BENEMÉRITA UNIVERSIDAD

AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE MEDICINA
PROFESIONAL ASOCIADO A IMAGENELOGIA

DETECCIÓN Y CLASIFICACIÓN
DE AMEBAS DE VIDA LIBRE EN
PISCINAS EN PUEBLA

PROFESOR: CHRISTIAN JAVIER VAZQUEZ REYES

Alumno: CHRISTOPHER PORTUGAL HERNANDEZ
201709933
 DETECCIÓN Y CLASIFICACIÓN DE AVL EN PISCINAS EN
PUEBLA
CONTENIDO
1. INTRODUCCION .................................. 2
2. ANTECEDENTES ................................. 2
3. HIPÓTESIS ........................................... 4
4. OBJETIVOS .......................................... 4
5. MATERIAL Y MÉTODOS ..................... 5
6. BIBLIOGRÁFICA................................... 6
1. I N T R O D U C C I O N
El siguiente protocolo de investigación
estaremos resaltando la importancia de la
detección de amebas de vida libre (AVL) , así
como se relaciona con la higiene que tienen
las piscinas y albercas del estado de puebla
Se ha establecido que las amebas de vida
libre producen en el hombre enfermedades de
curso diverso; desde cuadros agudos y fatales
con componentes de predominio necrótico a
enfermedades crónicas con reacción
inflamatoria granulomatosa.
Las características de las enfermedades
humanas producidas por estas amebas sólo
han sido reconocidas durante los últimos 30
años, ya que el número de humanos
infectados por amebas de vida libre es bajo en
relación con otros microorganismos
(David Oddó B. 2006)
La mayor parte de los casos de amebiosis
originados por Naegleria fowleri suceden en
personas que habían estado realizando
actividades acuáticas como natación, buceo o
esquí en piscinas, lagos o embalses.
1
Si bien, se han dado casos en individuos
que no habían estado en contacto con agua,
postulándose así la transmisión de quistes
viables por vía aérea. ( ÁUREA PEREIRA,
2008)
La infección con estos protozoos se
diferencia de otros porque éstos se
encuentran distribuidos en la biosfera, son
muy virulentos, existe errores en su
diagnóstico y no se conoce un tratamiento
adecuado y oportuno.
(Jesús Ayala Oviedo, 2009)
En cuanto a la importancia clínica en el
hombre, se destacan tres géneros: Naegleria,
Acanthamoeba y Balamuthia.
Naegleria afecta a individuos
aparentemente sanos, niños y jóvenes, los
otros dos géneros se encuentran asociados a
encefalitis granulomatosa amebiana (EAG) y
por lo general, parasitan a individuos
inmunosuprimidos. (Luisa Carbal, 2016)
Entre los padecimientos más graves y
dañinos por su importancia epidemiológica y
sus consecuencias están la meningitis y la
encefalitis, que conllevan invalidez e incluso la
muerte. (Francisco de P. Miranda, 2012)
 Hasta la fecha, sólo algunas especies y
géneros de AVL han sido descritos como
patógenos, pero todas ellas suponen un
riesgo como reservorio de bacterias
patógenas.
Su forma quística, les confiere resistencia
frente a las condiciones adversas y
desinfectantes comunes, permitiéndoles
superar los procesos de depuración y
potabilización y colonizar sistemas artificiales
de agua. (María Benito, 2018)
Diversas AVL han sido cultivadas de
material de hisopado faríngeo y nasal,
sugiriendo que estos organismos son
comúnmente inhalados
Estudios serológicos poblacionales han
determinado la presencia de anticuerpos
contra Acanthamoeba en personas sanas, por
lo que se presume que tenemos exposición a
estos agentes, pero sólo personas
susceptibles los inmunosuprimidos
principalmente desarrollan enfermedad.
(María del Carmen Garaycochea, 2008)
En 1965 Fowler y Carter reportaron el
primer caso de meningoencefalitis amebiana
primaria en Australia causada por amibas del
género Naegleria. Desde entonces y hasta
1997 se habían reportado 81 casos solo en
Estados unidos y para el 2002, un total
aproximado de 200 casos de
meningoencefalitis amebiana primaria (MAP)
en el mundo (Fátima Petit, 2006)
2. A N T E C E D E N T E S
Los primeros estudios epidemiológicos
empezaron entre 1960 y 80 donde se empezó
la expansión de estudios clínicos para muchas
enfermedades parasitarias.
