EXTRACCION E IDENTIFICACION DE ADN

Pardo Cepeda Laura Valentina; 20162180461, Cruz Sánchez Juan Pablo; 20162180030, Beltrán
Ramírez Cristhian Camilo; 20152180013, Hernández Ayala Camila Andrea; 20171180010
a
Universidad Distrital Francisco José de Caldas

INFO
ARTÍCULO
RESUMEN
Entregado:
5 de mayo de 2018 En el presente artículo se describen las diferentes reacciones
realizadas con enzimas proteolíticas, quienes son las encargadas de
romper enlaces peptídicos de los alimentos; y se pueden encontrar
Palabras claves: bases
en el tubo digestivo, siendo sintetizadas por el organismo en el
purinicas y
pirimidínicas, páncreas, o presentes en algunos alimentos, por ejemplo, la papaya.
ADN.ARN Para esto se desarrollaron varias pruebas para identificar la
naturaleza de la actividad proteolítica de las enzimas en condiciones
específicas como lo fueron el aumento de temperatura, cambio de
pH, adición de reactivos y comparación con un catalizador,
respectivamente, con el fin de observar los cambios producidos por
dichas condiciones y como estos afectaban a la actividad y
eficiencia de las enzimas proteolíticas.

ABSTRACT

In the present article describes the different reactions carried out

with proteolytic enzymes, which have the function of break peptide
bonds of the foods; being synthesized by the organism in the
pancreas, or present in some foods, for example, papaya. For this,
several tests were developed to identify the nature of the proteolytic
activity of enzymes under specific conditions such as temperature
increase, pH change, addition of reagents and comparison with a
catalyst, respectively, in order to observe the changes produced by
these conditions and how these affected the activity and efficiency
of proteolytic enzymes.

1. Introducción

2. Métodos 3. Resultados

4. Discusión
El protocolo de extracción de ADN
presente en el tejido del hígado de res se
divide en 5 partes en las cuales cada una de
ellas jugaba un papel importante.
Homogeneización
En esta parte mediante la fricción por
triturado entre la arena lavada y el pistilo se
rompen las uniones entre las células para de
este modo favorecer la interacción con la
solución lítica utilizada en el siguiente paso,
formando una pasta homogénea con el
hígado y la arena.
Lisis celular
Para esta parte se agrega EDTA 1 X 10−4
con cloruro de sodio 0.1 molar, estos
funcionan como un detergente y una
solución salina respectivamente e ácidos nucleicos.
interactúan con las células y rompen las
membranas, las cuales están compuestas de
lípidos y proteínas, el detergente en
solución salina las desnaturaliza
disolviendo así la membrana celular y
permitiendo la liberación de los ácidos
nucleicos del núcleo celular. El EDTA
también cumple una función al unirse con
iones Mg 2+¿¿ la cual impide el
funcionamiento de las DNasas lo cual es
muy importante ya que estas son enzimas
que catalizan la rotura de los enlaces
fosfodiéster en el ADN,[ CITATION Cli \l 9226
] lo cual no permitiría el aislamiento e
identificación de este ya que generan su
degradación.
Separación de proteínas y lípidos
Para esta parte se agrega fenol al 90% de
concentración, hay dos razones por las que
el fenol es un purificador tan eficaz y se
utiliza para este tipo de procesos. La
primera es que es un compuesto polar, dado
que los ácidos nucleicos son altamente
apolares, no se disuelven en presencia de
fenol. La segunda es que el fenol tiene una
densidad de 1,07 g / cm3, que es mayor que
la densidad del agua (1,00 g / cm3). Por lo
tanto, cuando se añade fenol a una solución
se forman dos "fases", una polar acuosa en
la parte superior de la solución que contiene
ácidos nucleicos y agua, y una fase orgánica
que contiene proteínas desnaturalizadas y
otros componentes celulares en la parte
inferior de la solución [ CITATION Orf11 \l
9226 ], este proceso se realiza dos veces,
esto con el fin de asegurar una remoción
correcta de proteínas y otros materiales
presentes.
Para la remoción de lípidos específicamente
se utiliza el éter dado que este solvente
orgánico es apolar y los lípidos también
tienen carácter apolar se disuelven y se
separan por afinidad electrostática de los
Precipitación del ADN
Para esta parte se utiliza etanol dado que el
ADN es una molécula polar, pero la
reacción con el etanol a muy baja
temperatura hace que se vuelva apolar e
insoluble en el etanol formándose un
precipitado justo entre la capa con etanol
líquido y la capa con el extracto. El DNA es
el único componente de la solución que no
es soluble en el etanol, y se hace visible
porque las diferentes cadenas se van
aglutinando entre sí al precipitar debido a la
acción de fuerzas físicas. [ CITATION
Mar15 \l 9226 ]
Identificación del ADN
En esta parte finalmente se observa un
precipitado de color blanco el cual nos
indica la correcta extracción del ADN sin
embargo al agregar la difenilamina no se
genera la coloración azul ya que no hay
presencia de nucleótidos que contengan
adenina o guanina.

5. Conclusiones

Se logro la correcta extracción del ADN

después de seguir rigurosamente el
protocolo establecido

6. Bibliografía

Bibliografía
Clinica Universidad de Navarra . (s.f.). Diccionario medico. Obtenido de Desoxirribonucleasa o
DNasa: https://www.cun.es/diccionario-medico/terminos/desoxirribonucleasa-dnasa

Martínez Martín, L. (abril de 2015). Extraccion de DNA. Obtenido de Experimento con reactivos de
la vida cotidiana: http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Mart
%C3%ADnez%20Mart%C3%ADn2015_4_19P21_19.pdf

Orfao, A., & Morent, M. (2011). Protocolo de extraccion de ADN. Obtenido de

http://redbiobancos.es/Pages/Docs/PNT_Acidos_Nucleicos.pdf