sustrato enzimático adecuado, se
cuantifica la reacción con un espectrofotómetro.
- La mayor dificultad es la necesidad de purificar el antígeno para que no
disminuya la especificidad.

- INMUNOBLOTTING
La técnica consiste en enfrentar el suero del paciente con los antígenos
separados mediante electroforesis en geles de poliacrilamida y
electrotransferidos a un papel de nitrocelulosa. Los antígenos se solubilizan
con dodecil sulfato de sodio (SDS) y mercaptoetanol
- Una vez que se unen a la nitrocelulosa se incuban primero en el suero del
paciente y luego con una anti-inmunoglobulina humana marcada con una enzima.
- Al agregar el cromógeno y el sustrato enzimático calculados, se colorea la
reacción.
IFI: detección de ANA , sustrato hep 2
IFI: detección de ANA , sustrato hep 2
IFI: detección de Anti DNA doble cadena,
sustrato Crithidia Lucilae
 ANCA - Patrón de tinción
Sustrato neutrófilos:

ANCA-P ANCA-C
(P=Perinuclear) (C=citoplasmático)
Elisa: MPO Elisa: PR3
ANCAs
• Son Ac dirigidos contra los gránulos azurófilos de los neutrófilos

• Se detectan por IFI sobre neutrófilos fijados en etanol

• Se corrobora con ELISA (Enzima :Proteinasa 3 o Mieloperoxidasa)
• Se distinguen dos patrones:

Patrón Citoplasmático: cANCA -Proteinasa 3-Poliangeítis Granulomatosa

(GW)

Patrón Perinuclear-pANCA-Mieloperoxidasa G Necrotizante

(PAM)
-Diagnósticos
-Actividad ?
-Remisión ?
IFI: Detección de ANCA
 EVALUACIÓN DE RESULTADOS

Clínica negativa Clínica positiva

FAN positivo FAN negativos

Buscar otras causas

 Infecciones 1% LES
 Drogas Anti-Ro +
 Antec. familiares
 ENFERMEDAD DIAGNÓSTICO
LES FAN / Anti-DNAd
Sm / VDRL falsa
EMTC U1 RNP

S. SJOGREN Ro / La / FAN / FR

A. REUMATOIDEA FR

ESCLERODERMIA Scl 70 /
Anticentromero
POLIMIOSITIS Antisintetasas
• PRONÓSTICO

• anti-DNA LES Nefropatía

• anti-Ro/La LES Afectación cut.,SS
• anti-centrómero Escl no fibrosis, Sí HTP
• anti-Scl70 Escl. Fibrosis Pulmonar, Crisis
• ANCAs Vasculitis Afectación Renal
• Antifosfolípido LES Trombosis , Abortos
LIQUIDO SINOVIAL

• Es un ultrafiltrado del plasma.

• Recubre la membrana sinovial y el cartílago
• Su función es la nutrición y la lubricación
• La artrocentesis puede practicarse como
diagnóstico o con fines terapeúticos
LIQUIDO SINOVIAL
Líquido sinovial:
Liquido sinovial
• Viscosidad:

• La viscosidad se evalua dejando gotear el L S desde la jeringa y midiendo

la longitud del filamento que provoca su caída libre. El LS normal o de
procesos no inflamatorios tine una elevada viscosidad, con filamento > a
5 cm, por la alta conc de ac hialurónico. En los inflam e infecciosos, la
viscosidad se reduce como consecuencia de la degradación del
hialurónico y el filamento mide < de 5 cm o puede gotear gota a gota
como el agua

• Coágulo de mucina:

• El coágulo de mucina se realiza añadiendo una gota de ac acético al 2%.