Durante la primera mitad del siglo XX, las
amibas de vida libre eran conocidas como
"amibas del suelo", protozoos no patógenos,
ubicuos en suelos y agua, utilizados como
modelos por los biólogos celulares.
2
En 1958, Culbertson demostró el potencial
patógeno de Acanthamoeba spp y en 1965
Fowler y Carter reportaron el primer caso de
meningoencefalitis amibiana primaria (MEAP)
causado por Naegleria fowleri en Australia;
posteriormente, en Checoeslovaquia se
identificó, de manera retrospectiva, un brote
de 16 casos de MEAP adquirida en una
alberca calentada artificialmente (1962 -
1965). (Teresa Uribarre, 2008)
En el año de 1997 En el centro de
laboratorios de salud pública de Lima Perú
publicaron “AMEBAS DE VIDA LIBRE EN
MUESTRAS DE AGUA DE PISCINAS DEL
DEPARTAMENTO DE LIMA” publicada por la
revista peruana de medicina experimental y
salud; donde recalcan la importancia del
estudio de las amebas de vida libre desde el
resumen
“Las amebas de vida libre son numerosas
y se encuentran en la naturaleza, en medios
como: agua, suelos y vegetación. Los
géneros Naegleria, Acanthamoeba,
Hartmannella y Vahlkampfia, tienen
importancia en salud pública, pues son
oportunistas y afectan al hombre (enfermedad
de los nadadores)”.
En donde se utilizó cultivos, técnicas de
coloración y pruebas de virulencia de 68
muestras tomadas en distintas albercas y
piscinas siendo las variables:
• Publicas
• Privadas
• Ríos
• Lagos y lagunas
• Tiempo de servicio
Tras las pruebas el resultado otorgado fue
una contaminación de más del 60% de las
muestras, afirmando la hipótesis planteada la
cual afirmaba que las lesiones oculares
(conjuntiva), córnea, y en menor grado las
meningoencefalitis son originadas por el
contacto con aguas contaminadas con AVL.
 POSTERIORMENTE EN 2003. LA
REVISTA PARASITOL. LATINOAM. V.58
N.3-4 DE SANTIAGO DE CHILE
PUBLICABA “AISLAMIENTO DE AMEBAS
DE VIDA LIBRE EN PISCINAS PÚBLICAS
DE SANTIAGO DE CHILE”.
Un artículo con datos cuantitativos que
rescata la importancia de la identificación de
los tipos de amebas que podemos encontrar
en aguas contaminadas, al igual que el
estudio anterior utilizo técnicas de
parasitología como el examen directo en
fresco y un cultivo. Donde se analizaron las
64 muestras obtenidas de piscinas y albercas
públicas con las siguientes variables de la
zona de muestra:
• Superficie
• Fondo
• Canaleta
• Salida del filtro
Todas fueron tomadas en hora de servicio.
Los resultados del análisis con las pruebas
dieron como resultado que 14 de las 64
muestras obtenidas resultaron positivas
posteriormente se dieron al trabajo de
identificar la especie de AVL con más
incidencia, siendo Hartmannella vermiforme
con mayor número de incidencia con el 12.5 y
la Acanthamoeba la menor con el 4,7%.
Llegando a la conclusión de la hipótesis
correlacional en donde a mayor número de
contacto con AVL tenga el individuo mayor
será su probabilidad de desarrollar alguna
sintomatología, teniendo como interrogantes a
futuro el modo en cómo llegan al agua las
AVL.
Todos estos estudios han estado
correlacionados de algún modo teniendo en
común variables como el tipo de alberca al
cual se le está haciendo la prueba y
compartiendo un 100% las pruebas de
comprobación.
3
EN EL AÑO DEL 2008 LA REVISTA
NORTEAMERICANA BIOL. TROP VOL.56
N.2 SAN JOSÉ JUN. PUBLICO EL
ARTÍCULO “FREE-LIVING
ACANTHAMOEBA AND NAEGLERIA SPP.
AMEBAE IN WATER SOURCES OF LEÓN,
NICARAGUA”
Donde recolecta información general del
ambiente donde se han reportado la presencia
de estas y destaca la poca investigación;
conocimiento epidemiológico que existe en
estos en países en desarrollo lo que preocupa
a la comunidad científica es que, en su
mayoría, estos países tienen el ecosistema
suficiente para el desarrollo de AVL.
Este estudio tiene como objetivo evaluar la
prevalencia de AVL potencialmente
patógenas en específico Acanthamoeba spp.
y Naegleria spp.
En el municipio de LEON de Nicaragua
donde se tomaron 88 muestras teniendo como
variables:
• Ríos
• Manantiales
• Pozos
• Grifos de agua
• Agua potable de zona rural
• Agua potable de zonas urbanas
A diferencia de otros estudios de la misma
índole estas no ocuparon métodos
parasitológicos como el directo en fresco o
cultivos, en este estudio utilizaron métodos
moleculares
Tinción, inmunohistoquimica y
inmunofluoresencia indirecta son los métodos
utilizados para la detección de distintas sepas,
así como la presencia de trofozoítos y quistes
de estos.
 Las muestras se observaron en microscopio
y se dejaron incubar durante 30 minutos a
temperatura ambiente, para las pruebas
inmunológicas se utilizaron anticuerpo de
conejos. Estos nuevos métodos llevaron a
resultados más confiables con un índice de
43% de muestras contaminadas de la cual la
más común fue la Acanthamoeba spp con el
21% de prevalencia.
Aunque los conocimientos microbiológicos
de que se dispone en la actualidad son muy
amplios, todavía es mucho lo que queda por
conocer y constantemente se efectúan
nuevos descubrimientos en este campo que
de hecho el premio nobel de medicina 2015
entregado a William C. Campbell y Satoshi
Omura fue gracias a sus trabajos de terapia
contra lombrices redondas un tipo de
nematodos (parásitos). Por lo tanto, a pesar
de que han pasado más de 300 años desde el
descubrimiento de los microorganismos, la
ciencia de la microbiología se halla todavía en
su infancia en comparación con otras
disciplinas biológicas tales como la zoología,
la botánica o incluso la entomología.
En ciencia es muy importante la
investigación y su publicación ya que gracias
a esta podemos compartir nuestros resultados
y encontrar como otros científicos han
desarrollado las mismas técnicas o nuevas
llegando a resultados contiguos o distintos.
El desarrollo de nuevas tecinas es vital
para la erradicación de enfermedades
parasitarias. Desgraciadamente en países en
vías de desarrollo el presupuesto para la
investigación es nulo y prestan poca atención
a las enfermedades parasitarias, es necesario
que la comunidad científica volteé su mirada a
estas zonas para que se hagan los estudios
pertinentes y evitar muertes causadas por
parásitos como la Acanthamoeba y la fowleri
En conclusión, cada uno de los estudios
realizados para el estudio de AVL ha
contribuido a la prevención de estas
enfermedades parasitarias.
4
3. H I P Ó T E S I S
Como en otros trabajos de investigación y
basado en los resultados tan convergentes,
formulo la siguiente hipótesis correlacional
entre las variables tipo de alberca y clase de
AVL: ENTRE MAYOR SEA EL NÚMERO DE
AVL DETECTADAS MENOR SERÁ LA
HIGIENE
4. O B J E T I V O S
Preocupado por los resultados obtenidos
en otros artículos científicos, donde se
obtienen resultados positivos en la detección
de AVL en piscinas, albercas.
Se Detecto similitudes en el número de
muestras y las pruebas que utilizan, estoy
convencido que, en puebla, tiene el
ecosistema y las condiciones ideales para el
desarrollo de AVL en municipios como
ATLIXCO, TEZIUTLAN, HUEHUETLAN EL
GRANDE Y PUEBLA.
Lo que me conlleva a plantearme los
siguientes objetivos con base a trabajos de
investigación previos
 Identificar la existencia de
AVL en piscinas de puebla
 Catalogar el tipo de piscina
con mayor número de sepas
 identificar el proceso de
higiene y saneamiento que tienen
 Publicar y dar a conocer los
resultados a la población en general,
aunque con mayor interés a la más
vulnerable
Apoyados por los dueños de los
establecimientos se debe realizar una
comparación entre el análisis del agua y el
proceso que utilizan para su tratamiento,
no con el propósito de brindar la
información adecuada o una
recomendación
 5. MATERIAL Y MÉTODOS De cada una se tomará 8 muestras de
agua, 900 - 1.000 ml, con matraces estériles
Para demostrar la incidencia y prevalencia de (dos desde la superficie, dos a 30 cm de
la exposición y del efecto del contacto con profundidad, dos desde el fondo, una en la
agua con presencia de AVL en una muestra canaleta lateral de desagüe y una a la salida
poblacional en un solo momento temporal. del filtro), las cuales se sellaron y rotularon
Nuestro estudio será TRANSVERSAL cross- convenientemente.
sectional study.