Se foma un coágulo (precipitado grisáceo) firme que resiste la agitación.
En liq inflamatorios o sépticos el coágulo es inexistente o friable
CRISTALES DE URATO MONOSÓDICO

Sin luz polarizada

Artritis por cristales de Pirofosfato de
Calcio

• Romboidal o de bastón con leve

birrefringencia positiva: amarillo
cuando están perpendiculares al
eje del compensador y azul
cuando están paralelos
Líquido sinovial: artritis sépticas
• El hueso presenta una remodelación ósea constante
para mantener la homeostasis mineral y los
requerimientos estructurales del hueso, dando un
mecanismo para la autoreparación y la adaptación a la
tensión.

• Se realiza en las superficies óseas (endóstica, canales

de Havers y menos en la perióstica).
• En el hueso cortical se produce en el osteón y en el
esponjoso en un área limitada de la trabécula (laguna
de Howship).
• A pesar de que el hueso cortical comprende las ¾
partes del tejido esquelético, la superficie disponible
para el remodelado es mucho menor que en el
trabecular
Remodelación ósea

• Proceso dinámico que consiste en

reemplazar osteonas y trabéculas
maduras por otras nuevas
• Localizado uni o polifocal
• Actividad acoplada de OB y OC
• Los OC inician el proceso (lagunas Howship)
• Los OB proliferan y depositan
osteoide
• La zona que sufre los cambios y los
elementos que intervienen :unidad de
remodelación ósea
• El proceso de destrucción y
formación: acoplamiento
Remodelamiento óseo
Remodelación ósea

• Marcadores bioquímicos de la remodelación ósea:

Osteoblastos Formación

Osteoclastos Resorción
Remodelación ósea: Marcadores Bioquímicos
Formación
Suero
Fosfatasa alcalina total
Fosfatasa alcalina ósea
Osteocalcina
Propéptido carboxiterminal del procolágeno tipo I(PICP)
Propéptido aminoterminal del procolágeno tipo I (PINP)

Resorción
Suero
Fosfatasa ácida tartrato resistente
Telopéptido carboxiterminal del colágeno tipo I (ICTP)
Orina
Hidroxiprolina
Piridinolina
Deoxipiridinolina
Telopéptido carboxiterminal del colágeno tipo I(Beta Cross Laps)
Telopéptido aminoterminal del colágeno tipo I
Formación

Fosfatasa alcalina:
Marcador comunmente usado para formación ósea
Sólo 50% proviene del hueso
Mayor utilidad medición de isoenzima ósea de Fosfatasa
Alcalina por Ac monoclonales(OB en estadio tardío de maduración)
Osteocalcina:
Molécula proteica no colágena específica de hueso y dentina
Sintetizada por OB
Se correlaciona con el crecimiento, y aumenta con la remodelación:
Hiperparatiroidismo,hipertiroidismo,E,Paget, etc

PICP/PINP
Extensiones carboxi y aminoterminal de la molécula precursora del
colágeno (OB)
Marcadores bioquímicos de remodelamiento óseo
Resorción
Hidroxiprolina:
Deriva de la degradación de colágeno (óseo y otros tejidos)
Poco sensible

Piridinolina y Desoxipiridinolina
Son puentes que estabilizan las fibrillas del colágeno.
Se liberan a la circulación o se eliminan por orina en la resorción
ósea.
Se pueden eliminar libres o unidos a péptidos. Desoxipiridolina más
Especifica

Beta Cross Laps (CTX)

Es el telopéptido carboxiterminal del colágeno tipo I.
Son los segmentos extremos lineales de la molécula de colágeno. Se
unen a la piridinolina durante la polimerización del colágeno
Marcadores bioquímicos de remodelamiento óseo: resorción

El colágeno esta formado por cadenas helicoidales con un

extremo distal o telopéptido (N o C Terminal).El extremo C y N
terminal une fibras a las adyacentes por puentes de Piridolina o
Desoxipiridolin.Estos extremos se liberan en la degradación del
colágeno (Beta Cross Laps (extremo C terminal)
Marcadores bioquímicos de remodelamiento óseo:
resorción
•Muchas Gracias!!!!
•Preguntas ?????