Las muestras deben ser tomadas en horas
Se realizará en el estado de puebla con de atención al público. Con la opción de antes
distintos puntos siendo piscinas y albercas de abrir y después de cerrar.
nuestras zonas de muestra
El análisis de estas muestras debe
 BALNEARIO AGUA AZUL efectuarse con al menos dos de los siguientes
Prolongación 11 Sur No. 5117, métodos: mediante examen directo a fresco,
Puebla por cultivo y molecular (inmunofluorescencia –
inmunohistoquímica).
 BALNEARIO AXOCOPAN
Calles Niños Heroes S/N, La El directo a fresco tiene como objetivo la
Magdalena Axocopan, 74365 Atlixco, orientación sobre la posible presencia de AVL,
Pue. y el cultivo para confirmación y aislamiento y
los estudios moleculares en caso de verificar
 CENTRO RECREATIVO con mayor precisión la sepa y la presencia de
ATOTONILCO trofozoito o quistes.
Municipio de Huehuetlán El Grande
Para ello primero se debe dejar decantar
 SWIMMING POOLS por tres a cuatro horas en matraces de copa,
No 2688 1, San Francisco estériles, protegido del polvo para evitar
Totimehuacan, Puebla, Pue contaminación exógena. Desechado el
sobrenadante, se debe centrifugar el
 PARQUE ACUÁTICO SAN CARLOS sedimento a baja velocidad (1.000 r.p.m.). Del
Camino a los Limones s/n, centrifugado se realizó el examen directo a
Comunidad de San Carlos, 74577 fresco, entre lámina y laminilla donde se
Izúcar de Matamoros, Pue obtendrá los inóculos para la siembra del
cultivo. Se debe observar en microscopio
 BALNEARIO LAS PALMAS óptico corriente, como de contraste de fase, a
Carretera Federal Puebla - Atlixco aumentos de 10x y 40x.
Km. 24,300, Tehuixtango, 74367
Atlixco, Pue. Los procedimientos de tinción
inmunohistoquímica y métodos moleculares
 BALNEARIO AGUAS DEL JORDÁN como prueba de inmunofluorescencia
18, Ignacio Romero Vargas Melchor indirecta se realizarán en quistes y trofozoítos
Ocampo #, Calle Melchor Ocampo 17, fijos sobre portaobjetos microscópicos y se
Ignacio Romero Vargas, 72120 incubarán durante 30 min a temperatura
Puebla, Puebla, Pue ambiente en experimentos separados con los
siguientes anticuerpos: de conejo anti N.
 Balneario Puerto EscondidoCalle 6 fowleri / N. lovanensis (NF-Pab), anticuerpo
Ote. 6, San Juan Aquihuac, Centro monoclonal de ratón anti N. fowleri (NF-
San Andrés Cholula, 72810 San 5D12u), anticuerpos de conejo contra
Andrés Cholula, Pue. Acanthamoeba spp. Y la hibridación
fluorescente in situ (FISH) se ha realizado
El estudio se efectuará en ocho piscinas mediante el ARNr 18S-dirigido sondas de
públicas de Puebla durante un periodo hábil, oligonucleótidos fluorescentes.
las cuales se identificaron por los numerales I
a VIII.

5
 Sondas: GSP para la detección de
Acanthamoeba y NAEG1088 para la
detección de Naegleria.
Para la siembra, se debe dejar caer dos
gotas del sedimento respectivo en cuatro
placas de Petri preparadas con medio de agar
no nutritivo (ANNE) en cuya superficie se
depositará previamente una película de
Escherichia coli inactivadas, con la finalidad
de servir como nutrientes para las AVL.
Todo este procedimiento debe ser
efectuado en un lapso no mayor de 72 horas
desde la recolección de la muestra.
Si durante los siete días de observación no
hubo multiplicación de AVL, la muestra fue
considerada negativa. Si, en cambio, existió
desarrollo, se procederá al aislamiento de las
colonias. Para ello, bajo lupa estereoscópica,
con bisturí fino y esterilizado, se cortará en
trozos de agar conteniendo las colonias y se
traspasará a otras placas preparadas en la
forma ya mencionada.
Se repetirá este mismo proceso durante el
plazo necesario hasta obtener cepas puras o
clonadas, siendo éste de 30 - 35 días.
Una vez logrado lo anterior, se procederá
a estudiar las características morfológicas de
los trofozoitos y/o quistes, con el objetivo de
diagnosticar el género y/o la especie.
Una vez teniendo los resultados se deben
colocar en una tabla de distribución de
frecuencias para su rápido análisis y
entendimiento.
6. B I B L I O G R Á F I A.
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